ENZIMAS Y CINETICA ENZIMATICA

ENZIMAS Y CINETICA ENZIMATICA

BREVE REVISIN HISTRICA El nombre de enzima, fue propuesto en 1867 por el fisilogo alemn Wilhelm Khne (1837-1900), deriva de la frase griega en zyme, que significa en fermento. Sin duda, la fermentacin alcohlica es la reaccin enzimtica ms antigua que se conoce. Se crea que este fenmeno y otros similares eran reacciones espontneas, hasta que en 1857 el qumico francs Louis Pasteur comprob que la fermentacin slo ocurre en presencia de clulas vivas. Sin embargo, el qumico alemn Eduard Buchner descubri en 1897 que un extracto de levadura libre de clulas puede producir fermentacin alcohlica. La antigua incgnita se resolvi; la levadura produce la enzima y sta lleva a cabo la fermentacin. En 1783 el bilogo italiano Lazzaro Spallanzani haba observado que la carne poda ser digerida por jugos gstricos extrados de halcones. ste fue el primer experimento en el que se llev a cabo una reaccin vital fuera de los organismos vivos. Tras el descubrimiento de Buchner, los cientficos asumieron que, en general, las fermentaciones y las reacciones vitales eran producidas por enzimas. Pero, todos los intentos de aislar e identificar su naturaleza qumica fracasaron. Ms tarde, en 1926, el bioqumico estadounidense James B. Sumner consigui aislar y cristalizar la ureasa. Cuatro aos despus su colega John H. Northrop aisl y cristaliz la pepsina y la tripsina. Se descubri que las enzimas eran protenas, y Northrop demostr que la protena era la enzima y no un simple 7 transportador de otro compuesto . En los ltimos aos, la investigacin sobre la qumica enzimtica ha permitido aclarar algunas de las funciones vitales ms bsicas de las enzimas. La ribonucleasa, una enzima tridimensional simple descubierta en 1938 por el bacterilogo estadounidense Ren Jules Dubos y aislada en 1946 por el qumico estadounidense Moses Kunitz, fue sintetizada por cientficos estadounidenses en 1969. La sntesis consiste en unir 124 molculas de aminocidos en una secuencia muy especfica para formar la macromolcula. Dicha sntesis permiti identificar aquellas reas de la molcula que son responsables de sus funciones qumicas, e hizo posible crear enzimas especializadas con propiedades de las que carecen las sustancias naturales. Este potencial se ha visto ampliado durante los ltimos aos por las tcnicas de ingeniera gentica que han hecho posible la produccin de algunas enzimas en grandes cantidades. PARA QUE SIRVEN LAS ENZIMAS? Algunas enzimas, como la pepsina y la tripsina, que intervienen en la digestin de las protenas de la carne, controlan muchas reacciones diferentes, mientras que otras como la ureasa, son muy especficas y slo pueden acelerar una reaccin. Otras liberan energa para la contraccin cardiaca y la expansin y contraccin de los pulmones. Muchas facilitan la conversin de azcar y alimentos en distintas sustancias que el organismo precisa para la construccin de tejidos, la reposicin de clulas sanguneas y la liberacin de energa qumica para mover los msculos. Adems, la pepsina, la tripsina y otras enzimas poseen la propiedad peculiar denominada autocatlisis que les permite originar su propia formacin a partir de un precursor inerte denominado zimgeno. Como consecuencia, estas enzimas se pueden reproducir en un tubo de ensayo. El uso mdico de las enzimas est ilustrado por la investigacin sobre la L-asparaginasa, que se piensa es una herramienta importante para el tratamiento de la leucemia; se ha descubierto que las

