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ANALTICA AVANADA 2S 2011

Aulas 3 e 4 Preparo de Amostras


(Continuao) Prof. Rafael Sousa Departamento de Qumica - ICE rafael.arromba@ufjf.edu.br

Notas de aula: www.ufjf.br/baccan

CONTEDO
Consideraes sobre amostragem Preservao de amostras Tratamentos preliminares Tratamentos convencionais (dissoluo, abertura, digesto, ...) ...) Detalhes sobre o preparo de amostras para determinaes inorgnicas Detalhes sobre o preparo de amostras para anlises cromatogrficas Exemplos de procedimentos de preparo de amostra
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DISCUSSO DE EXERCCIO Mtodos convencionais para o preparo de amostras


Pesquisar um procedimento para a dissoluo de uma liga metlica, como preparo prvio anlise qumica de sua composio.

Decomposio de Amostras em Sistemas Fechados


Teor de carbono residual em amostras decompostas com HNO3 em sistema abertos podem variar de 2 a 46% ! Pode ser melhorado: decomposio sob presso em temperaturas acima de 120 oC Digesto em bombas de altaalta-presso com frascos de PTFE:

Frasco de teflon (160 200 oC)

Cilindro de ao (mais comum)

Aquecimento -Chapa - Estufa termostatizada

Digesto de Amostras em Frasco Fechado


Caractersticas: Caractersticas : - AplicaAplica-se a todos os tipos de amostras, com a limitao de uso de massas de amostras relativamente pequenas - Geralmente demora menos que 3 horas e consome quantidades pequenas a moderadas de reagentes

elevada frequncia analtica adequada anlise de traos


- Possibilita utilizar apenas HNO3 ou HNO3 e H2O2 - A perda de analitos volteis geralmente desprezvel
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Instrumentos para Digesto de amostras em Frasco Fechado

ii

iii

Bombas de alta pressoa

i) Digesto convencional ii) Digesto em MW iii) Digestes por combusto

Microondas (MW) de laboratriob

(a) www.paralab.pt/client/documentos/portuguese/parr/SamplePrep.pdf (b) Existem tambm modelos para se trabalhar com frascos abertos (microondas focalizado).Vantagem: maior quantidade de amostra. Desvantagem: no compatvel focalizado). com analitos volteis

Condies para digesto em bombas de altaalta-presso com PTFE Parmetros experimentais Temperatura Presso final Tempo de decomposio cido ntrico (65 69%) Valores mdios 170 180 oC 20 bar 3 h (na temperatura de digesto) 2 mL

Massa de amostra (frasco de 35 mL) Correspondente a 100 mg C

Sistemas tm vlvulas de alvio de presso MAS HNO3 + H2SO4 no deve ser usado para gorduras ! Algumas amostras no so completamente decompostas...

Decomposio de Amostras em Sistemas Fechados


Digesto em bombas de altaalta-presso com frascos de quartzo: - Possibilidade de se usar temperaturas de at 300 oC High Pressure Asher sher ( (HPA HPA) ) Equilbrio de presses - Resultados satisfatrios em geral, inclusive para determinar As, Hg, P, S, Se - SE necessrio o digerido pode ser evaporado para eliminar vapores nitrosos dissolvidos
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Condies para digesto em bombas de altaalta-presso com quartzo Parmetros experimentais Temperatura Valores mdios 320 oC (300 oC no inteior) inteior)

Massa de amostra (frasco de 30 mL) Correspondente a 100 mg C** Presso final Tempo de decomposio cido ntrico (65 69%) <100 bar de at 3 h (na temperatura de digesto) 2 mL

** Massas maiores PODEM ser usadas SE a digesto puder ser realizada em temperaturas menores, na ordem de 180 oC. 9

Decomposio de amostras em Sistemas Fechados


Digesto assistida por microondas:
Exausto (caso vazamentos)

Sensores para monitorar temperatura e/ou presso

Controlador computadorizado

Porta reforada e projetada para no abrir

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Digesto assistida por microondas ?


