MORFOLOGIA E ULTRAESTRUTURA DE BACTRIAS

Microbiologia FFI 0751 Profa. Dra. Ilana Camargo

A clula procaritica
o Parede celular o Membrana plasmtica o Citoplasma (80% gua, protenas, carboidratos, lipdeos, ons orgnicos, compostos de baixo peso molecular) no possui citoesqueleto. o rea Nuclear ou nucleide o DNA circular grande de dupla fita (=cromossomo bacteriano), fixado membrana plasmtica. o Plasmdeo: DNA circular pequeno de dupla fita,
replicao independente, 5 a 100 genes, transportam genes relacionados resistncia a antibiticos, tolerncia a metais txicos, produo de toxinas e sntese de enzimas. 1 a vrias cpias, 1 ou mais tipos por clula. *Estrutura da clula eucaritica: membrana, citoplasma e ncleo.

o Ribossomos milhares, conferindo aspecto granular ao

citoplasma; 70S (30s+50S); sensvel ao de antibiticos.

o Incluses

A clula procaritica tpica

Corte transversal de uma bactria. a) Esquema. b) Micrografia. (Fonte: Tortora et al., 2005)

A clula procaritica x clula eucaritica

DNA (material gentico) no est envolvido por uma membrana e ele um cromossomo circular. DNA no est associado a protenas histonas. No possuem organelas revestidas por membranas. Parede celular contendo quase sempre peptdeoglicano. Geralmente diviso celular por fisso binria (envolve menos estruturas e processos que a diviso de eucariotos).

Procariotos - bactria

Cromossomo da Escherichia coli: tem cerca de 4,6 milhes de pares de bases (~4.300 genes) e cerca de 1 mm de comprimento. a)DNA emergindo da clula rompida. b)Mapa gentico. Unidades baseadas no tempo necessrio para transferir os genes durante o acasalamento entre duas clulas.
(Fonte: Tortora et al., 2005)

Procariotos - bactria
1 Cromossomo DNA de dupla fita, circular, grande E. coli 1,3 m de comprimento - 4,2 x 103 kb Mycoplasma 750 kb Exceo: Brucella abortus 2 cromossomos diferentes
http://www.sciencebuddies.org/mentoring/plugin_bac_diversity_bacteria_and_dna.jpg

Replicao de DNA bacteriano

Plasmdeos
DNA circular pequeno, de dupla fita, alm do cromossomo bacteriano; So elementos genticos extra-cromossmicos: no esto

conectados ao cromossomo bacteriano principal e replicam-se independentemente do DNA cromossmico; Contm de 5 a 100 genes no cruciais para a sobrevivncia da bactria em condies ambientais normais; Podem ser ganhos ou perdidos sem lesar as clulas; Alguns conferem a vantagem da transferncia de genes de resistncia aos antibiticos, tolerncia aos metais txicos,

produo de toxinas e sntese de enzimas. Podem ser utilizados para a manipulao gentica.

Procariotos - bactria
Plasmdeos elementos de DNA mveis que no so essenciais para a vida do microrganismo, mas que traz vantagens

Plasmdeos de 70 kb grandes 3.5 kb - pequenos

enovelado

Plasmdeos

Conjugao

- Genes de virulncia resistncia s drogas,

ou

de

- Origem de replicao para produzir cpias que passam para clulas filhas na diviso celular ou para outra clula atravs da conjugao, - Integrativos que se inserem no cromossomo bacteriano ou no

Resistncia aos antimicrobianos devido aquisio de plasmdeos

Ribossomos
Ribossomos so caracterizados pelo coeficiente sedimentao, expresso em unidades Svedberg (S). de

Procariotos: 70S contm uma subunidade grande (50S) e uma pequena (30S) Eucariotos: 80S contm uma subunidade grande (60S) e uma pequena (40S)

Tamanho das clulas

Fonte: Madigan et al., 2004

Mycoplasma as menores
Classe Mollicutes Ordem Mycoplasmatales Familia Mycoplasmataceae 2 gneros: Mycoplasma e Ureaplasma

So os menores procariotos capazes de se multiplicar de modo independente (0,2 0,3 um); Pleomrficos; No possui parede celular; Membrana possui colesterol; Requerem esteris para o crescimento; Genoma pequeno (580 2200 kpb)

Tamanho das clulas - gigantes

Epulopiscium sp, bactria endossimbionte de peixes herbvoros marinhos. Clulas podem atingir o tamanho de 600 um por 80 um.
http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=107617