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dextrinasas pueden prevenir la cada de los dientes, y que las alteraciones enzimticas estn ligadas a enfermedades como la fenilcetonuria, la diabetes, la anemia y otros trastornos sanguneos. Como norma, las enzimas no atacan a las clulas vivas. Sin embargo, tan pronto muere una clula, sta es digerida por enzimas que rompen sus protenas. La resistencia de las clulas vivas se debe a la incapacidad de las enzimas de atravesar la membrana celular mientras las clulas tienen vida. Cuando la clula muere, su membrana se hace permeable y la enzima puede penetrar en la clula y destruir las protenas en su interior. accin de una enzima sobre un sustrato. La fermentacin alcohlica y otros procesos industriales importantes dependen de la accin de enzimas, sintetizadas por las levaduras y bacterias empleadas en el proceso de produccin. Algunas enzimas se utilizan con fines mdicos. En ocasiones son tiles en el tratamiento de zonas de inflamacin local; la tripsina se emplea para eliminar sustancias extraas y tejido muerto de las heridas 7 y quemaduras . IMPORTANCIA DE LAS ENZIMAS Dentro de la gran variedad de funciones que realizan las protenas, una de las que se puede considerar como de mayor importancia es la capacidad que tienen para actuar como catalizadores. Desde el punto de vista del nivel de estructuracin proteca, una enzima es funcional y por tanto debe tener estructura terciaria o cuaternaria. Sin embargo, existen muchas enzimas que no solamente requieren de una parte proteca (a la parte proteca se le conoce como apoenzima y por si sola es inactiva) para poder acelerar la velocidad de una reaccin, sino que ademas requieren de una molcula pequea de peso molecular bajo, que puede ser inorgnica u orgnica (a esta molcula se le conoce como cofactor) y que ayuda a la enzima a realizar su trabajo aceptando o donando grupos que la enzima no puede porque cambiara su estructura y por tanto su funcin. Al complejo apoezima ms cofactor se le conoce como haloenzima y es totalmente activo. El cofactor es una molcula que se va a encargar de ayudar a la enzima en su trabajo enzimtico aceptando o donando grupos que la enzima no puede aceptar o donar por que modificara su estructura y por tanto su funcin. 2+ 2+ 2+ 2 2+ El cofactor puede ser un in metalico como: Fe , Zn , Mn , Mg , Cu , etc. o una molcula orgnica como las vitaminas o derivados de las vitaminas y a estas ltimas por enlazarse debilmente a la enzima se conocen como coenzimas. CARACTERISTICAS ESPECIALES DE LAS ENZIMAS Las enzimas son catalizadores biolgicos de naturaleza proteca que se encargan de acelerar la velocidad con la que ocurren las reacciones que se llevan a cabo en una clula. Realizan la transformacin de la molcula sobre la cual actan a la que se le llama sustrato. Todas las enzimas son protenas y presentan tres caractersticas que no presentan los catalizadores qumicos que normalmente se conocen: 1) son los catalizadores mas eficientes que se conocen, pues en pequeisimas cantidades son capaces de acelerar la velocidad de una reaccin termodinmicamente favorable hasta en ms de un milln de veces; 2) presentan especificidad que se refiere a la capacidad que tienen las enzimas de actuar sobre un solo sustrato (especificidad absoluta) o sobre dos o ms sustratos que generalmente son qumicamente parecidos (especificidad relativa) y; 3) presentan la particularidad de que su actividad esta sujeta a regulacin, es decir, la presencia de molculas denominadas moduladores provoca que la enzima se active. es decir, -trabaje-

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(moduladores positivos +), o disminuya notablemente (en ocasiones detenga) su actividad (moduladores negativos -).

