GENES QUE PARTICIPAN EN EL DESARROLLO DE LAS ESTRUCTURAS CRNEOFACIALES DURANTE LA TERCERA SEMANA DE VIDA INTRAUTERINA: ESTADOS 7-16.

Anglica Martnez. Carlos Forero. David Pea. Victoria Martn. Orlando Martnez. Lina Quintero. Desire Champsaur. Erika Simanca. Adolberto Torres. Jose Ariza. Patricia Maza. Irene Rodrguez. Liliana Otero. La tercera semana del desarrollo se caracteriza por ser un perodo de desarrollo rpido. Coincide con la primera falta del perodo menstrual de la embarazada. Al comienzo de la tercera semana aparece en la superficie dorsal del embrin bilaminar, la lnea primitiva, en su porcin caudal y en la lnea meda. Dicha estructura se va alargando progresivamente debido al agregado de clulas en su regin caudal y al mismo tiempo su extremo craneal sufre un engrosamiento que constituye el ndulo primitivo o de Hensen. Formacin del mesodermo Alrededor del decimosexto da del desarrollo y por un mecanismo de gastrulacin, que se define como importantes migraciones celulares que terminarn con la aparicin de la tercera hoja germinativa embrionaria, el mesodermo. Las clulas del ectodermo proliferan en los bordes de la lnea primitiva y migran haca el interior para formar el mesodermo, mientras que las clulas restantes permanecen formando la capa superficial. El mesodermo se ubica entre el ectodermo y el endodermo. A partir del mesodermo se originar el mesnquima intraembrionario. Formacin de la notocorda El embrin bilaminar se ha transformado en trilaminar. Desde el ndulo primitivo se produce una migracin celular en sentido craneal formando en la lnea media un cordn, el proceso notocordal. Este proceso avanza haca la lmina procordal que ndica el futuro lugar de la boca entre el ectodermo y el endodermo y con las lminas de mesodermo situadas lateralmente. La lmina o placa procordal, de Esta placa morfologa circular, es un rea del endodermo formada por clulas columnares que al unirse al ectodermo formar la membrana bucofarngea bilaminar. embrin. Caudalmente, en relacin a la lnea primitiva se encuentra la membrana cloacal donde tambin se fusionan ectodermo y endodermo. En consecuencia, a nivel de la membrana bucofarngea y cloacal el embrin es bilaminar (ectodermo y endodermo). procordal es una de las ms importantes organizadoras de la regin ceflica del

Al comienzo el embrin es plano y circular adoptando con posterioridad una morfologa piriforme. A medida que crece el proceso notocordal el embrin se va alargando. El proceso notocordal, constituido inicialmente, por un cordn celular macizo, se ahueca secundariamente para formar el conducto notocordal. La pared central de dicho conducto, se asocia al endodermo fusionndose e incorporndose a l, en tanto que la pared dorsal se engrosa para constituir la placa notocordal. Al final del proceso la placa notocordal se independiza del endodermo y forma la notocorda definitiva. En esta etapa, un grupo de clulas ectodrmicas vecinas al sitio de cierre del tubo neural se separan para constituir las crestas neurales. El tubo neural es el que da origen a todo el sistema nervioso central, mientras que las crestas neurales darn origen a casi todo el sistema nervioso perifrico, las meninges, melanocitos, mdula suprarrenal y odontoblastos. A diferencia del tubo neural, que permanece como una estructura continua, las crestas neurales se fragmentan con la aparicin de las somitas, originando as los ganglios de la raz posterior de la mdula espinal. A medida que la notocorda se desarrolla, el ectodermo suprayacente sufre un engrosamiento y constituye la placa neural que origina el sistema nervioso central. Hacia el da 18 se produce en la placa neural una invaginacin a lo largo de su eje, formndose el surco neural, el cual presenta a cada lado, los pliegues neurales. Al finalizar la tercera semana dichos pliegues comienzan a aproximarse y se fusionan. En esta etapa, un grupo de clulas ectodrmicas vecinas al sitio de cierre del tubo neural se separan para constituir las crestas neurales. El tubo neural es el que da origen a todo el sistema nervioso central, mientras que las crestas neurales darn origen a casi todo el sistema nervioso perifrico, las meninges, melanocitos, mdula suprarrenal y odontoblastos. A diferencia del tubo neural, que permanece como una estructura continua, las crestas neurales se fragmentan con la aparicin de las somitas, originando as los ganglios de la raz posterior de la mdula espinal. Neurulacin: As, el surco neural se transforma en el tubo neural. El cierre del tubo neural no es simultneo a lo largo de l, sino que comienza en la regin cervical del embrin progresando luego hacia caudal y ms hacia ceflico. El tubo permanece temporalmente abierto a la cavidad amnitica en los denominados neuroporos anterior o ceflico y posterior o caudal los que luego se cierran en ese mismo orden.

Diferenciacin del mesodermo El mesodermo intraembrionario al finalizar la tercera semana comienza a diferenciarse en: Mesodermo paraaxial, que dar origen a las somitas; Mesodermo lateral, del cual va a derivar el mesodermo somtico, el esplcnico y el celoma intraembrionario; y Mesodermo intermedio o futuro cordn nefrgeno, que da origen al sistema urogenital. Hacia el final de la tercera semana el mesodermo paraaxial se fragmenta en estructuras cuboides y pares, denominadas somitas. Las primeras somitas aparecen prximas al extremo ceflico de la notocorda y luego se forman metamricamente en direccin caudal. Debido a la aparicin de estas estructuras, el perodo de tiempo correspondiente entre los das 20 y 30 se llama perodo somtico, donde se forman 38 pares de somitas alcanzando al final de la quinta semana el nmero de 42 a 44 pares de somitas. Las somitas se dividen en dos zonas, el esclertomo (ventromedial) y el dermomitomo (dorso-lateral), de los que derivan respectivamente las vrtebras y costillas en el primer caso y, la dermis de la piel y el tejido muscular estriado en el segundo. En el mesodermo lateral van apareciendo espacios aislados que ms tarde van confluyendo para constituir el celoma intraembrionario, el cual divide a aqul en: a) mesodermo parietal o somtico que se ubica prximo al ectodermo (somatopleura) y que da lugar a la pared corporal y b) en mesodermo visceral o esplcnico prximo al endodermo (esplacnopleura) que origina los elementos conectivos musculares corporales. De este celoma van a derivar las cavidades pleural y peritoneal. La tercera semana del desarrollo se caracteriza por la formacin de una capa germinativa mesodrmica. Esta semana se extiende desde el da 15 hasta el da 21. El fenmeno mas caracterstico de esta semana es la formacin de un surco angosto denominada lnea primitiva 1 . Durante este periodo, se desarrolla la gastrulacin, este es el primer proceso del embrin. Para lograr esta accin y por forma celular, morfogentico en el desarrollo embrionario. En este periodo los grupos de clulas se localizan en diferentes regiones especficas coordinada supuesto, el de ciclo disposicin celular es imprescindible una predestinacin celular, la celular, los cambios del tamao y grupal de ciertas clulas.
2

movimiento

Entre estos movimientos

1 2

Biologa medica de Langman. 5 edicin, Editorial panamericana. Current opinion in genetics & Development 2002, 12:423-429

coordinados estn: la migracin que se produce por parte de las clulas del epiblasto direccin de la lnea primitiva, donde se desprende y se desliza por y el debajo de esta. Estas clulas se localizan posteriormente entre el epiblasto la gastrulacin. Ms adelante estas clulas se irn incrementando entre el epiblasto y el hipoblasto. Es importante mencionar que en el extremo ceflico de la lnea primitiva se prolongacin ceflica o notocordal que durante la invaginaran tambin algn nmero considerable de clulas las cuales forman una prolongacin a modo de tubo, llamado ocurre aproximadamente en el da 17. Para una correcto, y, coordinado disposicin y comportamiento de las clulas establecimiento del las tres capas germinativas, es importante la

hipoblasto creando la capa mesodrmica que al establecerse da inicio como tal a

participacin de un sin nmero de genes. Cada da se descubren nuevos genes en la participacin del crecimiento y desarrollo craneofacial. A continuacin se describen algunos de los genes que intervienen en este proceso. Durante la gastrulacin los factores de transcripcin Twist y Snail, se expresan el las clulas dorsales y en las clulas ventrales (mesodermo). El gen Snail en participan en la la polaridad mantenimiento de ausencia de Twist, promueve la invaginacin celular, y ambos regulacin de la circulacin celular y en el apical/basal para promover la gastrulacin . El factor de trascripcin Snail, acta directamente como represor de ciertos genes que son expresados en los futuros territorios del neuroectodermo 4 . La represin de algunos genes, tales como Crumb, shot gastrulation, E-cadherina, Delta y otros del complejo Enhancer of Split hacen que se efectu exitosamente la gastrulacin. Por otra parte los FGF regulan la morfognesis y los patrones de movimiento de la capa mesodrmica, durante el periodo de gastrulacin 5 . Twist es un factor de trascripcin, que originalmente se encontr en la mosca Drosophila. Este gen tiene una funcin importante en la embriognesis temprana en el momento de la gastrulacin e interviene en la formacin del tubo neural Baller-Gerold. Tercera semana- estado 8:
3 4 6-7 3

La mutacin de este gen est relacionada con los sndromes Saethre-Chotzen y y

Ibid Hemavathy K, Meg X , Differential regulation of gastrulation and neuroectodermal genes expression by Snail un the Drosophila embryo. Development 1997, 124:3683-3691 5 Ibid 6 Laura Flrores ; Avances en craneosinostosis, Rev Mex neuroci 2003; 4(2);63-74 7 Chen Zf, Behringer RR. TWist is required in brain mesenchyma for cranial neural tube morphogenesis. Genes Dev 1995;9:686-699

El estado 8 del embrin, est caracterizado por la aparicin de la fosa primitiva, el canal de la notocorda, y el canal neuroentrico; esto es identificado en el da 18 despus de la ovulacin. La formacin de la lnea primitiva esta inducida por la activina que es un miembro de la familia de las TGF- beta y por factores de transcripcin como el nodal, que es otro miembro de la familia del TGF- beta y HNF-3beta. Posteriormente esta lnea crece y forma una invaginacin o surco primitivo, que posee una depresin denominada fosita primitiva. Otras molculas y genes implicados en dichos ejes son: Lim-1, cerberus, gen-T, Shh, Lefty y nodal. En distintos tejidos ectodermicos, se ha observado (pOPc), durante este estado. Dlx5 es expresado durante el desarrollo. El factor de crecimiento fibroblstico (FGFs) tambin juega un papel importante durante el desarrollo fetal y embrionario. Tercera semana- estado 9: El estado 9 se alcanza entre 19 y 21 das post ovulacin, y se observan entre 1 y 3 somitas pares presentes. Tambin el pliegue neural est en desarrollo. El tamao de este embrin puede variar de 1,5 a 2 mm de longitud. El embrin bilaminar se ha transformado en trilaminar. Desde el ndulo primitivo se produce una migracin celular en sentido craneal formando en la lnea media un cordn, el proceso notocordal. Este proceso avanza haca la lmina procordal que ndica el futuro lugar de la boca entre el ectodermo y el endodermo y con las lminas de mesodermo situadas lateralmente. La lmina o placa procordal, de Esta placa morfologa circular, es un rea del endodermo formada por clulas columnares que al unirse al ectodermo formar la membrana bucofarngea bilaminar. embrin. A medida que la notocorda se desarrolla, el ectodermo suprayacente sufre un engrosamiento y constituye la placa neural que origina el sistema nervioso central. Hacia el da 18 se produce en la placa neural una invaginacin a lo largo de su eje, formndose el surco neural, el cual presenta a cada lado, los pliegues neurales. Al finalizar la tercera semana dichos pliegues comienzan a aproximarse y se fusionan. En esta etapa, un grupo de clulas ectodrmicas vecinas al sitio de cierre del tubo neural se separan para constituir las crestas neurales. El tubo neural es el que da origen a todo el sistema nervioso central, mientras que las crestas neurales darn origen a casi todo el sistema nervioso perifrico, las meninges, melanocitos, mdula suprarrenal y odontoblastos. A diferencia del tubo neural, que permanece como una procordal es una de las ms importantes organizadoras de la regin ceflica del mRNA Dlx5 en la porcin ceflica anterior ectodrmica (aCE), el pliegue neural (NF) y en la placoda tica primero que otros genes Dlx

estructura continua, las crestas neurales se fragmentan con la aparicin de las somitas, originando as los ganglios de la raz posterior de la mdula espinal. El mesodermo intraembrionario al finalizar la tercera semana comienza a diferenciarse en: Mesodermo paraaxial, que dar origen a las somitas; Mesodermo lateral, del cual va a derivar el mesodermo somtico, el esplcnico y el celoma intraembrionario; y Mesodermo intermedio o futuro cordn nefrgeno, que da origen al sistema urogenital. Hacia el final de la tercera semana el mesodermo paraaxial se fragmenta en estructuras cuboides y pares, denominadas somitas. Las primeras somitas aparecen prximas al extremo ceflico de la notocorda y luego se forman metamricamente en direccin caudal. Al finalizar la tercera semana comienza la circulacin sangunea en el embrin, siendo, por tanto el sistema cardiovascular el primer sistema con actividad funcional en el embrin. Las transformaciones que tienen lugar en segunda y la tercera semanas del desarrollo especialmente relacionadas con el complejo mecanismo la gastrulacin, se deben a un cambio significativo del patrn espacio temporal que se origina por consecuencia de modificaciones en la forma y estructura celular, en los movimientos y en las adhesividades celulares. Las clulas en la etapa de migracin se caracterizan estructuralmente por presentar dos polos diferentes: un polo de arrastre donde se ubican la mayor parte de las organelos incluido el complejo de Golgi y un polo de avance donde se localizan los microtbulos que intervienen en el desplazamiento. La formacin del disco trilaminar se caracteriza tambin, por un cambio en el metabolismo celular que, de anaerobio tpico del blastocisto, pasa a ser aerobio con un incremento de los fenmenos oxidativos. Desde el punto de vista morfolgico este hecho se relaciona con el aumento de mitocondrias presentes en las clulas del mesodermo. Durante el estadio E9.5 el crecimiento del primer arco branquial en cada lado de la cabeza se desarrolla en el primordio de los arcos mandibulares y maxilares, los cuales crecen hacia la lnea media ventral. Subsecuentemente mltiples fusiones de los pares de arcos mandibulares, maxilares y procesos frontonasal establecen la forma bsica de la cara. Errores en este evento morfogentico causan anormalidades craneofaciales incluyendo defectos de la mandbula, los cuales estn entre las ms comunes de las malformaciones en humanos. Ms de 130 sndromes humanos aparecen involucrados en el incorrecto desarrollo del primer arco branquial. Dlx1 y Dlx 2 se expresan en el mesnquima de los dominios distal y proximal del primer y segundo arco branquial comenzando el E9.5. Contrariamente a Dlx1 y Dlx 2, el gen Dlx3 solo se expresa en la piel y punta distal de los arcos branquiales y luego se restringe a la porcin caudal del proceso mandibular. En contraste a los

otros genes Dlx, Dlx3 no se expresa de una manera detectable en el sistema nervioso central. Hibridacin de RNA en embriones en E8.5 y E9 sugieren que Dlx1 y Dlx2 se expresan en clulas migratorias y post migratorias de la cresta neural, mientras que Dlx3 y Dlx5 se expresan solo en clulas post migratorias de la cresta neural craneal comenzando alrededor de E9.5. En E9.5 Dlx3 y Dlx5 se expresan progresivamente en dominios ms distales del primer y segundo arco branquial. Solo Dlx1 y Dlx2 se expresan en el proceso maxilar del primer arco branquial (tejido que es sensible a la prdida de la expresin Dlx1 y Dlx2).6 Al igual que Dlx3, el gen Dlx5 y Dlx6 tambin se expresan en el mesnquima del arco branquial distal. La expresin Dlx5 se presenta en la parte distal de la regin mandibular del primer arco en E8.5 y posteriormente en E9.5 en el maxilar superior como tambin en el hioides y mas dbilmente en el tercero y cuarto arcos branquiales. Dlx5 tambin se expresa en las placodas ticas y olfatorias, el cerebro anterior y la cresta neural, produciendo neuro epitelio. Dlx5 y Dlx6 se expresan en la regin pericondral de todos los elementos en desarrollo del elemento fetal, comenzando tan temprano como la iniciacin de cartlago y continuando a travs del perodo de mineralizacin.
5

El crneo en desarrollo puede ser subdividido en la porcin neuro craneal (tambin llamado endocrneo o cerebro primario) que contiene los rganos sensoriales: ojo, nariz, odo interno y cerebro; y el esplanocrneo,( tambin llamado esqueleto visceral o branqueocrneo), derivado de los arcos branquiales. Existen evidencias in Vitro que sugieren que Dlx5 juega un papel en la expresin de osteocalcina y diferenciacin osteoblstica. Miembros de la familia FGF, particularmente FGF8 han estado implicados en seales epiteliales que regulan la expresin gentica durante el desarrollo del primer arco branquial. En el estado 9.5 la expresin de Fgf8 aparece restringida al lado rostral del ectodermo. Se ha sugerido que Fgf8 no se requiere para la proliferacin celular en el primer arco branquial. Poco tiempo despus de que Fgf8 es inactivado en el epitelio del primer arco branquial naciente hay un breve perodo de muerte celular que llega a su pico en E9, durante el cual hay una gran proporcin de mesnquima proximal pero no distal que muere por apoptsis. Los genes hometicos Homeobox tambin se expresan durante E9, y una de sus funciones es interactuar con los FGF en la formacin de las estructuras crneofaciales. Barx1 es un gen homeobox identificado como inducidle por Fgf8. Al inicio de E9.5 se expresa en el mesnquima en la porcin proximal del primer arco branquial pero

no en la distal. Se ha sugerido que la expresin transitoria de Fgf8 en el lado caudal del primer arco branquial en E9.0 es suficiente para inducir la expresin de Barx1, Et1 y Gsc, pero que la expresin continuada de Fgf8 no se requiere para mantenerlos. Pax 9 y Msx-1 son tambin genes hometicos que se observan E10.5. entre E9.5 y La expresin de Msx1 normalmente est restringida al ectomesnquima

distal y Bmp4 (gen de la familia de TGFB2) se detecta en el ectodermo del primer arco branquial. En el E9.0 la expresin de Pax9 se restringe a la bolsa farngea.7 El estado 10 segn la clasificacin de Carnegie, comprende los das 22 y 23 del desarrollo embrionario. En el da 22, el embrin presenta una forma alargada y la placa neural est doblndose dorsalmente y la formacin de las somitas es continua. A los lados del notocordio se han venido organizando cordones longitudinales mesodrmicos, cuyas clulas centrales degeneran y al establecerse una cavitacin o luz central se transforman en las aortas dorsales. cardinales. Los lados derecho e izquierdo del embrin empiezan a doblarse hacia el centro y as el endodermo va formando un tubo llamado intestino primitivo, cuyo extremo interior llega hasta la placa procordal. De esta manera tendremos dos tubos; uno dorsal, el tubo neural, y otro ventral, el intestino primitivo. El saco vitelino se est reduciendo por lo tanto a un pedculo. Durante el da 23, el tubo neural permanece abierto en sus extremos que se denominan neuroporos anterior y posterior. El crecimiento mesenquimal de la regin ceflica y la epibolia ectodrmica de la regin, conforman el proceso frontal, el cual empieza a doblarse hacia delante, lo que favorece que el mesnquima en expansin rodee al tubo endodrmico y forme dos rodetes de crecimiento anteroposterior, llamados Arcos Farngeos o Braquiales. El primer arco se llama mandibular y el segundo hioideo, tambin nace de cada aorta dorsal el primer arco arterial artico8 . Entre los rodetes mandibulares a los lados, la eminencia cardiaca abajo y el proceso frontal arriba, se forma una depresin, que constituye el estomodeo. En el fondo de sta se halla la membrana Bucofarngea (antes la placa procordal). Esta membrana Estas se extienden desde la regin cardiaca hasta la caudal; simultneamente se estn formando las venas

CAMPOS, L. Desarrollo embriolgico y fetal del sistema masticatorio. Universitas Odontolgica. 1994; 13(26): 37-52.

tiene una capa interna de origen endodrmico y una capa externa de amnioblastos, ya que el epiblasto se separa para formar el tubo neural. De las clulas de la cresta neural se derivan, el mesnquima del proceso
9

mandibular y el mesodermo paraxial. mandibular,

10

Las clulas de la cresta neural que

provienen del cerebro medio, participan en la formacin del esqueleto del arco tambin, las estructuras del esqueleto caudal del arco mandibular, incluyendo elementos cercanos a la mandbula y a las estructuras del odo medio. El proceso mandibular est compuesto de dos regiones independientes: dos regiones laterales grandes y una medial pequea, las que estn mediadas por patrones de expresin exclusivos de molculas sealizadoras como la protena morfogentica sea 4 (BMP-4), factor de crecimiento fibroblstico 8 (FGF-8) en el epitelio, entre otras molculas reguladoras en el mesnquima. 11 Las regiones laterales donde la condrognesis y osteognesis, producen la porcin del arco mandibular que contiene los molares, el cartlago de Meckel, estructuras seas asociadas y estructuras del oido medio 12 . La regin lateral se caracteriza por la expresin de Fgf8 en el epitelio y altos niveles de expresin de los genes como el Dlx, Barx1, Lhx-6/7, Pitx1, genes Pax y Wnt5a. 13 La expresin restringida de muchos genes reguladores como el Shh, Fgfs, Fgfr2c, Fgfr3, Msx1, Gsc, Prx1, Et-1, Glil y ptc, se ha observado en el mesnquima epitelial y mandibular que rodea al proceso hioides. 14 La sealizacin de FGF-8, por medio de la interaccin con varios genes como Et-1, Jhx6, Barx1 y Gsc, juega un rol esencial en la mediacin de las interacciones que regulan la supervivencia, el crecimiento y la morfognesis de la regin lateral. (MORPH) Berge en 2001, reporta que los genes Prx1 y Prx2 controlan la proliferacin celular, por medio de la regulacin de la expresin del gen Shh en el epitelio del arco mandibular. La Shh ejerce un efecto en la morfognesis del arco mandibular, ya que regula la proliferacin celular en reas especficas del mesnquima del arco mandibular. Noden, D. M. The Embryonic origins of avian cephalic and cervical muscles and associated connective tissues. Am J Anat. 1983; 168: 257-276. 10 Courly G. A. Grapin-Botton. et al., The regeneration of the cephalic neural crest, a problem revisted: The regenerating cells originate from the contralateral or from the anterior and posterior neural fold. Development. 1996; 122:3393- 3407. 11 Mina, M.. Wang.Y. H. Ivanisevic. AM. Upholt WB y Rodgers B. Region and stege specifics effects of FGFsand BMPs in chick mandibular morphogenesis. Dev Dyn. 2002; mar 223(3): 333- 52. 12 Mallo, M. Embryological and genetic aspects of middle ear development. Int J Dev Biol. 1998; 42: 1122. 13 Francis West, Ladher, A. Barlow, A. Graveson . Signaling interactions during facial development. Mech Dev. 1998: 75:3- 28.. 14 Op cit. Mallo.
9

Las clulas de la cresta neural juegan un papel clave en el desarrollo craneofacial. Los polipptidos en la familia de la endotelina regulan el desarrollo de varios sublinajes de la cresta neural, incluyendo los del arco branquial. El factor de trascripcin dHAND es requerido para el desarrollo craneofacial y los embriones mutantes para Endotelina-1, la expresin de dHAND en los arcos braquiales est disminuida, sugiriendo que es un efector transcripcional de la accin de la Endotelina-1.
15

Los ratones que tienen una inactivacin del gen que codifica para

la Endotelina-1, presentan anomalas craneofaciales y cardiovasculares. Edn1 se expresa principalmente en el epitelio de los arcos faringeos y en el arco arterial artico, as como tambin en el tracto de circulacin cardiaca.
16

Durante la 4 semana el saco vitelino se estrangula y forma el intestino delgado primitivo, que se comunica con el saco vitelino por el conducto onfalomensentrico o vitelino. El endodermo estimulado por el Dlx5 da origen al epitelio del tubo digestivo, hgado, pncreas, aparato respiratorio, tiroides y paratiroides, proceso tico; adems controla el crecimiento craneofacial y es el responsable de mltiples malformaciones craneofaciales junto con los genes Dlx1, Dlx2 ya que estos genes son reguladores del ectomesnquima 17 . El intestino primitivo est cerrado por la membrana bucofarngea ceflicamente y la membrana cloacal caudalmente. La membrana bucofarngea desaparece al final del 1 mes. En el primer arco farngeo o mandibular tiene como base esqueltica rodetes o cartlagos de MECKEL (Burdi 1992) derecho e izquierdo. Estos dan soporte alas arterias del primer arco, los nervios trigminos y el ectomesenquima con los msculos masticatorios2. El segundo arco farngeo es llamado arco hioideo (cartlago de Richert), el cual va a originar al estribo, apfisis estiloides, ligamento estilo hioideo, hasta menor y porcin superior del cuerpo del hueso hioides. Los msculos son el msculo del estribo, el estilo hioideo, vientre posterior del digstrico, auricular y los msculos de la mmica, todos estos estn inervados por el facial2. En un estudio realizado en DNA de ratas adultas estudiando los arcos branquiales primero y segundos encontraron que la protena BMP estimula la diferenciacin morfogenetica de hueso
15

crneo facial adems encontraron genes

Charite, J. et al,. Role of Dlx6 in regulation o fan Endothelin-1- dependent, dHAND branchian arch enhencer Genes and Development. 2001; 15(22): 3039-3049. 16 THOMAS, T. et al,. A signaling cascade involving endothelin-1, dHAND and Msx1 regulates development of neural crest derived branchial arch mesenchyme. Development. 1998; 125: 3005- 3014.
17

Depaw M. Dlx5 reglates regional development of the branchial arches and sensory. Development. 1999; 128, 3831-3846.

tales como el GNB (proto oncogen receptor de protenas, varios tipos de protenas ribosomales como Rp13, 16, 7,19 y HNA 18 , lo cual permite deducir la gran cantidad de factores que intervienen en la diferenciacin del primero y segundo arco branquial. El tercer arco farngeo da origen a la porcin inferior del cuerpo y el asta mayor del hioides. La musculatura se circunscribe al msculo estilofarngeo, son inervados por el glosofarngeo, nervio del tercer arco3. Hacia la lnea media la eminencia hipobranquial que est formada por mesodermo del segundo y tercer arco y parte del cuarto arco. Un tercer abultamiento medial, formado por la porcin posterior de la lengua. Aparece a las 4 semanas como 2 protuberancias linguales laterales y una prominencia medial. El tubrculo impar se origina en el primer arco posterior del y el cuarto arco seala el cual desarrollo de la epiglotis. Por detrs se forma el orificio larngeo. Las protuberancias linguales laterales se fusionan entre s formando los dos tercios anteriores del cuerpo de la lengua. Los 2/3 anteriores de la lengua estn separados del tercio posterior por la V lingual o surco terminal. El odo, la nariz y los ojos provienen del proceso frontonasal, las placodas nasales se invaginan dentro del mesenquima del periprocenfalico y forman la foceta nasal. El mesensequima nasal crece alrededor formando una prominencia a manera de u invertida cuyas barras se denominan prosesos nasal medio, promedio nasal lateral. Los procesos nasales medios estn separados entre si por un segmento del proceso frontal. Las placodas pticas y ticas se han sumergido en el mesenquima y han formado las vesculas correspondientes en los estudios realizados en ratas se a encontrado que el gen Pax6 controla los diferentes estadios de la expresin del ojo, el Pax6, controla el ectodermo para ala expresin del ojo en ratas.5 Adems se ha podido encontrar que el gen Foxe3 es quien controla la posicin de los ojos. Los genes Dlx permiten la expresin del epitelio olfativo en particular el Dlx5 se a demostrado que cuando se altera este gen se producen mutaciones en el epitelio olfativo de las ratas.6

5. Patricia V Dimanlig. the upstrearm enhancer in Pax6 has inportands role in lens induction, Development 128, 4415-4424. 2001 6. Dlx5 regulates development of peripheral and central components olfactory system, JNeuro.15, 2003;23 568-578

Lindsay F Fowles. Genomic Screen for genes involmed in mammalian craniofacial developmet. Genome. 2003; 35, 73-75.

18

La morfognesis involucra la secuencia de eventos que determinan la forma y estructura a un organismo. La migracin celular tambin juega un papel importante durante algunos eventos del desarrollo y en otras clulas induce muerte celular programada lo que contribuye a la remocin de tejido localizado y moldeamiento de rganos 19 . Durante el da 23 se forman los arcos farngeos o braquiales. En esta formacin intervienen entre otros, los genes Wnts. 1ero. Arco: Proceso Mandibular. Gen Col2a1 expresa formando cartlago. El gen Eng1-3 se expresa en arco madibular dorsal del embrin 20 2do. Arco: Hioideo. Gen Shh y Wnts (mesnquima farngeo) se expresa en el endodermo farngeo y en el margen posterior ectodrmico del segundo arco.
21

Como ejemplo estn los ratones en los que la disrupcin del gen Hox-2 caus la ausencia de derivados del segundo arco braquial. Una conclusin importante es que los arcos branquiales expresan una combinacin de genes Hox especfica para el arco, este cdigo o combinacin est involucrado en la transmisin de la especificacin morfogentica y posicional del cerebro anterior a los arcos braquiales. 22 Nace de cada aorta dorsal el 1er arco arterial artico. El desarrollo del sistema vascular es regulado por una serie de sealizaciones extrnsecas e intrnsecas que resultan en la formacin y especializacin de vasos por donde circula sangre y linfa. Molculas de sealizacin como Factor de Crecimiento 23 Epitelial Vascular (VEGFA/VEGF2) y angiopoietinas, que establecen la identidad celular de clulas endoteliales en el embrin tambin juega un papel en establecer el desarrollo de vasos en arterias, venas o linfticos. Formacin del Estomodeo, aqu se halla la membrana bucofarngea Durante el da 24 se rompe la membrana bucofarngea y queda el estomodeo comunicado con el intestino primitivo anterior. Hay un aumento de la curvatura

GILBERT SF. Developmental Biology. 4 Ed. Sunderland. Sinauer Associates, 1994. YELICK,P. Molecular dissection of craniofacial development using zebrafish. Crit rev Oral Biol Med. 2002.13(4):308-322. 21 YELICK,P. Molecular dissection of craniofacial development using zebrafish. Crit rev Oral Biol Med. 2002.13(4):308-322. 22 THESLEFF,I. Homebox genes and growth factors in regulation of craneofacial and tooth morphogenesis. Acta Odontol Scand 1995, 53: 129-134. 23 ROSSSANT,J. Vascular development and patterning: making the right choices. Curr Op Genetics & Develop 2003, 13: 408-412
20

19

ceflica. Se cierra el neuroporo ceflico o anterior. Se han desarrollado entre 13-20 pares de somitas. Gen foxc1-a participa en somitognesis 24 . La proliferacin mesenquimal aproxima los hemiarcos mandibulares derecho e izquierdo hacia la lnea media, mientras que en la parte posterior el mesnquima forma los procesos maxilares. Los mecanismos moleculares que operan durante el establecimiento de la asimetra derecha e izquierda, pueden estar dados por molculas de sealizacin como el factor de crecimiento fibroblstico (FGF-8) y Shh modulados por molculas de adhesin expresadas localmente. Estas molculas han mostrado inducir nodos en el lado izquierdo de la expresin nodal. Sin embargo, aunque Wnt 8c se localiz ms en el lado derecho, la expresin nodal es represada en este territorio como consecuencia de la expresin de N-caderina.
25

La regulacin molecular del desarrollo est en relacin con el Shh (sonic hedgehog) secretado por la placa procordal y notocorda que ventraliza las reas del tubo neural medular y de los cerebros anterior y medio y las protenas BMP-4 Y BMP-7, secretadas por el ectodermo no neural que son las que inducen y mantienen la expresin de genes que producen dorsalizacin. 26 Se ha detectado la expresin de Msx1 en las clulas mesenquimales debajo del ectodermo de la parte posterior del tronco, estas clulas estn destinadas a formar dermis. Experimentos de injertos han mostrado que estas clulas se originan de somitas. 27 Durante el da 25, el mesnquima de los hemiarcos mandibulares se encuentra unindose en un solo arco y desplaza la eminencia cardiaca hacia abajo. Los procesos maxilares aumentan su volumen. Las clulas dorsales del tubo neural que quedan por fuera al completarse el cierre de este, son las clulas de la cresta neural: -Migran entre las somitas. -Migran sobre las somitas (ganglios simpticos y parasimpticos: ciliar, esfenopalatino,tico y submaxilar) -Entre las somitas y el tubo neural (ganglios V,VII,IX,X) espinales clulas de Schwann

YELICK,P. Molecular dissection of craniofacial development using zebrafish. Crit rev Oral Biol Med. 2002.13(4):308-322. 25 THIERY,J. Cell adhesin development: a complex significant network Curr opinin Genet & develop 2003,13:365-371. 26 FERRARIS, M.E. Histologa y Embriologa Bucodental. 2 Ed. 2002.Ed Mdica Panamericana. Madrid p.48. 27 HOUZELSTEIN, D. The expression of the homeobox gene Msx 1 reveals two populations of dermal progenitor cells originating from the somites. Development . 2000. 127, 2155-2164

24

-Migracin subdrmica (ameloblastos, odontoblastos, mesnquima de la cara, cartlago). Una vez que las clulas de la cresta neural son inducidas al borde del plato neural una cascada gentica de factores de transcripcin se activa lo que controla la migracin y diferenciacin final de estas clulas. Entre ellas los genes Pax 3, FoxD3. 28 Aunque todas las somitas comparten morfologa idntica y linajes celulares, la morfognesis de los tejidos que generan depende de su posicin a lo largo del eje AP. Esta regionalizacin depende en una combinacin cambiante de una familia de factores de transcripcin, genes Hox a lo largo del eje antero-posterior del cuerpo. Este fenmeno se conoce como colinearidad. 29 Se ha demostrado la presencia de Tenascina en la formacin de tejidos derivados de la cresta neural y del SNC. 30 Algunas clulas neuroectodrmicas que se encuentran en los bordes laterales del canal neural no se incorporan a la pared del tubo neural y forman las crestas neurales. Unas clulas de la cresta proliferan y migran para constituir las poblaciones celulares, denominadas ectomesenquimales o neuroectodrmicas, que al situarse centralmente contribuyen a formar la mayor parte de las estructuras de la cara y rganos dentales. La migracin ocurre entre los 18 a 37 das de gestacin y sus movimientos son regulados por varios factores del tipo de los proteoglicanos, colgeno, iones. Se trata de un mecanismo muy sensible a la accin de los agentes teratgenos. Al parecer la disminucin de las molculas de adhesin al comienzo de la etapa migratoria, el estmulo del factor activador del plasmingeno y el incremento en la produccin de cido hialurnico facilitan la migracin de las clulas de la cresta neural a travs del embrin. El cido hialurnico por su capacidad hidroflica favorece el desplazamiento de las clulas al ampliar los espacios intercelulares. Cuando las clulas alcanzan su destino se produce la hialuronidasa facilitando la adhesin celular. 31 En el da 26 se produce el cierre completo del tubo neural y se forman las 3 vesculas: prosencfalo, mesencfalo y rombencfalo.

AYBAR, M. Early induction of neural crest cells: lessons learned from frog,fish and chick. 2002 Curr opinion in Genetics & development 12: 12: 452-458. 29 DUBRULLE,J. From head to tail: Links between the segmentation clock and anteroposterior patterning of the embryo. Curr op In Genetics & Development 2002, 12: 519-23. 30 THESLEFF,I. The distribution of Tenascin coincides with pathways of neural crest migration. Development. 1998, 101:237-245. 31 FERRARIS, M.E. Histologa y Embriologa Bucodental. 2 Ed. 2002.Ed Mdica Panameriacana. Madrid p.48.

28

La distribucin de los genes Tlx y Dlx

tienen papel en el modelamiento de las

estructuras en el cerebro y la regin craneofacial. 32 El gen que codifica el dominio del telencfalo es el Foxg-1.Su accin es mediada probablemente por molculas de sealizacin incluyendo el factor de crecimiento fibroblstico 8 (FGF8). 33 El ectodermo del proceso frontal induce proliferaciones y diferenciaciones formando plcodas nasales y pticas y en la parte dorsal del 2 surco se forman las placodas ticas. El proceso nasal se llama ahora proceso frontonasal. Al comienzo de la cuarta semana comienza el desarrollo de los esbozos de los ojos y de los oidos. Se ha comprobado que el Pax-6 es un gen maestro para el desarrollo del ojo, este gen produce un factor de transcripcin que se expresa en el reborde neural anterior de la placa neural. La protena BMP-7 miembro de la familia del gen del factor de crecimiento TGF- es necesaria para mantener el desarrollo del ojo. 34 Miembros de la familia del gen Dlx ( Dlx-1, Dlx-3 y Dlx-5, Dlx-7) son necesarios para el desarrollo del odo interno. 35 Se forma el tercer arco farngeo o branquial. La extensa migracin celular hace que las poblaciones celulares establezcan nuevas relaciones y conduzcan a interacciones por induccin, las cuales a su vez producen otros tipos celulares cada vez ms diferenciados. Se ha comprobado que el patrn de organizacin y diferenciacin de los arcos braquiales parece estar regulado por los genes Hox. Estos genes establecen el modelo o cdigo del arco farngeo a travs de las clulas de la cresta neural que alcanzan esa regin desde el cerebro posterior. 36 Los genes Homeobox, grupo de factores de transcripcin, son una secuencia de 180 pares de bases que codifican el homeodominio unido al DNA. Los genes Hox tienen la caracterstica especial de codificar la informacin sobre posicin durante la embriognesis. Ejemplos dramticos son los ratones en los que la disrupcin del gen Hox-2 caus la ausencia de derivados del segundo arco braquial. 37 Los homeogenes Msx juegan un papel importante en la induccin de interacciones epitelio-mesenquimales que conducen a la organognesis de los vertebrados. Entre los miembros de esta familia el Msx1 es un factor fundamental para la formacin THESLEFF,I. Homebox genes and growth factors in regulation of craneofacial and tooth morphogenesis. Acta Odontol Scand 1995, 53: 129-134. ZAKI,P. Mouse models of telencephalic development. Curr Op Genetics & development 2003, 13:42337. 34 FERRARIS, M.E. Histologa y Embriologa Bucodental. 2 Ed. 2002.Ed Mdica Panameriacana. Madrid p.49. 35 FERRARIS, M.E. Histologa y Embriologa Bucodental. 2 Ed. 2002.Ed Mdica Panameriacana. Madrid p.49 36 FERRARIS, M.E. Histologa y Embriologa Bucodental. 2 Ed. 2002.Ed Mdica Panameriacana. Madrid p.53. 37 THESLEFF,I. Homebox genes and growth factors in regulation of craneofacial and tooth morphogenesis. Acta Odontol Scand 1995, 53: 129-134.
33 32

del esqueleto craneofacial. La expresin del gen Msx 1 se localiza principalmente en las regiones de migracin y diferenciacin de clulas de la cresta neural ceflica. 38 Durante la quinta semana del desarrollo embrionario, en el estado 13, se comienza a observar la diferenciacin de los procesos derivados de los 3 primeros arcos branquiales y aparecen los arcos 4, 5 y 6, y se observa la induccin del de la cresta neural sobre el mesnquima. 39 Las crestas neurales migran desde el tubo neural hasta las paredes farngeas respectivas, para introducirse en las hendiduras farngeas y contribuir al desarrollo de los arcos branquiales. Externamente, los arcos branquiales estn separados entre s por las hendiduras branquiales o surcos farngeos, mientras que por su cara interna esta separacin se denomina bolsa farngea. Inicialmente entre el ectodermo y el endodermo branquial existe tejido mesodrmico mesenquimal, que se ve invadido por clulas de la cresta neural, las cuales se constituyen en el mayor componente del mesnquima de los arcos. En la constitucin de un arco branquial, se tienen contribuciones (y derivados en la regin de cara y cuello) endodrmicas, como la pared farngea, las papilas gustativas y glndulas tiroides y paratiroides; mesodrmicas, como los msculos y el tejido endotelial; de la cresta neural, como lo son los huesos, los cartlagos y el tejido conectivo, y ectodrmicas, tales como la epidermis y las neuronas sensitivas de los ganglios epibranquiales. As un arco est constituido por un arco artico, un componente muscular, un nervio y un bastn cartilaginoso, que constituye el esqueleto del arco. Los arcos se numeran en orden cfalo-caudal, siendo el primero el mandibular 40 , que tiene como base esqueltica los cartlagos de Meckel derecho e izquierdo, los cuales dan soporte a las arterias del primer arco branquial, los nervios trigminos y el ectomesnquima de los msculos masticatorios. El segundo es el arco hioideo, constituido por los cartlagos de Reichert, las arterias, nervios y el ectomesnquima correspondiente con los msculos de la expresin facial. El tercer arco tiene cartlagos, nervios glosofarngeos, arterias que persisten como cartidas y en el ectomesnquima el msculo estilofarngeo. El cuarto arco, tiene cartlagos, arterias, nervios larngeos superiores y el ectomesnquima de los msculos del paladar y la faringe. El quinto y sexto arcos poseen cartlagos y estn inervados por el nervio vago, pero estos involucionan rpidamente. 41

WAKKACH,C. Endogenous Msx1 antisense transcript: In vivo and In vitro evidences, structure, and potencial involvement in skeleton development in mammals. PNAS, June 19 2001 vol 98 N.13,p.73367341. 39 Campos, L. Desarrollo embriolgico y fetal del sistema masticatorio. Univers Odont. 1994; 13(26):3752 40 Duque-Osorio,J.F. Crestas neurales, placodas y arcos branquiales: Una revisin evolutiva y embriolgica de datos bsicos y recientes. Rev Acad Colomb Cienc. 2003; 27(103):291-307 41 Campos, L. Desarrollo embriolgico y fetal del sistema masticatorio. Univers Odont. 1994; 13(26):3752

38

La morfognesis mandibular se da bajo estricto control gentico, y se han identificado cientos de genes que regulan el desarrollo embriolgico y actualmente se han comenzado a esclarecer sus funciones dentro de este proceso. Sin embargo, los mecanismos genticos y moleculares que intervienen el desarrollo y diferenciacin mandibular an no estn muy claros 42 . En estudios efectuados en ratas, se han logrado aislar hasta 306 genes distintos involucrados en el desarrollo de la mandbula, mediante estudios en los que se observa la actuacin de varios genes y factores moleculares en conjunto, los cuales permiten comprender de una manera ms exacta su funcin en la diferenciacin mandibular. Se han clasificado los genes de acuerdo a su actividad funcional durante el desarrollo embrionario, luego de analizar los estudios de RNA en tejido mandibular de rata. 43 Bsicamente se postula que ambos procesos mandibulares del embrin, tienen dos regiones funcionales independientes: las dos regiones laterales cuya morfognesis es dependiente del factor de crecimiento fibroblstico 8 (FGF-8) y una regin medial, ms pequea, que es independiente de este factor. Estudios recientes sugieren que la morfognesis del esqueleto mandibular est regulada por factores de sealizacin y factores de transcripcin que se observan despus de la llegada de las clulas de la cresta neural. Se ha sugerido que el desarrollo mandibular esta condicionado por la interaccin epitelio-mesnquima, involucrando no slo al epitelio mandibular, si no tambin al de otros procesos faciales. Se han observado diferencias entre las cascadas de sealizacin que regulan la diferenciacin de la regin lateral y medial del epitelio de la mandbula en pollos por medio de los genes Msx1 y Msx2. Se ha observado que el epitelio de la regin medial, el cual cubre al mesnquima que expresa los Msx, son capaces de producir a su vez la induccin ectpica de estos genes en el epitelio de regin lateral. 44 Otra teora que tambin se ha estado estudiando, y a la que ya se hizo mencin anteriormente, es la del Fgf8, el cual fue estudiado en ratones transgnicos a los que se les inactiv esta molcula en el epitelio del primer arco branquial, y se observ que las estructuras derivadas de la porcin lateral de la mandbula (cuerpo del cartlago de Meckel, huesos mandibulares, molares y odo medio, excepto por el martillo) no se formaron; sin embargo, los dientes incisivos, sus huesos asociados y la porcin de la snfisis del cartlago de Meckel si estuvieron presentes, lo que proporciona

Osikawa, M. et al. Gene expresin in the developing rat mandible: a gene array study. Arch Oral Biol. 2004; 49: 325-329. 43 Ob cit. 44 Mina M., Wang, YH., Ivanisevic, AM, Upholt, WB., Rodgers, B. Region- and stage-specific effects of FGFs and BMPs in chick mandibular morphogenesis. Dev Dyn; 2002 Mar; 223(3): 333-52.

