DETERMINACIN

DE LOS PRINCIPALES CAROTENOIDES DE LA GUAYABA

(PSIDIUM GUAJAVA L.)

Marisabel Ventosa*, Jos Luis Rodrguez y Olga Lidia Zerqueira Instituto de Investigaciones para la Industria Alimenticia Carretera al Guatao, km 3, C.P. 19 200, La Habana, Cuba E-mail: mary@iiia.edu.cu
RESUMEN
El objetivo del presente trabajo comprendi la identificacin y cuantificacin de los principales carotenoides presentes en la guayaba (Psidium guajava L). Se tomaron 7 muestras obtenidas en diferentes mercados de La Habana. La separacin y cuantificacin se realiz mediante cromatografa de columna abierta, combinada con espectrofotometra visible. El estudio de recobrado para los carotenoides presentes oscil entre 89 y 96 %. Se identificaron y cuantificaron como carotenoides mayoritarios: fitoflueno, -caroteno y licopeno, con una concentracin promedio de 2,0 g/g; 2,1 g/g y 44,1 g/g, respectivamente. Palabras clave: carotenoides, beta caroteno, licopeno, guayaba.

ABSTRACT Determination of major carotenoids in guava (Psidium guajava L.)

The objective of present work was the identification and quantification of the major carotenoids present in guava (Psidium guajava L). Seven samples from different markets of Havana were analyzed. Open column chromatographic combined with visible spectrophotometry was used for the separation and quantification of major carotenoids. Recoveries were found to be 89-96%. Phytofluene, -carotene and licopene were identified and quantified as majority carotenoids with average concentrations of 2.0 g/g; 2.1 g/g and 44.1 g/g, respectively. Key words: carotenoids, beta carotene, lycopene, guava.

INTRODUCCIN La guayaba pertenece a la familia Myrtaceae, una de las ms ricas en especies, gneros y variedades; que a pesar de ser una fruta no ctrica, presenta elevados niveles de vitamina C y reviste gran importancia en la dieta debido a la variedad y cantidad de sus componentes, que varan grandemente entre cultivos y localidades (1).

En la actualidad, ha cobrado mayor importancia el estudio de los carotenoides por parte de analistas, investigadores y mdicos en general. Los carotenoides son hidrocarburos liposolubles altamente insaturados derivados del isopreno, cuya caracterstica distintiva es un sistema de dobles enlaces conjugados que constituye el grupo cromforo, responsable de la capacidad de absorcin de energa en el espectro visible. Esta insaturacin es la causa principal de la oxidacin y degradacin que pueden sufrir estas sustancias (2). Inicialmente la importancia del estudio de los carotenoides estuvo basada en su papel como precursores de la vitamina A, jugando un rol principal el -caroteno (3); sin embargo, diversos estudios epidemiolgicos han demostrado que el consumo diettico de carotenoides se relaciona con una disminucin del riesgo de padecer diferentes tipos de cncer; enfermedades cardiovasculares, cataratas,

*Marisabel V entosa F ernndez Ventosa Fernndez ernndez: Licenciada en Ciencias Alimentarias (IFAL,U.H., 2004). Labora en la Direccin de Vegetales en el Laboratorio Qumico-Fsico, donde se dedica a realizar anlisis qumico-fsico a frutas y vegetales.

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degeneracin macular, enfermedades neurolgicas, inflamatorias y desrdenes inmunolgicos (4-6); as como acciones atribuidas a la capacidad antioxidante y a la propiedad de capturar el oxgeno singlete que presentan los carotenoides (7). El mtodo tradicional para este tipo de anlisis es la cromatografa en columna abierta, aunque el mtodo por excelencia es la cromatografa lquida de alta resolucin (2,8). El objetivo del presente trabajo comprendi la identificacin y cuantificacin de los principales carotenoides presentes en la guayaba ( Psidium guajava L). MATERIALES Y MTODOS

La concentracin de cada carotenoide aislado e identificado fue determinada midiendo la absorbancia (A) de las distintas fracciones a la longitud de onda recomendada para la cual se emplearon las frmulas siguientes:
M ( x) = A V 10 6 f C(x) = M(x)/ P 1% E1 cm 100

Donde:
1% E1 cm = Coeficiente de extincin del carotenoide para

un solvente determinado de acuerdo con (9), cm-1 (g/100 mL)-1 A= V= Absorbancia de la solucin de carotenoide. Volumen de la solucin conteniendo el carotenoide.