SITIO ACTIVO La especificidad enzimtica reside en una determinada regin de la superficie enzimtica, formada por aminocidos especiales llamado sitio activo. El modelo original de,sitio cataltico para referirse al sitio activo, fue propuesto por Fisher y representaba la interaccin sustrato-enzima como una analoga entre llave-cerradura; el modelo consideraba al sitio cataltico rigido, pero las protenas en solucin son flexibles por lo cual no se explicaba de todo la actividad enzimtica. Koshland en 1967 propuso un modelo al que llamo -ajuste inducido- , en este caso el sustrato induce un cambio conformacional en la estructura terciaria de la protena, como la mano en un guante. El modelo permite explicar la influencia de otros sitios, llamados reguladores o alostricos, que modifican la actividad al provocar cambios conformacionales en el sitio cataltico. LOCALIZACION Y DISTRIBUCION DE LAS ENZIMAS Dentro de un organismo las enzimas se encuentran distribuidas en los diferentes rganos y tejidos donde realizan su funcin especfica. en la clula, algunas enzimas se encuentran compartamentalizadas y ordenadas. P. ej. en las clulas hepticas, las enzimas de la gliclisis estn localizadas en el citoplasma, mientras que las del ciclo de Krebs en las mitocondrias.

T1.Localizacin intracelular de las principales enzimas y rutas metablicas REGIN CELULAR Citoplasma Mitocondria Lisosomas ENZIMAS Y RUTAS METABLICAS Gluclisis: ruta de las hexosa monofostato; glucognesis y glucogenolisis: sntesis de acidos grasos; catabolismo de purinas y pirimidinas; peptidasas; aminotransferasas; aminoacilsintetasas Ciclo de los cidos tricarboxilicos; oxidacin de cidos grasos; oxidacin de aminocidos; alargamiento de cidos grasos; sntesis de la urea; transporte electrnico y fosforilacin oxidativa acoplada. Lisozima; fosfatasa cida; hidrolasas, incluyendo proteasas, nucleasas, glucosidasas, arilsulfatasas, lipasas, fosfolipasas y fosfatasas. NADH y NADPH citocromo c reductasas; oxidasas de funcin mixta relacionadas con el citocromo b, y el citocromo P450; glucosa 6 fosfatasa; nuclesido difosfatasa; esterasa, glucuronidasa, y glucuroniltransferasa; rutas de sntesis de protenas; sntesis de fosfoglicridos triacilgliceroies, sntesis y reduccin de esteroides Galactosil y glucosiltransferasa; condroitina sulfotransferasa; 5nucleotidasa; NADH-citocromo c reductasa, glucosa 6-fosfatasa Urato oxidasa; D-aminocido oxidasa; alfa-hidroxicido oxidasa; catalasa; oxidacin de cidos grasos de cadena larga Rutas de Biosntesis de DNA y RNA

