AO DE LA UNION NACIONAL FRENTE A LA CRISIS EXTERNA UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA

INFORME DE PRCTICAS PRE-PROFESIONALES EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE LA FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA UNP

EJECUTOR:

QUINDE RIVERA PEDRO YASMANI

PERIODO: del 07 de Diciembre del 2008 al 19 de Junio del 2009.

CASTILLA, Setiembre del 2009 PIURA - PER

ANLISIS DE ALIMENTOS EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE LA FIP.

Jefe del Departamento Acadmico Ing -------------------------Csar Ramos Chunga

Asesor de Informe Prcticas Ing Edgardo Quinde Rentara. --------------------------

Ejecutor Quinde Rivera Pedro Yasmani -------------------------

El siguiente documento, es un fiel reflejo de todo lo observado y aprendido durante mi permanencia como parte del analista del laboratorio de control de Facultad de Ingeniera Pesquera. De antemano agradezco por la oportunidad brindada a los seores:: Ing. Edgardo Quinde Rentera actual Jefe del Laboratorio de Control de Calidad y Tec. Melecio Pintado Erazo. A continuacin se describen de manera detallada, de acuerdo al formato requerido por la Facultad, aspectos concernientes a los mtodos microbiolgicos utilizados en alimentos dentro del laboratorio de control de calidad de la FIP. Calidad de la

INDICE

INTRODUCCIN I. BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO: (BPL) 1.1. BIOSEGURIDAD 1.2. DEFINICIN DE TERMINOS 1.3. ACREDITACIN DE LABORATORIOS: II. PROTOCOLOS DE ANLISIS 2.1. PREPARACIN Y TOMA DE MUESTRA DE ALIMENTOS III. CULTIVOS PUROS 3.1. METODOS PARA AISLAR CULTIVOS PUROS 3.1.1. TECNICA DE SIEMBRA POR ESTRIAS EN PLACA Y TECNICAS DE SIEMBRA POR DIFUSION EN PLACA 3.1.2. TECNICA DE LA PLACA VERTIDA 3.1.3. TECNICAS DE ENRIQUECIMIENTO DEL CULTIVO IV. TCNICAS DE CULTIVO USADOS EN EL L.C.C. DE LA FIP: 4.1. MTODOS DE RECUENTO: 4.1.1. RECUENTO POR PLACA: 4.1.2. RECUENTO POR EL MTODO DEL NMERO MS PROBABLE V. ANLISIS MICROBIOLGICOS 5.1. ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL PESCADO FRESCO, REFRIGERADO Y CONGELADO. 5.2. ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL PESCADO SALADO. 5.3.ANALISIS MICROBIOLOGICO DE EMBUTIDOS DE PESCADO. 5.4. ANLISIS MICROBIOLGICO DE PRODUCTOS ENLATADOS VI. ALGUNOS MTODOS PARA DETERMINACIN DE MICROORGANISMOS 6.1. METODO RAPIDO PARA LISTERIA SP. 6.2. MTODO RAPIDO GLISA PARA SALMONELLA SP 6.3. ENUMERACIN DE COLIFORMES TOTALES EN AGUAS 6.4. MTODO RPIDO PARA LA DETECCIN SIMULTNEA DE COLIFORMES TOTALES Y E. coli EN ALIMENTOS VII. BIBLIOGRAFIA ANEXOS

INTRODUCCIN: Histricamente, la extremada caducidad del pescado ha restringido su consumo, en un estado razonablemente fresco, el entorno cercano al lugar donde era desembarcada la captura. Esto ha menoscabado solo ligeramente el hecho de que el pescado desempease u papel importante en la alimentacin humana ya que, en todo el mundo, se desarrollaron las tcnicas tradicionales del curado basadas en la combinacin de la salazn, del secado y del ahumado que permitieron un consumo mas extendido del pescado. Despus de su captura en el mar los peces son invariablemente almacenados en hielo o en agua de mar refrigerada hasta el momento en el que se descargan del barco en el puerto. Es importante que se utilice un agente refrigerante recin preparado y limpio pues su reutilizacin originar el crecimiento rpido de los microorganismos contaminantes psicrtrofos y la alteracin del pescado almacenado. Varios son los factores que coadyuvan en la caducidad sin igual del tejido muscular de los pescados. No obstante, en la mayora de los casos la alteracin es de origen microbiolgico. Para estudiar debidamente a los microorganismos se necesita como requisito previo el cultivarlos en condiciones de laboratorio. Para conocer cuales son los nutrientes y las condiciones fsicas que requieren. Mediante investigaciones extensas se han determinado las necesidades nutricionales de las bacterias varan de manera muy amplia existen diferencias muy importantes e cuanto a la composicin de los medios mas empleados. Por ese motivo he credo conveniente tratar los siguientes puntos que los veremos ms adelante, incluyendo la aplicacin de la microbiologa.

I. BUENAS PRCTICAS DE LABORATORIO: (BPL) Las buenas prcticas de laboratorio identifican, definen y describen los principios que deben regir los procesos de organizacin y las condiciones bajo las cuales se lleva a cabo la planificacin y ejecucin de los anlisis de laboratorio para control de calidad, incluyendo el registro de datos, la preparacin de los informes de anlisis y los procedimientos de control y garanta de calidad de sus actividades que permiten decidir si los resultados son lo bastante fiables para ser reportados. Siendo necesario dar cumplimiento a los siguientes acpites: 1. Recomendaciones de carcter organizativo. 2. Recomendaciones de carcter personal. 3. Recomendaciones de trabajo. 4. Relativas a la vestimenta. 5. Relativos al material de vidrio. 6. Relativos a limpieza del ambiente de trabajo. 7. Relativas al empleo de fuentes de calor.

Dentro del laboratorio est prohibido fumar

Es obligatorio el uso de ropa de proteccin en el ambiente de trabajo

El laboratorio debe estar extremadamente limpio

El material de vidrio antes de ser esterilizado se debe secar adecuadamente

1.1.

