CORYNEBACTERIUM

CORYNEBACTERIUM
Caractersticas do gnero: Bastonetes Gram positivos, retos ou curvos, delgados, extremidades afiladas
letras chinesas

Catalase positivos Grnulos metacromticos Imveis

MORFOLOGIA BACTERIANA

Colorao de Gram
Forma em clava: grossa em uma extremidade e delgada na outra Arranjo em forma de letras chinesas e ligeira curvatura dos bastonetes

PATOGENIA
Microbiota normal da pele e mucosa Principal patgeno: Corynebacterium diphtheriae Toxigenicidade: exotoxina secretada no foco da infeco Gene Tox: introduzido em cepas de C. diphtheriaae atravs de um bacterifago (tox + e tox -)

Revisando: Mecanismos de ao de TOXINAS

Bloqueiam funo nervosa-toxina tetnica
(contrao muscular), toxina botulnica (inibe contrao muscular)

Bloqueiam a sntese de protenas- toxina

diftrica

A liberao de uma exotoxina a causa de sua patogenicidade e virulncia. Para que isso ocorra, o bacilo deve ser lisogenado por um bacterifago contendo o gene tox, dando origem a descendentes tox+. Cepas no-toxignicas tambm podem causar a difteria, mas sem a virulncia das toxignicas.

REPLICAO DOS BACTERIFAGOS

Os bacterifagos podem ser vrus de DNA ou de RNA que infectam somente organismos procariotos.

 No ciclo lisognico, o vrus invade a bactria ou a clula hospedeira, onde o DNA viral incorpora-se ao DNA da clula infectada. Isto , o DNA viral torna-se parte do DNA da clula infectada. Uma vez infectada, a clula continua suas operaes normais, como reproduo e ciclo celular. Durante o processo de diviso celular, o material gentico da clula, juntamente com o material gentico do vrus que foi incorporado, sofrem duplicao e em seguida so divididos equitativamente entre as clulas-filhas.

A toxina diftrica um polipeptdeo que pode ser clivado em dois peptdeos, os fragmentos A e B. H receptores para o fragmento B na superfcie das clulas, com uma maior concentrao nos tecidos nervoso e miocrdio. A penetrao do fragmento A (txico) nas clulas ocorre atravs do fragmento B. A liberao de toxina pela bactria pode ser demonstrada por fagotipagem ou pelo teste de Elek.

Fatores de virulncia Toxina diftrica (gene tox) principal fator de virulncia tipo A-B Codificada por alguns tipos de fagos, que lisogenizam o bacilo diftrico, sendo o fago mais conhecido denominado fago beta. (Termolbil, letal em concentraes de 0,1 g/Kg de peso;)
1. Fixao da toxina (domnio B) ao receptor presente em tipos celulares 2. Endocitose 3. Translocao do domnio A para o citosol da clula 4. Domnio A ribosila o fator de alongamento da cadeia peptdica interrompe a sntese protica de maneira irreversvel com a morte celular (necrose)

PATOGENIA-TOXINA DIFTRICA

DIFTERIA
Doena infecto contagiosa de curto perodo de incubao Faringite exsudativa Formao de membrana de consistncia mucopurulenta, pode aumentar e envolver a laringe e a traquia

DIFTERIA
Virulncia- cepas produtoras de potente exotoxina Toxina de ao sistmica- sistema cardiorrespiratrio e sistema nervoso central Difteria cutnea

EPIDEMIOLOGIA
Aumento da incidncia nos meses frios Afeta pessoas no imunizadas, de qualquer idade, raa ou sexo (imunidade temporria ) Maior coeficiente de incidncia: crianas na idade pr escolar Letalidade: varia de 5 a 10%

DIAGNSTICO DIFERENCIAL
Faringite estreptoccica Mononucleose infecciosa Infeco por adenovirus Doena de Vicent

DIAGNSTICO LABORATORIAL COLETA E TRANSPORTE

feita com swab nas reas inflamadas da orofaringe e
nasofaringe Amostra em mais de um stio aumenta a sensibilidade A membrana no deve ser removida Coleta da nasofaringe de portadores

Meio de transporte semi slido Amies

Excedendo as 24 horas- meio com slica gel ou carvo

MATERIAL DO TRATO RESPIRATRIO

Coletar a amostra das bordas da pseudomembrana utilizando um swab

DIAGNSTICO LABORATORIAL
MICROSCOPIA Exame direto: baixo valor diagnstico Visualizao de grnulos metacromticos CULTURA Inoculados em meios no seletivos Meios especficos: Agar telurito de potssio, agar cistena telurito: colnias de cor cinza a pretas Meio de Loeffler: microscopia Tipos morfolgicos: gravis, mitis, intermedius TESTES DE TOXIGENICIDADE In vitro: Teste de Elek In vivo: inoculao em cobaias

