FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA DE LA UNAM DIVISION DE SISTEMA DE UNIVERSIDAD ABIERTA Y EDUCACIN CONTINUA CENTRO DE ENSEANZA, INVESTIGACIN Y EXTENSIN

EN PRODUCCIN OVINA

CONGELACIN DE SEMEN

MEMORIAS
8 y 9 de diciembre de 2005

DIRECTORIO UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO Dr. Juan Ramn de la Fuente RECTOR Lic. Enrique del Val Blanco SECRETARIO GENERAL Mtro. Daniel Barrera Prez SECRETARIO ADMINISTRATIVO Dra. Rosaura Ruiz Gutirrez SECRETARIA DE DESARROLLO INSTITUCIONAL Mtro. Jos Antonio Vela Capdevila SECRETARIO DE SERVICIOS A LA COMUNIDAD Mtro. Jorge Islas Lpez ABOGADO GENERAL Lic. Nstor Martnez Cristo DIRECTOR GENERAL DE COMUNICACIN SOCIAL FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA Dr. Francisco Trigo Tavera DIRECTOR Dra. Silvia Buntinx Dios SECRETARIA GENERAL Dra. Norma Prez Gallardo JEFA DE LA DIVISIN DE SISTEMA DE UNIVERSIDAD ABIERTA Y EDUCACIN CONTINUA Dr. Carlos Esquivel Lacroix SECRETARIO TECNICO DE EDUCACION CONTINUA Dr. Antonio Ortiz SECRETARIO DE PRODUCCIN ANIMAL Dr. Jess Nez DIRECTOR TCNICO DEL CEIEPO

COORDINADOR ACADMICO Dr. Jess Nez

COORDINACIN ADMINISTRATIVA DIVISION DE EDUCACION CONTINUA MVZ. Patricia R. Daz Gemez LIC. Mariana Figueroa Gmez MVZ. Patricia Mejia Gutirrez PMVZ. Dina Pescador

EDICIN VERSIN ELECTRNICA MVZ. Patricia R. Daz Gemez Lic. Mariana Figueroa Gmez MVZ. Patricia Mejia Gutirrez

La reproduccin parcial o total de los trabajos no podr efectuarse sin la previa autorizacin por escrito del autor y citando estas memorias como referencia. La informacin contenida, as como estilo y ortografa en cada uno de los escritos es responsabilidad de los autores.

ANTECEDENTES SOBRE EL USO DE LA INSEMINACIN ARTIFICIAL.

MVZ MPA ANTONIO ORTZ HERNNDEZ. CENTRO DE ENSEANZA, INVESTIGACIN Y EXTENSIN EN PRODUCCIN OVINA. FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO.

El objetivo de un sistema de produccin de ovinos sin importar la forma de produccin, es obtener el mayor nmero de corderos, lo que nos lleva a buscar que el mayor numero de ovejas queden gestantes, el mayor nmero de ovejas nos den ms de un cordero y por ltimo que se desteten el mayor nmero de corderos, (disminuir la mortalidad) y lograr mayor frecuencia de de paricin en las ovejas, lo que se conoce como intervalo entre partos reducirlo. Los logros dentro de los programas reproductivos dependen de mltiples factores, que van de genticos y ambientales. Es por esto que cuando interviene el factor humano, es decir el manejo que le da el hombre a sus ovejas, se debe considerar el como se realiza el empadre. Este empadre se puede realizar en forma natural como la monta en campo o corral en donde el semental no tiene restricciones y va dando servicio a las hembras conforme van apareciendo en estro. Otra forma es con monta controlada en la que el celo de la oveja es previamente detectado por un borrego vasectomizado o con mandil y una vez detectada se lleva al semental previamente seleccionado para darle la monta y por ltimo usar la Inseminacin artificial. La inseminacin artificial (IA.) puede definirse como un mtodo reproductivo en el que las clulas sexuales masculinas son depositadas dentro del tracto genital femenino por medios distintos al de la cpula natural. Debido a lo tortuoso del canal cervical de la borrega, se han desarrollado varias tcnicas que buscan adaptarse a la anatoma de los genitales de la hembra. En general puede decirse que existen cuatro tipos (sitios) de la inseminacin artificial: vaginal, cervical, transcervical y laparoscopica o intrauterina En este sistema no existe contacto directo entre el macho y la hembra, adems se puede considerar una tcnica que permite un mejor uso del material gentico de los machos cuyas caractersticas zootcnicas son superiores a la de la mayora de los animales de la misma especies domsticas. La IA. en los ovinos est lejos de ser una tcnica nueva lleva ms de 50 aos practicndose, las primeras ovejas que fueron inseminadas artificialmente con resultados satisfactorios en 1936, sin embargo fue posible aplicarlo a gran escala cuando se descubri en 1965 la forma de sincronizar los estros de las ovejas. La IA es una tcnica muy usada en el mundo, Rusia predomina con ms de 47 millones de ovejas inseminadas y una tasa de concepcin del 93%, en 1988 y 1989 se estim que 350,000 ovejas fueron inseminadas en Australia. En 1983, 225,960 fueron inseminadas en Francia y 35,000 en Espaa. Actualmente se calcula que se inseminan un promedio de 50 a 60 millones de borregas en el mundo.

Al igual que cualquier otro tipo de tecnologa existen ventajas y desventajas. Ventajas de la IA. 1. Mejora gentica: Mejoramiento gentico acelerado, mediante el uso de sementales probados. Con la utilizacin de sementales superiores se puede tener un beneficio directo sobre la produccin de la progenie resultante. Tambin facilita la introduccin o el cambio a otro genotipo. 2. Fcil transporte del material gentico: A menudo los criadores desean introducir sangre nueva en sus rebaos y transportar nicamente el semen, ya sea fresco, refrigerado o congelado, es ms barato que transportar a los sementales. 3. Conservacin prolongada del semen: El semen procedente de sementales valiosos se puede conservar en forma congelada para utilizarlo en aos venideros e incluso despus de la muerte del semental. 4. Aumento de la eficiencia reproductiva: Mejor utilizacin ya que a partir de un eyaculado es posible obtener de 20 a 35 dosis de semen fresco diluido y se pueden procesar aproximadamente 10 dosis de semen congelado, con lo que el potencial de corderos producidos por cada carnero aumenta considerablemente de 22 corderos anuales con monta natural a 500 con IA con semen refrigerado y hasta 12,000 con semen congelado. 5. Reduccin del nmero de sementales dentro del rebao: Evita la presencia de un nmero alto de sementales dentro del rebao y el gasto de su manutencin. 6. Prevencin de enfermedades: Por medio de la IA se evita el contacto directo machohembra y por lo tanto es factible controlar y prevenir la propagacin de enfermedades venreas u otras enfermedades. Es importante considerar el uso de animales libres de enfermedades contagiosas. 7. Utilizacin de programas de reproduccin sincronizada: Facilita la implementacin de programas de sincronizacin o bien de la induccin de celos, pudiendo incrementar con esto la produccin. 8. Facilita las pruebas de progenie: Este tipo de pruebas, perfectamente establecidas en otras especies empiezan a realizarse en ciertos pases como Australia, a partir de carneros seleccionados. Desventajas de la IA. 1) Es necesaria la asistencia de un tcnico especialista en IA. 2) Los valores de fertilidad obtenidos en nuestro pas con la IA llegan a ser un poco ms bajos que la monta natural. 3) Es un mtodo costoso. 4) Propagar enfermedades. La IA se pude realizar con semen fresco, refrigerado o congelado. Segn el diluyente que se utilice,

La IA con semen fresco, el eyaculado obtenido es puede ser fraccionado inmediatamente y depositado en las vas genitales de la hembra con muy buenos resultados de fertilidad. Esta tcnica requiere que se insemine en un tiempo relativamente corto, ya que la viabilidad disminuye rpidamente en el semen que no ha sido diluido. El volumen de la dosis debe ser entre 0.05 y 0.1 ml y contener por lo menos 50 millones de espermatozoides vivos. Inseminacin artificial con semen refrigerado, en este caso el semen obtenido se diluye inmediatamente despus de su obtencin y evaluacin. Existe una gran cantidad de diluyentes y la dilucin debe ser 1:4 y 1:6, diluciones mayores a 1:10 reducen los resultados de fertilidad. Inseminacin con semen congelado, se utiliza semen congelado a 196 grados con nitrgeno lquido, con lo cual las reacciones metablicas de los espermatozoides se detienen por completo. El semen se conserva para su uso a corto o a largo plazo Como ya se mencion, existen 4 tcnicas para realizar la IA en la borrega y stas se han desarrollado buscando adaptarse a la anatoma de los genitales de la hembra. Las 4 tcnicas se describen a continuacin: La inseminacin vaginal o inseminacin a ciegas; se usa con semen fresco, es el mtodo ms sencillo y rpido de los 4, pero generalmente requiere una mayos dosis de semen que los otros mtodos y los resultados obtenidos son poco predecibles. Esta tcnica se denomina disparo en la oscuridad (SID short-in the dark). Consiste simplemente en depositar el semen, generalmente sin diluir en lo ms profundo de la vagina sin intentar encontrar el cervix, se ha utilizado para la inseminacin de hembras primerizas, en las que la angosta porcin vestibular de la vagina no permite la libre entrada del espculo. Se realiza con la hembra parada y detenida contra la pared del corral, el inseminador puede auxiliarse abriendo los labios bulbares con la mano libre, se inserta la pipeta y se deposita el semen en la vagina. Con este mtodo se han reportado ndices de fertilidad bajos. La inseminacin cervical, es probablemente la forma ms econmica y eficiente de utilizar el semen fresco ya que al utilizar semen congelado los resultados obtenidos no justifican esta combinacin. En esta tcnica se busca depositar el semen a una profundidad de hasta 3 cm en el cervix para evitar daar el tejido. Se introduce el espculo con fuente de iluminacin propia con movimientos suaves de ste, se localiza el cervix, se introduce la pipeta lo ms profundo posible del cervix depositando el semen en l. Se ha demostrado que entre ms profundo en el cervix sea el punto de inseminacin, mayor ser la fertilidad obtenida. La inseminacin transervical, esta tcnica consiste en introducir un espculo con fuente de luz, se fija el cervix con unas pinzas y con una pipeta con punta de metal se realizan movimientos suaves y gentiles de izquierda a derecha tratando de pasar los pliegues del cervix para depositar el semen directamente en el tero. Existen reportes del 90% de fertilidad cuando se realiza en forma adecuada. La inseminacin intrauterina, consiste en depositar el semen directamente en el tero y ha dado muy buenos resultados con el uso de semen congelado, ya que se evita la barrera cervical obteniendo tasas de concepcin comparables con la monta natural y otras formas de inseminacin con semen fresco. A grandes rasgos consiste en la localizacin laparoscpica rpida del tero y la inyeccin del semen directamente a los cuernos uterinos mediante una pipeta fina a travs de una cnula separada.

Durante el desarrollo del curso se tocar ms ampliamente y con detalle los mtodos de coleccin, evaluacin y conservacin del semen, as como de las tcnicas de IA ms utilizadas en los ovinos. Literatura.
- Angulo MR, Ortz HA. La Inseminacin Artificial como tcnica para incrementar la productividad en los ovinos. Memorias: Curso Taller Inseminacin Artificial en Ovejas. Divisin de Educacin Continua. FMVZ. Tlapacoyan, Ver. 1996; 1-3. - De Lucas TJ , Arbiza AS. Sistemas de apareamiento e inseminacin artificial en ovinos. UNAM. FESC. 2004. - Dally MR. Making A.I. work for you. Fifth World Sheep and Wool Congress. Department of Animal Science University of California-Davis. Pomona Cal. 1998; 1-14. - Radillo DJJ. Inseminacin artificial en ovinos: Estudio Recapitulativo de 1981 a 1991. (tesis licenciatura). Mxico: Universidad Nacional Autnoma de Mxico, 1992.

CICLO ESTRAL Y SU CONTROL ARTIFICIAL.

DR. OCTAVIO MEJA VILLANUEVA.

El ciclo estral se define como un fenmeno rtmico, con perodos regulares pero limitados de receptibilidad sexual, asociados, en la mayora de los casos, con la liberacin de vulos capaces de ser fertilizados. De acuerdo con la presentacin de los ciclos estrales, las especies se clasifican en: Monostricas, polistricas continuas y polistricas estacionales, las primeras presentan un ciclo estral al ao (perros), las segundas presentan los ciclos estrales durante todo el ao (vaca y cerda) y las terceras, presentan muchos ciclos durante el ao pero confinados a una estacin (oveja y yegua). De acuerdo a la espontaneidad de la ovulacin, las especies se clasifican en: 1. Ovulacin espontnea con formacin de cuerpo lteo (Cl) y tenemos como ejemplos a la vaca, yegua, oveja, perra y cerda. 2. Especies de ovulacin espontnea sin actividad productiva del cuerpo lteo cuando no hay estimulacin cervical, como las ratas y ratones. 3. Ovulacin inducida, requiere la estimulacin cervical para ovular y tenemos como ejemplo la coneja y la gata. Existen factores que influyen en los patrones reproductivos como son: La Luz, este factor se puede considerar como determinante en la presentacin de patrones reproductivos de especies estacinales como son la yegua que presenta su actividad reproductiva en los meses cuando los das son ms largos y las noches ms cortas, es decir el fotoperodo es mayor, as la yegua ciclar en los meses de primavera, verano y principios del otoo. En el caso de las ovejas, presentan su estacin reproductiva durante los meses de poca luz, esto es, sus ciclos estrales aparecern durante otoo e invierno, cuando los das son ms cortos. La influencia de luz se presenta en los machos de estas especies estacinales, aunque su efecto no es tan marcado. La temperatura en la reproduccin su efecto no es tan marcado como la luz, se puede mencionar, por ejemplo, que bajas temperaturas durante el verano, favorecen el inicio temprano de la poca reproductiva en las ovejas. La nutricin, en las especies domsticas la reproduccin es una funcin de lujo, ya que antes de destinar energa para reproducirse, la destinar para sobrevivir. Por ltimo en los ovinos los aspectos sociales tienen inters ya que si se colocan en un corral adyacente al de las hembras, se producir un efecto de estmulo y an de sincronizacin.

Ciclo estral: La nomenclatura que a continuacin se describe es la ms utilizada en la literatura y se toma del ciclo estral de la rata. 1. Proestro. Esta etapa se caracteriza por un crecimiento folicular previo a la receptibilidad sexual. Comienza en algn momento durante el perodo de regresin del cuerpo lteo del ciclo anterior y termina al iniciarse la receptibilidad sexual. 2. Estro. Esta etapa se caracteriza por la receptibilidad sexual. Cada especie inicia esta de diferente manera. 3. Metaestro. Esta etapa se inicia con la ovulacin y termina al alcanzar el cuerpo lteo su plena funcionalidad. En otras palabras, esta es la etapa de maduracin del cuerpo hemorrgico a cuerpo lteo. 4. Diestro. Esta etapa se caracteriza por plena funcionalidad del cuerpo lteo, el cual secreta sus mximas cantidades de progesterona. 5. Anestro. En especies estacinales, sta ser la etapa de inactividad del eje hipotlamo-hipfisis-ovario. Existen otras formas de describir el ciclo estral as tenemos: 1. Basado en actividad ovrica, el ciclo presenta dos fases: 9 Fase folicular, que incluye proestro y estro hasta el momento de la ovulacin. 9 Fase ltea, que incluye metaestro y diestro hasta la regresin del cuerpo luteo. 2. Basado en el comportamiento sexual, el ciclo estral presenta 2 fases: 9 Estro. Receptibilidad sexual. 9 Diestro. No receptibilidad sexual. En cuanto a los eventos endocrinos que produce la ovulacin tenemos los siguientes: Crecimiento folicular inicial bajo niveles mnimos basales de gonadotropinas. Esto sucede durante la fase ltea. Retroalimentacin positiva de estrgenos. Pico preovulatorio de gonadotropinas. Ovulacin. En lo que se refiere a la oveja la duracin de las diferentes fases del ciclo estral son las siguientes: Proestro 2 das. Estro 1 2 das. Metaestro 2 das. Diestro 11 12 das. Anestro Estacional. El ciclo estral en la oveja presenta entonces una duracin de 14 a 19 das con un promedio de 17 das, presentando las corderas ciclos ms cortos que las ovejas adultas, la duracin promedio del estro en la oveja es de 30 horas teniendo una ovulacin espontnea entre 24 a 27 horas despus de iniciado el estro.

La manifestacin y conducta de las ovejas en estro son poco evidentes y slo el macho puede detectar a las hembras en esta etapa ya que lo buscan, se quedan quietas y aceptan la monta. Las ovejas presentan ms de una ovulacin en cada estro y ms de una cra al parto, aunque existen razas como la Rambouillet que no se caracteriza por parir ms de una cra en promedio al parto. El nmero de ovulaciones est influenciado por la raza y lnea gentica, la alimentacin y la poca del ao; se conoce que la tasa de ovulacin aumenta hacia la mitad de la estacin reproductiva. La prolificidad en forma prctica se mide mediante el porcentaje de paricin, el total de cras nacidas en relacin con el nmero de hembras paridas. Por esta caracterstica tenemos algunos ejemplos: Rambouillet 100 % Dorset 127 % Suffolk 144 % Pelibuey 144 % Romanov 238 % Finnish 600 %. En cuanto a la endocrinologa del ciclo estral de la oveja podemos mencionar lo siguiente: Hormona luteinizante (LH): el pico de LH en el plasma de la oveja aparece entre cinco y doce horas despus del inicio del estro y alcanza niveles de 20 a 100 ng/ml. Su nivel permanece bajo en otras fases del ciclo estral y solamente se eleva cuando la progesterona plasmtica alcanza un nivel inferior a 1 ng/ml. Estrgenos: En la oveja se observan picos de secrecin a lo largo del ciclo estral, que corresponden a diferentes perodos de crecimiento folicular. El ltimo pico de estrgenos del ciclo representa probablemente el crecimiento preovulatorio del folculo y es el responsable de la secrecin preovulatoria de la hormona LH. Progesterona: Su nivel es bajo durante los primeros das del ciclo y aumenta rpidamente del da 3 al 11. En el da 14 ocurre un descenso dramtico como consecuencia de la regresin del cuerpo lteo. La actividad funcional del cuerpo lteo y la produccin de progesterona termina el da 15. Prostaglandinas: Hacia el final de la fase ltea el endometrio secreta la prostaglandina F2, la cual sale por la vena uterina y pasa a la arteria ovrica provocando la regresin del cuerpo lteo. Sincronizacin de los estros en las ovejas. En un rebao donde todas las ovejas se encuentran ciclando, el nmero de animales que presentan estro en un determinado da es proporcional a la longitud del ciclo estral. Con la sincronizacin del ciclo ovrico se pretende incrementar significativamente la agrupacin de estro en un perodo corto. Existen razones importantes para buscar mtodos prcticos que resulten en un alto grado de sincronizacin estral acompaado de una fertilidad normal. Entre las ventajas que ofrece la sincronizacin estn: a. Facilitar el uso de la inseminacin artificial. b. Programar los nacimientos para el periodo ms favorable para la sobrevivencia de los corderos y de acuerdo a las necesidades del mercado. c. Aprovechar mejor a los machos superiores y valiosos.

d. Permite el ahorro de mano de obra especializada en los cuidados del recin nacido. e. Alcanzar una mayor eficiencia en el uso de los suplementos alimenticios, ya que la alimentacin podr irse modificando de acuerdo al estado de gestacin. f. Utilizar tcnicas avanzadas de reproduccin, como la inseminacin artificial y la transferencia de embriones. La sincronizacin del celo intenta el control de la actividad reproductiva y una gestacin racional en la explotacin, eliminando algunas consecuencias indeseables de la reproduccin incontrolada. El control reproductivo puede lograrse a travs de: 1. Modificar el ambiente exterior de los animales mediante el control de fotoperiodo, el manejo alimenticio y efecto macho. 2. Modificar el equilibrio endocrino de la funcin sexual a travs del empleo solo o combinado de diversas hormonas exgenas. 3. Una combinacin de ambos. Efecto macho, la introduccin del macho en un grupo de hembras en la poca de transicin entre el anestro y la estacin reproductiva induce y sincroniza el celo, siempre y cuando las hembras hayan estado separadas del macho. Su principal ventaja es la de que es un mtodo natural de inducir el celo. Efecto hembra, en estudios realizados en Mxico, se pudo comprobar que ovejas que se encontraban junto con ovejas que fueron inducidas a ciclar en forma sincronizada las indujeron a ciclar en un 40 % a las ovejas no tratadas, los autores concluyen que es por efecto de las ferormonas, ya que el efecto inductor del estro disminuye en las ovejas mantenidas en corrales progresivamente ms distantes. Sincronizacin del estro con prostaglandinas, los niveles de la prostaglandina F2 (Pg F2) en la sangre de la vena uterina se incrementa hacia el final del ciclo estral, hasta alcanzar niveles que son adecuados para producir lutelisis. El control del pico preovulatorio de LH, ovulacin y presentacin del estro se puede obtener mediante la lutelisis inducida con PGF2 o sus anlogos sintticos despus del da 4 o 5 del ciclo estral. Se logra una completa regresin ltea 15 a 20 horas despus de la administracin de la hormona, y esta regresin es seguida por la manifestacin de estros de 36 a 44 horas despus de la inyeccin. Se han reportado resultados de un 94% de sincronizacin de estros con 56 % de fertilidad y una Prolificidad del 175 % utilizando prostaglandina. Sin embargo la regresin ltea no se puede inducir dentro de los primeros 4 a 5 das despus del estro, ya que el cuerpo lteo es inmaduro y aun no es sensible a la prostaglandina Tambin se ha reportado fallas en la regresin del cuerpo lteo cuando se aplica la PGF2 entre el da 9 y 11 del ciclo estral, cuando la funcionalidad del cuerpo lteo es mxima. Esta situacin limita el uso de las prostaglandinas por lo que debe recurrirse a utilizar doble inyeccin de prostaglandina con varios das de separacin o combinarla con progestgenos. Sincronizacin de estros con progesterona y progestgenos. Estos productos suprimen el estro y ovulacin en ovejas que estn ciclando. Al dejarse de administrar el progestgeno se deja de inhibir a la gonadotropinas y se reinicia el desarrollo folicular, que

culmina con la presentacin de estro sincronizado en la mayora de las hembras en promedio 48 horas despus de finalizado el tratamiento. Un programa general de sincronizacin se puede evaluar de acuerdo a tres parmetros generales: Supresin de estros durante el tratamiento Presentacin de estros postratamiento y grado de sincronizacin de los mismos. Fertilidad de estro sincronizado. Progesterona por va intramuscular, 5 o 10 mg de progesterona diario cada dos das suprime el estro. Pero la presentacin de los estros es muy dispersa, la fertilidad es baja a inseminacin a primer estro postratamiento. La introduccin del carnero un da antes de la ltima inyeccin de la progesterona se logra mejorar la sincronizacin de los calores. Esponjas vaginales, impregnadas con acetato de fluorogestona (FGA) por 9 a 12 das, seguidas de una inyeccin 200 a 500 UI de gonadotropina corinica equina (eCG) han dado excelentes resultados para sincronizar estro en ovejas. Dispositivos intravaginales de liberacin controlada de progesterona (CIDR); con 366 mg de dosis total, se dejan de 9 a 12 das aplicando eCG al retirarlo, dando resultados similares a las esponjas intravaginales. Progestgenos orales, el uso del progestgeno en el alimento simplifica la administracin de la hormona a los animales domsticos, pudiendo controlar el final del tratamiento mediante el retiro del progestgeno de la mezcla alimenticia. El progestgeno ms utilizado es el acetato de melengestrol (MGA), se ha utilizado en dosis de 11 a 60 mg por da por animal con una duracin de 7 a 14 das de aplicacin, los mejores resultados son cuando se aplica a dosis de 11mg por da durante 7 a 14 das e inseminando a segundo estro, ya que en el primero la fertilidad se ve disminuida. Combinacin de progestgenos con agentes lutolticos, debido a que al iniciar un tratamiento con progestgenos los animales se encuentran al asar en los diferentes das del ciclo estral, se requiere administrar el progestgeno por 12 a 14 das para lograr la sincronizacin de todos los animales, esto es necesario para permitir que an los animales que estaban ovulando al inicio del tratamiento estn en la fase de lutelisis al terminar el mismo. Estos tratamientos largos causan una dramtica reduccin de la fertilidad, principalmente porque se afecta el transporte espermtico. En estudios realizados inyectando prostaglandinas al final del tratamiento con MGA, encontraron una buena respuesta a la sincronizacin del 80 al 90%, resultando mejor cuando se aplic el MGA por 7 das comparado con un periodo largo de 14 das. Como ya se ha mencionado, existen muchas formas de sincronizar el estro en las ovejas desde el ms econmico como es el efecto macho hasta los ms caros como la doble sincronizacin con prostaglandinas. Literatura.
Galina, C; Saltiel, A; Valencia, J; Becerril, J; Bustamante, G; Caldern, A; Duchateau,A; Fernndez, S; Olgun, A; Pramo, R; Zarco, L. Reproduccin de animales domsticos. Limusa. 1986, Mxico, D.F., 1986. Len, Q.Q.T. Estudios sobre el uso del acetato de melengestrol para la sincronizacin e induccin de estros en ovejas. FMVZ. UNAM Tesis de Doctorado. 1989. Mxico, D.F. 1989.

Hernndez, A; Angulo, M; Cervantes, M; Ortz, H; Zarco, L; Valencia, M. Influencia de la raza y de la profundidad del anestro sobre el efecto hembra-hembra en ovejas. X Congreso Nacional de Produccin Ovina. Memorias. Veracruz, 1999. Ortz, H A. Efecto de la duracin del tratamiento con acetato de melengestrol, la inclusin de prostaglandina f2alfa y la dosis de semen sobre la fertilidad del estro sincronizado en ovejas. FMVZ, UNAM. Tesis de Maestra. 1997. Mxico, D.F. 1997.

EVALUACIN REPRODUCTIVA DEL MACHO.

MVZ ROSA BERTA ANGULO MEJORADA CENTRO DE ENSEANZA, INVESTIGACIN Y EXTENSIN EN PRODUCCIN OVINA.

El objetivo de los programas reproductivos es mejorar las caractersticas de produccin del rebao, principalmente la cantidad y calidad de la carne, leche y/o lana. La consecucin de este objetivo depende de la capacidad reproductora de los sementales que se utilicen. Se debe poner especial atencin al seleccionar a los sementales para los programas reproductivos ya que los productores deben convencerse de que los machos que se utilicen para estos programas reproductivos deben ser mejores que sus congneres. Adems de los criterios genticos existen otros factores que se deben considerar al seleccionar a los machos para dichos programas. Entre estos encontramos el estado de salud y el buen estado de carnes. El macho seleccionado debe de carecer de cualquier enfermedad y por lo tanto los animales recin comprados, as como los ya presentes, deben ser sometidos a un completo examen fsico, en el que se debe incluir la toma de las constantes fisiolgicas y la evaluacin de los diferentes aparatos, como son el respiratorio, digestivo, locomotor, as como los diferentes sentidos, de la vista, del odo, olfato y la piel. La evaluacin reproductiva del semental es til en el diagnstico de problemas de infertilidad en el rebao. Al encontrar a los sementales como reproductores satisfactorios, pueden considerarse otros factores que influyen sobre la fertilidad. El examen androlgico requiere el conocimiento de las caractersticas reproductivas normales y de las causas de alteraciones ms frecuentes. En Mxico los sementales no son evaluados por desconocimiento de la tcnica y por que no se le da la importancia debida. La evaluacin de la aptitud reproductiva del semental debe incluir los siguientes aspectos: Examen clnico general, evaluacin del semen y evaluacin de la libido. Examen clnico general .- Una vez tomadas las constantes fisiolgicas completas (Temperatura corporal, frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria y movimientos ruminales), se realizar la revisin completa del animal haciendo nfasis en el aparato locomotor y en el reproductor. Considerar la condicin general del animal; ni flacos ni gordos, es recomendable que un semental se encuentre en una condicin corporal de 3 a 3.5 al iniciar el empadre. Revisar al animal en movimiento y en esttica, poner nfasis en las patas, principalmente en los miembros posteriores, columna vertebral y pezuas, las cuales no deben estar largas. Revisar la cabeza: ojos, odos y boca. Adems es importante considerar la edad del macho ya que un semental no deber trabajar antes del ao de edad, para permitir que el macho alcance una talla adecuada. As mismo un macho no deber se usado despus de los 5 aos de edad, ya que su potencial reproductivo comienza a devaluarse a partir de esta edad. Esta recomendacin podr ser omitida slo en los casos en los que al realizar la evaluacin reproductiva y de libido del semental, ste no presente problemas.

En aparato reproductor revisar: -Testculos por palpacin.

- Escroto.
- Epiddimos. - Prepucio. - Pene. Testculos.- Se debe poner especial atencin al tamao y forma de los testculos, estos pueden ser palpados a travs del escroto. Los testculos deben ser firmes y elsticos, deben carecer de lesiones y deformaciones y moverse fcilmente dentro del saco escrotal. No debe presentar dolor en esta zona un macho sano. Los animales con defectos en esta zona, tales como el criptorquidismo unilateral o total, hipoplasia testicular, varicoles, deben ser excluidos de los programas reproductivo. Escroto.- Es la piel que cubre a los testculos y debe estar intacta, no debe presentar lesiones ni secreciones de ninguna clase. El escroto puede presentar o no lana (depende de la raza), pero es recomendable seleccionar a los animales que presenten la menor cantidad de esta. Esta piel contiene gran cantidad de glndulas sudorparas y sebceas, debe ser suave al tacto. El escroto no solo soporta y protege a los testculos sino que tambin juega un papel importante en la regulacin de la temperatura y por lo tanto ayudan a mantenerla temperatura de los testculos por lo menos 3 4 C por debajo de la temperatura corporal. Epiddimos.- Estos son dos, uno para cada testculo, tienen una forma alargada y estn ntimamente en contacto con los testculos. Cada epiddimo consta de 3 partes las cuales son la cabeza, el cuerpo y la cola. La cabeza est unida a la parte superior del testculo y no es posible palparla fcilmente, el cuerpo se localiza a lo largo del testculo por la parte medial del mismo y la cola se encuentra en la parte baja del testculo y ambas pueden ser palpadas a travs del escroto. El epiddimo es el encargado de transportar, madurar y almacenar a los espermatozoides. Prepucio.- Es la piel que cubre y protege al pene, presenta una serie de pelos que cubren su orificio de salida, no debe presentar secciones que no sean de color transparente. Esta piel puede estar o no pigmentada (depende de la raza). Esta piel deber estar limpia y sin ninguna lesin, ya que existen enfermedades como son el estima contagioso o la postitis ulcerativa que lo pueden llegar a afectar. Pene.- Tiene dos funciones, la expulsin de la orina y la deposicin de los espermatozoides dentro de la vagina. El pene se divide en cuerpo, glande y proceso uretral, el cual es una extensin de la uretra de unos 3 4 cm y el cual gira rpidamente durante la eyaculacin y proyecta el semen en la parte anterior de la vagina de la hembra. El pene tambin se puede ver afectado por las enfermedades mencionadas en el punto anterior. Una vez terminada esta evaluacin, ser necesario llevar a cabo el siguiente examen: Evaluacin del semen: Dos son los mtodos utilizados para la coleccin de semen de los ovinos, por electroeyaculador y por vagina artificial.

El electroeyaculador consiste en un electrodo bipolar que se inserta de 15 a 20 cm dentro del recto y a travs del cual se realizan descargas elctricas de 2 a 3 voltios, 100 a 150 mA y con una duracin de 4 a 5 segundos. En general con 1 a 3 estmulos es posible obtener el semen. Este mtodo slo es aconsejado en machos en que es imposible colectar el semen por medio de la vagina artificial. La vagina artificial constituye el medio ms apropiado y utilizado para la evaluacin del semen as como para inseminar o conservarlo. Consta, normalmente, de un cilindro que puede ser de goma y es rgido de 12 a 15 cm de largo y alrededor de 5 cm de dimetro en el cual se hace un orificio provisto de un tapn de rosca, en el centro de la vagina que es por donde se le introducir el agua caliente a 45-48 C y aire para dar la presin y la temperatura adecuada, entre el tubo de la vagina y el agua caliente, debe existir un tubo de ltex (Tubo de Penrose del N1) que sirve como funda para la vagina, sta est onstruida de la misma manera que la vagina para bovinos, salvo naturalmente las menores dimensiones. El electroeyaculador consiste en un electrodo bipolar que se inserta de 15 a 20 cm dentro del recto y a travs del cual se realizan descargas elctricas de 2 a 3 voltios, 100 a 150 mA y con una duracin de 4 a 5 segundos. En general con 1 a 3 estmulos es posible obtener el semen. Este mtodo slo es aconsejado en machos en que es imposible colectar el semen por medio de la vagina artificial. La vagina artificial constituye el medio ms apropiado y utilizado para la evaluacin del semen as como para inseminar o conservarlo. Consta, normalmente, de un cilindro que puede ser de goma y es rgido de 12 a 15 cm de largo y alrededor de 5 cm de dimetro en el cual se hace un orificio provisto de un tapn de rosca, en el centro de la vagina que es por donde se le introducir el agua caliente a 45-48 C y aire para dar la presin y la temperatura adecuada, entre el tubo de la vagina y el agua caliente, debe existir un tubo de ltex (Tubo de Penrose del N1) que sirve como funda para la vagina, sta est construida de la misma manera que la vagina para bovinos, salvo naturalmente las menores dimensiones. 5 4

1 2

Vagina Artificial. 1.- Tubo de recoleccin, puede ser un tubo de centrfuga graduado de cristal o de plstico o cualquier tubo. 2.- Tubo de ltex (Tubo de Penrose N1). 3.- Tubo de plstico rgido (Cuerpo de la vagina). 4.- Espacio relleno con agua caliente y aire.

5.- Orificio de entrada del agua y del aire. La recoleccin del semen se realiza con una oveja en celo inmovilizada y permitiendo que el macho se acerque a ella y haga varios intentos de montar, finalmente cuando el macho monta a la hembra, se introduce la vagina artificial en el pene desviado, lo cual se logra sujetando el pene del prepucio con la mano libre de la persona que va colectar el semen. Se debe observar los movimientos del macho y cuando ste lleve a cabo el empuje de la cadera hacia delante el macho ha eyaculado y se procede a realizar la evaluacin del mismo. Es necesario aclarar que tanto el macho como la hembra deben ser manejados con sutileza, y deben ser acostumbrados a esta rutina descrita, de manera que el temor no supere al inters sexual, impidiendo la obtencin del semen. La obtencin del semen por medio de la electroeyaculacin se considera conveniente slo cuando no es posible utilizar la vagina artificial, sobre todo cuando el macho se rehsa o no puede llevar a cabo la monta cualquiera que sea la razn, por lo tanto se debe considerar como un mtodo auxiliar y no sustitutivo de la vagina artificial. El proceso de la electroeyaculacin es el resultado de una serie de contracciones rtmicas de orden expulsivo, que afectan a los diferentes segmentos de las vas urogenitales de emisin del semen, desde los epiddimos hasta los conductos deferentes, las ampollas seminales, los conductos eyaculatorios y la uretra peniana. Para la coleccin del semen con el elctroeyaculador, el macho se debe colocar en decbito lateral, sobre el suelo limpio. Se deben recortar los pelos o la lana larga que rodea la vaina, y el prepucio se debe limpiar correctamente. El electroeyaculador se lubrica con vaselina o alguna jalea lubricante y se inserta por el recto a una profundidad de 15 a 20 cm, procurando no lesionar la mucosa. El electroeyaculador se dirige hacia el piso de la pelvis aplicando los estmulos elctricos. El pene se extiende por el enderezamiento de la flexura sigmoidea de tal forma que el pene se presenta erecto, ste debe ser colocado dentro de una copa colectora de semen o bien en un tubo de boca suficientemente ancha como para que el pene pueda penetrar sin daar su mucosa. Despus de algunos estmulos elctricos, fluir la secrecin de las glndulas accesorias y luego el semen. Cuando se obtengan grandes cantidades de lquido claro, se debe desechar para evitar diluciones innecesarias del semen. Caractersticas del semen: - Color. Blanco cremoso-nacarado. - Volumen................................... 0.8 1.5 ml (1ml) - Motilidad. Masa....................... 0 4 (3) - Concentracin.......................... 1 6 X109 (4 X109) - Morfologa............No ms del 20% de anormalidades. Evaluacin de la libido: En muchas ocasiones el productor y el mismo Mdico Veterinario se olvida al seleccionar a los sementales es su capacidad de servicio y su vigor sexual, el cual se puede evaluar mediante una prueba de servicio, en la que se expone al macho a una o dos hembras en celo y se mide el tiempo que tarda en darle servicio a las mismas, se evala el tiempo de reaccin, tiempo de recuperacin, nmero de servicios y nmero de montas. La falta de voluntad a montar a las hembras puede que sea debida a

Progresivo.............. 60 80% (70%)

traumas fsicos (miembros anteriores o posteriores), problemas de pezuas largas o con infecciones, lesiones en el pene, etc. Por otra parte, los machos difieren en cuanto a su temperamento y su conducta sexual, lo que, sin duda, afecta a su capacidad de servicio, es por esto que los machos seleccionados deben ser los de mejor comportamiento ante esta prueba, una vez que hayan acreditado las pruebas anteriores.

RECOLECCIN, EVALUACIN Y DILUCIN DE SEMEN

DR. OCTAVIO MEJA VILLANUEVA. CENTRO DE ENSEANZA, INVESTIGACIN Y EXTENSIN EN PRODUCCIN OVINA (CEIEPO), FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA - UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO.

Normalmente se asume como poco probable que los machos a utilizar durante un empadre, presenten problemas de fertilidad asociados a una inadecuada produccin de semen. Sin embargo, siendo la obtencin y la evaluacin bsica del semen en los ovinos una actividad relativamente sencilla, que permite predecir la fertilidad de los machos a utilizar y por tanto optimizar su uso, o en su caso rechazarlos, es conveniente llevarla a cabo. A pesar de que la cantidad y la calidad del semen son caractersticas que pueden variar por factores como la edad, la temporada de reproduccin o de anestro, la temperatura ambiental, la condicin corporal, el tamao de los testculos o la raza, los carneros tiene capacidad para producir semen viable durante todo el ao. Con la evaluacin del semen se pueden conocer sus principales caractersticas como seran el volumen, la motilidad y la concentracin. Evaluaciones ms detalladas debern considerar la morfologa y la proporcin de espermatozoides vivos y muertos. Las muestras debern obtenerse en forma cuidadosa y manejarse correctamente, evitando principalmente los choques trmicos, ya que condiciones inadecuadas de manejo las caractersticas del semen pueden variar con facilidad. Adems, con la dilucin del semen es posible el mantenerlo en ptimas condiciones durante horas, algunos das, e incluso durante aos, ya sea simplemente para una posterior evaluacin o para su uso en fresco, en fro o congelado en la inseminacin artificial de hembras previamente sincronizadas. Con los diluyentes comerciales, fciles de adquirir y conservar, se evitan las dificultades que existan para conseguir algunos de los ingredientes, adems de las relativas complicaciones para pesarlos y mezclarlos adecuadamente en un laboratorio. Recoleccin de semen El mtodo ms adecuado para la obtencin de semen en los ovinos ser el de la vagina artificial, cuya temperatura y presin adecuadas, imitan de mejor manera las condiciones naturales del depsito del semen en la vagina de las hembras, por esto tambin provee eyaculados con caractersticas normales y representativas. Inicialmente es comn entrenar los machos con hembras en celo natural o sincronizado, y posteriormente y con algo de prctica puede utilizarse cualquier hembra, an sin estar en celo o machos de temperamento dcil. En pocos lugares se cuenta para la obtencin del semen, con rampas o fosos y se utilizan estructuras metlicas forradas con plstico o piel denominadas potros o maniqus. De cualquier manera, los machos son recolectados, previa limpieza del prepucio con agua tibia, en el momento en que montan y el pene ya erecto es desviado hacia la vagina artificial, procurando no tocarlo o tocando suavemente y el menor tiempo posible el prepucio, colocndose la persona que realiza la coleccin del semen a un lado del macho. Sementales con experiencia y buena libido eyaculan rpidamente en el primer o segundo intento de monta, mientras que la mayora lo harn despus de algunas montas falsas (monte y desmonte), hasta que penetren completamente en la vagina artificial.

Durante la eyaculacin, el macho realizar rpidos movimientos plvicos y contraer fuertemente los msculos abdominales, ocurriendo un nico y vigoroso movimiento hacia adelante. Despus de eyacular en la vagina artificial el macho desmontar y el pene se retraer hacia el prepucio. Machos con buena libido o con un periodo de descanso sexual prolongado, podrn ser colectados hasta en dos o tres ocasiones en un corto periodo de tiempo (media hora). Aunque existe muchos tipos de vaginas artificiales, fabricadas de manera domstica o industrial, stas consisten en un tubo rgido preferentemente de plstico, de 12 a 15 cm de longitud y 4.5 a 6 cm de dimetro, con una vlvula metlica que permite introducir agua y aire. Por la parte interna se introduce una funda de ltex, cuyos extremos se doblan y sujetan sobre el tubo rgido, formando un espacio que es llenado con agua caliente y aire, de tal manera que el pene entre libremente a la vagina, pero con cierta presin. Algunas personas recomiendan el lubricar el extremo de la vagina artificial por el que entra el pene, teniendo la precaucin de que el lubricante no sea txico para los espermatozoides. Por el otro extremo de la vagina artificial y dependiendo de su longitud, se coloca directamente una copa colectara graduada o un cono colector al que se le une un tubo graduado. La temperatura de la vagina artificial al momento de la coleccin del semen ser de entre 42 y 45 C; temperaturas mucho menores (alrededor de 30 C) no son en la mayora de las ocasiones estmulo suficiente para la eyaculacin. Temperaturas superiores a los 45 C, pueden molestar al semental o incluso lastimarlo, haciendo que relacione la colecta de semen con una actividad desagradable. En las ocasiones en las que el macho penetra en la hembra antes de ser recolectado en la vagina artificial, puede hacerse un lavado vaginal introduciendo a travs de una pipeta de plstico, de 15 a 20 ml de solucin salina fisiolgica, solucin Hartmann, leche o algn diluyente especfico, para tratar de recuperar la mayor cantidad posible del semen eyaculado. Dependiendo de la solucin utilizada, el semen podr usarse nicamente para ser evaluado o para realizar con l la inseminacin en fresco de algunas hembras. Es conveniente, para que los machos permanezcan con buena disposicin para ser recolectados con vagina artificial, que de vez en cuando monten y eyaculen directamente en algunas hembras en celo. En los machos en los que por alguna razn no puede usarse una vagina artificial, el semen se obtiene mediante electroeyaculacin, tenindose muestras con mayor volumen a las obtenidas con vagina artificial, pero con menor concentracin y comnmente contaminadas con orina. A pesar de que en la mayora de las ocasiones, la recoleccin se hace con el macho en pie o derribado hacia uno de sus lados (decbito lateral) y sujetado fuertemente entre varias personas, la tranqulizacin qumica con xilacina en dosis de 0.11 0.22 mg/kg evita estrs en el animal. La electroeyaculacin consiste en estimular elctricamente y por va rectal las glndulas accesorias del aparato reproductor del macho, como son las vesculas seminales y la prstata, pero principalmente el centro eyaculatorio que se encuentra en las ramificaciones nerviosas de la columna vertebral, entre las ltimas vrtebras lumbares y las dos primeras vrtebras sacras. Para aplicar los estmulos se utiliza un dispositivo rectal de forma cnica, con dimensiones para pequeos rumiantes de entre 2.2 y 2.5 cm de dimetro por 15 cm de

largo. Del electroeyaculador se introducen 10 cm en el recto, previa lubricacin, con los polos apuntando hacia las vesculas seminales. La intensidad en la que se han obtenido los mejores resultados se incrementa paulatinamente de 0 a 10 voltios, ya sean de corriente alterna o directa y con 160 miliamperios a 2 amperios, mientras que los ciclos cuando se utiliza corriente alterna, puede variar entre 20 y 60 ciclos/segundo. Para provocar la electroeyaculacin, una persona aplicar periodos de estimulacin de entre 3 a 7 segundos, seguidos por periodos de descanso con la misma duracin. Con electroeyaculadores manuales y porttiles, se aplican estmulos con un voltaje constante, pero se modifica el ritmo de la estimulacin elctrica. Es comn el uso de electroeyaculadores manuales de 6 a 9 voltios, con una rutina de 2 estmulos elctricos de 7 segundos por 7 segundos de descanso, 3 4 estmulos de 5 segundos por 5 de descanso hasta observarse la ereccin del pene y 3 4 estmulos de 3 segundos por 3 segundos de descanso hasta la obtencin del semen, que ser colectado en una copa graduada. En cuanto se considere adecuado el volumen del semen eyaculado, se suspende la estimulacin elctrica para tratar de contaminar lo menos posible el semen con orina, ya que en ocasiones los machos orinan en cualquier momento antes o inmediatamente despus de la eyaculacin, por lo que es importante una buena coordinacin entre el que estimula al macho y el que recolecta el semen. El semen contaminado con orina puede usarse, una vez diludo, para inseminar en fresco a las hembras. En caso de que se pretenda conservar el semen refrigerado o enfriado durante algunas horas, es conveniente centrifugarlo. Evaluacin del semen Una vez obtenido el semen, el examen del color, el olor y la consistencia deber hacerse lo ms pronto posible. El semen es de color blanco lechoso o crema plido, pero puede variar de un eyaculado a otro, an tratndose del mismo semental. Cuando el color es opaco indica un alta concentracin espermtica, mientras que los eyaculados translcidos contienen menos espermatozoides. Coloraciones rojizas o verdosas pueden ser reflejo de algunas lesiones en el pene o prepucio o por infecciones en las glndulas accesorias del aparato reproductor, mientras que coloraciones oscuras indican contaminacin con tierra o excremento. La presencia de orina en el eyaculado le proporciona un color amarillo o naranja y olor caracterstico, adems de una menor consistencia. El volumen del eyaculado se mide generalmente en el recipiente graduado en que se colecta la muestra, siendo en promedio de 1 mililitro. El volumen eyaculado puede variar tambin por otros factores como la frecuencia de coleccin y la habilidad del operador. La determinacin de la motilidad es una de las pruebas ms utilizadas para tener una aproximacin a la calidad del semen, para evaluarla es necesario el uso de un microscopio compuesto u ptico comn con objetivos de 10X y 40X (aumentos), siendo importante el mantener el semen a evaluar y el material a utilizar a una temperatura de entre 30 a 35 C. La motilidad se evala en masa, mediante la observacin de las ondas de movimiento en una gota de semen sin diluir, colocada en un portaobjetos y se califica en una escala del 0 al 5. A pesar de ser una evaluacin subjetiva, a travs de la experiencia los criterios entre evaluadores tienden a unificarse. Valor 5 Valoracin de las ondas de movimiento Clase Descripcin Muy buena Ondas muy rpidas, 90 %

4 3 2 1 0

Buena Regular Pobre Muy pobre Muertos

activos Ondas rpidas, 70-85 % activos Ondas lentas, 45-65 % activos Sin ondas, movimiento aislado, 20-40 % activos Sin ondas, movimiento dbil, 10 % activos

La motilidad se evala tambin de manera individual, mediante la determinacin de la proporcin o porcentaje de los espermatozoides con movimiento progresivo o de avance, por lo que es necesario diluir el semen 1:200, utilizando solucin salina fisiolgica o algn diluyente especfico, y colocando una gota del semen diluido en un portaobjetos con cubreobjetos. La motilidad individual o progresiva se califica en una escala del 0 al 100 %, correspondiendo el valor de 0 a las muestras sin movimiento y valores cercanos al 100 % a las muestras con una gran proporcin de espermatozoides con avance en lnea recta. La determinacin del nmero de espermatozoides mtiles y de la calidad del movimiento, deber hacerse en diferentes campos del microscopio. Se considerarn como movimientos inadecuados los movimientos circulares y los movimientos oscilatorios, sin cambio de posicin. Una motilidad en masa con valores menores a 3 y con motilidad individual menor al 70 % es indicadora de machos problema. Es importante recordar que se evala la proporcin de espermatozoides con movimiento y no la velocidad en la que se mueven. La concentracin promedio de espermatozoides en el semen de los ovinos es de 6 7 3,500 x 10 / ml (= 350 x 10 / ml). Los mtodos comunes para calcular la concentracin se basan a nivel de campo, en la valoracin de la consistencia del semen o en el conteo de los espermatozoides mediante un hemocitmetro, aunque ya se usan con mayor frecuencia fotmetros porttiles. La valoracin de la concentracin de acuerdo a la consistencia depender de la proporcin en que se encuentren sus principales constituyentes, el plasma seminal y los espermatozoides. Las muestras de consistencia espesa y con apariencia cremosa tendrn ms espermatozoides, mientras que las muestras ms acuosas y claras tendrn una menor concentracin.

Concentracin del semen valorada por su consistencia Valor

5 4 3

Consistencia
Cremosa espesa Cremosa Cremosa tenue

Espermatozoides / ml (x 106)
5,000 4,000 3,000

2 1 0

Lechosa Nebulosa Clara (acuosa)

2,000 700 No significativa

El uso de un hemocitmetro es un mtodo relativamente lento, pero proporciona una aproximacin adecuada de la concentracin espermtica en el eyaculado. Para esta evaluacin deber tenerse una cmara para contar clulas sanguneas (Neubauer), su cubreobjetos y la pipeta para contar eritrocitos. De manera rutinaria, se hace una dilucin del semen 1:200 en la pipeta, usando agua corriente o agua con formalina para matar rpidamente a los espermatozoides y se coloca una gota sobre la cuadrcula de la cmara. Antes de contar los espermatozoides es conveniente esperar alrededor de 3 a 5 minutos para permitir su sedimentacin. El conteo podr realizarse con el objetivo de 10X 40X y tomando en cuenta la cuadrcula formada por los 25 cuadros grandes, cinco por lado, delimitados por 3 lneas cada uno y subdivididos en 16 cuadros ms pequeos. En esta cuadrcula se contarn las cabezas de los espermatozoides que se encuentren dentro de 5 de los cuadros grandes, usando generalmente los 4 de las esquinas y el central. Como algunos espermatozoides sobrepasan las lneas de los cuadros, por norma, slo se deben contar los que estn en las lneas superior y derecha, excluyendo los de las lneas inferior e izquierda. La cmara, el cubreobjetos y la pipeta debern lavarse cuidadosamente con agua y alcohol, antes de cada evaluacin. La concentracin espermtica por mililitro se calcula multiplicando el nmero de los espermatozoides contados en los 5 cuadros por 10 millones (107). La concentracin del eyaculado se obtiene multiplicando la concentracin por mililitro por el volumen eyaculado, y para estimar adecuadamente la concentracin de espermatozoides vivos y con movimiento (concentracin de espermatozoides mtiles), se deber considerar tambin el porcentaje de la motilidad individual.
nmero de espermatozoides contados Conc. espermtica = -----------------------------------------------------------altura cmara X dilucin X superficie evaluada 1/10 1/200 5/25 = 1/5 = 1/10,000/ mm3 = 1/10,000,000/ ml (o cm3) Conc. espermtica = nmero de espermatozoides X 107/ ml
Conc. eyaculado =nm.espermatozoides/ ml X volumen eyaculado X motilidad individual (%)

El examen de la proporcin entre espermatozoides vivos y muertos, as como de la morfologa (proporcin de espermatozoides con anormalidades) se consideran pruebas de control de calidad, en las que se hacen frotis en portaobjetos y se usan diferentes tinciones. Como la preparacin, tincin y observacin cuidadosa de los frotis teidos es relativamente tardada, se hace despus de la evaluacin de las principales caractersticas del semen. Para la evaluacin rutinaria del porcentaje de espermatozoides vivos y muertos se usa la tincin Rosa de Bengala, con la cual se tien completamente y con mayor intensidad los espermatozoides muertos, puesto que la permeabilidad selectiva de su membrana est inhabilitada, mientras que los moribundos se tien con menor intensidad y principalmente en la regin de la cola. Para la evaluacin de la morfologa se usan la tincin Rosa de Bengala o la de Eosina-Nigrosina (5 % de Eosina y 10 % de Nigrosina). Las muestras debern revisarse con

el objetivo de 40X y se determinar en 100 espermatozoides evaluados, la proporcin o porcentaje de los espermatozoides con anormalidades. Las anormalidades de los espermatozoides a las que habr que prestar ms atencin sern las relacionadas con la espermatognesis o anormalidades primarias, es decir, las relacionadas con la estructura, como sern las cabezas grandes, pequeas o irregulares y las dobles cabezas o colas. Las anormalidades secundarias ocurren durante el trnsito de los espermatozoides por el epiddimo, por lo que pueden presentarse en machos sobretrabajados, siendo la ms comn la presencia de gotas citoplasmticas o de cabezas desprendidas; mientras que las anormalidades terciarias se presentan durante la eyaculacin o por un manejo inadecuado del semen, encontrndose por lo general las colas enrolladas o los espermatozoides aglutinados. Las muestras con una proporcin de espermatozoides muertos mayor al 30 % y con ms del 20 % de anormalidades sern indicadoras de machos con fertilidad reducida. La evaluacin del semen deber repetirse por lo menos 5 das despus, proporcionando descanso y buena alimentacin, en aquellos sementales cuyas caractersticas seminales no correspondan con los valores normales. Dilucin del semen Gracias al conocimiento de las caractersticas y funciones del plasma seminal que forma junto con los espermatozoides al eyaculado, se han podido hacer los diluyentes para el semen que se utilizan en la inseminacin artificial. El plasma seminal est constitudo por las secreciones de las glndulas bulbouretrales, la prstata, las vesculas seminales, el epiddimo y los conductos deferentes, siendo un vehculo isotnico, nutritivo y protector al permanecer tamponado, tendiendo hacia un PH normalmente neutro (5.9 - 7.3). Contiene tambin agentes antimicrobianos como la seminalplasmina e inmunoglobulinas, principalmente IgA y una gran variedad de hormonas como andrgenos, estrgenos, FSH, LH, gonadotropina corinica, hormona del crecimiento, insulina, glucagon, prolactina, relaxina, destacando entre ellas las prostaglandinas . Constituyentes del plasma seminal Agua Fructuosa cido ctrico Sorbitol Inositol Glicerilfosforilcolina Sodio Potasio Calcio Magnesio Cloro Prostaglandinas Protenas 75 % 250 mg / 100 ml 110-260 26-170 7- 14 1100-2100 178 89 6 6 86 740 g / ml 5 g / 100 ml

A pesar de la complejidad de un eyaculado, los diluentes de uso comn para el semen estn constituidos principalmente por agua, tris o citrato de sodio como amortiguadores, azcar como fuente de energa, glicerol o yema de huevo como protectores del enfriamiento y antibiticos. Un diluyente para el semen en fresco ampliamente utilizado es la leche de vaca, ya sea entera o descremada, a la que nicamente se le agregan los antibiticos.

DILUYENTES PARA SEMEN

1.- VELLN DORADO Citrato de sodio cido ctrico Estreptomicina Penicilina Agua bi o tridestilada, o desionizada 2.8 gramos 0.8 gramos 0.005 gramos 0.006 gramos 100.0 mililitros

2.- LECHE - preferentemente ultrapasteurizada y descremada - (light) 3.- OVIPRO (Minitbe, Alemania)

Especfico para semen ovino fresco o fro. No indica ingredientes. Preparacin: por cada 50 ml de OVIPRO, agregar 350 ml de agua bidestilada y 100 ml de yema de huevo.
4.- DILUYENTE VERDE (IMV, Francia)

Especfico para semen ovino fresco o fro. No indica ingredientes.

5.- DILUYENTE ROJO (IMV, Francia)

Especfico para congelar semen ovino. Se puede usar para semen fresco o fro. No indica ingredientes.

6.- TRILADYL (Minitbe, Alemania)

Especfico para congelar semen bovino. Frecuentemente usado para congelar semen de diferentes especies domsticas y silvestres, as como para semen ovino, ya sea con o sin la yema de huevo. Agua bidestilada TRIS cido ctrico Fructuosa Glicerol Antibiticos: tilosina, gentamicina, espectinomicina, lincomicina No indica la proporcin de cada uno de los ingredientes. Se conoce que contiene un 6.6% de glicerol y tiene un PH de 6.6. Preparacin: por cada 25 g de TRILADYL, agregar 75 g de agua bidestilada y 25 g de yema de huevo (1 g = 1 ml).
7.- ANDROMED (Minitbe, Alemania)

Diseado para congelar semen de bovino, se puede usar para semen fresco de ovino (no se agrega yema de huevo).

Agua bidestilada Buffers cido ctrico Fructuosa Glicerol Fosfolpidos Antibiticos: tilosina, gentamicina, espectinomicina, lincomicina No indica la proporcin de los ingredientes. Preparacin: por cada 200 ml de ANDROMED, agregar 800 ml de agua bidestilada.

8.- BOVIPRO (Minitbe, Alemania)

Diseado para congelar semen de bovino, se puede usar para semen fresco de ovino. Agua bidestilada TRIS cido ctrico Glicerol Antibiticos: tilosina, gentamicina, espectinomicina, lincomicina No indica la proporcin de los ingredientes. Concentracin final de 20% de yema de huevo y 6 % de glicerol. Preparacin: por cada 265 g de BOVIPRO, agregar 598 g de agua bidestilada y 200 g de yema de huevo.

Para realizar una adecuada dilucin del semen es conveniente estimar el nmero de dosis que se podran obtener del eyaculado, para lo cual hay que dividir la concentracin de espermatozoides mtiles entre el nmero de espermatozoides a inseminar, es decir la concentracin de cada dosis. En el caso de la inseminacin artificial va cervical con semen fresco es comn usar dosis de 100 millones de espermatozoides y con semen fro de 150 millones, en un volumen de 0.20 a 0.25 ml, mientras que para el semen que es depositado intrauterinamente la concentracin es generalmente de 20 millones y el volumen de 0.10 ml por cuerno. Por lo tanto, para estimar el volumen final, que estar constituido por el diluyente ms el semen eyaculado, se multiplica el nmero de dosis por el volumen de cada una. Finalmente, para saber la cantidad de diluyente a agregar, al volumen final se le resta el volumen del semen eyaculado.
Concentracin de espermatozoides mtiles dosis = --------------------------------------------------------Concentracin dosis a inseminar Volumen final = nmero de dosis X volumen de cada dosis Cantidad de diluyente a agregar = Volumen final volumen eyaculado Nmero de

Es importante adicionarpaulatinamente el diluyente al semen, procurando que escurra por las paredes del recipiente y homogenizar la mezcla. Unos minutos despus de terminada la dilucin, se deber tomar una muestra para observar su motilidad al microscopio, motilidad que no debe ser menor a la observada inicialmente. El semen una vez diluido deber ser envasado y conservado a una temperatura de entre 5 y 30 C, ya sea para ser usado como semen fro y fresco, respectivamente o para posteriormente congelarse. EJEMPLO
Semental ovino de tres aos de edad colectado mediante vagina artificial. Concentracin espermtica: 3500 x 106 (en 5 cuadros de la cmara de Neubauer se contaron un total de 350 espermatozoides). - Volumen eyaculado: 1.7 ml. - Motilidad individual o progresiva: 90% - Concentracin de cada dosis: 100 x 106 - Volumen de cada dosis: 0.25 ml nmero de espermatozoides contados Conc. espermtica = -----------------------------------------------------------altura cmara X dilucin X superficie evaluada 1/10 1/200 5/25 = 1/5 = 1/10,000/ mm3 = 1/10,000,000/ ml (o cm3) Despejando la frmula la concentracin espermtica = nmero de espermatozoides X 107/ ml 350 x 107/ ml = 3,500 x 106/ ml = 3500,000,000/ ml Conc. eyaculado = nm. espermatozoides/ ml X volumen eyaculado X motilidad individual (%) 3,500 x 106 x 1.7 ml x 90 % = 5355 x 106 Nmero de dosis =

concentracin del eyaculado -------------------------------------------concentracin dosis a inseminar 5355 x 106 ---------------- = 53.55 dosis 100 x 106 Volumen final = nmero de dosis X volumen de cada dosis 53.55 x 0.25 ml = 13.38 ml Cantidad de diluyente a agregar = volumen final volumen eyaculado 13.38 ml 1.7 ml =

11.68 ml

Literatura recomendada
Bearden, J.H. y J. Fuquay. 1982. Reproduccin Animal Aplicada. Ed. El Manual Moderno, Mxico. Calle, R. y H.W. Vivanco. 1976. Manual de Inseminacin Artificial en Ovinos. Universidad Nacional Agraria, Per. Evans G., Maxwell W.M.C. 1990. Inseminacin artificial de ovejas y cabras. Ed. Acribia, Espaa. Hafez ESE, Hafez B. 2000. Reproduccin e Inseminacin Artificial en Animales. McGraw-Hill Interamericana,

Mxico. McDonald, L. 1991. Endocrinologa y Reproduccin. Ed. Interamericana McGraw-Hill, Mxico. Sorensen, A.M. 1982. Reproduccin Animal. Ed. Mc Graw- Hill, Mxico. Steven, S. 1990. Inseminacin Artificial en Ovejas y Cabras. Ed. Acriba, Espaa. Wallace J. 1992. Artificial Insemination and Embryo Transfer. Progress in Sheep and Goat Research. C.A.B. International, UK. Williams H. 1995. Sheep Breeding and Infertility. Animal Breeding and Infertility. Blackwell Science Ltd, UK.

CARACTERSTICAS DE LOS DILUYENTES PARA CONGELAR SEMEN Y PRINCIPIOS DE LA CONGELACIN.

MVZ M EN C JOS DE JESS NEZ SAAVEDRA. CEIEPO FMVZ UNAM

Con el descubrimiento del glicerol como agente crioprotector de las clulas espermticas (Polge, et al., 1950) en Cambridge, Inglaterra se abri un amplio campo para la congelacin de semen. La congelacin de semen se refiere al proceso mediante el cual los espermatozoides pueden ser conservados a muy bajas temperaturas sin alterar de manera considerable sus caractersticas, permitiendo su mantenimiento a bajas temperaturas con la finalidad de ser utilizado en inseminacin artificial. De 1951 a 1956 se utiliz alcohol y hielo seco para la congelacin y mantenimiento de semen a temperatura de -79 C. