Processamento do RNA retirada de ntrons e emenda de xons

OBJETIVOS
Ao nal desta aula, voc deve ser capaz de: Estudar o mecanismo de retirada dos ntrons e emenda dos xons em pr-RNAs mensageiros. Conhecer o mecanismo de ao dos ntrons autocatalticos.

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Pr-requisito
Contedo da Aula 21.

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a u l a

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INTRODUO

Na aula anterior, voc teve a oportunidade de estudar o mecanismo de transcrio em eucariotos e algumas das modicaes que ocorrem nos transcritos que codicam protenas. Mas as novidades no param por a, existem ainda outras particularidades na produo dos RNAs mensageiros que voc ter a oportunidade de estudar nesta aula. Vamos l! Um fato interessante observado nos genes de eucariotos, que codicam protenas, que eles possuem, freqentemente, seqncias que so transcritas, mas no so encontradas nos RNAs mensageiros presentes no citosol, os quais sero utilizados como molde para a sntese protica. Essas seqncias so conhecidas como seqncias intercalares ou ntrons. Os transcritos encontrados no ncleo, contendo ntrons, so chamados RNAs primrios ou RNAs nucleares heterogneos. Ao longo desta aula, voc entender porque eles so chamados heterogneos. Pois bem, somente aps a retirada dos ntrons, temos a formao de um RNA mensageiro maduro. O processo pelo qual os ntrons so removidos chamado emenda. Voc vai encontrar alguns livros que utilizam o termo em ingls splicing, cujo signicado emenda. Nas nossas aulas, vamos utilizar o termo emenda, OK? As seqncias mantidas aps a emenda so chamadas xons. Na verdade, o nome do mecanismo se refere somente segunda etapa, uma vez que primeiro ocorre a retirada dos ntrons e, em seguida, a emenda dos xons. Um fato interessante observado pelos pesquisadores que os eucariotos superiores, quando comparados aos eucariotos inferiores, apresentam maior porcentagem de seus genes interrompidos por ntrons e estes, geralmente, apresentam um tamanho maior. O padro do tamanho dos ntrons segue grosseiramente a rvore evolutiva, ou seja, quanto mais complexo o organismo, maior o tamanho dos ntrons encontrados em seus genes, mas isso no uma regra geral. Alguns genes bacterianos tambm possuem ntrons, mas so muito raros. Falaremos sobre eles mais tarde.

COMO A EXISTNCIA DE NTRONS E A EMENDA DOS XONS FORAM DESCOBERTAS?

A emenda do RNA foi descoberta durante a anlise da sntese de RNAm de adenovrus. O RNAm que codica a protena do capsdeo, chamada hexon, foi isolado por eletroforese em gel, a partir de RNAs citoslicos poliadenilados (RNAs que apresentam a cauda poliA, conforme visto na Aula 21). Para mapear a regio do DNA viral que transcrita para formar o RNAm do gene hexon, os pesquisadores

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com o DNA desnaturado naqueles locais onde houver homologia entre eles, no mesmo? Pois, anal, existe complementaridade das bases, uma vez que uma das tas do DNA serviu de molde para a sntese do RNA. Pois bem, aps a hibridao, o hbrido RNA/DNA foi visualizado atravs de microscopia eletrnica. A Figura 22.1 ilustra o resultado obtido. Observe a gura e acompanhe a explicao a seguir.

5'

DNA

3' B RNA

Figura 22.1: A formao de alas aps a hibridao do RNAm e o DNA viral indicou a presena de regies no DNA, que no estavam presentes no RNAm; (a) arranjo dos xons e ntrons (letras A, B e C) ao longo da poro do DNA do adenovrus; (b) diagrama interpretativo da estrutura observada atravs de microscopia eletrnica, mostrando o pareamento entre o DNA e o RNA; as alas A, B e C correspondem aos ntrons mostrados em (a).