BIOSEGURIDAD

Es un conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la seguridad del personal que trabaja en el laboratorio, frente a diferentes riesgos producidos por agentes biolgicos. Complementariamente se deben incluir normas contra los riesgos producidos por agentes fsicos, qumicos y mecnicos. Los agentes de riesgo pueden ser : Agentes Biolgicos: Transmitidos por ingestin, inhalacin. Inoculacin por contacto directo a travs de piel o mucosas. Agentes Qumicos: Que pueden ser: - Corrosivos que causan destruccin o alteracin de los tejidos. - Txicos cuyos efectos se manifiestan segn la va de exposicin por inhalacin, ingestin o contacto directo con piel o mucosas. - Carcinognicos o mutagnicos - Inflamables - Explosivos. 1.2. Definicin de trminos: Limpieza: Es indispensable para la preparacin del material antes de someterlo a desinfeccin o esterilizacin. Colonia: Una colonia esta formada por microorganismos que comparten caractersticas fisiolgicas y bioqumicas, y en microbiologa se emplean algunas caractersticas para identificar la morfologa colonial, las cuales son : Forma, tamao, color, olor, aspecto, consistencia, borde, luz transmitida, luz reflejada, elevacin y produccin de pigmento en el caso de la morfologa colonial bacteriana, en la morfologa colonial de los hongos se consideran las caractersticas de color, micelio areo, produccin de pigmento anverso y reverso, entre otras. Desinfeccin: Se efecta mediante el uso de agentes qumicos, lquidos, pasteurizacin a 750C e irradiacin ultravioleta. El grado de desinfeccin depende de la calidad y concentracin y el agente antimicrobiano, la naturaleza de la contaminacin y el tiempo de exposicin. Algunos procedimientos de desinfeccin utilizados a la concentracin requerida y en periodo de tiempo no menor de 30 minutos producen la destruccin de todos los microorganismos. Exceptuando las esporas resistentes. Esterilizacin: Su objetivo es la destruccin de toda forma de vida. Se realiza preferentemente por medio del vapor saturado a presin (autoclave), por calor

seco (horno), incineracin (mechero de gas) y en algunos casos mediante el uso de agentes qumicos determinados en forma lquida o de gas. 1.3. ACREDITACIN DE LABORATORIOS: Como consecuencia de cuanto ya ha sido expuesto, debe quedar claro que puede haber formas diferentes de detectar el mismo organismo en una muestra de alimento. La eleccin del mtodo a utilizar puede estar regida por varios factores y las excelencias de los distintos mtodos constituyen un tema de investigacin y debates constantes. Sin embargo, esto puede abocar a una situacin en la que las diferencias en cuanto a un resultado facilitado por dos laboratorios refleja simplemente que han sido utilizados mtodos diferentes. Adems de los problemas derivados de las diferencias intrnsecas en cuanto a la ejecucin de mtodos diferentes, el mismo mtodo en laboratorios diferentes puede estar sujeto a una variacin introducida por factores tales como diferencias en las tcnicas, en el material y en su contratacin. Algunos ejemplos posibles comprenderan el perfil de la temperatura del autoclave cuando se esterilizan los medios, el tiempo y la temperatura de incubacin, las procedencias de los componentes de un medio y, desde luego, la competencia y experiencia del personal del laboratorio. Para soslayar estos problemas posibles se adoptan varias medidas. Varios organismos nacionales e internacionales sancionan varios mtodos estndar para realizar determinados anlisis debindose adoptar uno de stos en el trabajo de rutina y debindose ceir estrictamente al mismo siempre que sea posible. Los laboratorios de anlisis tambin participan con frecuencia en programas de garanta de la calidad en los que un organismo central distribuye muestras estndar para su anlisis especificando con frecuencia el plazo en el que se debe realizar aquel y el mtodo a utilizar. Se comunican los resultados al organismo central, el cual los coteja y remite un informe conjunto a los laboratorios participantes que despus juzgan su ejecucin con respecto a la de los dems. Finalmente, los laboratorios pueden solicitar alguna forma de reconocimiento independiente. Existen sistemas de calidad, como por ejemplo el programa denominado Good Laboratory Practice, y patrones, como por ejemplo el BS 5750 (ISO9000), que se refieren a calidad de la gestin dentro de la organizacin pero que no fijan el nivel de calidad o la competencia concretos que se deben alcanzar.

Tambin existen programas de acreditacin de los laboratorios que se refieren ms a la calidad programas de acreditacin de los laboratorios que se refieren ms a la calidad o a la ejecucin de pruebas concretas. En el RU esta acreditacin se solicita a travs del Nacional Measurement Accreditation Service (NAMAS) que acredita a los laboratorios sobre una serie total de actividades no precisamente de anlisis microbiolgico. La mayora de los pases tiene su propia organizacin equivalente, por ejemplo las designadas con las siglas NATA (Australia), DANAK (Dinamarca), ILAB (Irlanda) y STERLAB (Holanda). El organismo acreditador inspecciona el laboratorio y sus tcnicas para asegurarse de que las pruebas se llevan a cabo conveniente y correctamente utilizando mtodos sancionados acompaados de las medidas adecuadas de control de la calidad establecidas. Entre las caractersticas investigadas se encuentran el adiestramiento y las calificaciones del personal, la adecuacin del material y de las tcnicas en cuanto a contraste y mantenimiento, la participacin en un programa de perfeccionamiento de los anlisis y la existencia de la documentacin completa que dicta los procedimientos de funcionamiento de los laboratorios. La obtencin de la acreditacin de un laboratorio puede resultar una empresa costosa pero, si se consigue, proporciona una declaracin independiente de la pericia del laboratorio y dar mayor confianza a los posibles clientes.

II. PROTOCOLOS DE ANLISIS PREPARACIN Y TOMA DE MUESTRA DE ALIMENTOS PARA ANALISIS MICROBIOLOGICO: Cuando se trata de los procedimientos de anlisis microbiolgicos en general, es tcito mencionar la cuidadosa asepsia del lugar de trabajo, la esterilizacin del material de cultivo y la manipulacin adecuada de los utensilios por parte del personal de laboratorio. Para la toma de muestra de piel es recomendable preparar una lmina metlica a la que se ha cortado una ventana (una especie de marco metlico), cuya rea interior sea conocida (puede ser de 10 cm2) que si se dobla ligeramente en las esquinas podra incrustarse fcilmente en la superficie del pescado. Con un bistur se corta la piel a lo largo de la ventana y luego se le desprende utilizado pinzas. Es importante retirar solo la piel que se desmenuza para proseguir con su anlisis. La toma de muestra de msculo de pescado se realiza retirando la piel del lugar de toma de muestra desprendiendo aspticamente 10 gr. De carne cortada en trozos pequeos con ayuda de tijeras y pinzas estriles, para ser pesados en un recipiente estril (vaso del homogenizador). En el caso de productos secos, salados o similares la toma de muestra se hace simplemente cortando y triturando una cantidad determinada de producto. Cuando se desee analizar productos congelados empacados (por ejemplo filetes de pescado, mariscos, en bolsas plsticas), dejar descongelar al ambiente aspticamente y cuando el producto se halle semi-descongelado, desinfectar la parte externa del envase con un poco de algodn empapado en alcohol de 70O C , dejar secar y abrir el envase aspticamente con tijeras estriles (bistur si es necesario) y pesar 10 gr. En trozos pequeos en un frasco estril (vaso del homogenizador). Cuando se trata de embutidos, frote la parte externa del envase con alcohol d 70oC para su desinfeccin, deje secar por un momento y retire la pelcula del envase en forma asptica. Corte el embutido en pequeos trozos desde la parte del centro e incorpore en el frasco.