Microondas so radiaes do espectro eletromagntico Regio de comprimentos de onda onda: : 1mm a 1m e freqncias de 300 a 30000 MHz Freqncias para usos industrial, mdico e cientifico: cientifico: 915 MHz, 2450 MHz, 5800 MHz e 22125 MHz, estabelecidas pela Comisso Federal de Comunicaes - FCC (USA)

Correspondncia entre Radiao e Energia

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Digesto assistida por microondas

CARACTERSTICAS DAS MICROONDAS


Microondas no so radiaes ionizantes A energia das microondas muito menor que a energia necessria para quebrar as ligaes das molculas orgnicas mais comuns Potncia: Potncia : faixa de trabalho geralmente entre 500 1500 W Equipamentos utilizam programas de aquecimento: Temperatura x Tempo OU Potncia x Tempo Frascos reacionais: reacionais: vidro, quartzo (at 12 Mpa) ou

teflon (at 7 mPa mPa) ) politetrafluoretileno

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Digesto assistida por microondas

CARACTERSTICAS DAS MICROONDAS

Materiais podem refletir, absorver ou no absorver microondas

Os lquidos absorvem energia de microondas modificando: Rotao de dipolo Conduo inica

Aumento da temperatura
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Digesto assistida por microondas

CARACTERSTICAS DAS MICROONDAS

A absoro da microonda depende da: da: Constante dieltrica (capacidade de uma molcula ser polarizada por radiao eletromagntica) Perda dieltrica (eficincia de converso da energia da microonda em calor) Fator de dissipao, tan (razo / / ) ): habilidade do material em absorver energia da microonda, convertendo a energia da onda eletromagntica em calor

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Digesto assistida por microondas

CARACTERSTICAS DAS MICROONDAS


Taxa de converso de energia de microondas (tan (tan ) em diferentes materiais Material tan (x10-4)

gua Quartzo fundido Cermica F-66 Porcelana No 4462 Vidro fosfato Vidro borossilicato Vidro Corning No 0080 Acrlico (Plexiglass) Nylon 6-6 Polietileno Poliestireno Teflon PFA

25 25 25 25 25 25 25 27 25 25 25 25

1570 0,6 5,5 11 46 10,6 126 57 128 3,1 3,3 1,5

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Mecanismos de aquecimento provocado por microondas


Rotao de dipolo

Refere-se ao alinhamento de molculas na amostra, que tenham Referemomentos de dipolo induzido ou permanente, devido aplicao de um campo eltrico Molculas polarizadas so alinhadas com a aplicao do campo eltrico Quando o campo removido ou reduzido, a desordem induzida termicamente restaurada e energia trmica liberada A 2450 MHz, o alinhamento das molculas, seguido do seu retorno a desordem ocorre 4,9 x 109 vezes por segundo, e resulta em rpido aquecimento

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Mecanismos de aquecimento provocado por microondas

Ilustrando a rotao de dipolo

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Mecanismos de aquecimento provocado por microondas


Conduo (ou migrao) inica
Refere Refere-se migrao dos ons no sentido do campo eletromagntico

e que sofre resistncia por parte de espcies em sentido oposto (calor) (calor )

+ + +
E

-+

+ -

MAS a conduo inica depende tambm da mobilidade, carga,

concentrao do on e temperatura do meio

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Mecanismos de aquecimento provocado por microondas Aquecimento por microondas

As paredes do frasco so transparentes energia da microonda e apresentam temperatura menor que a temperatura da soluo

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Tipos de microondas para digesto de amostras Sistema de microondas no focalizadas (cavity-type)


Alguns exemplos: -Milestone - CEM - Perkin Elmer - Provecto, ...