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transcricional, desnaturado. Voc j sabe que o RNA formar um hbrido

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hibridaram o RNAm isolado com o DNA, correspondente unidade

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Aps a hibridao, observou-se a presena de trs alas de DNA ta simples (A, B, e C). Essas alas correspondem aos trs ntrons do gene hexon. Os ntrons presentes no genoma viral no esto presentes no RNAm maduro do gene hexon e, assim, eles formam alas entre as seqncias do xon que hibridam com suas seqncias complementares no RNAm. Anlise semelhante de hbridos de RNA isolados de ncleos de clulas infectadas e DNA viral resultou em RNAs colineares com o DNA viral (transcrito primrio) e RNAs com um ou dois dos ntrons removidos (intermedirios). Da eles serem chamados RNAs nucleares heterogneos, pois no ncleo se encontram RNAs de diferentes tamanhos: RNAs nos quais os ntrons ainda no foram retirados; RNAs nos quais alguns ntrons foram retirados e, RNAs nos quais todos os ntrons foram retirados, formando, assim, um conjunto de RNAs diferentes, mas que, na verdade, so produtos da mesma unidade transcricional. Ficou claro para voc? Quando se trata de unidades transcricionais pequenas, formadas DNAC
DNA complementar um DNA sintetizado a partir de um RNAm. Os RNAs mensageiros podem ser isolados, seletivamente, atravs da puricao de RNAs poliadenilados (que contm a cauda poliA). Para isso, utiliza-se uma resina, na qual foram ligados oligonucleotdeos poliT. Estes vo se parear com a cauda poliA dos RNAs mensageiros, podendo posteriormente ser puricados. A enzima transcriptase reversa utilizada para a sntese da molcula de DNA a partir do RNA poliadenilado. Atravs dessa tcnica, possvel isolar somente as regies funcionais de um gene, ou seja, somente as regies que sero utilizadas para sintetizar protenas, uma vez que as demais seqncias no estaro presentes no RNA mensageiro.

por poucos xons e ntrons, a emenda ocorre logo aps a clivagem e a poliadenilao da extremidade 3 do transcrito primrio. Voc est lembrado que vimos isso na Aula 21? Se tiver dvidas, d uma olhadinha nela. J em unidades transcricionais grandes, formadas por vrios xons e ntrons, a emenda ocorre no RNA nascente, antes que a transcrio esteja completa.

CARACTERIZAO DOS NTRONS E STIOS DE EMENDA NO PR-RNAm

A presena de ntrons, bem como a caracterizao de stios de emenda no pr-RNAm, pde ser determinada atravs da comparao entre a seqncia do DNA genmico, correspondente unidade transcricional, e a seqncia de DNAc preparado a partir do RNAm correspondente. As seqncias que esto presentes no DNA genmico, mas ausentes no DNAC, correspondem aos ntrons e permitem a anlise das seqncias que circundam a juno entre o xon e o ntron. A anlise de muitos RNAs mensageiros diferentes revelou a presena de seqncias moderadamente conservadas. Observe a Figura 22.2 e acompanhe a explicao a seguir.

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xon 5' Pr-RNAm

% A/C A G
70 60 80

ntron
G U A/G A G U
100 100 95 70 80 45

xon 3'
C U A/G A C/U
80 90 80 100 80 20-50b Regio N C A G rica em Pi

80 100 100 60

Figura 22.2: Representao da juno entre os xons e os ntrons. Na extremidade 5do ntron, observa-se a presena do dinucleotdeo GU. Na extremidade 3 do ntron, observa-se a presena do dinucleotdeo AG. A regio rica em pirimidinas (Pi) tambm est representada. A Adenosina em destaque indica o ponto de ramicao. Os nmeros no esquema indicam a freqncia de ocorrncia desses nucleotdeos nos genes analisados. Note que GU, AG e o ponto de ramicao A ocorrem em 100% dos genes estudados. Para os demais nucleotdeos ocorrem variaes.

A juno entre o ntron e o xon no pr-RNAm em eucariotos superiores apresenta uma regio rica em pirimidina localizada acima do stio de clivagem na extremidade 3. Os nucleotdeos conservados universalmente so GU, na extremidade 5, e AG, na extremidade 3 do ntron. A destruio da poro central de diferentes ntrons mostrou que somente 30-40 nucleotdeos so necessrios em cada extremidade do ntron para que a sua retirada ocorra normalmente e, conseqentemente, a emenda dos xons. Um fato bastante curioso foi observado quando pesquisadores utilizaram um DNA recombinante, contendo a juno da extremidade 5 entre o xon e o ntron, a partir de uma unidade transcricional e a juno da extremidade 3 entre o xon e o ntron, a partir de uma outra unidade transcricional. Voc j sabe que um DNA recombinante pode ser obtido quando dois ou mais fragmentos de DNA, oriundos de organismos diferentes, so unidos atravs da ao da DNA ligase. Esse DNA recombinante foi introduzido em clulas cultivadas. Como resultado, observou-se a formao de molculas de RNAm nas quais os dois xons estavam emendados e o ntron
QUIMRICO

foi retirado de

QUIMRICO
Nome que se d a um gene ou unidade transcricional gerada a partir da juno de diferentes segmentos de DNA, de diferentes genes, atravs das tcnicas de DNA recombinante.

maneira correta. A formao de RNAs mensageiros corretos mostrou que o maquinrio de retirada dos ntrons e a emenda dos xons foi capaz de reconhecer corretamente os stios de clivagem presentes nas extremidades 5 e 3, mesmo sendo heterlogos, ou seja, proveniente de organismos diferentes. Isso indica que o mecanismo conservado para os diferentes RNAs primrios.

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Stio de emenda 5'

Ponto de ramicao

Stio de emenda 3'

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RETIRADA DOS NTRONS E EMENDA DOS XONS

Experimentos in vitro usando extratos celulares foram decisivos para a compreenso do mecanismo de retirada dos ntrons e emenda dos xons do RNA. A observao de molculas intermedirias formadas durante a reao de emenda in vitro levou concluso de que os ntrons no so retirados como molculas lineares. O ntron removido na forma de uma ala na qual a guanosina da extremidade 5 unida, de forma pouco usual, a uma adenosina prxima extremidade 3do ntron, atravs da ligao fosfodister 5 2 ilustrada na Figura 22.3. A adenosina chamada ponto de ramicao porque nela ocorre a formao de um brao na estrutura de ala (a posio da adenosina j foi ilustrada na Figura 22.2).

Ligao 2' - 5'

3' da seqncia do ntron

Figura 22.3: Formao da ala no ponto de ramicao. O fosfato 5 da Guanosina na extremidade 5 do ntron ligada ao grupamento hidroxila 2 da Adenosina no ponto de ramicao para formar uma ligao fosfodister 5 - 2. A cadeia ramicada permanece na seqncia nal do ntron que foi retirado e forma a ala. A linha pontilhada representa a seqncia do ntron.

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transestericao mostradas na Figura 22.4.

Figura 22.4: Reaes seqenciais de transestericao durante a emenda. Na primeira reao (transestericao 1), a ligao ster entre o fsforo 5 do ntron e o oxignio 3 do xon 1 trocada por uma ligao ster com o oxignio 2 do resduo adenosina no ponto de ramicao. Na segunda reao (transestericao 2), a ligao ster entre o fsforo 5 do xon 2 e o oxignio 3 do ntron trocada por uma ligao ster com o oxignio 3 do xon 1, liberando o ntron na forma de ala e ligando os dois xons. As setas indicam os pontos nos quais os oxignios dos grupamentos hidroxila ativados reagem com os tomos de fsforo.

Em cada reao, uma ligao fosfato ster trocada pela outra. No ocorre consumo de energia, uma vez que o nmero de ligaes fosfato ster no alterado na reao. O resultado dessas duas transestericaes que os dois xons so ligados e o ntron liberado na forma de uma estrutura de ala.

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demonstrar que a emenda ocorre atravs de duas reaes seqenciais de

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Aps a descoberta da formao da estrutura de ala, foi possvel

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PEQUENAS PARTCULAS RIBONUCLEOPROTICAS NUCLEARES PARTICIPAM DA EMENDA

Seis RNAs pequenos, ricos em Us, so abundantes no ncleo das clulas de mamferos. Esses pequenos RNAs so chamados snRNAs (small nuclear RNAs, que signica RNAs nucleares pequenos) U1 a U6 e seus tamanhos variam entre 107 e 210 nucleotdeos. Mesmo antes da demonstrao da emenda in vitro, vrias observaes indicaram a participao dos snRNAs no mecanismo de emenda dos xons. A seqncia consenso encontrada na extremidade 5 dos ntrons (CAGGUAAGU) mostrou ser complementar a uma seqncia encontrada perto da extremidade 5 do snRNA U1. Alm disso, snRNAs associados com RNAs heterogneos foram encontrados em extratos nucleares. MUTAO
COMPENSATRIA