Morfologia celular: Forma e arranjo

Coco Bacilo (ou bastonete)

Morfologia celular: Forma e arranjo

Espiral Forma de estrela: Stella Forma quadrada e plana: Haloarcula

Forma helicoidal (saca-rolhas) com corpo rgido, movimentao com flagelos

Forma helicoidal (saca-rolhas) com corpo flexvel, movimentao com filamento axial (flagelo contido em bainha externa flexvel)

Aula de hoje...
o Parede celular o Estruturas internas parede
o Membrana citoplasmtica o Incluses o Endsporos

o Estruturas externas parede

o Glicoclice (ou glicoclix) o Flagelos o Fmbrias e Pili

o Locomoo da clula bacteriana

o Flagelar o Deslizamento o Taxias (fototaxia, quimiotaxia)

Parede celular

Parede celular - Funo

o Estrutura complexa, semi-rgida e que confere forma clula.

o Previne a ruptura da clula fornece rigidez contra a presso de turgor (meio intracelular geralmente mais concentrado em solutos que o meio externo).

o Proteo contra choques fsicos;

Essencial para crescimento e diviso da clula;

o Importncia clnica e taxonmica;

o Visualizao individualizada somente em microscopia eletrnica.

Parede celular Gram-Positivo e Gram-Negativo

Parede celular composio e estrutura

N-acetilmurmico (NAM) N-acetilglicosamina (NAG)

o Peptideoglicano (ou murena) principal componente da camada rgida da parede (s encontrado em Bacteria). o Unidades repetidas de um dissacardeo unido por polipeptdeos.
Ligao 1,4 sensvel lisozima!!

Cadeia de glicano (ligaes covalentes)

Interligadas atravs da ligao cruzada de suas cadeias de tetrapeptdeos para formar peptdeoglicano Ponte cruzada de peptdeos Cadeia adjacente de glicano

Parede celular composio e estrutura

http://www.cryst.bbk.ac.uk/PPS95/course/10_interactions/NAMNAGb14_t.gif

Parede celular composio e estrutura

Organizao das unidades repetitivas formando a camada de peptideoglicano. a) Ligao cruzada em bactrias Gramnegativas. b) Ponte interpeptdica de glicina em bactrias Gram-positiva (Staphylococcus aureus). c) Vrias fitas de peptdeoglicano unidas por ligaes cruzadas. (Fonte: Madigan et al., 2004). Obs.: DAP (cido diaminopimlico) ocorre nas Gramnegativo e poucas Gram-positivo; Lys (lisina), maioria dos cocos Gram-positivo.

Paredes celulares de Bacteria

Diagrama esquemtico das paredes celulares de bactrias Gram-positivo (a) e Gram-negativo (b)
(Fonte: Madigan et al., 2004)

Paredes celulares de Bacteria

(c) Micrografia eletrnica de Arthrobacter crystallopoietes (Grampositiva). (d) Leucothrix mucor (Gram-negativa). (e) e (f) MEV de Bacillus subtilis e E.coli. (Fonte: Madigan et al., 2004).

Parede das bactrias Gram-positivo

Micrografia eletrnica de transmisso de Staphylococcus aureus

Parede celular medida em nm

(Camargo et al, AAC 2008)

Parede das bactrias Gram-positivo

o o Muitas camadas (at ~25) de peptideoglicano (corresponde a 90% da parede). Apresentam cido teicico (polissacardeo cido, com resduo de glicerol fosfato ou ribitol fosfato), que confere carga negativa superfcie celular, regulando o movimento de ons + na clula. cidos teicicos respondem pela especificidade antignica da parede, tornando possvel a identificao de bactrias em testes laboratoriais.

Fonte: Madigan et al, 2004.

Parede das bactrias Gram-negativo

o o o Membrana externa composta de lipopolissacardeo (LPS), lipoprotenas e fosfolipdeos. Periplasma espao entre a MP e a ME fluido com alta concentrao de enzimas e protenas de transporte. Uma ou poucas camadas de peptideoglicano (que no contm cido teicico).

Fonte: Madigan et al, 2004.

Parede das Gram-negativo

o Membrana externa
o Permevel a pequenas molculas pela presena de porinas, que permitem a passagem de molculas hidroflicas de baixa massa molecular (alguns nucleotdeos, dissacardeos, peptdeos, aminocidos, vitamina B12 e ferro). o Propriedade txica: associada ao lipdeo A (=endotoxina) do LPS. Exemplos de gneros patognicos Escherichia, Salmonella e Shigella. o Polissacardeos O do LPS atuam como antgenos e so teis para diferenciar espcies de bactrias Gram-negativas.