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Sistema de microondas no focalizadas (cavity-type)


Proteo de cermica Frasco Teflon

Camisa para alta presso

Sistema Provecto
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Sistema de microondas no focalizadas (cavity-type)

Forno de microondas carregado com os frascos


AplicaAplica -se um programa de temperatura temperatura: : Adequado para cada tipo de amostra Realizado em etapas (com duraes diferentes): - aquecimento brando - aquecimento em temperatura alta (rampa lenta) - resfriamento

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Sistema de microondas no focalizadas (cavity-type)


(Segurana Segurana) ) Monitorando o interior dos frascos frascos: : 10 mL de HNO3 em 6 frascos de Teflon TFM fechados, aplicandoaplicando-se 600 W por 15 min: Temperatura (oC)
250 200 150 100 50 0 0 300 600 900 30 25 20 15 10 5 0 1200

Tempo (s) A presso de vapor gerada no interior dos frascos aumenta a temperatura de ebulio do HNO3
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Aquecimento por microondas em sistema fechado


Vantagens da decomposio em frascos fechados
Reduz erros sistemticos e obtmobtm-se menores limites de deteco No h perdas de analitos Reduz contaminao Possibilita menor consumo de cidos Maior presso maior temperatura decomposio apenas com HNO3 Reduz custos Diminui o consumo de cidos ultrapuros (caros) Minimiza impactos ambientais

Limitaes
Alto custo do equipamento Baixa frequncia analtica comparado aos blocos digestores
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Condies para digesto assistida por microondas


Parmetros experimentais Temperatura ou Potncia Massa de amostra Tempo de decomposio Valores mdios Dependem da amostra e do equipamento (verificar manuais) Em geral at 500 mg Menos de 1 h 1) HNO3 + H2O2 2) H2SO4 + H2O2 3) HNO3 + HCl

Reagentes

1) Plantas, tecidos animais e alimentos 2) leo lubrificante, PVC, poliamidas, polisteres e alimentos gordurosos 3) Metais, ligas metlicas e para extrao em solos e sedimentos
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Tipos de microondas para digesto de amostras


Sistema com microondas focalizadas (waveguide (waveguide-type)

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Sistema com microondas focalizadas (waveguide (waveguide-type) Ex de um forno de microondas com sensores individuais e possibilidade de adio de reagentes:

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Forno de Microondas Focalizado


Trabalha a presso atmosfrica Mais seguro, mas requer condies mais drsticas de reao (uso de H2SO4) Permite uso de at 10 g de amostras Permite adio automtica de cidos e/ou solventes orgnicos Ideal para amostras com alta concentrao de orgnicos Vantagens em relao chapa e bloco digestor Permite melhor controle de temperatura e consequntemente melhor controle da reao Sistema de refluxo volatilizao reduz contaminao e perdas por
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Digesto assistida por microondas

Frasco adequado

+
Reagentes apropriados

Programa de temperatura adequado

Decomposies eficiente
Orgnicos Inorgnicos (incluindo refratrios)
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Mtodos convencionais para o preparo de amostras Digesto x Dissoluo

Digeridos de fgado, rim, corao, pulmo, fmur e bao

Solubilizados de fgado, rim, pulmo e bao

Para amostras de solos, sedimentos, plantas e tecidos animais a obteno de uma suspenso/soluo de amostra no implica, implica, necessariamente, em uma amostra devidamente digerida e sim solubilizada (total ou parcialmente).

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Mtodos convencionais para o preparo de amostras Dissoluo x Digesto Outro exemplo de solubilizao alcalina (TMAH):
A B

Tecido normal de seio

Tecido tumoral de seio

A colorao da soluo 1 se deve ao elevado teor de gordura da amostra A


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Preparo de amostras para determinaes Inorgnicas e orgnicas


Para casa: LEITURA Oliveira, E. Sample Sample Preparation for Atomic Spectroscopy Spectroscopy: : Evolution and FutureTrends; FutureTrends ; J. Braz. Chem Chem. . Soc. 14 (2003) 174 Nbrega, JA; Santos, MC; Sousa, RA et al. Sample preparation in alkaline medium, Spectrochim. Spectrochim . Acta B, 61 (2006) 465.