No ncleo, os snRNAs associam-se com seis a dez protenas para formar partculas ribonucleoproticas nucleares pequenas, chamadas snRNPs (do ingls, small nuclear RiboNucleoProtein). Algumas dessas protenas so comuns a todos os snRNPs, enquanto outras so especcas para snRNPs individuais. Evidncias para a importncia do pareamento da seqncia presente na extremidade 5 do snRNA U1 e a seqncia conservada no stio da emenda na extremidade 5 foram obtidas a partir de experimentos com genes contendo mutaes na seqncia consenso 5 de um ntron. Quando os genes apresentando essas mutaes foram transferidos para clulas, a emenda dos RNAs correspondentes foi bloqueada. Entretanto, quando um gene mutante foi co-inserido no mutante para snRNA U1, contendo uma seqncia compensatria que restaurava o pareamento com o stio da emenda 5, a emenda ocorreu normalmente. Este resultado sugeriu que o pareamento de bases entre o stio 5 de um pr-RNAm e a regio 5 do snRNA U1 necessria para que ocorra a emenda. Aps a descoberta da estrutura de ala formada nos ntrons que foram retirados, uma seqncia consenso foi reconhecida na regio adjacente ao ponto de ramicao em pr-RNAs mensageiros. Na levedura S. cerevisiae, todos os ntrons possuem a seqncia UACUAAC na regio do ponto de ramicao A. Exceto para o ponto de ramicao A, a seqncia da levedura complementar a uma seqncia interna do snRNA U2. Experimentos de
MUTAO COMPENSATRIA,

Voc deve estar lembrado do que vimos nas aulas anteriores sobre o uso de mutantes para entender a funo de diferentes protenas e, assim, poder identicar os genes responsveis pela sua sntese. Pois bem, a mutao compensatria consiste em utilizar um indivduo que apresente uma mutao em um determinado gene ou que no possua um determinado segmento de DNA responsvel por uma funo especca e que, conseqentemente, ser deciente em uma determinada etapa de um processo biolgico. A introduo de um gene ou segmento de DNA que no contenha aquela alterao resgatar a funo original e com isso ser possvel identicar os genes ou os segmentos de DNA que desempenham um papel especco naquele processo.

semelhantes

aos descritos para o snRNA U1 e o stio de emenda na extremidade 5 demonstraram que o pareamento entre o snRNA da U2 e a seqncia

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permitindo que o seu grupamento hidroxila 2 participe da primeira reao de transestericao durante a emenda do RNA. Estes resultados observados para os snRNAs U1 e U2 indicaram que, durante a emenda, eles se pareiam com o pr-RNAm. Experimentos adicionais com mutaes compensatrias demonstraram que outras interaes RNA-RNA tambm ocorrem durante a emenda. A Figura 22.5 ilustra as interaes descritas anteriormente.
a

Figura 22.5: Modelo de interao entre o pr-RNAm e os snRNPs; (a) interaes entre o pr-RNAm e o snRNP U1 e U2; (b) pareamento de bases entre U4 e U6. (c) U6 troca o pareamento com U4 pelo pareamento com U2. O pareamento de bases com U5 posiciona as regies 5 e 3 do xon favorecendo a formao da ala.

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de ramicao A, que no pareado ao snRNA U2, ca exposto,

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do stio de ramicao no pr-RNAm crtico para a emenda. O ponto

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UM MODELO PARA O MECANISMO DE EMENDA

Com base nos resultados citados anteriormente, na identicao de reaes intermedirias e em outras anlises bioqumicas foi possvel propor um modelo para o mecanismo de emenda. Observe a Figura 22.6 e acompanhe a explicao a seguir.

Emendossoma Rearranjo do pareamento RNA/RNA

transestericao 1 Figura 22.6: Representao esquemtica do mecanismo de emenda do RNA. As snRNPs esto ilustradas, bem como as interaes entre elas e o pr-RNAm para formar o emendossoma. As duas transestericaes esto representadas, resultando na emenda dos xons e liberao do ntron, na forma de ala, associado ao emendossoma. O ntron degradado e as snRNPs so recicladas, podendo participar novamente da emenda do RNA.

