UNIVERSIDAD SAN PEDRO

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA PROFESIONAL MEDICINA HUMANA

Introduccin a la Gentica Molecular: Gen y Genoma

Mg. Blgo. Jess Ruiz Baca

I. EL CONCEPTO DE GEN COMO UNIDAD DE LA HERENCIA

Gregorio Mendel en 1860 se interesa en la transmisin de la descendencia. Mendel decidi enfocarse en siete caracteres o rasgos muy definibles:

Mendel llego a las siguientes conclusiones: 1) Las caractersticas de las plantas dependan de factores de herencia (genes). Teniendo 2 genes idnticos o no, posteriormente, estas dos formas alternativas de genes se conocieron como alelos. 2) Cada clula germinativa ( gameto) de la planta slo tenia una copia del gen correspondiente a cada caracterstica. Alelo recesivo o dominante. Unin de gametos masculino y femenino. 3) La ley de la segregacin, los 2 alelos permanecen unidos en la planta separndose en la formacin de gametos. 4) La ley de la permutacin independiente, La separacin de los dos alelos correspondientes de un rasgo no tiene efecto sobre la separacin de los alelos de otro rasgo, es decir, que son independientes.

II. CROMOSOMAS: PORTADORES FSICOS DE LOS GENES El descubrimiento de los cromosomas

Walther Flemming en los primeros aos de la dcada de 1880 observ que durante la divisin celular, el material del ncleo se organizaba en filamentos visibles, que se denominaron cromosomas, trmino que significa corpsculos coloreados. Theodore Boveri experiment en huevos de erizo de mar, fecundados con dos espermatozoides en vez de uno (poliespermia), como sucede en condiciones normales, caracterizada por alteracin de la divisin celular y la muerte temprana del embrin. Boveri concluy que el proceso ordenado del desarrollo normal es dependiente de una combinacin particular de cromosomas y esto slo puede significar que los cromosomas individuales deben poseer diferentes cualidades.

 En 1883, el bilogo belga Edouard van Beneden observo que las clulas del cuerpo del gusano Ascaris posean cuatro cromosomas grandes, pero los ncleos masculino y femenino con 2 cromosomas cada uno. en 1887 el bilogo alemn August Weismann propuso que la meiosis inclua una divisin reducida durante la cual el numero de cromosomas disminua a la mitad despus de la formacin de los gametos.

Cromosomas como portadores de la informacin gentica

En 1903, Walter Sutton, En las clulas germinales de la gnada masculina ocurren dos tipos de divisiones: la mittica, las espermatogonias producen mas espermatogonias, y la meitica, la espermatogonia genera espermatozoides. Durante la observacin de los estados de mitosis del espermatozoide del saltamontes, Sutton cuantific 23 cromosomas. Se distinguieron 11 pares de cromosomas (estructuras bivalentes) junto con un cromosoma adicional, llamado cromosoma accesorio (cromosoma X determinante del sexo), que no tena pareja o estaba solo. Sutton comprob que la presencia de pares de cromosomas, o cromosomas homlogos como pronto se los denomino, se correlacionaba perfectamente con los pares de factores hereditarios descubiertos por Mendel.

El numero de alelos que posee cada gameto es igual al numero de alelos con el gameto homologo, y los dos gametos que se unen durante la fecundacin producen un individuo con dos alelos para cada rasgo.

Los genes en un mismo cromosoma deban actuar como si estuvieran ligados entre si, es decir, formar parte de un mismo grupo de ligamiento. Los genes que controlan cada rasgo estudiado por Mendel pueden identificarse en cromosomas diferentes o estar separados en el mismo cromosoma y actuar de manera independiente. Ejem: se demostr en los guisantes dulces que dos rasgos (color de las flores y forma del polen) estaban ligados