Retculo endoplasmtico (microsomas) Golgi Peroxisomas Ncleo

NOMENCLATURA Y CLASIFICACION La forma de nombrar originalmente a las enzimas se hiz relacionando el nombre del sustrato sobre el cual actan y adicionando la terminacin ASA; p.ej. la enzima que cataliza la hidrolisis de la urea -ureasa; la enzima que cataliza la hidrlisis de la maltosa a dos molculas de glucosa - maltasa-; la enzima que realiza la hidrlisis de la sacarosa a una molcula de glucosa y una de fructosa - sacarasa, etc. Posteriormente se combin el nombre del sustrato o el nombre del producto con el tipo de la reaccin
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que catalizaba, p.ej. la enzima que transforma al cido lactico en cido piruvico se llam lactico deshidrogenasa, pues realizaba la deshidrogenacin del ac. lctico Actualmente ,se ha establecido una forma sistemtica de clasificar y nombrar a las enzimas de acuerdo a la recomendacin de la Comisin Internacional de Enzimas. Este sistema divide a las enzimas en seis clases principales, cada una de las cuales se divide a su vez en subclases y subsubclases, adems cada enzima se le denomina de acuerdo a un nombre recomendado, generalmente corto y apropiado para su uso, un nombre sistemtico que identifica a la reaccin que cataliza y por un nmero de clasificacin que posee cuatro digitos y se utiliza cuando es necesaria la identificacin precisa de una enzima en especial, como es el caso de los trabajos de investigacin que se publican en revistas cientficas. T.2. Grupos propuestos por la Comisin de Enzimas 1. Oxidoreductasas. Enzimas que catalizan oxidorreducciones de los grupos CH-OH, CH-CH, C=O, CHNH2 y CH= NH. Subclases representativas: 1.1 Enzimas que actan sobre el grupo CH-OH como donador de electrones. Por ejemplo: + 1.1.1.1 Alcohol:NAD oxidoreductasa [alcohol deshidrogenasa] 1.4 Enzimas que actan sobre el grupo CH-NH2 como donador de electrones. 2. Transferasas. Enzimas que catalizan la transferencia de grupos (distintos del Hidrgeno) de un slo carbono, residuos aldehdicos o cetnicos, y grpos acilo, alquilo, glucsilo o que contienen fsoforo o azufre. Subclases representativas: 2.3 Aciltransferasas. 2.7 Enzimas que catalizan la transferencia de grupos que contienen fsforo. Por ejemplo 2.7.1.1 ATP:D-hexosa-6-fosfotransferasa [Hexocinasa]. 3. Hidrolasas. Enzimas que catalizan la hidrlisis de los enlaces de tipo stre, ter, pptido, glucosilo, anhdrido de cido, C-C, C-halogeno o P-N. Subclases representativas: 3.1 Enzimas que actan sobre los enlaces de tipo ster. Ejemplo: 3.1.1.8. Acilcolina acilhidrolasa [seudocolinesterasa]. 3.2 Enzmas que actan sobnre compuestos glucoslicos. 3.4 Enzimas que actan sobre los enlaces peptdicos. 4. Liasas. Enzimas que catalizan la remosin de grupos de los sustratos por mecanismos diferentes de la hidrlisis, formando dobles ligaduras. Incluyen enzmas que actan sobre los enlaces C-C, C-O, C-N, C-S, C-halogeno. Subgrupos representativos: 4.2. Carbono oxgeno liasas. 5. Isomerasas. Esta clase comprende todas las enzimas que catalizan la interconversin de ismeros pticos, geomtricos o de posicin. Hay dos subclases: 5.2 Cis-Trans isomerasas. 5.3 Enzimas que catalizan la interconversin de aldosas y cetosas. 6. Ligasas o sintetasas. Enzimas que catalizan la combinacin de dos compuestos acoplada a la rotura de un enlace pirofosfrico en el ATP o compuesto semejante. Se incluyen enzimas que catalizan reacciones que forman enlaces C-O, C-S, C-N y C-C. Subclases representativas: 6.3 Enzimas que catalizan la formacin de enlaces C-N 6.4 Enzimas que catalizan la formacin de enlaces C-C.

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ENZIMAS OLIGOMERICAS E ISOENZIMAS Existen enzimas que constan de una sola cadena polipeptdica integrando un monmero; a este grupo pertenecen la lisozima, ribonucleasa, tripsina. Otro grupo de enzimas contienen dos o ms subunidades asociadas por enlaces no covalentes; a este grupo pertenecen algunas enzimas de la gliclisis, las isoenzimas y las enzimas alostricas. Las isoenzimas o isozimas son diferentes protenas con la misma actividad enzimtica, que se originan en diferentes tejidos y presentan un desplazamiento electrofortico diferente. Difieren en su composicin aminocida, por lo que sus diferencias estn determinadas genticamente. El caso ms ilustrativo es el de la deshidrogenasa lctica, enzima tetramrica que posee dos subunidades diferentes: H (corazn); M (msculo). estas dos subunidades se combinan en cinco formas diferentes para formar cinco isoenzimas: H4 , H3 M, H2M2, HM3 y M4. Cada una de ellas presenta parmetros cinticos diferentes. T.3 Enzimas Oligomricas
ENZIMAS Fosforilasa a Hexocinasa Ffructocinasa Enolasa Desh. Lctica NO. SUBUNIDADES 4 4 2 2 4 PM. C/SUBUNIDAD 92,500 27,500 78,000 41,000 35,000 PM TOTAL 370,000 102,000 190,000 82,000 150,000