ATP

transestericao 2

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nos snRNPs U4 e U6 se pareiam em uma longa regio complementar. Voc pode ver a extenso do pareamento na Figura 2.5(b). Este complexo se associa a U5 e em seguida ao complexo formado previamente pelo pr-RNAm pareado com U1 e U2, provavelmente atravs de interaes protena-protena. O complexo ribonucleoprotico resultante, de alto peso molecular (60S) chamado emendossoma. Aps a formao do emendossoma ocorrem rearranjos no pareamento dos snRNAs e os pr-RNAs mensageiros. U4 e U6 se dissociam e, ento, U6 se pareia a uma seqncia do U2 que est localizada 5 em relao seqncia que interage com o ponto de ramicao no pr-RNAm. U1 se desliga do stio de emenda 5 no prRNAm aps o pareamento de U5 com seqncias prximas ao stio de emenda. Estes rearranjos resultam nas interaes mostradas, anteriormente, na Figura 22.5. Aps o rearranjo, a poro protica do emendossoma catalisa as duas reaes de transestericao que resultam na emenda do RNA. Aps a segunda reao de transestericao, os xons ligados so liberados do emendossoma, enquanto a ala do ntron permanece associada s snRNPs. Este complexo nal ntron-snRNP instvel e se dissocia. As snRNPs individuais liberadas podem participar de um novo ciclo de emenda. O ntron liberado rapidamente degradado por uma enzima, que hidrolisa a ligao fosfodister 2 - 5 no ponto de ramicao, e outras RNases nucleares. Estima-se que, pelo menos uma centena de protenas estejam envolvidas na emenda do RNA, o que faz com que esse mecanismo seja to complexo quanto os mecanismos de sntese protica e de iniciao da transcrio. DOMNIOS PROTICOS
Regies na seqncia de um polipeptdeo (protena) responsveis pelas suas funes. No caso das enzimas, os domnios proticos apresentam as regies responsveis pelas atividades catalticas. Esses domnios so geralmente conservados em uma classe de protenas.

CONSEQNCIAS DA EMENDA
O mecanismo de emenda dos RNAs apresenta implicaes evolutivas. Os xons das unidades transcricionais geralmente coincidem com os DOMNIOS PROTICOS. Os xons de diferentes genes podem ser trocados atravs do mecanismo de recombinao. Qual a possvel conseqncia dessa troca? A resposta simples: novos tipos de protenas podem ser formados.

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e com o ponto de ramicao do ntron, respectivamente. O snRNAs

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O modelo prope que U1 e U2 pareiam com o stio de emenda 5

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E no pra por a! A emenda tambm possibilita a criao de xons durante a expresso gnica. Vamos entender isso melhor utilizando um exemplo. No incio do desenvolvimento, alguns pr-RNAs mensageiros podem ser emendados de uma maneira, formando um RNAm que servir de molde para a sntese de uma determinada protena. Mais tarde, no desenvolvimento, o mesmo pr-RNAm, poder ser emendado de maneira diferente, formando um RNAm que servir de molde para a sntese de uma outra protena. Por que ocorre a formao de protenas diferentes? Ora, a seqncia de nucleotdeos no RNAm quem determina os aminocidos que sero incorporados no polipeptdeo. Se a seqncia do RNAm for alterada em conseqncia da retirada dos ntrons e emenda dos xons, a seqncia do polipeptdeo tambm ser alterada. O mecanismo de emenda oferece, ainda, uma outra maneira de regulao da expresso gnica (lembre-se de que a regulao j pode ter ocorrido ao nvel da iniciao da transcrio!!!), pois a ecincia do mecanismo e a forma como ele ocorre inuenciam o tipo de protena que ser produzida. Vamos utilizar o exemplo do gene que codica a tropomiosina para ilustrar o que foi explicado anteriormente. A tropomiosina uma protena envolvida na contrao muscular e est presente em muitos tipos celulares diferentes. A anlise do RNAm da tropomiosina em diferentes tipos celulares revelou arranjos diferentes dos xons. Observe a Figura 22.7 e acompanhe a explicao a seguir.

