In Vitro antioxidante, antimicrobiano, antiviral y actividades de el aceite esencial y varios extractos de piezas a base de plantas y Los callos de Origanum

acutidens El aceite esencial y de extractos obtenidos de diferentes acutidens Origanum y los extractos de metanol (MeOH) de los callos se han evaluado por su poder antioxidante, antimicrobiano, antiviral y de propiedades. El aceite esencial mostraron actividad antimicrobiana fuerte, con un efecto inhibidor significativo contra 27 (77%) de las 35 bacterias, 12 (67%) de los 18 hongos, levaduras y un probado y moderada capacidad antioxidante en DPPH y ensayos de cido -carotene/linoleic. GC y GC-MS anlisis de la petrleo como resultado la identificacin de los 38 constituyentes, el carvacrol siendo el componente principal. El MeOH extractos obtenidos a partir de piezas a base de plantas mostraron un mejor efecto antioxidante que la de butilado hidroxitolueno (BHT), mientras que los callos tambin exhibi interesantes patrones de antioxidantes. En cuanto a la actividad antiviral, ninguno de los extractos inhibieron la reproduccin de una gripe / virus de Aichi en clulas MDCK. Los extractos de MeOH de piezas a base de plantas inhibe la reproduccin de VHS-1, y tambin los callos ejerce efecto antiherpticos leve. INTRODUCCIN Los radicales libres lderes de la oxidacin de las biomolculas que se im complicadas en varias enfermedades (1). Sus efectos de deterioro puede ser afectado por los antioxidantes naturales disponibles en los alimentos. Tambin, reacciones de oxidacin limitar la vida til de los frescos y procesados los productos alimenticios y son una grave preocupacin en la industria alimentaria. Syn estticos y / o antioxidantes naturales son muy eficaces en el la proteccin de las grasas no saturadas y aceites, y son, por tanto, utilizarse como potenciales inhibidores de la peroxidacin lipdica para estabilizar la grasa contienen los productos alimenticios. Sin embargo, la introduccin de sntesis antioxidantes ha causado algunos problemas debido a su gran volatilidad, la inestabilidad a altas temperaturas, y la estricta ley las restricciones, hacer frente a los consumidores y, por tanto fabricante las preferencias de las fuentes naturales de antioxidantes (2). Toxicidad, aumento de reacciones adversas a medicamentos, y la aparicin de la droga resistencia a limitar el uso de los antibiticos ms comunes y de los agentes antivirales como la teraputica. Adems, las enfermedades transmitidas por los alimentos son sigue siendo un problema importante en el mundo, incluso en bien desarrollados pases (3). Una variedad de microorganismos que tambin conducen a la alimentacin corrupcin, que es una de las cuestiones ms importantes relativas a la industria alimentaria (4). En consecuencia, es necesario un uso ms seguro y los productos qumicos ms fiable para evitar las reacciones de oxidacin y de el crecimiento de los alimentos estropear los microbios y para el tratamiento de los varias enfermedades causadas por microorganismos patgenos y los virus. Recientemente, ha habido un creciente inters en las plantas como las fuentes naturales para la prevencin de la oxidacin, el control de los agentes patgenos o toxinas que producen los microorganismos en los alimentos, y el tratamiento de varias enfermedades como la teraputica (5 8). Muchos Origanum (Lamiaceae), las plantas son de gran importancia a este respecto, debido a su utilizacin verstil como agentes saborizantes, fragancias, y la teraputica (9, 10). Origanum acutidens es un de plantas endmicas, herbcea, perenne, y sobre todo en rocas calcreas y noncalcareous, pendientes, y pedregales (1000 3000 m), en Anatolia Central (11). En cuanto a nuestra encuesta de la literatura pudo averiguar, la composicin del aceite esencial de O. acutidens se inform anteriormente (12), pero no se dispona de informacin por su potencial antimicrobiano, antioxidante, y antivirales. No - lo tanto, tenemos aqu el informe de anlisis qumico y la in vitro, actividad antimicrobiana, antioxidante, antiviral y de los extractos de y los aceites esenciales de las partes a base de hierbas y los callos culturas de la O. acutidens (Lamiaceae). MATERIALES Y MTODOS Material Vegetal. O. acutidens (Hand.