Debe recordarse que existen considerables diferencias en el recuento, dependiendo de la posicin o parte que se tome de una muestra. En cualquier caso, las muestras deben ser siempre bien desmenuzadas. Es importante recalcar que en el caso de no realizar el control microbiolgico en forma inmediata a la toma de muestra, como sera lo ptimo, deber refrigerarse la muestra y analizarse en un lapso mximo de 6 horas. La relacin diluyente y muestra es la siguiente la cantidad del diluyente deber ser igual a 9 veces el peso de la muestra previamente pesada en el frasco del homogenizador estril (100 ml. De capacidad mnima), coloque la respectiva cuchilla estril y mezcle bien usando homogenizador o licuadora para obtener una suspensin de muestra 10 veces diluida (dilucin 10 -1). En el caso de no contar con un homogenizador sta operacin puede llevarse a cabo triturando la muestra en u mortero con un mazo estril agregando poco a poco la solucin salina estril y ayudando la trituracin con arena limpia estril. Si se homogeniza 10 cm2 de piel en 50 ml de solucin salina ( 100 ml), 1 ml. De sta suspensin es equivalente a 0.2 cm2 ( 0.1 cm2) de rea de piel. Cada rango de dilucin debe registrarse de tal forma de poder calcular la unidad original de peso o rea de la muestra al como 1 gr. 1 a 10 cm2. La solucin utilizada para suspender la muestra y efectuar las diluciones correspondientes es una solucin de cloruro de sodio al 0.85% (8.5 gr. De cloruro de sodio en 100 ml de agua destilada) de Ph. 7.o a 7.2, posteriormente esterilizada en autoclave a 121oC por 15 minutos. A 1 litro de sta solucin puede tambin agregrsele 1 gr. De peptona como elemento nutriente en el momento de su preparacin. Se recomienda tambin agregar a 800 ml. De la solucin anterior, 1 ml de una solucin tampn (solucin madre) que se prepara de la siguiente manera: Pesar 34 gr. De fosfato monopotsico (PO 4H2K) y disolverlo en 500 ml. De agua destilada, adicionar 175 ml. De hidrxido de sodio (Na OH) 1.0 N (40 gr. Para 1 litro), agregar agua destilada hasta completar 1 litro y ajustar el Ph A 7.2. El agua de mar esterilizada puede sustituir a las soluciones salinas y a las soluciones de dilucin decimal mencionadas.

III. CULTIVOS PUROS El cultivo puro representa las condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo del laboratorio. A pesar de esto, para determinar las caractersticas de especies concretas de microorganismos, es imperativo que el microorganismo se asle y se desarrolle en el laboratorio como un cultivo puro. Existe gran variedad de tcnicas por medio de Las cuales las diferentes especies en una muestra natural pueden ser aisladas y desarrollarse como cultivo puro. Para marcar bien las definiciones podemos decir que un cultivo puro es aquel que esta formado por microorganismos del mismo gnero y especie, comnmente se le llama cepa pura; en cambio un cultivo mixto es aquel en el que estn dos o ms microorganismos. 3.1. METODOS PARA AISLAR CULTIVOS PUROS 3.1.1. Tcnicas de siembra por estras en placa y tcnicas de siembra por difusin en placa. Con un asa bacteriolgica, se pasa una porcin de la muestra a la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar y se siembra en el medio ya sea por estras o por difusin. Para sembrar por difusin en placa, por lo comn se usa una varilla de cristal estril para esparcir la muestra. Esta operacin hace posible adelgazar la muestra de tal manera en la superficie del agar quedan las bacterias separadas unas de las otras. Cuando se raya adecuadamente el agar con el asa de siembra, las clulas bacterianas quedan lo suficientemente separadas en algunas reas de la placa lo que permite estar seguros que la colonia que se desarrolla a partir de una clula no se junte con la que esta desarrollndose a partir de otra clula. Cabe suponer que cada colonia aislada es la descendencia de una sola clula, y por tanto un cultivo puro. En las especies donde las clulas se agrupan de forma caracterstica, por ejemplo, Staphylococcus y Streptococcus, la colonia se desarrolla a partir de un grupo de clulas del mismo tipo e igualmente representa un cultivo puro. Una porcin de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo viene a ser un cultivo puro. Despus de una incubacin apropiada, el desarrollo de cada cultivo de observa en el microscopio o mediante cultivo para verificar que es puro.

Las tcnicas de siembra en placas por estras o por difusin se pueden hacer convenientemente y con equipo mnimo; estos son procedimientos de rutina que se efectan para aislar bacterias o cultivo puro. Aunque una de sus limitaciones es que solo pequeas cantidades de la muestra pueden ser esparcidas sobre la superficie del medio de cultivo. 3.1.2. Tcnica de la placa vertida: El principio de la tcnica de la placa vertida es la dilucin (adelgazamiento) de la muestra en tubos con agar fundido y enfriado. Se necesita hacer diluciones en ms de un tubo fundido para obtener colonias bien aisladas, si es que no se conoce la magnitud de la poblacin bacteriana de la muestra antes de manejarla. El medio se mantiene al estado liquido a una temperatura de 45 0C para permitir que el inoculo se distribuya adecuadamente en el medio. Una vez sembrado el medio se pone en placas de petri, se deja solidificar y despus se incuba. Como algunos microorganismos quedan atrapados entre el agar se observaran colonias tanto en la superficie como entre el medio cuando este solidifica. Esta tcnica se hace en forma cualitativa y cuantitativamente. Cuando se emplea el procedimiento cuantitativo, podremos determinar el nmero de bacteria de un tipo particular en la muestra, as como aislarlas en cultivo puro. Las tcnicas de siembra por estras(o por diseminacin) y las de placa vertida para aislar cierta clase de bacterias, pueden mejorarse con medios de cultivos selectivos o diferenciales. Tambin es posible tratar el medio para eliminar otro tipo de bacterias diferentes de las que se desean aislar, antes de sembrar en las placas. Por ejemplo, supngase que la tarea es aislar bacterias formadoras de esporas. Como las esporas son resistentes al calor, la muestra se someter a temperatura de 850C durante 5 minutos antes de sembrar las placas. El tratamiento de calor destruir todas o la mayora de las formas de bacterias no esporuladas. 3.1.3. Tcnicas de enriquecimiento del cultivo: Para mejorar las posibilidades de aislamiento de algunos tipos fisiolgicos poco frecuentes de bacterias, los procedimientos de siembra