MICROSCOPIA GRNULOS METACROMTICOS

COLORAO DE AZUL DE METILENO DE LOEFFLER (Azul de metileno, lcool etlico) COLORAO DE ALBERT-LAYBOURN 1) Azul de toluidina, verde malaquita, cido actico, lcool 2) Iodo, iodeto de potssio, gua

Grnulos metacromticos- colorao de Albert- Laybourn

Bacilos longos, curvados e delgados numerosos grnulos bacilos se coram de verde acinzentados

DIAGNSTICO LABORATORIAL
MICROSCOPIA Exame direto: baixo valor diagnstico Visualizao de grnulos metacromticos CULTURA Inoculados em meios no seletivos: agar sangue Meios especficos: gar cistena telurito: colnias de cor cinza a pretas Meio de Loeffler: microscopia Tipos morfolgicos: gravis, mitis, intermedius TESTES DE TOXIGENICIDADE In vitro: Teste de Elek In vivo: inoculao em cobaias

MORFOLOGIA COLONIAL

Corynebacterium diphyteriae em gar sangue

MORFOLOGIA DOS BIOTIPOS

Colnias do tipo gravis Cones achatados com centros cinzas metlico margens radialmente estriadas

Colnias do tipo mitis centro preto que se declina suavemente at um halo descorado

Colnias do tipo intermedius So menores do que mitis e gravis Com centros escuros e margens mais claras

BIOTIPOS

Microrganismo C.diphyteriae biotipo intermedius mitis gravis belfanti C. ulcerans C. pseudotuberculosis

A=produo de cidos; v= varivel

Glicose A A A A A A

Amido + + -

Nitrato + + + v

Uria + +

PROCEDIMENTO DE ISOLAMENTO E INCUBAO

Semear o swab nos meios

gar sangue C 35 24 horas Verificar a presena de colnias beta hemolticas

CTBA (cystine tellurite Bood medium)

C 35 24 a 48 horas

Loeffler inclinado C 35 2 a 4 horas

Colnias tpicas tamanho mdio cinza metlico

Colorao de AlbertLaybourn

Gram

Catalase + Bacilos Gram + diftricos

18 a 24 horas Subcultivar em CTBA

gar sangue

Provas bioqumicas

Semear swab
CTBA (cystine tellurite bood medium)
C 35 24 a 48 horas

Colnias tpicas tamanho mdio cinza metlico

Catalase + Bacilos Gram + diftricos

gar sangue

Provas bioqumicas

Produo de cidos: glicose, maltose, sacarose, manitol e xilose Hidrlise de amido Reduo de nitrato Hidrlise da uria CAMP

PROVAS BIOQUMICAS

Hidrlise de amido
CAMP + -

Hidrlise de uria

COMO REPORTAR O RESULTADO

Liberar resultados preliminares aps 24 e 48 horas de observao de culturas Resultado negativo: cultura negativa para Resultado positivo: provvel corynebacterium diphteriae, encaminhar para laboratrio de referncia para confirmao e teste de toxicidade

corynebacterium diphteriae

DIAGNSTICO LABORATORIAL
MICROSCOPIA Exame direto: baixo valor diagnstico Visualizao de grnulos metacromticos CULTURA Inoculados em meios no seletivos Meios especficos: gar cistena telurito: colnias de cor cinza a pretas Meio de Loeffler: microscopia Tipos morfolgicos: gravis, mitis, intermedius TESTES DE TOXIGENICIDADE In vitro: Teste de Elek In vivo: inoculao em cobaias

TESTE DE ELEK

Elek Teste: antitoxina que foi impregnado numa tira de papel de filtro estril colocada sobre a superfcie do meio de agar. Aps, um inoculo pesado riscado em ngulos retos para a posio da tira de papel, e deixa-se incubar durante 24 horas. Se o organismo toxignico, uma linha visvel de Ag-Ac precipitado ir se formar.

Mtodo in vitro- TESTE DE ELEK

TESTE DE ELEK MODIFICADO

Meio de ELEK adicionado de soro bovino Inculo pesado de amostras testes e controle Disco com antitoxina (10 UI/disco) no centro Incubao 24 a 48 horas a 37C Observao da linha de precipitao

TESTE INTRADRMICO PARA TOXIGENICIDADE

Suspenses de vrias amostras so injetadas na pele do coelho

As leses que no se desenvolvem em coelhos protegidos com antitoxina confirmam que estas so causadas pela toxina diftrica

TRATAMENTO
Administrao da antitoxina diftrica Antibioticoterapia com penicilina e eritromicima Preveno: imunizao ativa com com toxide diftrico: DPT

OUTRAS ESPCIES
C. jeikeium- pacientes imucomprometidos ou submetidos a procedimentos invasivos. Resistncia antimicrobianos C. urealyticum- assciado com infeco urinria C. ulcerans-doena semelhante a difteria. Toxina menos potente C. pseudotuberculosis- doena em animais C. xerosis- infeces oportunistas