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Figura 22.7: Organizao do gene da -tropomiosina de rato e os sete padres de emenda alternativa, que ocorre nos diferentes tipos celulares apresentados. Em cinza escuro: xons presentes em todos os RNAm; em cinza mais claro (prximo aos dois xons representados em cinza escuro): xon especco para clulas do msculo liso; em branco: xons especcos para clulas do msculo estriado e em preto: xon varivel. Os xons da musculatura lisa e estriada codicam 39 a 80 aminocidos que so exclusivos. xons alternativos tambm ocorrem nas extremidades 3 dos diferentes RNAs mensageiros. 5NT - regio 5 no traduzida; 3NT - regio 3 no traduzida.

A utilizao de diferentes xons de um pr-RNAm para formar diferentes RNAs mensageiros maduros chamada emenda alternativa. O nome se deve ao fato de existir um grande nmero de possibilidades (alternativas) de se combinar os diferentes xons para produzir os transcritos maduros. Estima-se que cerca de 5% dos pr-RNAs mensageiros de eucariotos utilizem a emenda alternativa para formar protenas diferentes, a partir de um mesmo RNA primrio. Quando ocorre a emenda alternativa, alguns ntrons passam a funcionar como xons, pois eles no so retirados do RNA primrio. Para o gene que codica a tropomiosina, um nico pr-RNAm capaz de formar sete tipos de RNAs mensageiros. Observe que, quando comparamos o RNAm produzido nas clulas da musculatura lisa ao RNAm produzido nas clulas da musculatura estriada, observamos duas regies que atuam como xons na musculatura estriada, sendo retiradas como ntrons nas clulas da musculatura lisa. Do mesmo modo, uma regio que atua como xon na musculatura lisa retirada como ntron nas clulas da musculatura estriada.

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O mecanismo bastante interessante, voc no acha? Todavia, a sua regulao no bem conhecida, pois natural que nos perguntemos: Como que os ntrons e os xons so escolhidos? Uma das explicaes que protenas ligantes de RNA podem inibir ou ativar o mecanismo de emenda, atravs da exposio ou no dos stios de ligao reconhecidos pelas snRNPs. Uma outra possibilidade a disponibilidade das snRNPs em alguns tipos celulares, ou seja, maior concentrao implica em maior ecincia na retirada dos ntrons e emenda dos xons, enquanto menor concentrao implica em menor ecincia, que resulta na no retirada de alguns ntrons.

NTRONS AUTOCATALTICOS
Alm do mecanismo de emenda descrito anteriormente, no qual participam as snRNPs e ocorre a formao do emendossoma, existem outros tipos de ntrons que no utilizam protenas ou ribonucleoprotenas para a emenda dos xons. A grande novidade o fato de eles serem autocatalticos, ou seja, o prprio RNA catalisa a reao. Isso foi demonstrado, em 1982, por Thomas Cech e colaboradores durante o estudo do RNA ribossomal do protozorio ciliado Tetrahymena thermophila. Os pesquisadores sintetizaram o RNA primrio (contendo ntrons) in vitro e observaram que o RNA ribossomal maduro podia ser produzido sem a participao de nenhuma enzima protica. Posteriormente foi descoberto um RNA ribossomal capaz de promover a ligao peptdica entre dois aminocidos. Essas duas descobertas reforaram a idia de que alguns RNAs podem apresentar atividade cataltica, sendo por isso chamados ribozimas (termo resultante da juno de Ribonuclico e Enzimas). Os ntrons autocatalticos foram divididos nos grupos I e II, a m de discriminar o mecanismo de emenda. Os ntrons do grupo I so encontrados em alguns genes nucleares, mitocondriais e cloroplastiais que codicam RNAs ribossomais, RNAs mensageiros e RNAs transportadores. J os ntrons do grupo II, so encontrados em pr-RNAs mensageiros mitocondriais e cloroplastiais de fungos, algas e plantas. Os raros ntrons descritos em genes bacterianos pertencem aos grupos I e II. Da mesma forma que ocorre com a emenda dependente de snRNPs, a retirada dos ntrons e emenda dos xons ocorre atravs de duas transestericaes.

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O ntron do grupo I utiliza uma guanosina, como co-fator, cujo grupamento 3' OH utilizado como um nuclelo na primeira etapa do corte. Esta guanosina pode ser mono, di ou trifosfato. Observe a Figura 22.8 e acompanhe a explicao a seguir.