en placa debern estar precedidos de desarrollo de bacterias en un cultivo de enriquecimiento. Esta afinacin en el aislamiento de microorganismos fue introducida por dos de los grandes precursores de la bacteriologa. Beijerinck y Winogradsky entre 1890 y 1900. El principio de esto es procurar un ambiente de cultivo diseado (medio de composicin conocida y condiciones especificas de incubacin) que pueda favorecer el desarrollo de cierto tipo concreto de bacterias que necesitaremos pero que no sea adecuado para las dems. Las tcnicas de aislamiento bacterianos son diversas, la ms usada es la tcnica de la estra cruzada ( agotamiento por estra) y en esta el propsito o el uso es el de obtener colonias aisladas que puedan ser identificadas posteriormente. En este mtodo se requiere solamente de una o unas placas de medio de cultivo (acordes al proceso de la muestra), en el que se deposita la muestra y se realizan las estras con un asa microbiolgica, es la tcnica mas usada en la determinacin microbiolgica mdica. El mtodo de diluciones se emplea principalmente para cuantificar la carga microbiana presente en una muestra, es la tcnica mas empleada en la microbiologa sanitaria o de alimentos, y consiste en realizar diluciones seriadas de la muestra y colocarlas en las placas de cultivo.

IV. TCNICAS DE CULTIVO USADOS EN EL LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DE LA FIP: Aunque evidentemente existen para el examen de un alimento para descubrir la posible presencia microorganismos, el examen microbiolgico completo requiere que cada uno de los propgadores viables sea estimulado para que se multiplique en medios lquidos o en la superficie, o en la matriz de un medio solidificado con agar. El Agar es un polisacrido con varias propiedades interesantes que se obtiene de especies de algas rojas. Aunque es un material complejo y de composicin variable, el componente mayoritario del agar es la azarosa que est constituida por unidades alternantes de 3,6-anhidro-1-galactosa (o de 1-galactosa) unida en posicin 1,4 y de D-galactosa (o de 6-O-metil-D-galactosa) unida en posicin 1,3.

Las propiedades del agar que le hacen tiles para los microbilogos incluyen la capacidad para formar un gel a bajas concentraciones (1,5-2%) que no influye de modo significativo en el potencial de agua del medio. ste gel es muy estable a temperaturas muy elevadas por lo que, para fundirlo, se necesita un bao de agua en ebullicin, o las temperaturas del autoclave. Sin embargo, una vez fundidas, las soluciones de agar permanecen lquidas cuando se enfran a temperaturas relativamente bajas (aprox. 40 0C) haciendo posible mezclarlo con muestras que contienen organismos viables antes de, o durante su distribucin. Otra propiedad til del agar es su estabilidad frente a la hidrlisis microbiana, a pesar de ser un polisacrido. nicamente un grupo relativamente reducido de microorganismos es capaz de degradar el agar, presuntamente debido a la presencia de la inslita forma L de la galactosa en el polmero. 4.1. MTODOS DE RECUENTO: 4.1.1. Recuento por Placa: En un laboratorio convencional normal el mtodo mas sensible para descubrir la presencia de una bacteria viable consiste en permitir que aumente de tamao por si sola para formar una colonia visible. Esto constituye la base de la siembra en placa por difusin, de la siembra en placa por estra o del mtodo de Miles y Misra de siembra en placas de gotas de agar, todava muy utilizados en los laboratorios de microbiologa. En el mtodo de siembra en placa por difusin, la muestra (generalmente 1ml) se pipetea directamente a una placa de petri estril y se mezcla con un volumen apropiado de agar fundido. Aun cuando el agar fundido es entibiado cuidadosamente a 40450C, el choque trmico inflingido a las organismos psicrtrofos puede dar como resultado que stos no produzcan colonias visibles. El recuento en placa mediante siembra por estra soslaya este inconveniente y tambin garantiza un medio aerobio pero el volumen de la muestra suele estar limitado a 0.1 ml. El diluyente, para la preparacin de la muestra y las diluciones decimales, que se utilice no debe causar dao alguno, por ejemplo choque osmtico, a loa microorganismos. Por sta razn el agua destilada no es apropiada. Un diluyente que s utiliza corrientemente, conocido como diluyente de recuperacin

mxima, contiene un 0,1% de peptona y un 0.85% de cloruro sdico. Los mtodos tradicionales de recuento en placa son caros utilizando placas de petri y medios de agar, de modo especial si se lleva a cabo la duplicacin adecuada de las placas. 4.1.2. Recuento por el Mtodo del Nmero Ms Probable: El mtodo alternativo para efectuar el recuento de cifras bajas de microorganismos viables es el denominado mtodo del nmero ms probable (NMP). El mtodo se suele basar en la inoculacin de series dobles de tubos (generalmente 3,4 o 5) que contienen un medio lquido apropiado y se siembran con tres volmenes diferentes de muestra o con tres diluciones diferentes del material a examinar (por ej., 10g, 1.0g y 0.1g). el medio que se utiliza tiene que estar ideado para hacer posible juzgar si ha habido o no ha habido crecimiento y el nmero de positivos en cada volumen o dilucin de la muestra se determina despus de la incubacin de los tubos. El NMP se obtiene recurriendo a una tabla como la que se muestra en la siguiente tabla:

Nmero positivos 000 100 200 210 300 310 311 320 321 330 331 332

de

tubos NMP <0.30 0.36 0.92 1.5 2.3 4.3 7.5 9.3 15 24 46 110

Niveles de confianza del 95% 0.02 a 1.7 0.15 a 3.5 0.4 a 3.8 0.5 a 9.4 0.9 a 18.1 1.7 a 19.9 1.8 a 36 3.0 a 38 4.0 a 99 9.0 a 198 20 0 a 400

333

>110
Tabla del Nmero Ms Probable

V. ANALISIS MICROBIOLOGICO 5.1. ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL PESCADO FRESCO, REFRIGERADO Y CONGELADO. I. Objetivos: Determinar el grado de frescura y calidad microbiolgica en el pescado fresco. Conocer la metodologa de anlisis microbiolgicos para fresco. II. Materiales Equipos: Erlenmeyer de 250 ml estriles Pipetas estriles Bistur estriles Mortero estriles Incubadora pescado

Balanza analtica Placa petri estriles Tubos de ensayo estriles Cuenta colonias Mecheros Campanas de Dirham. Medios de cultivo Agar Nutritivo Agar Mc conkey Agar T.C.B.S. Agar Baird Parker Caldo E. coli III. PRUEBAS MICROBIOLOGICAS A REALIZARSE Numeracin total de aerobios mesfilos (300C) Presencia total de Vibrio parahaemolyticus Recuento total de Staphylococcus coagulasa (+); St. Aureus. Presencia de Vibrio cholerae Numeracin ms probable de Escherichia coli. Numeracin de Enterobacteriaceas

IV. PROCEDIMIENTO 4.1. Preparacin de las soluciones salinas peptonadas 1. 90 ml. De solucin salina peptonada, para la solucin 10-1. 2. En dos tubos colocar 9 ml. De solucin salina peptonada para las diluciones (10-2 y 10-3). 4.2. Preparacin de la muestra (pescado fresco) Piel: cortar con un bistur esterilizado 10 cuadrados de 1 cm 2 aproximadamente colocar en un Erlenmeyer estril que contenga 90 ml. De S.S.P. (Solucin salina peptonada) homogenizar bien agitando con cuidado; considerar a esta solucin como dilucin 10 -1. de esta preparacin sacar 1 ml. Con una pipeta estril y colocar en uno de los dos tubos que contiene 9 ml de s.s.p. homogenizar bien, esta seria la dilucin 10-2, homogenizar, y luego sacar 1 ml. Para agregar al otro tubo que contiene 9 ml de s.s.p. considerarla como solucin 10-3.

Msculo: cortar de diferentes partes del pescado (msculo) y triturar en un mortero estril luego pesar 10 g. y colocarlos en la solucin de 90 ml. 10-1. homogenizar y dejar sedimentar por un lapso de 15 minutos. De esta dilucin sacar con una pipeta estril 1 ml. Y colocar en el tubo de 9 ml. (10-2) a partir de esta solucin preparar la dilucin 10-3. V. SIEMBRAS MICROBIOLOGICAS APTITUD MICROBIOLOGICA PARA CONSUMO HUMANO Los alimentos pesqueros sern considerados microbiolgicamente aptos para el consumo humano cuando cumplan en toda propiedad con los criterios microbiolgicos establecidos en la norma tcnica sanitaria de MINSA-DIGESA. 5.1. PLAQUEO El agar que ha sido previamente preparado colocarlo en bao mara para que se licue colocar con cuidado en placas estriles en una cantidad que cubra toda la superficie del fondo aproximadamente un cuarto de la altura de la placa. Dejar enfriar para luego efectuar las siembras microbiolgicas por superficie.

1. NUMERACIN TOTAL DE AEROBIOS MESOFILOS (300C) Siembra por incorporacin: Colocar 1 ml De cada dilucin o muestra en tres placas estriles por duplicado y luego agregar el medio de cultivo agar nutritivo en una cantidad que cubra el fondo de la placa aproximadamente un cuarto de su altura. Incubacin: las placas sembradas incubarlas a 370C por 24 horas. Lectura: tomar para el recuento aquellas placas que contengan entre 30 y 300 colonias. 2. NUMERACION DE Vibrio parahaemolyticus Siembra por superficie: colocar 0.1 ml. De cada muestra preparada o muestra en placas por duplicado que contienen medio de cultivo y esparcir bien la muestra con la esptula de Driglasky. Incubacin: las placas sembradas incubarlas a 370C por 24 horas.

Lectura: tomar para el recuento las placas que contengan colonias entre 30 y 300. 3. RECUENTO TOTAL DE Staphylococcus coagulasa (+) Caractersticas: Tpicos Gram +, son fermentativos pero no producen gas. Son catalasa +. Se distinguen staphylococcus+ (si producen coagulasa) de los staphylococcus- (no producen coagulasa). Los que producen coagulasa son los ms virulentos y patgenos. CULTIVO: sembrar por agar Baird Parker por superficie una asadla de cada dilucin en la superficie de agar solidificado por medio de estras o agregando 0.1 ml de cada muestra preparada. Estas bacterias crecen bien en agar y caldo, pero se usan medios selectivos y diferenciales (agar 110, agar manitol-sal). Estos medios llevan un 5-10% de sal que impide el crecimiento de otras bacterias. Tambin se usa el agar-chapman, agar TPEY, agar Baird Parker. LA PRUEBA DE COAGULASA: Consiste en poner en un tubo de ensayo suero de conejo en contacto con una gota del cultivo. Se incuba durante 4 horas y si se coagula es porque la bacteria produce coagulasa (coagulasa+) si no, es porque no la produce (coagulasa-) Incubar: las placas a 370C por 24 horas. Lectura: observar y contar colonias negras lustrosas rodeadas de halo claro. 4. NUMERACION DE Vibrio cholerae Siembra en superficie colocando sobre una placa que contenga agar TCBS 0.1ml de cada dilucin o muestra a analizar. Incubar: colocar las placas sembradas en posicin normal en la incubadora a 370C x 24 horas. Lectura: observar y contar colonias que muestran un halo oscuro. 5. RECUENTO DE Escherichia coli Sembrar por superficie y por duplicado 1ml de cada dilucin en caldo E coli. Incubar: a temperatura 41.5 por 18 a 24 horas. Lectura: observar si hay colonias rojas.

6. NUMERACION TOTAL DE ENTEROBACTERIACEAS Siembra por superficie: colocar 0.1 ml de cada dilucin en placas que contengan medio de cultivo Agar Mc. Conkey slido expandir la muestra con la esptula de driglasky. Incubacin: colocar las placas invertidas en la incubadora a 370C X 24 horas. Lectura: contabilizar las colonias rojizas rodeadas por un halo del mismo color o rosado claro.

