INFORMACION GNICA Y PROTEINAS

El ADN fue aislado por Friedrich Miescher en 1869 de esperma de salmn y de pus de heridas abiertas. Dado que la encontr solamente en los ncleos, Miescher denomin a este compuesto nuclena Luego se lo cambi a cido nucleico y por ltimo a cido desoxirribonucleico (ADN).

Experimentos de Griffith En 1928 Frederick Griffith estudi las diferencias entre una cepa de la bacteria Streptococcus pneumoniae que produca la enfermedad y otra que no la causaba. La cepa que causaba la enfermedad estaba rodeada de una cpsula (tambin se la conoce como cepa S, del ingles smooth, o sea lisa. La otra cepa, la R, de rugosa, no tiene cpsula y tampoco causa neumona. Frederick Griffith (1928) fue capaz de inducir la transformacin de una cepa no patognica Streptococcus pneumoniae EN PATOGNICA.

En los pocos aos siguientes se mostr que el mismo fenmeno poda reproducirse en el tubo de ensayo. Se encontr que los extractos de las bacterias encapsuladas muertas, cuando se agregaban a los cultivos de las bacterias vivas inocuas, podan convertirlas en el tipo virulento dotndolas de la capacidad para hacer cpsulas. Adems, una vez efectuada la transformacin, podan transmitir esa caracterstica a la progenie. Este fenmeno se conoci como transformacin y el algo'' en el extracto que causaba la conversin se llam el factor transformante.

El modelo de la doble hlice de Watson y Crick ha supuesto un hito en la historia de la Biologa. Watson y Crick integraron todos los datos disponibles en un intento de desarrollar un modelo de la estructura del ADN.

Franklin tom fotomicrografas de difraccin de rayos X de cristales de ADN, que fueron la pieza clave del rompecabezas.

Los datos que se conocan por ese tiempo eran: 1) que el ADN era una molcula grande tambin muy larga y delgada. 2) los datos de las bases proporcionados por Chargaff (A=T y C=G; purinas/pirimidinas=k para una misma especie). 3) los datos de la difraccin de los rayos-x de Franklin y Wilkins (King's College de Londres). 4) los trabajos de Linus Pauling sobre protenas (forma de hlice mantenida por puentes hidrgeno), quin sugiri para el ADN una estructura semejante. Watson (23 aos) y Crick (34 aos) Laboratorio Cavendish, Cambridge, Inglaterra, 1953)

Modelo de Watson-Crick

Cada molcula de ADN est formada por dos largas cadenas de polinucletidos que corren en direcciones opuestas formando una hlice doble alrededor de un eje imaginario central. De esta forma la polaridad de cada cadena es opuesta

Cada nucletido est en un plano perpendicular al de la cadena polinucletida

Las dos cadenas se encuentran apareadas por uniones de hidrgeno establecidas entre los pares de bases El apareamiento es altamente especfico. Existe una distancia fsica de 11A entre dos molculas de desoxirribosa en las cadenas opuestas (slo se pueden aparear una base prica con una pirimdica. A-T G-C entre A y T hay dos puentes de hidrgeno y entre G-C hay tres).

La secuencia axial de bases a lo largo de una cadena de polinucletidos puede variar considerablemente, pero en la otra cadena la frecuencia debe ser complementaria

COMPOSICIN QUIMICA DEL ADN

Qumicamente el ADN es un Polmero, formado por la combinacin de 4 Monmeros: los nucletidos Una Base Nitrogenada

Nucletido Un Azcar (desoxirribosa) Un grupo fosfato

Contenido nucleotdico del ADN humano

A 29.9%

G 20.7% A=T

C 19.9%

C metilada 0.7%

T 30%

G = C = C metilada

Comparacin de algunas secuencias de ADN conocidas con los tamaos de cromosomas y genomas de distintos organismos y el hombre
Secuencuias Cromosoma 3 de la levadura Genoma de Escherichia coli El ms grande cromosoma de levadura mapeado Genoma de la levadura El ms pequeo cromosoma humano (Y) El ms grande cromosoma humano (1) Genoma Humano 3 Billones 250 Millones 50 Millones 15 Millones 5.8 Millones 4.6 Millones 350 mil N de Bases

Imgenes generadas con apoyo del computador del: ADN- B (izquierda), ADN-A (centro) y ADN Z (derecha).