42

evidencia de la dependencia del desarrollo que tiene la porcin lateral de la mandbula y el control que ejerce sobre esas estructuras el FGF-8. Por otra parte, se ha observado que ha diferencia de la porcin lateral, la proliferacin del mesnquima de las regiones mediales, es dependiente de las seales derivadas por el epitelio que lo recubre 45 . Se observa que en perodos tempranos del desarrollo embrionario, se expresan en todo el epitelio mandibular los genes Fgfr1, Fgfr2 (en dos isoformas Fgfr2b y Fgfr2c) y Fgfr3. Se cree que de la mayor o menor expresin de estas molculas, dependen los cambios morfogenticos de la mandbula, pudindose afirmar que cantidades tan pequeas como 10 ng/l, producen cambios significativos en la mandbula. Los factores FGF-2 y FGF-4 pueden producir efectos sobre la porcin medial del proceso mandibular, incluyendo el mantenimiento de la expresin de genes los Msx durante el crecimiento del proceso mandibular y la elongacin del cartlago de Meckel 46 . As mismo se han hecho estudios que sugieren que las protenas morfogenticas seas (BMPs) no tienen un rol positivo en el crecimiento del mesnquima mandibular. Al realizar experimentos sobre embriones de pollo, se presume que la aplicacin de BMP-7 en la regin lateral de la mandbula en estadios tempranos del desarrollo causan apoptosis, expresin ectpica de genes Msx e inhibe el crecimiento de los procesos mandibulares y la formacin del cartlago de Meckel; aunque se ha observado que en estadios posteriores esta protena puede inducir la condrognesis. En estudios realizados sobre ratones, a los cuales se les inactivaron los genes Dlx5 y Dlx6 (Dlx5/6-/-), se han observado grandes defectos en el desarrollo craneofacial, que en ocasiones no son compatibles con la vida. Se observaron diferencias fenotpicas en los embriones Dlx5/6-/- en E11.5, tales como ausencia de las estructuras del oido interno y del ojo, derivados de los arcos branquiales dismrficos, y reduccin de la expresin de lacZ en la prominencia frontonasal 47 . En E14.5 se observaron grandes fisuras en toda la cavidad nasal, asi como tambin la prdida de la expresin de los tejido que dan origen a las estructuras faciales y del crneo. Tambin durante este estado, se observaron defectos en el desarrollo de las reas frontonasal, supraoccipital y rostral del temporal, con ausencia completa de la formacin del cartlago de Meckel. Se observ tambin que, aunque los cartlagos que dan origen a las estructuras de la base de crneo (basioccipital, basiesfenoides y esfenoides) estaban presentes, su formacin presentaba defectos

Ob cit. Mina M., Wang, YH., Ivanisevic, AM, Upholt, WB., Rodgers, B. Region- and stage-specific effects of FGFs and BMPs in chick mandibular morphogenesis. Dev Dyn; 2002 Mar; 223(3): 333-52. 47 Robledo, R., Rajan, L., Li, X., Lufkin, T. The Dlx5 and Dlx6 homebox genes are essential for craniofacial, axial, and appendicular skeletal development. Genes & Development. 2002; 16:1089-1101.
46

45

graves, sugiriendo que los genes Dlx5 y Dlx6 cumplen un rol fundamental en la cascada de sealizacin para la formacin de todas estas estructuras La etapa 15 se localiza entre los das 35 y 38, durante la quinta semana de desarrollo del embrin. Esta etapa se caracteriza por el cierre de las vesculas del cristalino, la formacin de los agujeros nasales, la segmentacin del arco hioideo, la diferenciacin de los brotes de los miembros superiores, y la elevacin de las somitas y el ganglio espinal. 48 En cuanto al desarrollo nasal, en esta etapa, el mesnquima nasal se invagina hasta hacer contacto con la mucosa del estomodeo y finalmente la perforan, este proceso forma dos cavidades nasales. 49 Vesculas del cristalino: Se ha reconocido que el gen Pax 6 tiene un rol central en el desarrollo del ojo; algunos experimentos han mostrado que este gen es esencial en la formacin del cristalino durante todas sus etapas de desarrollo, incluyendo el cierre de las vesculas. Mutaciones en este gen en ratones, han dado como resultado defectos en: las vesculas del cristalino, en el cierre de dichas vesculas, tamao reducido del cristalino (microftalmia o anoftalmia), y disminucin en la expresin del Foxe3.
50

en la separacin con el ectodermo;

adems se encontr que produca defectos a nivel de las placodas nasales y Dudley y col. en 1995 encontraron que la proteina sea morfogentica 7 (Bmp7) se encontraba en anomalas como anoftalmia y microftalmia, posteriormente Wawersik y col. en 1999 encontraron que la Bmp7 jugaba un papel importante en el desarrollo del cristalino y, particularmente, en la expresin del Pax6 y el Sox2 (gen al que se le ha atribuido la ubicacin del ojo en la cara) 51 . Furuta y Hogan en 1998 sealaron que la Bmp4 tambin intervena en el desarrollo del cristalino. Faber en el 2001 mencion la importancia del la Bmp7 en el proceso de formacin del cristalino y adems seal que el Pax6 requiere de el receptor Fgf.52 Ruyichi y col. en el 2003 en un estudio en ratones, sealaron que el gen Mab21/1 (responsable de formar la placoda de la crnea y la vescula ptica) es dependiente

L.M.Harkness, D.T.Baird. Morphological and molecular characteristics of living human fetuses between Carnegie tages 7 and 23: developmental stages in the post-implantation embryo, Human Reproduction Update 1996, Vol. 3, No. 1 pp. 323 49 Campos L., Desarrollo embriolgico y fetal del sistema masticatorio. Universitas Odontolgica, 1994; 13 (26): 46. 50 Patricia V. Dimanlig, Sonya C. y col. The upstream ectoderm enhancer in Pax6has an important role in lens induction. Development 128, 4415-4424 (2001) 51 Wawersik, S., Purcell, P., Rauchman, M., Dudley, A. T., Robertson, E. J. and Maas, R. BMP7 acts in murine lens placode development. Dev.Biol. 207, 176-188. 1999). 52 L.M. Harkness, Op cit p 4423

48

del gen Pax6, por tanto, si se produce una alteracin en este gen, el Mab 21/1 tambin se ver afectado. 53 Agujeros nasales: Quinn y col. en 1996 en un estudio en ratones, encontraron que el gen Pax6 tambin se relacionaba con anormalidad en el desarrollo del epitelio nasal y de las cavidades nasales en donde stas no se desarrollaban o se encontraban pequeas. 54 MacKenzi y col. en 1991, en un estudio en ratones, encontraron que las mutaciones en el gen Hox-7 producen diferentes alteraciones durante el desarrollo craneofacial (E9.5 al E15.5), entre estas una malformacin en los agujeros nasales, odo externo y formacin del ojo. El Hox-7 ha sido relacionado con reas en donde hay interaccin mesquima/epitelio y migracin celular 55 El gen Goosecoid se ha asociado al desarrollo embriolgico temprano de estructuras como: procesos faciales, arcos branquiales, miembros y cuerpo ventrallateral 56 ; sin embargo Gen Yamanda y col. en 1995 en un estudio realizado en ratones encontraron que los defectos en donde interviene el gengoosecoid afecta la expresin en fases mas tardas del desarrollo embrionario que involucra estructuras como: mandbula y msculos asociados, cavidades nasales y agujeros nasales, y odo interno y externo; adems, los defectos en este gen no son compatibles con la vida, ya que los ratones mueren despus de 24 h. de nacidos. 57 Lpez en 1992 en un estudio en ratones, encontr que un incremento en las concentraciones de cido retinico, afecta el Xeb1 (homebox asociado al desarrollo temprano del rostro) y por tanto afecta estructuras como: agujeros nasales, ojos, vesculas ticas y cerebro. 58 Es muy drstico dividir el rol de los genes en un estadio determinado ya que stos estn involucrados en un proceso, y como tal intervienen; es por ello que varios de los genes anteriormente mencionados tambin son responsables de otras estructuras craneofaciales que se desarrollan en los diferentes estadios. La

Ryuchi Y.y col. Cell-autonomous involvement of Mab21l1is essential for lens placode development. Development 130, 1759-1770, 2003. 54 JC Quinn, JD West and RE Hill. Multiple functions for Pax6 in mouse eye and nasal development Genes & Development, Vol 10, 435-446, 55 A MacKenzie, MW Ferguson and PT Sharpe. Development, Vol 113, Issue 2 601-611, Hox-7 expression during murine craniofacial development. 56 Stephen J. Gaunt, Martin Blum and Eddy M. De Robertis; Expression of the mouse goosecoid gene during mid-embryogenesis may mark mesenchymal cell lineages in the developing head, limbs and body wall. Development 117, 769-778 (1993) 57 Gen Yamada, Ahmed Mansouri y col.Targeted mutation of the murine goosecoidgene results in craniofacial defects and neonatal death. Development 121, 2917-2922 (1995) 58 Lopez SL, Carrasco AE. Retinoic acid induces changes in the localization of homeobox proteins in the antero-posterior axis of Xenopus laevis embryos. Mech Dev. 1992 eb;36(3):15364.

53

comprensin de la gentica y el papel de los genes en el desarrollo craneofacial, nos acerca an mas al entendimiento de las patologas y alteraciones que se dan durante los procesos de gnesis de los tejidos, razn por la cual, cada vez se ampla mas la puerta que nos conduce hacia el manejo de la gentica como teraputica. En el estadio 16, el embrin se encuentra alrededor e la sexta semana entre los das 37 a 42. Las caractersticas asociadas con esta etapa incluyen: un tamao aproximado entre 11-14 mm (rango total entre 7-14 mm); 37 das de postovulacin; las fosas nasales envolvindose ventralmente de su posicin lateral el lmite lateral puede verse con su pliegue colgando ligeramente levantada, desaparece desde una vista de perfil y slo los labios prominentes que forman marginalmente en el suelo de las fosas nasales. El pigmento de la retina se vuelve visible hacia el fin de la fase; los arcos hioideos se arquean y se ponen mucho ms eminentes, formando los montculos auriculares, y recprocamente, el arco glosofarngeo retrocede y no se vuelve a ver despus de finales de la fase 16. El brote del miembro superior empieza a mostrar la formacin de una planta de la mano en que, ocasionalmente, la vena marginal puede verse; el brote del miembro inferior empieza a diferenciarse en el muslo, la pierna, y el pie 59 . Los puntos en desarrollo son las vesculas de la frente (fbv), las manos (hp) y las plantas del pie (fp), el ombligo (u) y el pigmento retinal (rp) en la vescula ptica. En el embrin de 8 mm, todos los pares craneales son reconocidos exceptuando el nervio ptico y el olfativo. Todos los nervios que llevan las fibras sensitivas presentan ganglios prominentes cerca se sus puntos de conexin con el cerebro, esto incluye los pares V, VII, VIII, IX, y X. Los principales pares aferentes III, IV, VI, y XII no presentan un ganglio externo. Durante el periodo de 8 a 14-mm, el nervio posterior auricular aparece cerca de la cuerda del tmpano (chorda tympani). La separacin completa de los nervios faciales y acsticos es aparente y se desarrolla discretamente el nervio intermedio 60 . Durante la sexta semana, el desarrollo facial progresa rpidamente. El prosencefalo se divide en telencefalo (hemisferios cerebrales) y Diencfalo (tlamo e hipotlamo). El mesencefalo persiste en los pednculos cerebrales. El rombencefalo constituye el mialencefalo (medula espinal) y el metencfalo (cerebro) 61 .La
59

L.M.Harkness, D.T.Baird. Morphological and molecular characteristics of living human fetuses between Carnegie stages 7 and 23: developmental stages in the post-implantation embryo. Human Reproduction Update 1996, Vol. 3, No. 1 pp. 323. 60 Thayer R, Selber J. Embryology - Phylogeny and embryology of the facial nerve and related structures, part 2. Ear, Nose & Throat Journal, Oct, 2003. 61 Campos L. Desarrollo embriolgico y fetal del sistema masticatorio. Universitas Odontolgicas. 1994; 13(26): 37-52.

expresin de los genes humanos PAX6 y PAX3 semanas

fueron investigados entre las

6-9. El PAX6 se expreso en la zona ventricular del telencefalo y el

diecencefalo, y en las zonas intermedias ventriculares y ventrales de la medula oblongata y en la medula espinal. Durante esta semana del embrin humano, la transcripcin del gen PAX3 fue observado en la zona ventricular del borde mesencefalico-rhombencefalico, y en la parte dorsal de la zona ventricular del techo del plato de la medula oblongata y de la medula espinal. Durante el desarrollo del embrin humano, los genes PAX6 y PAX3 parecen estar envueltos en la regionalizacin del cerebro y el establecimiento de la polaridad de la medula espinal La expresin de Pax6 fue detectada tanto en la capa ptica, el tallo ptico y el epitelio de la cornea. Tambin se encontr expresin del PAX6 en el infundbulo como en el saco de Rathke de la glndula pituitaria. El ojo vertebrado se origina de tejidos derivados de un gran nmero de partes incluyendo la superficie del ectodermo neural, las clulas de la cresta neural y el mesenquima mesodermico 62 . En el ojo, las seales de Pax6 son necesarias para el desarrollo y posterior funcionamiento de este. Pax6 expreso en la cornea en el epitelio del lente, y en la retina pigmentada mientras que fallo en expresarse en el nervio y disco ptico4. La expresin del Pax6 se ha visto vinculada al Msx1 (gen miembro de los homebox-7) durante la formacin del ojo y de las placodas nasales 63 .. Adicionalmente, el PAX6 participa en la organognesis del ojo y de la glndula pituitaria y cuello . El hipocampo es una de las estructuras craneofaciales encontradas en el cerebro la cual juega un papel importante en la memoria y el aprendizaje del humano y de los animales. Esta estructura ha sido estudiada desde el punto de vista embriolgico, donde se encontr una cascada de genes (432) presentes durante su desarrollo en la E16. La expresin de estos genes en vueltos en diferentes funciones celular (proliferacin celular, sntesis de DNA y RNA, y la regulacin de la transcripcin y la translacin) se vieron altamente expresados en esta etapa pero fueron decayendo a medida que se avanzaban las etapas embrionarias 65 .
64

PAX3 en el desarrollo del mesenquima de la cara y del

Xu P, Woo I, Her H, Beir D, Maas R. Mouse Eya homologues of the drosophilia eyes absent gene require Pax6 for expression in lens and nasal placode. Dev. 1997; 124: 219-231. 63 Foerst-Potts L, Sadler TW. Disruption of Msx-1 and Msx-2 reveals roles of these genes in craniofacial, eye and development. Dev Din. 1997; 209: 70-84. 64 Terzic J, Saraga-Babic M. Expression pattern of PAX3 and PAX6 genes during human embryogenesis. http://www.ijdb.ehu.es/abstract.sept99-2/ 65 Mody M, Yanxiang C, Zhenzhong C, Khoon-Yen T, y col. Genome-wide gene expression profiles of the developing mouse hippocampus. PNAS. 2001; 98 (15): 8862-67.

62

Durante la sexta semana, las fositas nasales continan su ingresin en el mesenquima nasal hasta hacer contacto con la mucosa del estomodeo (boca primitiva) y finalmente la perfora. Este proceso crea dos cavidades nasales arriba y la cavidad bucal abajo dejando una porcin de tejido interpuesta o paladar primario. Desde la periferia de la vescula ptica hasta el estomodeo y entre los procesos nasal lateral y maxilar se forma el surco nasolacrimal que al cerrarse se sumerge en el mesenquima mientras los dos procesos nasal y maxilar quedan unidos. El encorvamiento ceflico cada vez ms acentuado favorece que la lengua cuya consistencia es gelatinosa y su actividad miogenica contrctil, produzcan cada de la punta lingual hacia delante. El descenso lingual permite que el mesenquima de los procesos maxilares se desplace hacia el centro, de atrs hacia delante3. La falla en cualquiera de estos procesos que se efectan consecutivamente puede ocasionar hendiduras que la cual la estructura que se va a ver mayormente afectada en esta etapa embrionaria (E16) va a ser el paladar secundario. Dentro de los genes encontrados en literatura como candidatos asociados a estas patologas podemos encontrar Mthfr, Tgfa, Msx1, F13a, Tgfb2, Tgfb3, Rara, Bcl3, Cpx, Ofc1, Ofc2, Ofc3, Vws, Edn1 Tfap2a, Tgfb1, Pvr, Pvrl1, Pvrl2, Tp63, Ap2, Mthfr, Ski/Mthfr, Gabrb3, Rara 66, 67 , 68 . Durante el crecimiento normal, el maxilar inferior se forma del componente mandibular del primer arco branquial. El mesenquima del proceso mandibular se deriva de las clulas de la cresta neural y del mesodermo paraxial. El mesodermo paraxial produce el crecimiento de los msculos de la mandbula y de los tejidos vasculares. Adems de las clulas de la cresta neural, otras clulas han sido encontradas en jugar un papel importante en el desarrollo del esqueleto mandibular. El desarrollo embriolgico de la mandbula se puede dividir en dos eventos que aunque diferentes no pueden estar separados. Uno es la morfologa de la regin lateral y otro es la morfologa de la regin media. La regin lateral se ha visto influenciada por la expresin directa del Fgf8 en el epitelio y otra variedad de genes incluyendo los Dlx, Barx1, Lhx-6/7, Pitx1, genes Pax y los Wnt5a. En adicin tambin se ha encontrado una expresin restricta de genes como Shh, Fgfs, Fgfr3, Msx1, Gsc, Prx1, Et-1, Gli1 y ptc rodeando la hendidura hiomandibular. La morfologa de la regin media se ha caracterizado por la expresin de la Bmp4 en el epitelio y Msx1, Msx2, Bmp2 y Fgfr2 en el mesenquima. Esta regin media del arco
66

Roderick R McInnes, Jacques Michaud, Gene/environment causes of cleft lip and/or palate. Clin Genet 2002; 61: 248256. 67 Astanand J, Rolv T, Wilcox A, Murray J. Variants of Developmental Genes (TGFA, TGFB3, and MSX1) and Their Associations With Orofacial Clefts: A Case-Parent Triad Analysis. Genetic Epidemiology. 2003; 24: 230239. 68 Spritz R. The genetics and epigenetics of orofacial clefts. Genetics. 2001; 13:556560.

mandibular contiene los dientes incisivos, y los elementos esquelticos mediales incluyendo la porcin sinfisiana del cartlago de Meckel 69 . La morfognesis es el proceso por el cual la lmina dental genera un diente con caractersticas morfolgicas. La morfognesis dental envuelve diferentes etapas: 1. lamina dental, 2. brote, 3. casquete, 4. campana temprana, 5. campana tarda, 6. Folculo dentario 70 . La transicin entre la etapa de brote y la etapa de campana parece ser un paso critico en la morfognesis dental (E15-16) 71 , y marca la aparicin del desarrollo de la corona de los dientes. El sitio de la punta del diente donde se produce el comienzo del doblamiento del epitelio un centro de sealizacin que marca la formacin de los nudos del esmalte. La expresin restringida de 10 seales pertenecientes a las familias de las BMP, FGF, Hh, y Wnt han sido reportadas en jugar un papel en el nudo del esmalte. El nudo del esmalte ha sido reportado por ser tener un papel regulador en la forma del diente y su induccin es un prerrequisito para que el diente avance a la etapa de campana. EL nudo del esmalte es una estructura que desaparece por apoptosis, luego de su apoptosis en dientes con varias cspides, se forman nuevos nudos en el lugar donde van a aparecer las cspides, por lo cual podemos llamarlos primeros y segundos nudos del esmalte respectivamente 72 . Estos nudos secundarios expresan Fhf4 y son removidos por apoptosis como los primeros. La apoptosis de estos nudos esta asociada con la expresin de BMP4 en la clula del nudo. Los nudos secundarios son la primera seal para los patrones cuspideos. Usando la Fgf4 como un marcador cuspideo, se evalu la aparicin de patrones cspideos especficos, para lo cual se encontr que estos comienzan su aparicin hacia la etapa 15 en los ratones. Adems las seales moleculares que regulan la relativa posicin de las cspides se activan inmediatamente despus de la apoptosis de los nudos primarios. Mientras la Fgf1 y la p21 son molculas que se activan una vez comienza el desarrollo de las cspides, la expresin de Fgf4 se ve restringida en las puntas de las cspides. La expresin de p21 comienza su funcin alrededor del nudo del esmalte y se encuentra asociada al cese de la proliferacin celular y en compaa

Mina M. Morphogenesis of the Medial Region of the Developing Mandible Is Regulated by Multiple Signaling Pathways. Cells Tissues Organs 2001; 169:295301. 70 Gmez de Ferraris, Mara Elsa. Histologa y embriologa bucodental. 2a ed. Editorial Mdica Panamericana, 2002. Madrid, Espaa. 71 Jernvall J, Kera nen S, Thesleff I. Evolutionary modification of development in mammalian teeth: Quantifying gene expression patterns and topography. Proc Natl Acad Sci U S A. 2000; 97(26): 14444-14448. 72 Jenvall J, Kettunen P, y col. Evidence for the role of the enamel knot as a control center in mammalian tooth cusp formation: non-dividing cell express growth stimulating Fgf4 gene. Int J Dev Biol. 1994; 38: 463-69.

69

de otras seales como la Fgf9 y la Shh producen la diferenciacin de los ameloblastos 73 . Se a reportado, que el desarrollo del diente se ve afectado en la etapa de casquete si se produce la anulacin de los genes Left1, Msx1 y Pax9 As como los factores de trascripcin son blancos de las seales de BMP, FGF y Wnt, la formacin de la campana del diente parece ser dependiente, de nuevo, de estas vas de sealizacin. La BMP-4 es una buena candidata para la seal mesenquimal induciendo la transformacin desde la etapa de casquete a campana4, 74 ,. Particularmente, Las BMPs han sido sugeridas a jugar un mayor papel en la formacin peridica de patrones por medio de la inhibicin de sealizacin de de las FGFs 75 . Por lo cual se ha llegado a la conclusin que la Fgf4 va a funcionar como un activador cuspdeo mientras que las BMPs y posiblemente la Shh, pueda funcionar como inhibidoras regulando la distancia entre las cspides en formacin. El estadio 17 se localiza aproximadamente en el da 42, final de la sexta semana de desarrollo del embrin. Esta etapa se caracteriza por presentar: el pigmento del ojo, los hoyos nasales, canal nasolacrimal , el meatus acstico externo, el montculo auricular, el corazn, los rayos digitales, el muslo, el tobillo, el plato del pie, el cordn umbilical. 76 Las fositas nasales continan su ingresin en el mesnquima nasal hasta hacer contacto con la mucosa del estomadeo y finalmente la perforan. Este proceso crea dos cavidades nasales arriba y la cavidad bucal abajo dejando una porcin de tejido interpuesta o paladar primario (Moss- Salentijn 1981) Otros autores consideran que la lmina dental se forma de manera independiente y adyacente a la lmina bucal (Ten Cate 1989). Entre la sexta y la sptima semana los procesos nasales medio y laterales establecen contactos entre si, por debajo de la fosa olfatoria en desarrollo. La fusin de los tres procesos: lateronasal, medionasal y maxilar forman un reborde considerable de tejido en la base de la fosa olfatoria, que luego se desarrolla hacia abajo y hacia delante. Mientras ocurren estos cambios se advierte que en el primer arco branquial, se subdivide en dos porciones el proceso maxilar y mandibular. Alrededor de las seis semanas
73

se

produce

la

diferenciacin

de

la

lmina

dental,

inicia

la

Jernvall J, Thesleff I. Reiterative signaling and patterning during mammalian tooth morphogenesis. Mechanisms of Development. 2000; 92: 19-29. 74 Cobourne MT, Sharpe PT. Tooth anf jaw: molecular mechanism of patterning in the first branchial arch. Arch oral biol. 2003; 48: 1-14. 75 Jung HS, West F. Widelitz RB. Local inhibitory action of BMPs and their relation with activators in feather formation: implications for periodic patterning. Dev Biol. 1998; 196: 11-23. 76 http://anatomy.med.unsw.edu.au/cbl/embryo/wwwhuman/Stages/Stage17L.htm