Estrutura do lipopolissacardeo de bactrias Gram-negativas. A composio qumica do lipdeo A e dos polissacardeos varivel nas diferentes espcies.
Fonte: Madigan et al, 2004.

Caractersticas comparativas entre Gram e +

Caracterstica Reao de Gram. Gram-positivo Gram-negativo Retm o corante violeta Espessa mltiplas Presentes em muitas Ausente Ausente Nenhum Baixo Exotoxinas Alta Alta Aceita o contracorante (safranina) Camada nica fina Ausentes Presente Presente Alto Alto (devido ME) Endotoxinas Baixa Baixa Baixa Alta Adaptado de Tortora et al., 2005.

Camada de peptideoglicano. cidos teicicos. Espao periplasmtico. Membrana externa. Contedo de LPS. Contedo de lipdeos e lipoprotenas. Toxinas produzidas. Resistncia ruptura fsica. Ruptura da parede por lisozima. Sensibilidade estreptomicina, cloranfenicol e tetraciclina.

Sensibilidade penicilina e s sulfonamidas. Alta Baixa

Parede celular de Archaea

o Diversidade de tipos de parede neste domnio porm inexiste peptideoglicano. o Tipo mais comum: Camada S camada superficial paracristalina (tambm encontrada em Bacteria) o formada por um arranjo bidimensional de protenas, com vrias simetrias; o funo pouco esclarecida: atua como barreira de permeabilidade permite passagem de pequenas molculas; o em bactrias patognicas poderia proteger a clula contra mecanismo de defesa da clula hospedeira. o Paredes compostas por polissacardeos, glicoprotenas ou protenas (Methanosarcina, Halococcus). o Pseudopeptideoglicano: presente em algumas espcies de Archaea, como Methanobacterium. o Possui o N-acetiltalosaminurnico (NAT), em substituio ao Nacetilmurmico (NAM) de Bacteria. o Ligaes glicosdicas do tipo -1,3 (insensvel lisozima).

Parede celular de Archaea

Pseudopeptideoglicano de Archaea: ligaes peptdicas cruzadas entre os resduos do NAT (N-acetil talosaminurnico).
Fonte: Madigan et al, 2004.

Parede celular o Estruturas internas parede

o Membrana citoplasmtica o Incluses o Endsporos

o Estruturas externas parede

o Glicoclice (ou glicoclix) o Flagelos o Fmbrias e Pili

o Locomoo da clula bacteriana

o Flagelar o Deslizamento o Taxias (fototaxia, quimiotaxia)

Membrana citoplasmtica dos procariotos

Bicamada de fosfolipdios (invertidos) Poro hidroflica Poro hidrofbica

Membrana citoplasmtica dos procariotos

Estrutura de uma bicamada lipdica. Fonte: Madigan et al., 2004.

o Bacteria possuem hopanol, em substituio ao esterol das MP dos eucariotos (o que torna a MP menos rgida). o Algumas bactrias possuem dobras internas da MP onde localizam-se enzimas e pigmento envolvidos na fotossntese (cromatforos ou tilacides).

Membrana citoplasmtica dos procariotos

Funes: -Barreira para a maior parte das molculas solveis em gua, muito mais seletiva que a Parede Celular. - Stio de localizao de Permeases, protenas especficas que transportam pequenas molculas para dentro da clula; -Enzimas produzem energia e auxiliam a sntese da Parede Celular.

Membrana citoplasmtica bacteriana

Funes de barreira: Osmose e Difuso
Permite a osmose - entrada de gua quando em uma soluo

hipotnica (baixa concentrao de soluto) e sada de gua de dentro da clula para fora quando em soluo hipertnica (alta concentrao de soluto).

Tambm permite a difuso simples, a entrada de molculas pequenas como oxignio e dixido de carbono, dissolvidos por meio da membrana citoplasmtica sem gasto de energia (um processo passivo); Entretanto, a maior parte dos nutrientes transportada por permeases e requer gasto de energia (processo ativo)

Membrana citoplasmtica dos procariotos

Proton motive force is composed of pH and (membrane potential)
Redox loop and electron transfer chain

Dehydrogenase + quionone + Proton pump + cytochrome + ATP synthase

Membrana citoplasmtica dos procariotos

As membranas citoplasmticas de muitas bactrias estendem-se no citoplasma para formar tbulos chamados Mesossomos. Parecem estar: - ligados ao material nuclear; - envolvidos na replicao de DNA; - envolvidos na diviso celular.

http://crv.educacao.mg.gov.br/sistema_crv/banco_objetos_crv/%7B66BDC17A-6FDE-4726-A6E9-6B427F0A7C93%7D_0801_image009.gif

Membrana citoplasmtica bacteriana

A maioria das Membranas Citoplasmticas procariticas no contm esteris (colesterol), por isso so menos rgidas que as clulas eucariticas. Exceo so os micoplasmas, a nica eubactria que no possui parede celular. Possuem esteris junto membrana citoplasmtica ajudando a manter sua integridade.