Anlisis gentico en Drosophila

En 1909, Thomas Hunt Morgan, se enfoc en la mosca de la fruta, Drosophila sp. para la investigacin en gentica. Por su tiempo de generacin de 10 das aprox., produccin de mas de 1000 huevecillos en su tiempo de vida y por ser econmico. Pero tuvo una gran desventaja: slo dispona de una cepa de la mosca, la de tipo silvestre. Antes de un ao, despus de criar miles de moscas, logro su primer mutante, es decir, un individuo con una caracterstica hereditaria que lo diferenciaba del tipo silvestre. El mutante tenia ojos blancos en lugar de los ojos rojos habituales. En algunas ocasiones muy raras ocurra un cambio espontaneo, o mutacin, dentro de un gen, que se alteraba de manera permanente y poda transmitirse de una generacin a la siguiente. Esto sugera un mecanismo para la variacin que dentro de las poblaciones, evidencia de relacin directa con la teora de la evolucin.

Entrecruzamiento y recombinacin
Aunque se confirmo la vinculacin de genes entre grupos ligados, la relacin entre alelos sobre el mismo cromosoma era incompleta. Las caractersticas maternas y paternas heredadas por un individuo en cromosomas homlogos separados pueden remezclarse de modo que terminen en el mismo cromosoma de un gameto. Por el contrario, dos caractersticas que se heredaron juntas en el mismo cromosoma podan separarse la una de la otra y colocarse al final en gametos separados. Morgan sugiri que este fenmeno, que denomin entrecruzamiento (o recombinacin gentica), podra explicar la aparicin de la descendencia (recombinantes) de modo tal que surgen combinaciones inesperadas de caractersticas genticas. Si se fija el locus de cada gen, la frecuencia de recombinacin entre dos genes provee una medida de la distancia que separa a estos dos genes. Cuanto mayor sea el espacio disponible entre dos sitios del cromosoma, ms probable es que ocurra la rotura entre esos dos sitios y mayor la frecuencia de recombinacin.

 En 1911, Alfred Sturtevant, concibi la idea de que las frecuencias de recombinacin podan utilizarse para mapear las posiciones relativas de los genes individuales a lo largo de un cromosoma especfico. A partir de las frecuencias de recombinacin, Sturtevant comenz a construir un mapa detallado del orden de los genes colocados uno atrs de otro de los cuatro cromosomas de la mosca de la fruta. Desde entonces se emplean las frecuencias de recombinacin para elaborar mapas cromosmicos de diferentes organismos, desde virus y bacterias hasta una gran variedad de especies eucariotas.

Mutagnesis y cromosomas gigantes

En 1927, H. J. Muller, observ que las moscas sometidas a rayos X presentaban una frecuencia 100 veces mayor de mutaciones espontaneas respecto a controles. Aumenta el uso de agentes mutagnicos (rayos X y radiacin ultravioleta), adems de sus peligros. En 1933, Theophilus Painter, existe notoria variacin entre organismos, a nivel macro y micro (celular y subcelular). Clulas de la glndula salival de la larva Drosophila con cromosomas casi 100 veces mas grandes que otras clulas (cromosomas politnicos). Durante el desarrollo de la larva, estas clulas dejan de dividirse, pero mantienen su crecimiento. La replicacin del DNA contina y provee el material gentico adicional necesario para conservar los altos niveles de actividad secretora de estas clulas gigantes.

 La comparacin de patrones de bandas de cromosomas politnicos de diferentes especies se tiene la oportunidad de investigar cambios evolutivos a nivel del cromosoma. Son estructuras dinmicas en las cuales regiones definidas se esponjan durante etapas particulares del desarrollo, siendo sitios de alta transcripcin del DNA a RNA.