Figura 22.8: Mecanismo de autoprocessamento de ntrons do grupo I.

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fsforo e, em cada etapa, uma nova ligao fosfodister formada.

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Um grupo hidroxila 2'ou 3'da ribose faz um ataque nucleoflico em um

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O grupamento OH forma uma ligao fosfodister com a extremidade 5' do ntron. A hidroxila 3' do xon age como um nuclelo, em uma reao semelhante na extremidade 3' do ntron. O resultado a retirada do ntron e a emenda dos xons. O autoprocessamento do RNA de Tetrahymena pertence a esse grupo. A guanosina se liga ao RNA e ataca a extremidade 5do ntron, levando ao rompimento da ta de RNA neste local, enquanto permanece ligada ao RNA. Essa ligao resultar na exposio de uma extremidade 3' OH (da guanosina). Essa extremidade do xon, ento, ataca a extremidade 3'OH do xon anterior, resultando na juno dos xons e na liberao do ntron. A extremidade 3'do ntron ataca uma ligao fosfodister perto da extremidade 5'do prprio ntron, gerando um fragmento circular de RNA mais um fragmento de 15 nucleotdeos contendo a guanosina. O RNA circular perde 4 nucleotdeos e se abre, produzindo uma molcula linear. Este autoprocessamento requer a integridade estrutural do RNA inicial, pois o pareamento intracadeia que gera uma estrutura secundria e terciria essencial para as etapas de corte. Isso pode ser comprovado atravs da utilizao de agentes desnaturantes que inibiram o processamento. Algumas seqncias consenso foram caracterizadas nesta classe de ntrons. Uma regio rica em pirimidina (CUCUCU) ocorre no ponto de corte 5'e seqncias ricas em purinas (GGGAGG) ocorrem dentro dos ntrons. Nos ntrons do grupo II, o padro semelhante, exceto que o nuclelo da primeira etapa, nesse caso, o grupamento hidroxila 2', fornecido por um Adenilato presente na seqncia do ntron. A Figura 22.9 ilustra as etapas envolvidas na retirada do ntron. Assim, ocorre a formao de uma ala como um intermedirio, da mesma forma que ocorre no ponto de ramicao visto anteriormente para a emenda dependente de snRNPs.

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Stio 5'

Stio 3' aceptor

xon 5'

ntron

xon 3'

ataque nucleoflico

xon 5'

ntron

xon 3'

xon 5'

xon 3' ntron Ataque nucleoflico

xon 5'

xon 3' ntron retirado na forma de ala

Figura 22.9: Mecanismo de autoprocessamento de ntrons do grupo II.

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Ponto de ramicao

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importante ressaltar que esses dois tipos de autoprocessamento apresentam caractersticas tambm presentes no processamento catalisado pelo emendossoma. Em ambos, a etapa inicial consiste de um ataque de um grupo OH de uma ribose no ponto de corte 5'. A extremidade 3' OH, recm-formada no xon anterior, atacar o ponto de corte 3' do xon seguinte, formando uma ligao fosfodister xonxon. Alm disso, em ambas as reaes, o grupo fosfato de cada ponto de corte mantido nos produtos e so reaes de transestericao. Os mecanismos sugerem que o processamento mediado pelo emendossoma evoluiu a partir dos mecanismos autocatalticos, sendo que os ntrons do grupo II seriam um intermedirio entre os dois mecanismos uma vez que apresentam a formao de uma ala durante a retirada do ntron. O principal ponto de evoluo, nesse caso, o fato de que a atividade cataltica passou do RNA para molculas proticas, permitindo, assim, uma melhor regulao do processo.

AFINAL, QUAL A IMPORTNCIA DAS RIBOZIMAS?