Para casa: QUESTES


1) Liste as principais caractersticas da digesto em vaso aberto e da digesto em sistema fechado. 2) Considerando que um outro tipo de digesto cida a digesto sulfrica usada para a determinao de nitrognio pelo mtodo de Kjeldhal, Kjeldhal, descreva como esse mtodo funciona.
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d) MTODOS DE EXTRAO (determinaes em geral)


Extrao lquido lquido-lquido
Baseada na diferena de solubilidade entre duas substncias em relao A DOIS SOLVENTES, geralmente gua e um solvente orgnico Transferncia de um soluto de uma fase para a outra

funil de separao

Sistema DESCONTNUO (batelada)


- Tcnica simples - Temperatura ambiente - A substncia separada ainda pode ser tratada (purificada, prpr-concentrada, etc etc) )
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Uso: separao e purificao de substncias Substncias mais polares ou inicas fase aquosa Substncias mais apolares fase orgnica
ASPECTOS FSICOFSICO-QUMICOS: Coeficiente de Partio (KD) a constante de equilbrio para a solubilidade de um composto em um solvente 1 em relao a um solvente 2: KD= C1/C2 C1 e C2 so as solubilidades do composto nos solventes 1 e 2 Nmero alto de KD:

grande parte do soluto ir ser transferida para o solvente 1


Lei da distribuio de Nernst prev:

Eficincia da extrao

Mesmo em casos onde KD bastante alto, mais eficiente se realizar sucessivas extraes usando volumes pequenos, em vez de uma nica extrao com a soma dos volumes
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Alguns exemplos: exemplos:


Extrao lquidolquido-lquido de espcies inorgnicas ( (metais metais) ) Formao de quelatos metlicos (atentar para o pH do meio durante extrao)

Exemplos de aplicaes

Extrao de vrios metais (Al, Be, Ce, Co(III), Ga, In, Fe...)
Acetilcetona (quelante) + CCl4 (solvente)

Extrao de Ni e Pd
Dimetilglioxima (quelante) + HCCl3 (solvente)

Vrios outros quelantes: quelantes: Cupferron, Cupferron , difeniltiocarbazona, difeniltiocarbazona, dietilditiocarbamato de sdio...
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Extrao slido slido-lquido (mais efetiva para substncias inorgnicas)


Uma das fases um slido slido, , onde se encontra o soluto Uma ou mais substncias vo passar para a fase lquida

Ex cotidiano: cotidiano: Preparao de bebidas como ch e caf

Extrator de Soxhlet (1879):

Solvente destilado contendo a(s) substncias extradas

Slido + solvente

Ex. indstria: indstria: anlise inorgnica de solos e fertilizantes (elementos minerais e nions)

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Extrao lquidoquido-slido (usada majoritariamente para analitos orgnicos)

Microextrao em fase slida (SPME SPME) ) I N J E T O R G C

Extrao por purga ou aprisionamento

Condies experimentais : temperatura, agitao e tempo de extrao (a serem avaliados)

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Equipamentos auxiliares para o Preparo de amostras

Extrao Dissoluo Homogeneizao

Banhos de ultrasom
A posio do frasco de amostra influencia na eficincia do processo

Agitador e misturador
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Preparo de amostras para determinaes Inorgnicas e orgnicas


LEITURA recomendada
- NOVKOV, L.; VLKOV, H. A review of current trends and advances in modern biobio-analytical methods: methods: Chromatography and sample preparation. preparation. Analytica Chimica Acta, v.656, p.8p.8-35, 2009. - KATAOKA, HH. New trends in sample preparation for clinical and pharmaceutical analysis. analysis . Trends in Analytical Chemistry, v.22, p.232p.232-244, 2003. - MARTIN, G.; M.; BOUVIER, E.S.P.; E.S.P.; COMPTON, B.J. Advances in sample preparation in electromigration electromigration, , chromatographic and mass spectrometric separation methods methods. . Journal of Chromatography A, v.909, p.111p.111-135, 2001.