III.LA NATURALEZA QUMICA DEL GEN

La estructura del DNA En 1953, James Watson y Francis Crick resolvieron la incgnita de la estructura del DNA. Existen 2 tipos de bases nitrogenadas (BN): pirimidinas, con un solo anillo (T y C), y las purinas, con dos anillos (G y A). El nuclesido es una molcula que slo contiene una de las cuatro BN unida a una fraccin de azcar pentosa. Ejm: desoxiadenosina, desoxiguanosina, desoxitimidina y desoxicitidina. El nucletido es un nuclesido con 1 o ms grupos fosfato. Es la unidad bsica para construir un DNA. Ejm: 5-monofosfato de desoxiadenosina (dAMP), 5-difosfato de desoxiguanosina (dGDP) y 5-trifosfato de desoxicitidina (dCTP). Por muchos aos que el DNA posea una estructura simple de repeticiones tetranucleotidicas (p. ej., ATGCATGCATGC). En 1950, Erwin Chargaff elimin la teora del tetranucletido y proporcion informacin vital de la estructura del DNA. Si la teora del tetranucleotido era correcta, la proporcin de cada base en un DNA deba ser casi de 25% de la cantidad total, pero no fue as. Pero el nmero de purinas siempre es igual al nmero de pirimidinas. Es decir, el nmero de adeninas siempre fue igual al nmero de timinas y el nmero de guaninas siempre semejo al de las citosinas:

Con el uso de datos de difraccin de rayos X y los modelos construidos a partir de recortes de los cuatro tipos de nucletidos, Watson y Crick propusieron una estructura de DNA: 1.- La molcula esta compuesta por 2 cadenas de nucletidos. 2.- Las dos cadenas estn en espiral alrededor de la otra formando un par de hlices dextrgiras. 3.- Las 2 cadenas comprenden una doble hlice que corre en direcciones opuestas (5 3 y 3 5). 4.- El azcar-fosfato de c/cadena se ubica hacia el exterior y las BN sobresalen hacia el centro. Los grupos fosfato dan a la molcula carga negativa. 5.- Las bases ocupan planos que son aproximadamente perpendiculares al eje largo de la molcula y estn apiladas una encima de otra. Las Interacciones hidrfobas y fuerzas de van der Waals proporcionan estabilidad de la molcula de ADN completa. 6.- Las dos cadenas se mantienen unidas por enlaces de hidrgeno entre cada base de una hebra y una base asociada en la otra hebra. Aditividad de los enlaces. 7.- La distancia del esqueleto del tomo de fosfato al centro del eje es de 1 nm (en consecuencia, el ancho de la doble hlice es de 2 nm). 8.- Una pirimidina en una cadena esta siempre apareada con una purina en la cadena complementaria. 9.- Los tomos de nitrgeno unidos al C4 de la citosina y al C6 de la adenina muestran la configuracin amino (NH2) en vez de imino (NH). Similar a los tomos de oxigeno unidos al C6 de la guanina y el C4 de la timina muestran configuracin ceto (C=O) en vez de enol (COH). Por lo tanto, los nicos pares posibles son A-T y G-C.

10.- Los espacios entre los giros que forman la hlice crean dos surcos de diferente amplitud (surco mayor y surco menor) que rodean la superficie externa. 11.- La doble hlice realiza una vuelta completa cada 10 residuos de nucletido (3.4 nm) o 150 vueltas por cada milln de daltones de masa molecular. 12.- las dos cadenas de la doble hlice son complementarias entre s. 5-AGC-3 3-TCG-5

La doble hlice (continuacin). c) Pares de bases de Watson y Crick. El modelo original mostraba tanto el par A-T como el G-C con dos enlaces de hidrogeno; el tercer enlace de hidrogeno en el par G-C fue identificado despus por Linus Pauling.

Modelo del DNA que elaboraron James Watson y Francis Crick de la Cambridge University en 1953. El recuadro muestra la foto tomada por Rosalind Franklin del patrn de difraccin de rayos X de una fibra de DNA que sugera la estructura helicoidal del DNA.

La importancia de la propuesta de Watson y Crick se define en 3 funciones principales: 1.- Almacn de la informacin gentica. 2.- Replicacin y herencia. 3.- La expresin del mensaje gentico.

DNA superenrollado
El DNA tiene la capacidad de enrollarse sobre si mismo, llamado superenrollamiento. Una molcula posee el nmero estndar de 10 pares de bases por vuelta de hlice y se dice que esta relajada. Si se tuerce el DNA a lo largo y en direccin opuesta a la cual estn enrollados los dobletes, la molcula tiende a desenrollarse. Una molcula de DNA desenrollada tiene mayor numero de pares de bases por vuelta de hlice. La molcula tiende a oponerse al esfuerzo para desenrollarla, vuelve a enrollarse sobre si misma y posee una conformacin superenrollada. Se dice que el DNA superenrollado es negativo cuando se genera por desenrollamiento, y positivo cuando se forma por retorcimiento excesivo.

DNA circular superenrollado, sin ramificaciones (la lnea representa la doble hlice):

Izquierda .-DNA circular superenrollado, con una ramificacin. Derecha.-El superenrollamiento puede permitir que posiciones lejanas en la secuencia se aproximen.

 Las clulas dependen de enzimas para cambiar el estado de superenrollamiento del DNA dplex, son llamadas topoisomerasas y cambian la topologa del DNA. Se conocen 2 tipos de isomerasas: tipo I y tipo II. Las topoisomerasas de tipo I cambian el estado de superenrollamiento de la molcula de DNA tras crear una rotura transitoria en una cadena del dplex, permitiendo que la cadena intacta complementaria sufra una rotacin controlada, la cual relaja la molcula superenrollada. Esencial en procesos de replicacin del DNA y la transcripcin. Previenen el superenrollamiento excesivo. Las topoisomerasas tipo II hacen una rotura transitoria en ambas cadenas del DNA duplex. Otro segmento de la molcula del DNA (o una molcula separada por completo) se transporta entonces a travs de la rotura y las cadenas se unen de nueva cuenta. Se requieren para separar las molculas de DNA antes de que los cromosomas se dupliquen para separarse durante la mitosis. Son un blanco para diferentes frmacos, destruyendo de manera primaria las clulas que se dividen y de esta forma se emplean para el tratamiento contra el cncer.

LAS TOPOISOMERASAS DEL DNA. a) Un modelo que ilustra la accin de la topoisomerasa I humana . La enzima ha cortado una de las cadenas de DNA, la cual gira alrededor del enlace fosfodiester en la cadena intacta. La cadena cortada vuelve entonces otra vez a religarse. (Nota: el dibujo muestra una topoisomerasa de tipo IB; las enzimas de tipo IA encontradas en bacterias actan por un mecanismo diferente.) b) Un modelo molecular basado en cristalografa de rayos X muestra la accin de la topoisomerasa II. En el paso 1, la enzima dimrica tiene una conformacin abierta lista para unirse al segmento G del DNA, as nombrado porque establece el punto de partida a travs del cual pasa el segmento T-DNA (o DNA transportado). En el paso 2, la enzima ha sufrido un cambio conformacional cuando se une al segmento G. En los pasos 3 y 4, la enzima se une a una molcula de ATP, el segmento G se corta y el segmento T se traslada a travs de la compuerta abierta. El estado de rotura representa un intermediario hipottico que lleva hacia afuera el paso en el cual el segmento T se transporta a travs del segmento G. En este estado, ambos extremos cortados del segmento G estn unidos de manera covalente a la enzima. En el paso 5, los dos extremos del segmento G se unen de nueva cuenta y el segmento T se libera. Se ha propuesto que la hidrlisis de ATP y la liberacin de ADP y fosfato inorgnico ocurren a medida que el estado de inicio se regenera. c) Tipos de reacciones que pueden catalizar las topoisomerasas . La parte 1 ilustra las reacciones de superenrollamiento y relajacin; la parte 2 las reacciones de anudacin y desanudacin; la parte 3 las reacciones de formacin de concatameros y desconcatenacion.

Nature es la revista cientfica que ha publicado la secuenciacin del genoma de los grandes simios. El primer estudio, del ao 2005, analiz el material gentico del chimpanc, con quien el ser humano comparte el 99% del genoma. El ao pasado, el orangutn mereci la portada de la revista, con quien la coincidencia gentica es del 96%. Ahora, el gorila con el 98% ocupa un lugar intermedio entre ellos. Los gorilas Comparten el 98% del material gentico con los humanos, con quien tuvieron un antepasado comn hace unos ocho millones de aos. "Entre el 5% y el 10% de las regiones del material gentico del gorila se repiten y provocan enfermedades que tambin se dan en humanos, como el autismo y la esquizofrenia".

Algunos de los genes ligados al sexo