5.2. ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL PESCADO SALADO I. Objetivos. Conocer la metodologa de anlisis microbiolgicos para pescado salado. Reconocer la microflora propia del pescado salado.

II. Materiales Equipos: Erlenmeyer de 200 ml, etc Pipetas Bistur Mortero Incubadora Balanza analtica Placa petri Tubos de ensayo Cuenta colonias

Campanas de Dirham MEDIOS DE CULTIVO Agar Nutritivo al 15% y al 20% Agar Manitol Salado Agar XLD Agar Sabouraud Agar Baird Parker Caldo Lactosado y CLBVB III. PRUEBAS MICROBIOLOGICAS A REALIZARSE Numeracin total de microorganismos halfilos viables Numeracin total de Micrococceas Numeracin de Serratia salinaria Numeracin total de hongos y levaduras Recuento total de Staphylococcus coagulasa (+) numeracin de Streptococcus faecalis Numeracin ms probable de coniformes totales.

IV. PROCEDIMIENTO 4.1. Preparacin de las soluciones salinas peptonadas 1. colocar 90 ml. De solucin salina peptonada en un erlenmeyer, para la solucin 10-1. 2. E n dos tubos colocar 9 ml. S.S.P. para las soluciones (10-2 y 10-3). 4.2. Preparacin de la muestra (pescado salado) Piel: cortar con un bistur esterilizado 10 cuadrados de 1 cm 2 aproximadamente colocar en un erlenmeyer estril que contenga 90 ml. De S.S.P. (Solucin salina peptonada) homogenizar bien agitando con cuidado; considerar a esta solucin como dilucin 10 -1. de esta preparacin sacar 1 ml. Con una pipeta estril y colocar en uno de los dos tubos que contiene 9 ml de s.s.p. homogenizar bien esta seria la dilucin 10-2, homogenizar, y luego sacar 1 ml. Para agregar al otro tubo que contiene 9 ml de s.s.p. considerarla como solucin 10-3.

Msculo: cortar de diferentes partes del pescado salado (msculo) para una representatividad y triturar en un mortero estril luego pesar 10 g. y colocarlos en la solucin de 90 ml. 10 -1. homogenizar y dejar sedimentar por un lapso de 5 minutos. De esta dilucin sacar con una pipeta estril 1 ml. Y colocar en el tubo de 9 ml. (10 -2) a partir de esta solucin preparar la dilucin 10-3. V. SIEMBRAS MICROBIOLOGICAS 5.1. PLAQUEO El agar que ha sido previamente preparado y colocarlo en bao mara para que se licue colocar con cuidado en placas estriles en una cantidad que cubra toda la superficie del fondo aproximadamente un cuarto de la altura de la placa. Dejar enfriar para luego efectuar las siembras microbiolgicas por superficie. NUMERACIN DE MICROORGANISMOS HALFILOS Sembrar por incorporacin: Colocando 0.1 ml. De cada dilucin (muestra) en placas estriles y luego agregar el agar nutritivo al 15% y 20% de ClNa. Extender cuidadosamente el medio y dejar solidificar. Incubar: a 370C por 1, 2, 3,4 semanas. Lectura: tomar para el recuento de microorganismos halfilos viables aquellas placas que contengan entre 30 y 300 colonias. NUMERACION DE MICROCOCCACEAS Sembrar por superficie: colocar 0.1 ml. De cada muestra preparada sobre las placas que contiene agar Manitol salado extender bien sobre la superficie del agar slido. Incubar: a 370C por 24 horas. Lectura: tomar para el recuento de bacterias aquellas placas que contiene colonias que presentan halo amarillo luminoso. NUMERACION TOTAL DE Serratia salinaria

Siembra por superficie: sembrar por estras con el asa de Kolle a partir de cada dilucin o muestra preparada en la superficie en agar slido de XLD. Incubar: las placas a 370C por 24 48 horas. Lectura: para la lectura observar y contar colonias que muestran un halo oscuro. NUMERACION TOTAL DE HONGOS Y LEVADURAS Siembra por superficie: sembrar por el modo de superficie, es decir, primero plaque el medio (Agar saboraud), luego siembre en la parte superficial agregando 0.1 ml. De cada dilucin. Incubar: al medio ambiente con placas en oposicin normal. Lectura: para la lectura tomar placas que contengan colonias entre 30 300. NUMERACION TOTAL DE Staphylococcus coagulasa (+) Sembrar 0.1 ml. De cada dilucin sobre la superficie en placas que contenga el medio Baird Parker slido esparcir bien la muestra con el asa de Kolle. Incubacin: las placas sembradas colocarlas en la incubadora en posicin normal a 370C x 24 horas. Lectura: observar y contar colonias negras lustrosas rodeadas de halo claro. NUMERACION MAS PROBABLE DE COLIFORMES TOTALES Siembra: agregar 1 ml de cada dilucin en caldo Mc conkey hacerlo por triplicado. Incubacin: colocar los tubos sembrados a temperatura de 370C X 24-28 HORAS. Lectura: observar si hay produccin de gas dentro de la campana Dirham. (Gas+). Considera lectura positiva y luego sembrar una asada de cada tubo positivo en C.L.B.V.B. para la confirmacin.

5.3.ANALISIS MICROBIOLOGICO DE EMBUTIDOS DE PESCADO . I.Objetivos Prepara muestras microbiolgicas de embutidos de pescado. Efectuar anlisis microbiolgicos a embutidos de pescado. Determinar la calidad microbiana de los embutidos Conocer la flora microbiana de los embutidos de pescado.