Las frutas maduras fueron adquiridas en mercados agropecuarios de diferentes municipios de La Habana. Los frutos sin pelar, se cortaron en cuartos, y se tomaron las secciones opuestas, las que posteriormente fueron homogeneizadas en una licuadora. Se tomaron 5 g de la muestra homogeneizada y se realiz la extraccin adicionando 50 mL de la mezcla ter de petrleo 40-60 C: etanol (1:1 v/v), seguido de filtracin en embudo Bchner a presin reducida. Estas operaciones se repitieron hasta que el residuo qued exento de colores asociados a los carotenoides. Posteriormente, se elimin la fase acuosa del extracto mediante el empleo de un embudo separador. Finalmente el extracto de carotenoides fue secado con sulfato de sodio anhidro y concentrado en un rotoevaporador a presin reducida. Para la separacin cromatogrfica se emple una columna cromatogrfica de 1x 20 cm utilizando como fase estacionaria Mg0: celite en proporcin 1:1(m/m). La separacin de cada carotenoide tuvo lugar con la adicin de ter de petrleo y cantidades crecientes de ter dietlico y acetona. Para la identificacin de cada fraccin se tuvieron en cuenta: el comportamiento en la columna cromatogrfica, espectro de absorcin obtenido, con un espectrofotmetro Shimadzu 2401PC, pruebas de confirmacin mediante cromatografa de capa fina, as como pruebas qumicas, reordenamiento epxido furanoide e isomerizacin cis-trans catalizada con yodo.

C(x) = Concentracin del analito expresada en mg/g. P= Peso de la muestra, expresado en g.

M(x) = Masa del carotenoide expresada en mg. f= Factor de dilucin.

Para la cuantificacin del valor de vitamina A, se tom como base la actividad provitamina A de los carotenoides identificados. Se asumi que 1 g equivalente de retinol (E R) corresponde a 6 g de -caroteno (10). Para el ensayo de recobrado se realiz una cromatografa preparativa con el material de estudio para la obtencin de patrones de los carotenoides mayoritarios, de los cuales se tomaron alcuotas de concentracin conocida, se continu la marcha analtica hasta la obtencin final del carotenoide y posteriormente se volvi ha determinar la concentracin. El porcentaje de recobrado fue calculado a partir de la frmula siguiente: % recobrado = M2 (x) / (M1 (x). 100) Donde: M 2 (x) = masa del carotenoide determinado analticamente, expresada en g.

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M1 (x) = masa inicial del carotenoide, expresada en g. RESULTADOS Y DISCUSIN En la separacin cromatogrfica se obtuvieron 3 fracciones, la primera incolora, la cual mostr fluorescencia al exponerse a radiacin UV y eluy rpidamente con ter de petrleo. La segunda fraccin de color naranja tenue y la tercera de color rojo intenso, fueron eluidas con 2 % de ter dietlico en ter de petrleo y 2 % de agua en acetona, respectivamente. Los carotenoides fueron identificados comparando el espectro de absorcin obtenido con los reportados en la literatura, por lo que se identifica la fraccin 1 como fitoflueno, la fraccin 2 como -caroteno y la fraccin 3 como licopeno (9,11). Los valores observados de los Rf de cada carotenoide fueron aproximadamente 1, lo cual excluye la presencia de sustituyentes oxigenados (9 ). El -caroteno y licopeno obtenidos fueron todo trans ya que la prueba de isomerizacin result negativa y se descart la oxidacin del -caroteno ya que la prueba de reordenamiento epxido furanoide fue negativa. En el estudio de recobrado se obtuvo 98 % de recobrado para el -caroteno y 89 % para el licopeno.

La Tabla 1 expone el contenido de fitoflueno, -caroteno y licopeno determinados en el presente estudio, adems, los resultados obtenidos en otras investigaciones realizadas en guayaba (13-15). Se observan diferencias cuantitativas, las cuales vienen dadas por la influencia de factores tales como: variedad, estado de maduracin, clima, composicin del suelo, duracin de la postcosecha, procesamiento y almacenamiento (12). El contenido promedio de licopeno de las muestras de guayabas analizadas represent ms de 90 % del total de carotenoides y el mismo est dentro del rango de valores informados en la literatura, excepto el brindado por Setiawan y col. (9). El contenido promedio de -caroteno, se encuentra en el lmite inferior del rango de valores informados por otros autores (13-15). Este caroteno, a diferencia del licopeno, exhibe una gran variabilidad (Tabla 1). Este comportamiento se debe bsicamente a la influencia del factor variedad, ya que en Cuba actualmente se propaga a gran escala la variedad Enana, dentro de la cual se destacan dos clones: EEA-18-40 y EEA-123, lo que pudiera determinar en gran medida las diferencias cuantitativas observadas.