odontognesis. 77 La funcin del gen homeobox Msx-1 ha demostrado ser necesaria para el desarrollo dental 78 . La expresin de Msx1 inicia localizada en las clulas mesenquimales de la papila y del folculo dental. En contraste la expresin de Dlx1 y 2 en el mesnquima del arco maxilar y mandibular es restringido a las regiones donde se desarrollara el futuro molar. Barx 1 se expresa en las regiones del futuro molar no en las regiones anteriores. 79 Al finalizar la sexta semana los rebordes de los futuros maxilares superior e inferior son formaciones macizas, que no muestran subdivisiones en labios y encas. El maxilar inferior tiene osificacin mixta, yuxtaparacondral( el cuerpo), el cual; aparece entre la sexta y la sptima semana, y la rama es endocondral (con aparicin entre la 12 y 13 semana). El maxilar superior comienza su osificacin al terminar la sexta semana, a partir de los puntos de osificacin situados por fuera de cartlago nasal, uno a nivel anterior denominado premaxilar y otro posterior denominado postmaxilar, el tipo de osificacin es intramembranosa. 80 Los genes Dlx 5 y Dlx6, asociados con el desarrollo craneofacial, pueden regular la osificacion endocondral y la intramembranosa, y defectos en estos genes pueden causar perdida completa del cartlago de Meckel. El Dlx5 y Dlx6-lacZ fueron espresados en el desarrollo de las extremidades y del oido externo. 81 Numerosos genes se requieren para el desarrollo craneofacial, incluyendo Prx1, Prx2, Msx1, Msx2, Edn1, ETa, ratones nulos en Prx1/2, Msx1/2 y Edn1 o Eta, presentaron defectos craneofaciales y oticos similares a los defectos causados por alteraciones en Dlx5/6. El gen Msx-1 mostr ser necesario para el desarrollo del paladar y de los dientes. 82 En ratones transgenicos en los cuales el Msx-1 fue alterado hubo paladar fisurado y anodoncia completa. El Msx-1 es expresado en clulas mesenquimales derivadas de la cresta neural , en el proceso facial expresado intensamente en las extremidades.
83

es especialmente intenso en el es

mesenquima alrededor de la morfognesis dental. Por otro lado el Msx-1

CAMPOS L. Desarrollo embriologico y fetal del sistema maticatorio. Univers Odont, 1994;13 (26):3352. 78 THELEFF I. homeobox genes and growth factors in regulation of craniofacial and tooth morphogenesis. Acta Odontol Scand. 1995; 53: 129-134. 79 Cobourne M. The Genetic control of early Odontogenesis. 1999. British Journal of Orthodontics/Vol26/21-28 80 FERRARIS M. Histologia y Embriologia Bucodental. 2 edicion Panamericana. 2002. pp 49 81 RAYMOND F. The Dlx5 and Dlx6 Homeobox genes are essential for craneofacial, axial and appendicular skeletal development.2002. www.genesdev.org/cgi/doi/ 82 WILKINS. A.S. Genetic analysis of animal development. 2nd edition New York:Wiley-Liss. 1993:41525; 465-76. 83 THELEFF I. homeobox genes and growth factors in regulation of craniofacial and tooth morphogenesis. Acta Odontol Scand. 1995; 53: 129-134.

77

El gen Pax 6 es un gen altamente conservado que controla el desarrollo del ojo 84 . La proteina BMP7 es necesaria para mantener el desarrollo del ojo. 85 El estadio 18 se localiza aproximadamente en el da 44, al inicio de la sptima semana de desarrollo del embrin. Esta etapa se caracteriza por presentar formacin del prpado, los canalas nasolacrimales, la formacin de la aurcula,el meatus acstico externo y el plato de la mano con los rayos digitales 86 . Desde la periferia de la vescula ptica hasta el estomodeo y entre los procesos nasal lateral y maxilar se forma el surco nasolacrimal; ste se cierra y sumerge mesenquima mientras los dos procesos nasal y maxilar quedan unidos. La curvatura pronunciada del embrin y la proliferacin mesenquimal producen la proyeccin del proceso maxilar hacia delante y simultneamente el empuje y fusin de los procesos nasales en la lnea media hasta dejar un proceso nasal medio nico. En los extremos distales del primer surco aparecen los promontorios auriculares y empieza la formacin de la oreja 87 . MacKenzi y col. en 1991, en un estudio en ratones, encontraron que las mutaciones en el gen Hox-7 producen diferentes alteraciones durante el desarrollo craneofacial, tales como, malformacin en los agujeros nasales, odo externo y formacin del ojo. El Hox-7 ha sido relacionado con reas en donde hay interaccin epitelio- mesnquima y migracin celular 88 La glndula submaxilar se forma al comienzo de la La lmina epitelial o engrosamiento epitelial de la mucosa del estomodeo se invagina dentro del mesnquima subyacente, formando una cinta epitelial o lmina vestibular o bucal. En la regin anterior de esta lmina nace otra como una repisa horizontal que es la Lmina Dental, mientras en la regin posterior las dos lminas, bucal y dental, se originan separadas pues la lmina dental se halla curvada hacia adentro (Radlanski 1993).En el extremo de la lmina dental se van formando engrosamiento esfricos o botones dentarios en respuesta a una condensacin del mesnquima adyacente. 89 Se expresan Msx1 y Msx2 ampliamente en muchos rganos; particularmente en los sitios dnde hay interacciones epitelial-mesenquimales. Se expresan Msx1 y Msx2 fuertemente en las regiones crneofaciales en vas de desarrollo. en el

PICHAUD F. et al. Pax genes and eye organogenesis. Current opinin in genetics and development 2002, 12:430-434. 85 FERRARIS M. Histologia y Embriologia Bucodental. 2 edicion Panamericana. 2002.
86
87

84

http://anatomy.med.unsw.edu.au/cbl/embryo/wwwhuman/Stages/Stage18L.htm

CAMPOS L. Desarrollo embriologico y fetal del sistema maticatorio. Univers Odont, 1994;13 (26):3352. 88 A MacKenzie, MW Ferguson and PT Sharpe. Development, Vol 113, Issue 2 601-611, Hox-7 expression during murine craniofacial development. 89 CAMPOS L. Desarrollo embriologico y fetal del sistema maticatorio. Univers Odont, 1994;13 (26):3352.

La expresin de Msx2 es perceptible en la semana 7.5 del desarrollo embrionario humano. En la fase de desarrollo el germen del diente, Msx2 es perceptible en la lmina vestibular, y el epitelio dental y mesnquima distribucin temprana de colgeno, fibronectina y
90

Se ha demostrado la durante la

tesnacina

morfognesis dental. 91 Se ha propuesto que la tesnacina juega un papel importante en las interacciones de tejido que maneja el desarrollo temprano de organos embrinicos y los folculos dentales. 92 Esta glicoproteina esta asociada con la capacidad de diferenciacin de clulas formadoras de tejidos duros.93 YY1 activa endgenamente la expresin del gen Msx2. BMP4 regula la expresin de Msx2 en tejido embrinico y en clulas P19, se evalu que YY1 es el mediador de la actividad de BMP4. BMP4 no induce la expresin de YY1 esto sugiere que las clulas P19 no requieren mediador va BMP4. Las funciones de YY1 como un activador para el Msx2, y su regulacin independiente de la va BMP4 , puede ser requerida durante la morfognesis temprana craneofacial y de las extremidades. 94 Msx-1 se encuentra en una variedad de tejidos embrionarios requiriendo de interacciones epitelio-mesenquimales para su morfognesis como el brote de las extremidades, cola embrionaria, foliculo piloso y brote dentario. Los ratones con dficit de Msx-1 exhibieron malformaciones como paladar figurado, longitud mandibular reducida, anormalidades del hueso nasal, frontal y parietal as como desarrollo dental afectado, sugiriendo el papel del MSx-1 en el crecimiento aumentado de estos tejidos. En humanos, las mutaciones en el Msx-1 han sido involucradas en la agenesia dental y paladar hendido y el fenotipo fue relacionado con una dosis efectiva de la proteina Msx-1. la subregulacion de Msx 1 esta asociada con la diferenciacin terminal de varios tipos celulares como cartlago y msculo y tambin clulas musculares. Otros factores que estan involucrados en la diferenciacin celular esqueletica como el Cbfa1 (factor unido al ncleo), un gen maestro para el hueso. Cbfa 1 y actores como Msx2 o Dlx5 miembros de la familia

ALAPPAT, S . ZHANG S, CHEN P. Msx Homeobox gene family and craneofacial development. Cell Research (2003); 13(6):429-442 91 THESLEFF I et al. Changes in the distribution of tenascina during tooth development. Development 101, 1987. 289-96 92 Garbauch C. Immunochemestry of the intercellular matrix components and the ephithelial mesenchimal juntion of the human tooth germen. Histochen J. 26, 1994: 110-80 93 Vakura M et al. Comparasion of the distribution petterns of tenascina and alkaline phosphatase in development of teeth, cartilage and bone of rats and mice. Anat Rec, 1990, 228:69-76. 94 Tan DP, Nonaka K, Nuckolls GH, Liu YH, Maxson RE, Slavkin HC, Shum L. YY1 activates Msx2 gene independent of bone morphogenetic protein signaling.Nucleic Acids Res. 2002 Mar 1;30(5):1213-23.

90

de proteinas del homeodominio han sido encontrados como controladores de la expresin de osteocalcina. 95 En la morfognesis dental, la expresin de Lhx 6 y Lhx7 es nica y est restringida al mesnquima de la cresta neural y al medio oral, y Fgf8 induce su expresin, y se puede considerar que este induce la cascada de la iniciacin dental.. BMP4 y Shh, estn relacionados con la posicin del germen dental. La expresin de Pax 9 es inducida por Fgf8 y represada por Bmp 4, Bmp4 es capaz de inducir Msx 1. Msx1 esta relacionado con la region de incisivos, mientras Barx 1 con la de molares. Por otro lado mutaciones a nivel de Lef-1, Msx-1 y Pax-9 resultan en el bloqueo a nivel del estadio de campana. Muchos factores de transcripcin son expresados en el epitelio oral, tales como, Otlx2, Dlx2, Msx1, Msx2. Shh, Bmps, y Fgfs son expresados en centros de sealizacin como ZPA y AER de las extremidades, del nodo y la notocorda.
96