II. Materiales Equipos: Erlenmeyer de 250 ml estriles Pipetas estriles Bistur estriles Mortero estriles

Incubadora Balanza analtica Placa petri estriles Tubos de ensayo estriles Cuenta colonias Mecheros Medios de cultivo Agar Nutritivo Agar Mc conkey Agar Baird Parker Canamicina Esculina Azida Caldo infusin cerebro corazon (ICC). III. PRUEBAS MICROBIOLOGICAS A REALIZARSE o o o o o Numeracin total de microorganismos viables Numeracin total de Enterobacteriaceas Numeracin total de Vibriones Recuento de Listeria Recuento de Bacillos

IV. PROCEDIMIENTO 4.1. Preparacin de las soluciones salinas peptonadas 1. 90 ml. De solucin salina peptonada, para la solucin 10-1. 2. E n dos tubos colocar 9 ml. De solucin salina peptonada para las soluciones (10-2 y 10-3). 4.2. Preparacin de la muestra (embutidos): Cortar longitudinalmente los embutidos y observar la presencia de poros o huecos, efectuar un anlisis fsico organolptico a los embutidos. Luego triturar una determinada muestra representativa de los embutidos en un mortero de porcelana, pesar 10 gramos de muestra y colocar en un erlenmeyer estril que contenga 90 ml. De S.S.P. (Solucin salina peptonada) homogenizar bien agitando con cuidado; considerar a esta

solucin como dilucin 10-1. de esta preparacin sacar 1 ml. Con una pipeta estril y colocar en uno de los dos tubos que contiene 9 ml de s.s.p. homogenizar bien, esta seria la dilucin 10 -2, homogenizar, y luego sacar 1 ml. Para agregar al otro tubo que contiene 9 ml de s.s.p. considerarla como solucin 10-3. V. SIEMBRAS MICROBIOLOGICAS 5.1. PLAQUEO El agar que ha sido previamente preparado colocarlo en bao mara para que se licue colocar con cuidado en placas estriles en una cantidad que cubra toda la superficie del fondo aproximadamente un cuarto de la altura de la placa. Dejar enfriar para luego efectuar las siembras microbiolgicas por superficie. VI. SIEMBRA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO NUMERACIN TOTAL DE MICROORGANISMOS AEROBIOS FACULTATIVOS VIABLES. Siembra por incorporacin: Colocando 1 ml De cada dilucin o muestra en tres placas estriles por duplicado y luego agregar el medio de cultivo agar nutritivo en una cantidad que cubra el fondo de la placa aproximadamente un cuarto de su altura. Incubacin: las placas sembradas incubarlas a 370C por 24 horas. Lectura: tomar para el recuento aquellas placas que contengan entre 30 y 300 colonias. NUMERACION DE ENTEROBACTERIACEAS. Siembra por superficie: colocar 0.1 ml. De cada muestra preparada o muestra en placas por duplicado que contienen medio de cultivo AGAR Mc conkey slido y expandir la muestra con cuidado tratando de no destruir el medio con el asa de kolle. Incubacin: las placas sembradas incubarlas a 370C por 24 horas. Lectura: contabilizar las colonias rojizas rodeadas por un halo del mismo color o rosado claro. DETERMINACIN DE Enterococos y Estreptococos faecalis.

Se utilizaran tres series de diluciones de tres o cinco tubos de caldo azida dextrosa (AD) a los cuales se les inocula: 0.1 ml de cada una de las diluciones 10-1 10+2 10-3 de las muestra homogenizadas y se incubarn a 35.50C por 24 -48 horas. De los tubos de AD positivos, se introduce un asa estril y luego se siembra por estras, en agar KF-Estreptococos y se incuban a 370C por 24 horas. De las colonias amarillas que crezcan en este agar, se toma una asada y se trasfiere a tubos que contengan 9 ml de caldo infusin cerebro corazon (ICC) con 65% de NaCl que se incuban luego a 450C con agitacin por 24 horas. Transcurrido ese tiempo, se efectuaran comparaciones con los tubos positivos de AD que crecieron en agar KF-Estreptococos y de los tubos de ICC se apuntan resultados y se compararon estos resultados con las tablas del Nmero ms probable para determinar el calculo de Enterococos y Estreptococos presentes en las muestras. NUMERACION DE Streptococcus faecalis. Siembra en superficie colocando sobre una placa que contenga agar canamicina esculina azida 0.1ml de cada dilucin o muestra a analizar. Incubar: las placas a 370C x 24 horas. Lectura: observar colonias negras o que muestran un halo oscuro.

DETERMINACIN DE Listeria. o Caractersticas: Bacilo no esporulados, Gram (+), con extremos muy redondeados. Son relativamente polimrficos pueden presentar flagelos. Son bacilos, facultativos, mviles (movimiento tambaleante caracterstico). o Cultivo: sembrar en Agar Sangre (hemlisis) en superficie una asada de cada muestra preparada o en otros en medios de enriquecimiento como suero (de caballo) , o el medio PALCAM.

Incubar: a temperatura de 370C. Desprenden colonias muy desagradables. En agar las colonias son de color rojo con halo transparente.

DETECCIN DE BACTERIAS ANAERBICAS. o Sembrar en dos series por triplicado 3-5g a cada tubo en 30 ml de BHI + Medio Carne Cocida. o Cubrir con parafina e incubar una serie a 370C por 24 horas y a 550C por 24 horas. Observar la aparicin de turbidez. o Transplantar una azada de cada tubo al Medio Carne Cocida e incubar a 370C por 24 horas y a 550C por 24 horas.

5.4. ANLISIS MICROBIOLGICO DE PRODUCTOS ENLATADOS CONSERVAS I. OBJETIVOS: Efectuar un anlisis fsico organolptico en conservas de pescado. Determinar la calidad sanitaria microbiolgica de un producto hidrobiolgico en conservas. Conocer y evaluar conservas de productos hodrobiolgicos en estado normal y alterado. II. MATERIALES Y EQUIPOS: Incubadora Balanza analtica

Placas Petri Tubos de ensayo Erlenmeyer Pipetas Cuchillo Algodn Medios de cultivo III. Caldo de infusin Cerebro Corazn (BHI) + 0.1% de almidn soluble. Caldo Infusin Cerebro Coraazn (BHI) + Carne Media Cocida + Parafina. Agar Carne Hgado

PRUEBAS A REALIZARSE A. CONSERVAS NORMALES. 1. Efectuar un anlisis fsico organolptico al envase externo e interno, y luego al contenido 2. anlisis microbiolgico Determinacin de bacterias aerobias tpicas y facultativas (Mesfilas y Termfilas) Determinacin de bacterias anaerbicas estrictas (Mesfilas y Termfilas)

B. CONSERVAS ALTERADAS. 1. Aislamiento de microorganismos aerbicos 2. Aislamiento de microorganismos anaerbicos. IV. PROCEDIMIENTO 4.1. Pre Incubacin de Conservas: Llevar cuidadosamente las conservas a analizar con agua jabonosa. Squelas colocndolas sobre hojas de papel filtro a fin de detectar durante el periodo de incubacin cualquier fuga del producto. Efecte una Pre incubacin, colocando las conservas a temperatura de 370C durante 4 semanas y otra a 550C por 10 das.