T.4 Isoenzimas LDH

TIPO LDH-1 LDH-2 LDH-3 LDH-4 LDH-5 COMPOSICIN HHHH HHHM HHMM HMMM MMMM LOCALIZACI N Miocardio Miocardio Carebro y rion Suero Hgado y Musc. Esqueltico

COMO ACTAN LAS ENZIMAS? Un catalizador, acta disminuyendo la energa de activacin que las molculas reaccionantes requieren para poder transformarse en productos. El catalizador en este caso la enzima se combina transitoriamente con la molcula reaccionante para formar un complejo (Enzima-sustrato) que tiene un estado de transicin de menor energa de activacin que el que tendra la misma reaccin no catalizada. Un catalizador ayuda a que un mayor nmero de molculas reaccione por unidad de tiempo que las que reaccionaran en ausencia de la enzima.

E + S
En donde: E S ES P = Enzima = Sustrato = Complejo Enzima-Sustrato = Producto

ES

Para el caso de los catalizadores protecos como las enzimas es necesario que ocurran una serie de eventos para que pueda existir la formacin de un producto:

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a. b. c. d.

Acercamiento y orientacin favorable entre la enzima y el sustrato. Reconocimiento qumico, entre enzima y sustrato (puede ser por medio de grupos funcionales). Fijacin del sustrato por la enzima ( a travs de algn tipo de enlace). Transformacin qumica (Ataque nucleoflico, electroflico, adicin o eliminacin de un grupo, etc. cualquier tipo de reaccin en la cual participe una enzima) e. Liberacin del producto. Despus de estos eventos la enzima se encuentra libre y en posibilidad de volver a transformar otra molcula de sustrato, y as sucesivamente. ACTIVIDAD ENZIMATICA La actividad de una enzima se expresa en trminos de la cantidad de producto formado (o desaparicin de sustrato) por cantidad determinada de enzima por unidad de tiempo. La unidad estndar de actividad enzimtica (U) es la cantidad de enzima que cataliza la transformacin de un micromol de sustrato por minuto a 25 C en condiciones ptimas d ensayo. La actividad especfica se define como el nmero de unidades de enzima por miligramos de protena (U/mg de protena). El antiguo nmero de recambio fue recientemente sustituido por actividad molecular o molar, se define como el nmero de moles de sustrato transformado por un mol de enzima por minuto (mol/min/Mol d enzima). La Comisin de enzimas de la Union Internacional de biqoumica ha propuesto una nueva unidad, el Katal (Kat) que se define como la conversin de un mol de ustrato por segundo. T.5 Actividad Molecular de algunas enzimas
ENZIMA Anhidrasa carbnica Catalasa Beta- amilasa Beta-galactosidasa Succinato deshidrogenasa ACTIVIDAD MOLECULAR 36,000,000 5,600,000 1,100,000 12,000 1, 150

CINTICA ENZIMTICA La cintica enzimtica se encarga del estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y de los factores que las afectan. El primer tratamiento matemtico de cintica enzimtica que se realiz, lo llevaron a cabo Michaellis y Menten y llegaron a establecer un modelo matemtico que explica de una manera muy aproximada el comportamiento de una reaccin enzimtica con un solo sustrato.

TRATAMIENTO DE MICHAELLIS-MENTEN
k1 k3

E + S
k2

ES

Se define lo siguiente: [ ET ] = Concentracin total de Enzima [ S ] = Concentracin deSustrato [ ES ] = Concentracin del complejo Enzima-Sustrato [ P ] = Concentracin del producto [ EL ] = Concentracin de Enzima libre [ EL ] = [ E ] - [ ES ]

velocidad de formacin:

V1 = d [ ES ]

/dt

= K1 ( [ E L ] [ S ] )

----------------------- (1) ----- (2)

6

= K1 ( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ]
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velocidad de descomposicin:

V2 = - d [ ES ]

/dt

= K2 [ ES ]

------------------------ (3) ------------------------ (4)