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5) Exemplos de procedimentos de preparo de amostras

1) Amostra de GUA

Determinao de metais Coleta

Filtrao (0,45 m m) ) Acidificao - frao lquida* lquida*

Acidificao

Digesto ou Anlise direta

Resultados
*metais dissolvidos metais totais
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Exemplos de procedimentos de preparo de amostras

Amostra de GUA

Determinao de metais

Digesto pelo Mtodo EPA 3015


1) Adicionar em frasco de digesto - 45 mL de amostra - 5 mL de HNO3 conc. 2) Agitar vagarosamente a mistura 3) Fechar o frasco e introduziintroduzi-lo no rotor do MW 4) Submeter a amostra ao seguinte programa de aquecimento: - 10 min at 160 oC - 10 min at 165 oC 5) Aps o frasco resfriar, abriabri-lo e, se necessrio, realizar a diluio do digerido 6) Armazenar a amostra em frasco de plstico limpo e analisar a soluo de amostra
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6) Consideraes sobre segurana no laboratrio


Massas elevadas de amostras maior que 0,5 g so inadequadas para sistemas fechados devido levarem formao de grande quantidade de vapor A abertura dos frascos fechados, aps a digesto, deve ser feita aps os mesmos voltarem temperatura ambiente e preferencialmente na capela

A adio de H2O2 em frasco aberto deve ser feita a frio A reao de cidos fortes com amostras finamente divididas so geralmente muito rpidas... 42

Consideraes sobre segurana no laboratrio


Materiais muito reativos ou em quantidades relativamente elevadas podem ser prpr-digeridos antes do incio do procedimento a ser adotado

~ 0,25g de fgado (triturado) reage instantaneamente com HNO3 conc. Preferir equipamentos com controle de presso

cido fluordrico rapidamente absorvido pela pele e causa queimaduras profundas de forma lenta e de difcil remediao (para lembrar...)
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7) Alguns tpicos para aprofundamento e leitura


Contaminaes da amostragem e estocagem
Hoening oening, , M.; Kersabiec, Kersabiec, AM. Sample Sample Preparation Steps for Analysis by Atomic pectroscopy Methods: Methods: Present status; Spectrochim Spectrochim. . Acta B 51 (1996) 1297

Contaminaes durante a anlise de traos


S. Mitra. Sample Preparation Techniques in Analytical Chemistry; John Wiley & Sons, Inc., 2003

CONTEXTO: determinaes de metais, compostos orgnicos volteis PRINCIPAIS FONTES: poeira e atmosfera ambiente, reagentes, frascos e materiais que entram em contato com a amostra

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8) Consideraes finais
Validao do procedimento de preparo de amostras

Utilizar amostras de referncia (preferencialmente amostras de Referncia Certificadas) Comparar resultados analticos com aqueles obtidos com mtodos de referncia ou oficiais (testes estatsticos) Participar de Ensaios Interlaboratoriais

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Referncias consultadas
D. A. Skoog, Skoog, D. M. West and F. J. Holler. Fundamentals of Analytical Chemistry; Chemistry; 7th Ed., Thomson Learning, 1996. 2) Hoening Hoening, , M.; Kersablec, Kersablec, A. M. Sample Preparation Steps for Analysis by Atomic Spectroscopy Methods: Present Status, Status, Spectrochim. Spectrochim . Acta B, 51 (1996) 1297 1297-1307. 3) J. Mendham Mendham, , R. C. Denney, Denney, J. D. Barnes, M. Thomas. Vogel Anlise Qumica Quantitativa; Quantitativa; 6a ed., LTC, 2002. 4) S. Mitra. Sample Preparation Techniques in Analytical Chemistry; Chemistry; John Wiley & Sons, Inc., 2003. 5) Leite, F. Amostragem Amostragem Analtica em Laboratrio; Rev. Anal. 3 (2003) 5252-59. 6) Oliveira, E. Sample Sample Preparation for Atomic Spectroscopy Spectroscopy: : Evolution and Future Trends Trends; ; J. Braz. Chem. Chem. Soc. 14(2003) 174174182. 7) Borowski Borowski, , K. Tips and Techniques for Ethos Series Microwave Lab Stations; Stations ; Milestone Inc., 2003. 8) D. C. Harris. Anlise Qumica Quantitativa; Quantitativa; 7a ed., LTC, 2008. 9) F. J. Krug. Krug. Mtodos de preparo de amostras: fundamentos sobre o preparo de amostras orgnicas e inorgnicas para anlise elementar; 1 ed., 2010. 10) Notas de aula do Prof Jlio Csar Jos da Silva, do DQ/ UFJF (www.ufjf.br/baccan). 1)

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