Voc j deve estar convencido de que para que ocorra a vida, necessrio que muitas reaes qumicas aconteam, dando origem a macromolculas essenciais ao metabolismo. Voc j estudou isso em Bioqumica e em outras disciplinas. E agora, em Biologia Molecular, voc est vendo mais uma vez que as enzimas desempenham um importante papel nessas reaes qumicas, que vo desde antes da sntese do DNA at a produo das prprias protenas. Voc sabe ainda que as enzimas so proticas e, por isso, devem ser codicadas por um cido nuclico. Mas para que exista um cido nuclico, necessria a participao de enzimas. E agora? Quem surgiu primeiro, o cido nuclico ou a protena? Esta pergunta intriga muitos dos pesquisadores que trabalham na rea, os quais propuseram algumas hipteses. Na dcada de 1960, Carl Woese, Francis Crick e Leslie Orgel observaram a complexidade funcional e estrutural do RNA e propuseram que essa macromolcula poderia possuir uma funo cataltica alm da sua funo bsica informacional, o que abriria um novo campo de investigao sobre os primrdios da vida. A descoberta do RNA cataltico, conforme descrito anteriormente, e de RNAs que apresentam a capacidade de catalisar a sua prpria replicao permitiu formular a hiptese

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organismos vivos, competindo entre si por meio de seleo natural. Aquelas que possuam maior longevidade e estabilidade eram capazes de se replicar mais vezes e com maior delidade e, como conseqncia, aumentavam a sua populao e contribuam para a extino de molculas instveis. Com o surgimento do cdigo gentico e a conseqente produo de protenas, criou-se um mecanismo mais eciente, uma vez que estava separado do mecanismo informacional e no necessitava de uma estrutura especial para realizar as suas tarefas. possvel que, a partir da, cada um dos sistemas pde evoluir com maior ecincia, produzindo uma molcula melhor e mais estvel, capaz de armazenar a informao, o DNA, e outra molcula mais malevel, capaz de assumir diferentes conformaes que atuassem em reaes diferentes, gerando uma melhor especicidade enzimtica. Assim, os RNAs autocatalticos, ou ribozimas, seriam uma espcie de elo perdido para os processos conhecidos atualmente.

RESUMO
Na aula de hoje, voc teve a oportunidade de conhecer sobre um mecanismo adicional de modicao de RNAs que consiste na retirada de ntrons, que so regies no codicadoras e a emenda dos xons, que so as regies codicadoras. Vimos que, em eucariotos, existe um tipo de emenda que necessita da participao de um complexo formado por ribonucleoprotenas, as quais reconhecem seqncias especcas do RNA e retiram o ntron na forma de uma ala. Alm disso, voc teve a oportunidade de conhecer o mecanismo de emenda alternativa, que resulta na produo de diferentes RNAs mensageiros a partir de um mesmo RNA primrio. Ao nal da aula, voc teve a oportunidade de aprender sobre outros mecanismos nos quais o prprio RNA desempenha a quebra da regio do ntron e a juno dos xons e que so, por isso, chamados ntrons autocatalticos. Por ltimo, discutimos a implicao evolutiva da existncia de tais RNAs.

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mundo do RNA, as molculas se comportavam praticamente como

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de um mundo primordial formado apenas por molculas de RNA. Nesse

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EXERCCIOS
1. O que so ntrons? De que forma a sua existncia pode ser comprovada? 2. Quais seqncias conservadas puderam ser caracterizadas ao se comparar ntrons de genes diferentes? 3. De que forma ocorre a retirada dos ntrons e a emenda dos xons? 4. O que so snRNPs? Qual a sua funo no mecanismo de emenda? 5. O que emenda alternativa? Qual a sua principal conseqncia? 6. Como ocorre a emenda dos ntrons dos grupos I e II? 7. Qual a importncia evolutiva dos RNAs autocatalticos?

AUTO-AVALIAO
Se voc compreendeu o contedo desta aula, no deve ter encontrado diculdades para responder aos exerccios propostos. Sem fugir regra dos assuntos tratados anteriormente, nesta aula, apresentamos uma srie de processos moleculares mediados por muitas enzimas em inmeras etapas. Recomendamos, mais uma vez, que ao trmino de cada tpico voc faa esquemas e resumos e volte ao contedo da aula para ver se compreendeu tudo corretamente. A partir da prxima aula, veremos os mecanismos de regulao da expresso gnica em procariotos e eucariotos. Como voc j deve ter notado, os contedos no so independentes e, a no-compreenso de uma etapa compromete a compreenso da prxima. Por isso, importante que voc compreenda bem as aulas sobre transcrio em procariotos e eucariotos para que possa entender as aulas sobre regulao da expresso gnica. Bom estudo e at l!

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