V3 = - d [ ES ] / d t = K3 [ ES ]
En el equilibrio:

velocidad de formacin = velocidad de descomposicin [ ES ] = constante

K1 ( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ] = K2 [ ES ] + K3 [ ES ] K1 ( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ] = [ ES ] ( K2 + K3 )

( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ] )

[ ES ] =

( K 2 + K3 )

K1

KM Constante de Michaellis

( [ ET ] - [ ES ] ) [ S ] = KM [ ES ] ( [ ET ] [ S ] - [ ES ] [ S ] ) = KM [ ES ] [ ET ] [ S ] = K M [ E S ] + [ E S ] [ S ] [ ET ] [ S ] = [ E S ] ( K M + [ S ] ) [ E S ] = [ ET ] [ S ]

/ KM

+ [ S ] ------------- (5) --------- (6)

Vo = K3 [ E S ]
sustituyendo (5) en (6):

Vo = K3 [ ET ] [ S ]

KM + [ S ] ------- (7)

Vmax = K3 [ ET ] -------- (8) [ ET ] = Vmax

ustituyendo (9) en (7):

K3 ---- (9)

Vo = K3 ( Vmax [ S ]

K3 ) / KM + [ S ]

Vo = Vmax [ S ] / KM + [ S ]
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ECUACION DE MICHAELLIS-MENTEN Cuando Vo = Vmax KM = [ S ]

Vo

VMax/2

[S]
KM

TRATAMIENTO DE LINEWEAVER-BURK
Inverso de la ecuacin de Michaellis:

1 / V = KM + [ S ] / V Max [ S ]
Rearreglando:

1 / V = KM / V Max [ S ] + [ S ] / V Max [ S ] 1 / V = KM / V Max 1 / [ S ] + 1 / VMax

Y = m X + b

1 / Vo

m = KM / Vmax

b = 1 / VMax

- 1 / KM

1/[S]

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FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE UNA REACCION ENZIMATICA. Las enzimas son protenas y por tanto su solubilidad se ve modificada al variar ciertos factores ambientales como son el pH, la temperatura, la concentracin salina, el solvente, etc. Sin embargo, no todas las protenas se afectan de la misma forma al variar cada uno de los diferentes factores, as mismo se puede hablar de un comportamiento general de la variacin de la velocidad de reaccin enzimtica con respecto a cada uno de los factores que la modifican pero al hablar de enzimas especficas existen algunas cuyo comportamiento puede caer en alguna situacin extrema. pH Debido a su naturaleza proteca las enzimas se ven afectadas estructural y funcionalmente al variar el pH del medio en el cual se encuentran y por lo tanto su actividad cataltica se puede regular en la clula por variaciones de este factor. El comportamiento general de la velocidad de una reaccin catalizada por enzima con respecto a las variaciones de pH tiene una forma de campana de Gauss; en la cual se puede observar un mximo que indica un valor o un rango de pH en el cual la actividad cataltica de la enzima es mxima y haca ambos lados se observa una disminucin de actividad por efecto de la neutralizacin que puede existir de los grupos cargados que existen en la superficie de la enzima y que en un momento dado pueden llevar a la desnaturalizacin de la enzima, momento en el cual se observa su minima actividad, lo cual puede ocurrir en valores de pH inferiores o superiores al pH ptimo.

Vo

pH ptimo

pH

TEMPERATURA El efecto que la temperatura puede ejercer sobre la velocidad de una reaccin se debe al aumento de energa cintica de las molculas reaccionantes que les permite alcanzar ms rpidamente la cima energtica que deben sobrepasar para transformarse en productos. Se conoce que por cada aumento de 10 grados en la temperatura se duplica la velocidad de una reaccin, pero en el caso de las enzimas es necesario considerar el efecto de desnaturalizacin trmica. Una grfica de vel de reaccin vs temperatura muestra en un principio un efecto positivo al aumentar la temperatura existe un aumento de la vel de reaccin, posteriormente se observa una zona en la cual la velocidad es maxima y despus decrece, el punto maximo indica una temperatura ptima de trabajo de la enzima donde existe un mnimo de desnaturalizacin, despus el efecto desnaturalizante es mayor que el efecto de aumento en la energa cintica de los reaccionantes y se observa una disminucin de actividad, que en muchas ocasiones puede ser muy drstico.