Mycoplasma as menores bactrias

Membrana citoplasmtica de Archaea

Diferena dos domnios Bacteria e Eucarya est na composio do lipdeo. Ligao do tipo ter entre glicerol e a cadeia lateral. Cadeia lateral no um cido graxo e sim unidades repetitivas de isopreno (hidrocarboneto de 5 C).

(a) Ligao ster (liga o glicerol ao cido graxo em Eucarya e Bacteria). (b) Ligao ter (liga o glicerol cadeia lateral, em Archaea). (c) Isopreno, estrutura da cadeia lateral hidrofbica dos lipdeos de Archaea.
Fonte: adaptado de Madigan et al., 2004.

Membrana citoplasmtica de Archaea

Tipos de cadeia lateral definem a alta resistncia a rupturas que alguns grupos apresentam, inclusive as ocasionadas por altas temperaturas (caso das arquias hipertermfilas).
Principais lipdeos de Archaea e a estrutura de suas membranas.
Fonte: Madigan et al., 2004.

Na monocamada lipdica as cadeias laterais de fitanil de cada molcula de glicerol esto covalentemente ligadas, o que confere a resistncia a rupturas.

Parede o Estruturas internas parede

Membrana citoplasmtica o Incluses o Endsporos

o Estruturas externas parede

o Glicoclice (ou glicoclix) o Flagelos o Fmbrias e Pili

o Locomoo da clula bacteriana

o Flagelar o Deslizamento o Taxias (fototaxia, quimiotaxia)

Incluses da clula bacteriana

Funo de armazenamento de energia ou como reservatrio de constituintes estruturais. Geralmente envolvidas por uma fina camada de lipdeos. Polmeros de armazenamento de carbono PHB (cido poli-b-hidroxibutrico): natureza lipdica PHA (poli-b-hidroxialcanoato): nome coletivo para os grnulos acumulados, cujos polmeros podem variar de tamanho (C4 at C18). Glicognio (polmero de glicose)

Estrutura qumica do PHB. Micrografia eletrnica de uma seo da clula de Rhodovibrio sodomensis. (Fonte: Madigan et al., 2004)

Incluses da clula bacteriana

Grnulos de polifosfato (volutina): reserva de fosfato inorgnico para ser usado na sntese de ATP (tambm encontrados em algas, fungos e protozorios). Grnulos de enxofre: Thiobacillus (bactria do enxofre). Magnetossomos: incluses de xidos de ferro - Fe3O4 em algumas bactrias Gram-negativo. Funo provvel relacionada ao movimento atrao magntica a sedimentos onde [ ] de O2 menor. Vesculas de gs: em procariotos aquticos (cianobactrias, fotossintticas anoxignicas), com funo de aumentar a flutuabilidade.

Magnetossomos: fotomicrografia de Aquaspirillum magnetotacticum com uma cadeia de magnetossomos.

Fonte: Tortora et al., 2005.

Parede celular o Estruturas internas parede

Membrana citoplasmtica Incluses o Endsporos

o Estruturas externas parede

o Glicoclice (ou glicoclix) o Flagelos o Fmbrias e Pili

o Locomoo da clula bacteriana

o Flagelar o Deslizamento o Taxias (fototaxia, quimiotaxia)

Endsporos
Estruturas de resistncia (ao calor, agentes qumicos, dessecao, radiao), desidratadas e durveis. So formados em condies de exausto de nutrientes no meio. Geralmente em bactrias do solo, Gram-positivo (descritos em cerca de 20 gneros de Bacteria). No se observou em Archaea. Bem estudados nos gneros Clostridium e Bacillus. Podem permanecer dormentes por longos perodos de tempo: Clostridium aceticum: 34 anos, frasco perdido em depsito da Universidade da Califrnia. Thermoactinomyces: 2.000 anos. Fragmentos de runas de stio arqueolgico romano no Reino Unido.

Formao do endsporo
Condio de limitao de um ou mais nutrientes essenciais. Em B. subtilis, ~ 200 genes envolvidos no processo de esporulao. Processo completo pode levar 8 horas. Interrupo da sntese de protenas envolvidas nas funes da clula vegetativa e ativao da sntese das protenas especficas do esporo, em resposta a um sinal ambiental.

Clula com metabolismo ativo e mida

Endsporo seco, metabolicamente inerte e extremamente resistente

Estgios da formao de um endsporo

(fonte Tortora et al., 2005)

Composio da estrutura do endsporo

Exsporo Camada externa consiste de membrana lipoprotica que contm aminoacares. Capa do esporo rgida composta de protena rica em ligaes de dissulfeto intramoleculares que confere a resistncia aos agentes qumicos Parede do esporo peptideoglicano que dar origem a parede celular da clula vegetativa; Crtex camada espessa (peptideoglicano diferente com menos ligaes cruzadas); Cerne do esporo Regio interna

Estrutura do endsporo
Camadas adicionais e externas parede celular que protegem o DNA, formadas basicamente por protenas. Ncleo: parcialmente desidratado (contm de 10 a 30% de gua da clula vegetativa) inativa as enzimas, aumenta a termoresistncia.

Apresenta altas [ ] de PPASs (pequenas protenas de cido solveis de esporo): liga-se ao DNA, protegendo-o de possveis danos causados pela radiao, calor seco e dessecamento; pode ser utilizado como fonte de energia e carbono na germinao do esporo.

cido dipicolnico: exclusivo dos esporos, corresponde a 10% do peso seco do esporo.

Endsporo bacteriano. (a) MET de esporo maduro de Bacillus megaterium. (b) Fotomicrografia de fluorescncia de clula de B. subtilis em esporulao. O corante liga-se a uma protena da capa do esporo. Fonte: Madigan et al., 2004.

Germinao do endsporo

Ativada por leso fsica (aquecimento) ou qumica no revestimento do esporo. Enzimas do endsporo rompem as camadas extras. Intumescimento devido entrada de gua; sntese de novas molculas de RNA, protenas e DNA (se condies nutricionais foram favorveis).

Germinao de um endsporo em Bacillus. (a) esporo maduro. (b) ativao perda de refringncia. (c) e (d) extruso nova clula emergindo.
Fonte: Madigan et al., 2004.

Endsporos
Endsporos - Se formam dentro da clula, so exclusivos das bactrias. Possuem parede celular espessa; So altamente refratveis; Altamente resistentes s mudanas do ambiente, exposio a compostos qumicos txicos (desinfetantes). Em M. O. - Colorao especfica aps o aquecimento do material para que os mesmos absorvam o corante. Variam em forma e localizao dentro da clula!

Colorao de Schaeffer-Fulton

Bacillus anthracis Endsporos e clulas vegetativas

Localizao, tamanho e forma dos endsporos

Esporos ovais: localizao central (Bacillus cereus)

Esporos esfricos: localizao terminal (Clostridium tetani)

Esporos ovais: localizao subterminal (Clostridium subterminale)

So mais freqentes nos gneros Clostridium e Bacillus. Geralmente em culturas que se aproximam do final de um crescimento ativo.

Localizao, tamanho e forma dos endsporos

Endsporos bacterianos. Fotomicrografia de contraste de fase ilustrando localizaes intracelulares de endporos em diferentes espcies. (a) Terminais (b) Subterminais (c) Centrais.
Fonte:Madigan et al., 2004.

Atrapalhou a tentativa de contrariar a Teoria da Gerao Espontnea

Condies de experimentos no eliminavam as formas latentes de bactrias e fungos;

No combate ao carbnculo, os microbiologistas compreenderam que as formas latentes do bacilo do carbnculo poderiam sobreviver no solo por anos!!

Clostridium botulinum
Causam a intoxicao alimentar - Botulismo. Possui endsporos: resistem a fervura durante horas; As clulas vegetativas so mortas por temperaturas acima de 70 C, mas a maioria dos endsporos pode resistir a 80 C por at 10 minutos.

Perda de gua durante a esporulao;

Resistncia ao calor

Presena em grande quantidade de cido dipicolnico (DPA) combinado com grande quantidade de clcio.

Clostridium sp.

Bibliografia

- Madigan et al., Microbiologia de Brock. So Paulo:Prentice-Hall, 10 ed., 2004. Captulo 4. - Tortora et al., Microbiologia. Porto Alegre; ArtMed, 8 ed., 2005. Captulo 4.