-Mazz.) letswaart (Lamiaceae) se recab de los bordes de la carretera cerca del pueblo de Beypinari (1200 m), Zara, Sivas, Turqua, cuando la floracin (julio de 2003). Un bono de especifi - los hombres ha sido depositado en el Herbario del Departamento de Biologa, Cumhuriyet University, Sivas, Turqua (AA vale CUFH 3105). Aceites Esenciales y Extractos. Secos y una muestra de suelo (100 g) a partir de piezas a base de plantas de O. acutidens se present a hidrodestilacin durante 3 h utilizando un aparato de British tipo Clevenger (rendimiento ) 1,63%, v / w). Una parte (100 g) de material vegetal seco fue colocado en un Soxhlet extractor y se extrajeron con hexano (HE) durante 24 h (rendimiento ) 2,14%, w / w), seguido de diclorometano (DCM) durante 18 h (rendimiento de ) 1,34%, w / w) y metanol (MeOH) durante 6 h (rendimiento ) Del 7,91%, w / w). Todos los extractos obtenidos fueron liofilizados y mantiene en la oscuridad a 4 C hasta su uso.

Los callos. Las semillas se sumergieron en el 70% EtOH acuosa 1 min, seguido por la esterilizacin de superficie con una solucin de 10% NaOCl durante 10 minutos y enjuague con agua estril bidestilada, a continuacin, establecidos en medio de Gamborg B5 basal (13), complementada con naftalina cido actico (cido 2,0 ppm), 6-benzilaminopurina (N 6 -benciladenina) (2,0 ppm), y sacarosa (3,0%) como fuente de carbono. Los callos se inici subcultivan utilizando los medios de comunicacin mencionados mediante la transferencia de pequeas piezas de callo de en intervalos de 28das. Todas las culturas se mantiene a 25 ( 2 C en la oscuro. Callos de edad de un mes-(1 kg) liofilizada, y la resultante material en polvo (88 g) fue extrado con metanol, dando un extracto en el rendimiento de 6,20% (w / w). Essential Oil Analysis. GC y GC-MS anlisis han sido realizado de acuerdo a los mtodos que en otra parte (5). El horno La temperatura se mantuvo a 50 C durante 3 minutos y luego programado para 240 C a una tasa de 3 C / min. Para el anlisis GC-MS, el rango de masas fue de m / z 35 a 400. Las proporciones relativas de los aceites esenciales componentes se expresaron como porcentajes obtenidos por el rea del pico GC la normalizacin. El nalcanos fueron utilizados como puntos de referencia en el clculo de los ndices relativos (RRI). La identificacin de los compo - nentes se bas en la comparacin de su tiempo de retencin relativo y espectros de masas con los de las normas o NBS75K GC / MS datos de la biblioteca y los datos de la literatura (14). R -Pineno, -pineno, borneol y se adquirieron , de Sigma-Aldrich Co. (Steinheim, Alemania); -mirceno, R -ter - pineno, -terpineno, R -cariofileno terpineol, el carvacrol, y -se adquiridos de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO), p-cimeno fue adquiridos de Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, WI) y el timol fue adquirido de Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO). Determinacin de fenoles totales. Total de componentes fenlicos de los extractos de Se determin mediante el empleo de los mtodos descritos en la literatura (15) participacin de Folin Ciocalteu y cido glico como estndar. Antibacterianos y antimicticos Ensayos. El aceite esencial y extractos de fueron probados individualmente frente a un panel de 54 microorganismos, incluidos 35 bacterias, 18 