PRACTICA N 7 NUMERACION DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS VIABLES I. II. III. OBJETIVOS FUNDAMENTO TEORICO EQUIPOS Y MATERIALES 1.

Los requisitos necesarios para la preparacin y dilucin de las muestras de alimentos. 2. Placas Petri. 3. Pipetas bacteriolgicas de 1 y 10 ml. 4. Bao de agua regulado a 44 46oC para mantener el agar licuado 5. Incubadora regulada a 29 31 oC 6. Contador de colonias. 7. Agar Plate Count. PROCEDIMIENTO 1. Preparar la muestra para hacer las diluciones necesarias. 2. Pipetear por duplicado a las placas de Petri estriles; alcuotas de 1 ml a partir de dilucin 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6. Se sugiere esta serie de diluciones cuando no se conoce el rango aproximado del nmero de bacterias. 3. Agregar rpidamente a las placas de Petri 15 ml de agar licuado u temperado entre la preparacin de la dilucin y la adicin del agar no debe de transcurrir ms de 10 minutos. 4. Mezclar inmediatamente las alcuotas con el agar mediante movimientos de vaivn y de rotacin de las placas Petri. una secuencia satisfactoria de pasos es la siguiente: a) Mover la placa de arriba abajo 5 veces en una direccin. b) Rotar 5 veces la placa en el sentido de las agujas del reloj. c) Mover la placa 5 veces en la direccin que haga ngulo recto al costado en el primer tiempo y, d) Rotar 5 veces la placa en sentido inverso al de las agujas del reloj. 5. Como control de esterilidad, adicionar a las placas Petri, agar sin inocular y agar inoculado con el diluyente. 6. Una vez solidificado el agar, invertir las placas e incubarlas a 29 31 oC durante 48 +- 3 horas. 7. Computo de recuento estndar en placa a) Seleccionar 2 placas correspondientes a una dilucin que contenga entre 30 y 300 colonias utilizando un contador de colonias. b) Si las placas de 2 diluciones consecutivas presentan recuentos menores a que 30 y mayores que 300, tomar el promedio de los dos recuentos.

IV.

c)

Si el nmero de colonias de la placas de 2 diluciones consecutivas estn dentro del rango de 30 300, computar el recuento para cada de las diluciones y establecer la relacin de los dos recuentos. Si el cociente es menor que 2 reportar el promedio de los dos valores, pero, si el recuento mayor contiene 2 veces o ms al menor, en este caso se reportara el recuento del menor. d) Multiplicar por el factor de dilucin de la dilucin utilizada. reportar el resultado como numero de microorganismos aerobios mesfilos por gramo o mililitro segn el caso. 8. Computo de estimado de recuento Stndar en placa. a) Si las placas de todas las diluciones muestran ms de 300 colonias, dividir cada duplicado de placas de la dilucin ms alta en secciones radiales convenientes (2, 4, 8) y contar todas las colonias en una o ms secciones. Multiplicar el total en cada caso por el factor apropiado para obtener el nmero de colonias por toda la placa. Promediar los estimados de las dos placas duplicadas y multiplicar por la dilucin correspondiente. Reportar el resultado como un estimado del nmero. Si no hubiese colonias en las placas de la mayor concentracin, reportar el estimado como menor que la inversa de la dilucin. Eje: 10-1 = 0 colonias. Se reporta como < 10ufc /gr. O ml. Si hubiese sembrado, 0,1 ml, en este mismo caso se reporta < 100ufc/gr. O ml. Expresin de resultados a. Se deber reportar nicamente dos dgitos significativos, ellos son el primero y el segundo (comenzando por la izquierda) del promedio de los recuentos. Los dems dgitos se reemplazarn por ceros. Ejemplo: 523,000 se reportar 520,000= 52 x104 ufc/gr, o ml, del alimento segn sea el caso. Si el tercer dgito de la izquierda es 5 o mayor que 5, adicionar una unidad al segundo dgito (redondear) b. Si el recuento en placa se utiliza para determinar la aceptacin o rechazo de un lote de alimentos, nicamente se considera el recuento estndar en placa, nunca el estimado del recuento, ste es til solamente como una aproximacin primaria de la determinacin de la calidad microbiolgica de un alimento.

V. VI. VII.

RESULTADO CONCLUSION BIBLIOGRAFIA