Tabla 1. Concentracin (g/g) de fitoflueno, -caroteno y licopeno reportados en guayaba Carotenoide Presente estudio n=7 2,0 (1,5) 2,1 (1,9) 44,1 (13) Variedad a IAC-4 n=4 3,7 (0,7) 53 (6)
a

Variedad a indefinida n=3 12 (5) 53 (14)

b

Variedad a indefinida n=3 5,5 (2,3) 47 (16)

c

Variedad b indefinida n=3 4,14 (3,0-5,8) 53 (44,8 -60,6)

Variedad c indefinida n=3 9,84 (1,0-26,7) 11,50 (7,7-18,2)

Fitoflueno -Caroteno Licopeno

Valores medios (desviacin estndar). ref. 13, ref. 14, ref. 15.

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La concentracin de fitoflueno (Tabla 1) exhibe una variabilidad similar al -caroteno, aunque esta no se puede explicar nicamente por la existencia de dos clones, sino por factores como estado de maduracin, clima y composicin del suelo. El aporte de vitamina A dado por el -caroteno, presente en la guayaba y calculado a partir de los datos presentados en la Tabla 1 result, como valor promedio, 35 g equivalentes de retinol (E.R.)/100 g de fruta.

CONCLUSIONES Fueron separados e identificados como carotenoides mayoritarios de la guayaba Psidium guajava , el fitoflueno, -caroteno y licopeno en concentraciones promedio de 2,0; 2,1 y 44,1 g/g, respectivamente. Teniendo en cuenta que la concentracin promedio de licopeno en la guayaba fue similar a los contenidos aportados por alimentos como el tomate, se puede considerar como una fuente excelente de este carotenoide.

REFERENCIAS
1. Caizares, Z. La guayaba y otras frutas Mirtceas. Ed. Gente Nueva, La Habana, 1968, pp.17-33. 2. Rodrguez-Amaya, D. Carotenoides y preparacin de alimentos: La retencin de los carotenoides provitamina A. Dpto. de Ciencia de Alimentos. Universidad Estatal de Campinas, Brasil, Ed. OMNI, 1999, pp. 10-12. 3. Philip, T. y Chen, T. J. Food Sci. 53(6):1703-1706, 1988. 4. Hughes, D. Revista del Laboratorio Clnico Mdico 129: 309-317, 1997. 5. Bendich, A. Biological functions of dietary carotenoids. En: Carotenoids in Human Health. Ed. L.M.Canfield, N.I. Krinsky, y J. A. Olson, Ann N.Y. Acad. Sci. New York, 1993. 6. Bendich, A. Pure Appl Chem. 66: 1017-1024, 1994. 7. Palozza, P. y Krinsky, N. Methods Enzymol. 213: 403-420, 1992. 8. Rodrguez-Amaya, D.; Raymundo, L. y Lee, T. Ann. Bot. 40:615-524, 1976. 9. Rodrguez-Amaya, D. A guide to carotenoid analysis in foods. Departamento de Ciencia de los Alimentos. Facultad de Ingeniera de los Alimentos. Universidad Estatal de Campinas, Brasil, Ed. OMNI, 2001. 10. Mahan, K. y Escott-Saump, S. Nutricin y dietoterapia dKrausse. McGraw-Hill Interoamericana, 9a ed., Mxico, pp. 7980, 1998. 11. Adewvsi, S. y Bradbury, J. J. Food Sci. Agri. 62: 375-383, 1993. 12. Rodrguez-Amaya, D. Nature and distribution of carotenoids in foods. En: Charalambous G (ed), Shelf-life studies of foods and beverages. Chemical, biological, physical and nutritional aspects. Elsevier Science Publishers. Amsterdam, pp. 547-589, 1993. 13. Padula, M. y Rodrguez-Amaya, D. Food Chem. 20:11-19, 1986. 14. Wilberg, V. y Rodrguez-Amaya, D. Lebensmittel-Wisseenschaft und Technologie. 28(5): 474-480, 1995. 15. Setiawan, B.; Sulaeman, A.; Giraud, D. y Driskell, J. J. Food Composition and Analysis 14:169-176, 2001.

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