4.2. Apertura de Latas Efecta la apertura en ambiente estril. Desinfecte la cubierta del envase con un algodn impregnado de alcohol. Las latas que no presentan hinchamiento flamelas en el mechero, abra la lata eliminando toda la tapa que contenga todo el cdigo de produccin. Vierta el contenido de cada envase en un depsito estril, tome muestras de la parte central y bordes del contenido de la conservas. 4.3. Siembra en los Medios de Cultivo a. Conservas Normales DETECCIN DE BACTERIAS AERBICAS TPICAS Y FACULTATIVAS (MESFILAS Y TERMFILAS) Sembrar en dos series por triplicado 5 g. en 30 ml de caldo de infusin cerebro corazn (BHI) + 0.1 % de almidn soluble. Incubar a 370C y 550C. Observar si aparece turbidez para transplantar de cada tubo una azada agar Carne Hgado e incubar una serie a 370C por 24 horas y otra a 550C por 24 horas. Lectura: observar si hay crecimiento en agar Carne Hgado. DETECCIN DE BACTERIAS ANAERBICAS Sembrar en dos series por triplicado 5 g en cada tubo en 30 ml de BHI +Medio Carne Cocida. Cubrir con parafina e incubar una serie a 37 0C por 24 horas y a 550C por 24 horas. Observar la aparicin de turbidez. Transplantar una azada de cada tubo al Medio Carne Cocida e incubar a 370C por 24 horas y a 550c por 24 horas. b. Conservas Alteradas

1. Aislamiento de Microorganismos Aerbios Sembrar una porcin de la muestra en Medio Carne Cocida. Incubar a la misma temperatura de pre incubacin (370C 550C ) 2. Aislamiento de Microorganismos Anaerbicos Extender una porcin de la muestra en Agar Caldo Carne Cocida. Incubar en condicin anaerbica a la misma temperatura de preincubacin ( 370C 550C) Lectura A partir de las colonias aisladas realizar el conteo en cuenta colonias, si el germen es Gram negativo o Gram positivo efecte pruebas bioqumicas a fin de identificar el tipo de microorganismos.

VI. ALGUNOS MTODOS PARA DETERMINACIN DE MICROORGANISMOS 6.1. Mtodo rpido para Listeria sp.

10-1 Muestra: 25 g/ml

Caldo Fraser suplementado a 1/2concentracin 225 ml Incubar 18 h a 24 h / 350C Suplemento antimicrobiano: Acriflavina y Ac. Nalidixico. Suplemento de citrato frrico de amonio

Caldo Fraser suplementado completo 10 ml Incubar 24 h / 300C Suplemento antimicrobiano: Acriflivina y Ac. Nalidixico

Tomar una alcuota 2 ml y hervir x 15 min. En bao de agua.

Aplicar en el dispositivo Singlepath Listeria o Singlepath L mono.

Expresin de resultados: Presencia / Ausencia de Listeria sp. X 25 gr. De alimento. 6.2. Mtodo rpido GLISA para Salmonella sp. (RI AOAC validado)

Agua peptonada tamponada 225 ml Incubar 18h a 24 h / 350C

10-1 Muestra: 25 g/ml

Caldo Rappaport Vassiliadis 10 ml Incubar 24 h / 41.50C

Tomar una alcuota 2 ml y hervir x 15 min. En bao de agua.

Aplicar en el dispositivo Singlepath Salmonella.

Expresin de resultados: Presencia / Ausencia de Listeria sp. X 25 g de alimento. Agua peptonada tamponada: peptona de caseina 10 g cloruro de Na. 5 g dihidrogeno fosfato de potasio 1.5 g hidrgeno fosfato disdico 9 g.

6.3. ENUMERACIN DE COLIFORMES TOTALES EN AGUAS (Standard Methods) Muestra original 1 ml

9 ml de agua peptona 0.1 %

10-1

10 ml a cada tubo

1 ml a cada tubo

1 ml a cada tubo

10 10 ml caldo Laurel Doble ml caldo Laurel Simple

1 10 ml caldo Laurel Simple

10 -1 10

Incubar a 35+/- 0.50C x 24-48 h

Seleccionar los tubos positivos (presencia de gas) Tomar 1 asada de cada tubo positivo e inocular en caldo Brila

Incubar a 35 +/- 0.50C X 24-48 H

Para el resultado final verificar la tabla de NMP. 6.4. MTODO RPIDO PARA LE DETECCIN SIMULTNEA DE COLIFORMES TOTALES Y E. coli EN ALIMENTOS CON AGAR CHROMOCULT COLIFORMES. 9 ML Agua peptona 0.1% 90ml A.P. 0.1 %

10-2
Muestra: 10g/10ml

10-3

PLACAS ESTRILES

Una vez colocado 1 ml de cada dilucin (por duplicado) verter el agar chromocult coniformes a cada placa, previamente licuado (a 45 0C). Incubar a 350C x 24 h

Elegir las placas con 20 200 colonias Colonias Rojas o Salmn y Colonias Azul Violetas Solo colonias azules: Escherichia coli

Prueba de confirmacin in situ Reaccin de Indol Agregar 1 gota de reactivo De Indol a la colonia: +: Color Rojo

Expresin de resultados: Ufc / g alimento.

BIBLIOGRAFIA:

Enlaces de Internet:

ANEXOS:

Balanza analtica donde se pesa la muestra

Estufa para determinacin esterilizacin de materiales.

Medios de utilizados en microbiologa

cultivo

Cocina con 6 para calentar los medios de cultivo

hornillas

Incubadora: para incubacin de microorganismos

Autoclave para esterilizacin de medios.

Cuentacolonias

Desarrollo de E.coli en medio de cultivo TBX

Desarrollo de salmonella sp. En medio de cultivo XLD

Desarrollo de salmonella sp. En medio de cultivo BPLS

Esterilizacin de los materiales usados para la siembra.

Forma correcta siembra cerca del mechero.

de hacer la

Preparacin de medios de cultivo, bao mara.

Crecimiento de hongos y levaduras en medio de cultivo.

Tubos con cultivo MMGM para determinacin de E coli.

Medio de

Midiendo el Ph adecuado de los medios de cultivo.

Siembra por superficie.

Placas rotuladas.

debidamente

Plaqueo con cultivo Baird Parker.

medio de