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Vo

T(C)
T ptima

TIEMPO En una grafica de velocidad de reaccin vs tiempo, se observa una linea recta de pendiente positiva es decir a mayor tiempo la velocidad aumenta, siempre y cuando la concentracin de sustrato sea mucho mayor que la concentracin de enzima. Para una determinada cantidad de enzima se forma una cierta cantidad de producto; al permitir que el sustrato y la enzima interaccionen ms tiempo el producto formado es mayor y esto se puede observar como un aumento en la velocidad de reaccin. CONCENTRACIN DE ENZIMA Una grafica de vel. de reacc vs concentracin de enzima, muestra que a mayor concentracin de enzima la velocidad de reacccin aumenta. Mientras mayor sea la cantidad de enzima presente mayor cantidad del complejo enzima sustrato se va a formar y mayor ser la cantidad de producto obtenido, siempre y cuando se considere que la concentracin de sustrato no es un factor limitante, es decir, la concentracin de sustrato siempre debe ser mayor a la concentracin de enzima.

Vo

[E]
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INHIBICION ENZIMTICA Existen dos tipos de inhibicin: la inhibicin irreversible y la inhibicin reversible. En la inhibicin irreversible el inhibidor ( I ) se une covalentemente y modifica uno o ms grupos funcionales esenciales para la catalisis lo que provoca la inactivacin total de la molcula de enzima, la cual no tiene posibilidad de regenerarse, este tipo de inhibicin se considera como un envenenamiento enzimtico. En el caso de una inhibicin reversible se pueden tener tres tipos generales: competitiva, no competitiva y acompetitiva y cada una de ellas se puede reconocer perfectamente por los efectos que el inhibidor provoca sobre la cintica de la reaccin. Experimentalmente se realiza por comparacin de los parmetros cinticos en presencia y ausencia de una molcula inhibidora. Para que el estudio cintico sea vlido el inhibidor debe combinarse rpida y reversiblemente con la enzima o con el complejo enzima-sustrato. Inhibicin competitiva En una inhibicin competitiva, el sustrato ( S ) y el inhibidor ( I ) compiten por unirse al sitio activo de la enzima ( E ) . El inhibidor y el sustrato son qumicamente parecidos y ambos pueden formar un complejo con la enzima, pero uno de ellos no puede sufrir disociacin posterior para formar un producto y regenerar a la enzima. Los efectos inhibitorios disminuyen al aumentar la concentracin de sustrato, simplemente por efecto de Ley de accin de masas.

E E

+ +

S I

ES EI

E X

Los efectos que un inhibidor competitivo provoca sobre la cintica de una reaccin se pueden observar al hacer la representacin doble reciproca, en presencia y ausencia del inhibidor. Lo que se puede observar en este caso es que la grafica con inhibidor cruza al eje de las Y aproximadamente en el mismo punto que el de la cintica normal y al eje de las X en un punto mas cercano al origen que el caso de la normal. Esto significa que un Inhibidor competitivo afecta la KM pero no modifica a la VMax. Inhibicin no competitiva En la inhibicin no competitiva, el inhibidor y el sustrato se unen a la enzima en sitios fsicos diferentes; no es necesario que el inhibidor sea quimicamente parecido al sustrato pues no existe competencia por el sitio activo. El inhibidor y el sustrato se unen tanto a la enzima libre como al complejo ES. Este tipo de inhibicin no disminuye sus efectos con el aumento de concentracin del sustrato.