hongos, y una especie de levadura. Los microorganismos utilizados en y sus fuentes se indican en los cuadros 3 y 4. Disc-difusin, de microtitulacin de dilucin y dilucin en agar MIC se realizaron despus de la metanfetamina dologa dado en otra parte (5). Antibiticos estndar empleados se les da en los cuadros 3 y 4. Determinacin antivirales. Virus, clulas, y medios de comunicacin. El virus de la gripe humana A/Aichi/2/68 (H3N2) (A-Aichi) fue cultivada en clulas Madin Darby Canine rin (MDCK); el ttulo infecciosas fue de 10 5,7 DICT 50 / ml (50% dosis infecciosa cultivo de tejidos / mL). Virus herpes simplex tipo 1 (HSV - 1), la cepa DA, se cultiv en Madin Darby de rin de bovino (MDBK) de las clulas; el ttulo infecciosas fue de 10 10 DICT 50 / mL. Las reservas de virus se almacenados en -- 70 C y se de la coleccin del Instituto de De Microbiologa de la Academia Blgara de Ciencias, Sofa, Bulgaria. El lneas celulares fueron pases como se ha descrito antes (17). Compuestos. Clorhidrato de rimantadina se ha obtenido de Hoff - hombre-La Roche Inc., Nutley, NJ, y BVDU [E -5 - (2-Bromovinil) -2 desoxiuridina] de Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Deisenhofen, Alemania. El aceite esencial y los extractosn fuerontratados con dimetil sulfxido (DMSO), DCM, y el Excmo en consecuencia y se diluyen en bidestilada agua estril al 10% de soluciones. Para los experimentos 2-diluciones se realizaron en medio de cultivo celular. Toxicidad celular se determin como se describi antes (17). La dosis, que produce el 50% de efecto citoptico (ECP) con respecto al control de la clula (intacto las clulas), se estima (TC 50 ). Las proporciones relativas de los componentes del aceite esencial expresado como porcentajes obtenidos por GC-FID de respuesta. Los importes del total de fenlicos se ofrecen como equivalentes de cido glico ( g mg -1 ). Efecto Citopatognico (CPE) Reduccin de ensayo. El mtodo fue el mismo que el descrito antes (17). La concentracin por la reduccin de CPE 50% (CE 50 ) Con respecto al control de virus, se estim de grficos parcelas. El ndice de selectividad (SI) se determina a partir de la relacin de TC 50 / CE 50 . SI G 4 se consider que presentarse a un selectivo importante inhibicin. Cincuenta por ciento de puntos finales de valoracin tcnica (EPTT). El mtodo de fue seguido de acuerdo a 7 ref. El efecto antiviral se determin por la diferencia entre los ttulos de control y los virus tratados ( registro DICT 50 / mL). La importancia de las diferencias fue estimada por Prueba de la t de Student. RESULTADOS Y DISCUSIN La tabla 1 muestra los componentes qumicos del aceite esencial. Treinta y ocho se identificaron componentes que representan el 98,2% de el aceite. Un alto contenido de monoterpenos, se observ (95,4%); entre ellos los compuestos oxigenados estn representados en 76,8%. El carvacrol fue el compuesto predominante (72,0%), seguido por la biogentica precurcors p-cimeno (7,5%) y -terpineno (5,3%). El petrleo tuvieron una composicin similar cin, en comparacin con la utilizada en un estudio anterior (12). Tambin, anteriormente mencionados quimiotipo es caracterstico de muchos Origanum especies (18, 19). Como se esperaba, los callos se incapaz de producir el aceite esencial in vitro. La actividad antioxidante de varios O. acutidents extractos, el cultivo de callos, y el aceite esencial se ha estudiado in vitro. En ambos el extracto y el aceite de los casos, las reacciones tras una concentracin,

patrn de dependencia. La Tabla 2 muestra el potencial antioxidante de las muestras analizadas. Ambos captacin de radicales libres y la inhibicin de de la oxidacin del cido linoleico en el extracto de metanol fueron comparables con los de la BHT antioxidante sinttico. En cuanto a la libre actividad de captacin de radicales, la superioridad de la metanfetamina extracto anol podra atribuirse a la presencia de compuestos fenlicos polares que comprende el 15,1% del extracto (Tabla 2). En particular, sinergistic los efectos de los cidos fenlicos, por ejemplo, cido rosmarnico y polifenoles, as como otras sustancias qumicas como los flavonoides Tambin podra ser tenido en cuenta (20). El radical DPPH actividad del barrido del petrleo tambin fue alta, y esto fue obviamente relacionado con el alto contenido de carvacrol (72%, v / v). Esta no-fenol cristalizable result ser el principal componentes antioxidantes de los aceites aislados de varios Origanum especies (21, 22). El aceite esencial mostraron actividad antimicrobiana notable (Cuadros 3 y 4), exhibiendo un efecto inhibitorio contra 27 (77%) de las 35 bacterias, 12 (67%) de los 18 hongos, y la levadura las especies estudiadas, mientras que los extractos de las piezas a base de plantas (HE, DCM, y MeOH) y los callos (MeOH) se mantuvo inactivo. Esto observacin confirman las conclusiones de los estudios anteriores presentacin de informes que los aceites esenciales contienen los antimicrobianos notable sustancias (carvacrol, en particular) en comparacin con extractos de plantas (5, 10). La evaluacin de la actividad antiviral se indic que ninguna de los extractos inhibe la reproduccin de una gripe-Aichi virus en MDCK (Tabla 5). Cabe sealar que la mayora de los las muestras fueron txicas para las lneas celulares, los extractos de MeOH son menos txicos. Los extractos de MeOH inhibi de manera significativa en de manera dosis-relacionados con la reproduccin de VHS-1 en MDBK clulas, el extracto de MeOH de cultivo de callos mostr la menor toxicidad, pero su efecto antiherpticos disminuy (Tabla 5; Figura 1). Nuestras investigaciones fitoqumico preliminar sobre los callos revel la presencia de cido rosmarnico y rutina. Cuadro 3. Actividad antimicrobiana del aceite esencial de O. acutidens microorganismo de ensayo y la fuente de Zona de inhibicin de dimetro (mm) alrededor de los discos impregnados con 10 L de aceite esencial. OFX, ofloxacina (10 g / disco), SCF, sulbactam (30 g) cefoperazona (75 g) (105 g / disco), y NET, netilmicina (30 g / disco), se utilizaron como positiva los discos de referencia estndar de antibiticos (Oxoid). Maxipine ( g / ml) se utiliz como referencia de antibiticos en la dilucin de ensayo de microtitulacin (Sigma). b Concentraciones mnimas inhibitorias como g / ml. Tabla 4. Anticandidal y Actividades antifngica del aceite esencial de O. acutidens DD, la zona de inhibicin de dimetro (mm) alrededor de los discos impregnados con 10 L del aceite esencial; MIC, la concentracin mnima inhibitoria ( g / ml) de la aceite esencial. b DD, la zona de inhibicin de dimetro (mm) alrededor de los discos impregnados de con los extractos (300 g / disco). NET (netilmicina, 30 g / disco) fue utilizado como positiva patrn de referencia de disco antibiticos (Oxoid). MIC, concentracin mnima inhibitoria ( g / ml) de antibiticos estndar; AmpB, anfotericina B ( g / ml) (Sigma). As, las sustancias solubles en agua, por ejemplo, cidos fenlicos, tales como el cido rosmarnico en particular, podra ser responsable de la inhibicin viral (23). Sobre la base de estos resultados, se puede concluir que la de aceite esencial extrado de la O. acutidens posee compuestos con propiedades antimicrobianas y antioxidantes, aunque no se efecto antiviral puede ser observado. Extracto de MeOH, por el otro mano, puede ser digno de mencin para evaluar sus propiedades antioxidantes y actividades de lucha contra el VHS. Por ltimo, de especial inters pueden ser dirigidas a los callos que pueden ser de gran importancia en trminos de la produccin in vitro de propiedades antioxidantes.