En la Sptima semana del desarrollo embriolgico humano (das 43-49), ocurre que la lmina epitelial primaria se invagina dentro del mesenquima subyacente, formando una cinta epitelial o lmina vestibular. En la parte anterior de esta lmina nace otra como una repisa horizontal que es la Lmina Dental, mientras en la regin posterior dos lminas (bucal y dental), se originan separadamente pues la lmina dental se haya curvada hacia adentro. En el extremo de la lmina dental se van formando engrosamientos esfricos o botones dentarios en respuesta a una condensacin del mesnquima adyacente. Las clulas centrales de la lmina degeneran y se forma un surco que separa una parte externa o labial de otra interna o alveolar, conformando as lo que se conoce como vestbulo bucal 97 . El mesnquima externo a la lmina crece enrollndose hacia fuera, produciendo un abultamiento trasversal que corresponde al labio. Se inicia igualmente la formacin de las papilas que dura hasta la 9 semana, mientras los procesos palatinos del maxilar comienzan a fusionarse en el centro y de adelante atrs, para conformar el paladar duro. El estadio 18 esta caracterizado por un aumento en el tamao del embrin de 1317 mm, y una edad post-ovulatoria de 44 das. Las extremidades son ms largas y WAKKACH, C. et al. Endogenous antisense transcrip: in vivo and in vitro evidence, estructure and potencial involvement in skeleton development in mammals. Pnas June 19 2001. Vol 98 No 13. Pag 7336-7340 96 TUCKER A. Molecular Genetics of tooth Morphogenesis and Patterning: The right Shape in the Right Place. J Dent Res 1998. 78(4):826- 834. 97 CAMPOS, L. Desarrollo embriolgico y fetal del sistema masticatorio. Univers. Odont. 1994; 13(26): 37-52.
95

el plato de la mano es escotado; la regin del codo es usualmente discernible; el brote del miembro inferior muestra que el primer dedo (pulgar) forma rayos o en algunas proyecciones en el plato digital que son identificable u observables

especies. Los dobleces del prpado han tomado una forma ms avanzada y una extremidad distinta al final de la nariz, es tambin observable; el ventrculo auricular se ha transformado para la especie en parte del odo. Los factores de crecimiento fibroblsticos (FGFs) son una familia de polipptidos que juegan importantes roles en lo que al crecimiento, diferenciacin y supervivencia celular se refiere; as como tambin en desarrollo endocondral e intermenbranoso 98 . Diversos sndromes displsicos esquelticos resultan de mutaciones especficas en el Fgfr1, Fgfr2 y Fgfr3 sugiriendo que los FGFRs antes mencionados, son un crecimiento y componente esencial de la cascada reguladora que gobierna el desarrollo esqueltico. Mutaciones (carcter dominante) que producen aumento de las funciones en los receptores del Factor de Crecimiento Fibroblstico (FGF) causan sndromes como la Crneosinostosis y la Condroplasia. De hecho el sealar al FGF en el desarrollo esqueltico cobra mayor importancia al conocer que una mutacin en un punto en el dominio de la transmembrana del FGFR3 es la etiologa de la Acondroplasia, la ms comn de las formas genticas del enanismo en humanos. Las mutaciones en el FGFR2 como responsables de la Crneosinostosis de Apert, Crouzon y Pfeiffer, aunque cada uno de ellos cursa con caractersticas craneofaciales especficas. Se sugiere que el FGF18 es un ligando fisiolgico para el FGFR3. El FGF18 acta como un factor paracrino que transmite seales a travs del FGFR3 para inhibir la proliferacin condroctica. El FGF18 es expresado en el pericondrio en crecimiento, y por tal razn se considera un candidato para regular el crecimiento esqueltico. Adems es el primero en ser detectado en las clulas mesenquimales de la clavara y posteriormente en el desarrollo es expresado en el mesnquima osteognico y en los osteoblastos diferenciados en las superficies endstica y peristica de los huesos del crneo. numerosos procesos de

98

ORNIZT, D and MARIE, P. FGF signaling pathways in endochondral and

intramembranous bone development and human genetic disease. 2002. Genes and Development.Vol. 16 No. 12, pp.1446-65.

La sobreexpresin del MSX2 en ratones (in Vitro) y la mutacin de Msx2 en humanos inducen la formacin sea precoz y Crneosinostosis (tipo Boston), por incremento en el nmero de clulas progenitoras. La insuficiencia de Twist, el cual es factor de transcripcin que se expresa en la sutura mesenquimal y afecta la expresin gentica de los osteoblastos y apoptsis en los osteoclastos de los huesos calvarios, prematura . Los genes Dlx son considerados los homlogos mamferos del gen Dll. Los genes de la familia Dlx/ Dll pareciera jugar un rol importante en el desarrollo de algunas especies. La inactivacin dirigida de los genes Dlx5 y Dlx6 en ratones (in Vitro) se traduce en severas anormalidades esquelticas, craneofaciales y axiales y con ello la muerte perinatal. Igualmente la inactivacin dirigida o ablacin de los genes Dlx1, Dlx2, Dlx1/2 o Dlx5 en ratones (in Vitro) vestibulares. La inactivacin dirigida de los genes Dlx5/6 (in Vitro) causan defectos severos caniofaciales, seos y del odo interno. Defectos craneofaciales que pueden incluir alteraciones como: la disminucin del tamao de los ojos, la hendidura y dimorfismo nasal, maxilar y mandibular. Otros de los numerosos genes que son requeridos para alcanzar el adecuado desarrollo craneofacial y del odo, son Prx1, Prx2, Msx1, Endothelin-1 (Edn1) y Al Endotelial Areceptor (ETA) 100 . Funcin de los genes Prx en la morfognesis craneofacial: El prx-1 y prx-2 realizan funciones similares en el proceso mandibular del mesnquima del primer arco branquial. Estos genes requieren se requiere para una formacin del incisivo mandibular como para la mayora del cartlago de Meckel. Se encontr que el prx-1 se encuentra expresado ectopicamente en los ratones mutados. result en defectos craneofaciales, oseaos y
99

resulta en una osificacin craneana

99

ROBLEDO, R. RAJAN, L. LI, X and LUNKIN, T.

The Dlx5 and Dlx6 homeobox

genes are essential for craniofacial, axial and appendicular skeletal development. 2002. Gene and Development Vol. 16, No. 9, pp.1089-1101.
100

ZHONGAHAO, L. JINGSONG, X, COLVIN, J and ORNITZ, D.Coordination of

chondrogenesis and osteognesis by fibroblast grown factor 18. 2002. Genes and Development. Vol. 16, No. 7, pp.859-69.

Prx-1 y

prx-2 funcionan para mantener y

estabilizar

los destinos celulares del

mesnquima craneofacial. En ausencia del prx-1 las poblaciones especificas de clulas estn presentes pero no expresan lacZ, fallando en el desarrollo o generando procesos de apoptosis. El prx-1 y prx-2 funcionan para mantener la expresin correcta del pax 9 en el incisivo central mandibular. Estos resultados tienen las implicaciones importantes para los mecanismos de desarrollo el craneofacial subyacente el desarrollo. El reciente trabajo ha demostrado que el CNC tiene en algn grado una capacidad de patrn intrnseca . Los datos sugieren que el prx-1 y prx-2 son los componentes del programa gentico que funciona para mantener la informacin del patrn migracin y escala de rgano gnesis craneofacial. OTRAS PATOLOGAS CRNEOFACIALES PRODUCIDAS POR ALTERACIONES GENTICAS El rol de Dlx6 en la regulacin de la endotelina-1-dependiente, dHAND en el desarrollo de arcos branquiales Las clulas de la cresta neural juegan un papel importante en el desarrollo craneofacial. La endotelina es secretada y regulada por polipptidos de la cresta neural, que se encuentran incluidas en el arco branquial de la cresta neural. El helix-loop-helix del factor de Transcripcin dHAND es requerida para el desarrollo craneofacial, al igual que la regulacin de la endotelina-1 (ET-1) en embriones; la expresin de dHAND en los arcos branquiales presenta una baja regulacin, lo que implica que el factor transcripcional ET-1 se encuentra activo. Para determinar los mecanismos de regulacin de ET-1 en la Transcripcin de dHAND, fueron analizados los genes dHAND de los arcos branquiales. Se analizaron receptores de endotelial, identificando Dlx6, miembro de la familia de protenas homeodomain, asociado al factor ET-1. Concluyendo que el Dlx6 es receptor de la endotelina 1, y presenta una baja regulacin en los arcos branquiales de ratones. Lo que puede entenderse que el Dlx6 es un regulador intermediario entre la sealizacin de ET-1 y el gen dHAND durante la morfognesis craneofacial. Tambin se ha encontrado que tanto Dlx5 y Dlx6, se encuentran involucrados en la diferenciacin de osteoblastos, y por lo tanto son necesarios para el desarrollo craneofacial. durante la

Mutaciones en dHAND se encuentran relacionadas con prdidas de la funcin, alteraciones en el desarrollo craneofacial, lo que da pie a futuras investigaciones relacionadas con el Sndrome de Treacher-Collins. Deficiencia de los derivados de membrana farngea en ratones,

anormalidades dentales, craneofaciales y de las extremidades. Los genes Pax han mostrado un importante papel en el desarrollo de mamferos y en la organogsesis. El Pax9, es miembro de la familia del factor de transcripcin, expresado en las somitas, membrana farngea, el mesnquima que involucra el sistema craneofacial, dientes, y el desarrollo de las extremidades, durante la embriognesis del ratn. Para analizar la funcin in vivo en el estudio, se produjo deficiencia de Pax9 en ratones y muestra que el Pax9 es esencial para el desarrollo de una variedad de rganos y elementos del esqueleto. Los ratones despus del experimento murieron, y la mayora tena como consecuencia paladar hendido. A ellos les faltaba, el timo, glndula paratiroides, y el ltimo cuerpo branquial (rganos que son derivados de la membrana farngea). El Pax9 es requerido para la expresin de Bmp4, Msx1 y Lef1, lo que sugiere que el papel del Pax9 induce el desarrollo de los dientes. Hay que resaltar que en el estudio se muestra al Pax9 como un regulador clave durante el desarrollo del rgano del primordio. Durante el estado 11.5, la membrana farngea se encuentra relacionada con el desarrollo del timo, glndula paratiroides, y ltimo cuerpo branquial. En este estado tanto el Pax9 como el Pax1 se expresan en epitelio de la membrana farngea, observndose despus de ste estado que el epitelio del timo es requerido para la maduracin normal de las clulas T. Al parecer Pax1 no acta en ausencia del Pax9 durante la fase embrionaria de la formacin del timo. Es posible que tanto el Pax9 como el Pax1 regulen diferentes procesos durante el desarrollo de la membrana farngea. Diferenciacin de clulas stem de embriones inducida por factores GATA El endodermo extraembrionario es diferenciado de clulas en estado de blastocito tardo del endodermo visceral y parietal; ambos tienen un importante papel en la embriognesis temprana. El papel esencial de los factores GATA 6 y GATA 4 en la diferenciacin del endodermo visceral, ha sido analizado en este estudio en ratones. La sobreproduccin de ambos factores causa la activacin de los dos genes exgenos.

El GATA 6 promueve la diferenciacin del endodermo extraembrionario despus de retirar el factor estimulador de leucemia y promueve el endodermo visceral. En el estudio muestra que los factores GATA son suficientes para la diferenciacin del endodermo extraembrionario. Se demuestra que inducen diferenciacin de las clulas indiferenciadas (stem), por una sobre-expresin de los factores especficos de Transcripcin; sin embargo se reporta este estudio como el primer estudio fisiolgico de diferenciacin de eventos por expresin ectpica de factores de Transcripcin en clulas indiferenciadas embrionarias. Estas clulas podran diferenciar la formacin de cuerpos embrioides que es la va de transicin al ectodermo primitivo, lo cual podra ser esencial para la diferenciacin de los grmenes del embrin. Si se produce sobre-expresin del GATA 4, se dan diferentes respuestas en las clulas indiferenciadas del embrin, y clulas embrionarias carcinognicas, (clulas induciendo las clulas del endodermo extraembrionario y los cardiomiocitos. Estas diferencias podran estar basadas en que stas clulas pluripotenciales cancergenas) tienen caractersticas semejantes a las del ectodermo primitivo. En conclusin, existen numerosos genes relacionados con la morfognesis craneofacial, y cada da la investigacin en esta rea crece y con ella, el nmero de genes reportados en la literatura. Las alteraciones pequeas en cualquiera de estos genes da lugar a las patologas y sndromes craneales y dentomaxilofaciales.