E ES

+ I + I

EI ESI

X X

Al realizar la representacin doble reciproca en presencia y ausencia del inhibidor, se puede observar que la recta con inhibidor cruza al eje de las Y en un valor mas elevado que la normal y al eje de las X la cruza en un punto mas o menos cercano o igual al que la cruza la normal. Esto significa que un inhibidor no competitivo disminuye a la Vmax pero mo modifica a la KM . Inhibicin acompetitiva o incompetitiva La inhibicin acompetitiva o incompetitiva se presenta generalmente en reacciones enzimticas con dos o ms sustratos. Es un tipo de inhibicin compleja en la cual el inhibidor se une unicamente al complejo

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enzimas sustrato ES para formar un complejo inactivo que no sufre disociacin posterior para formar un producto y regenerar a la enzima.

ES

ESI

En una representacin doble reciproca, se reconoce a este tipo de inhibicin porque al comparar las graficas con y sin inhibidor se observan dos rectas paralelas, es decir, para este tipo de inhibicin la pendiente de las rectas permanece constante, pero ambos parmetros cinticos cambian, pero la relacin KM /VMax permanece constante.

1/ Vo

No competitiva Competitiva Normal

Acompetitiva

1 / [S]

REGULACION ENZIMATICA En un tubo de ensayo, las enzimas funcionan como un sistema cerrado y se acumula el producto de la reaccin. Sin embargo, en la clula, los productos de la reaccin no se acumulan ya que son utilizados como sustratos de otra enzima, y los productos de sta son sustratos de otra enzima y asi sucesivamente (sistemas multienzimticos) hasta llegar al llamado producto final.

E1

E2

E3

E4

E8

I
E6 E5

J
E7

E F

E1 enzima alostrico

Los sistemas multienzimticos bsicamente pueden ser de tres tipos: a) S. M. soluble b) Complejo multienzimtico c) S. M. Asociado a membrana

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ENZIMAS Y CINETICA ENZIMATICA

Aunque todas las reacciones catalizadas por enzimas son reversibles en el tubo de ensayo, en la clula, la caracterstica secuencial de las vas metablicas hace que el flujo del metabolismo celular sea irreversible y permanentemente dinmico. En un sistema tan complejo como la clula existen mecanismos muy finos de regulacin o control de la multitud de reacciones simultaneas que ocurren. Regulacin alostrica La actividad cataltica de algunas enzimas se ve afectada por ciertas molculas que producen un cambio en la actividad, pero no se modifican ppor la accin. Estas molculas se denominan efectores, modificadores o moduladores, por lo general, estos tienen poca o nula semejanza estructural con el sustrato. Un modulador alostrico cambia la afinidad de la enzima hacia el sustrato. Los efectores alostricos positivos (+) incrementan la afinidad enzima- sustrato y los efectores alostricos negativos (-) hacen lo inverso. El sitio alostrico donde se une el efector positivo se conoce como centro activador. El sitio alostrico donde se une un efector negativo se denomina centro inhibidro. Una enzima alostrica, es aquella cuya actividad puede ser modulada por la presencia de moduladores. Represin e induccin Los estudios de regulacin enzimtica han permitido reconocer tres tipos de protenas enzimticas: constitutivas, inducibles y reprimibles. las enzimas constitutivas estn presentes en concentraciones constantes durante toda la vida de la clula, debido probablemente a una relacin constante entre sntesis y degradacin, son las enzimas de las vas metablicas principales. Las enzimas inducibles son aquellas que normalmente se encuentran en concentracin baja en la clula y a medida que se requiere mayor cantidad la velocidad de sntesis aumenta, con respecto a su degradacin. P. ej. Betagalactosidasa en E. Coli. El tercer tipo de enzimas es el de las reprimibles. La sntesis de estas enzimas se suspende si esta presente en abundancia el peroducto final de la va metablica donde funcionan.. P. ej, Sntesis de histidina en Salmonella. Existen otros formas de regulacin enzimtica como Fosforilacin/desfosforilacin (fosforilasa del glucgeno), entre otras. la regulacin covalente:

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Elaborado por: Q. Arcadia Hernndez Beltrn

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