ADN-B y ADN-Z. 1.- El ADN-B es una doble hlice que gira a la derecha con 10.5 pb por vuelta de la hlice. Las bases se organizan en la regin central de la hlice con el esqueleto de fosfato dispuesto hacia el exterior de la hlice. El ADN-B tiene dos hendiduras: una mayor y una menor. 2.- ADN-Z puede existir dentro de regiones de una hlice de ADNB. La regin del ADN-Z se muestra rodeada por regiones de ADNB.

El ADN puede sufrir una separacin de las hebras en forma reversible

Anlisis de denaturacin del ADN

Efecto de la fusin del ADN sobre la absorbancia de una solucin de ADN

NIVELES DE LA ESTRUCTURA DE LA CROMATINA

La cromatina existe en forma extendida y condensada

La heterocromatina consiste de regiones del cromosoma que no se desenrrollan

Caractersticas

Cromatina Cromatina transcripcionalmente transcripcionalmente activa inactiva Abierta, conformacin extendida Relativamente no metilado, especialmente en las regiones de los promotores Conformacin altamente condensada Metilada, incluyendo las regiones de los promotores

Conformacin cromatina Metilacin del ADN

Acetilacin de histonas Histonas acetiladas

Histonas desacetiladas

Un modelo para el empaquetamiento de la cromatina en los cromosomas durante la metafase

El modelo de solenoide de la cromatina condensada

Solenoide

ADN

nucleosomas armazn

solenoide

ADN

nucleosomas

armazn 30 nm solenoide

Analisis de translocaciones cromosomales por patrones de bandeo. Las translocaciones cromosomales estn asociadas con ciertos desrdenes genticos y tipos especficos de cncer. Por ejemplo: en casi todos los pacientes con leucemia mielgena crnica, las clulas leucmicas contienen el cromosoma Philadelphia [der(22)] y un cromosoma 9 anormal [der(9)]. Esto resulta de una translocacin entre los cromosomas normales 9 y 22 .

Algunas molculas de ADN son circulares y cuando este ADN se separa de las protenas asociadas adopta una configuracin sobreenrrollada, en cambio, cuando se corta una de sus hebras queda en forma relajada

sobreenrrollado

relajado

FIN

Estructura de ARNs

Complejidad del ADN

Curvas Cot La cintica de reasociacin mide la complejidad de una mezcla de ADN Las mezclas simples se reasocian ms rpidamente Ej.: secuencias repetidas Las mezclas complejas se reasocian lentamente Ej.: genes de copia nica en el ADN genmico total

Para ello se aisla el ADN de una especie y, luego, se denatura. Una vez que est completamente en simple hebra, se monitorea por absorbancia a 260 nm, la cintica de renaturacin de la muestra.

Experimentos de reasociacin revelan tres fracciones principales de ADN eucaritico

ADN copia nica (50-60%) ADN moderadamente repetido/repetido intermedio (25-40%) Incluye elementos de ADN mvil ADN satlite/secuencia simple/altamente repetido (10-15%) El ADN de secuencia simple es usado para la huella del ADN y revela la relacin gentica entre individuos

ADN Fingerprinting (impronta del ADN)

Demostracin experimental de los loops de cromatina en los cromosomas en interfase.

Esquema de la organizacin del ADN en el ncleo. Eucromatina, predominantemente en la forma de fibra de cromatina de 30 nm est unida a la matriz proteica por secuencias ricas en AT llamadas regiones de unin al andamio (SARs : scaffold attachment regions) o (MARs: regiones asociadas a la matriz)

Bandeo G en cromosomas humanos. Los cromosomas son sometidos a un tratamiento proteoltico y, luego, son teidos con Giemsa lo que genera distintas bandas en lugares caractersticos. Cada brazo est dividido en secciones principales (1, 2, etc.) y subsecciones. El brazo corto del cromosoma 4, por ejemplo, tiene 5 subsecciones.

Reasociacin de los cidos nucleicos: Curvas Cot

Co x t1/2

Reasociacin ms lenta
Las primeras en encontrar la secuencia complementaria y reasociarse es el ADN de secuencia simple Cintica de 2 orden, reasociacin ms rpida es el ADN de secuencia simple Aquella de reasociacin ms lenta es el ADN que se halla en secuencia nica y que comprende la mayora de los genes Cot refleja la cantidad de una secuencia particular en el genoma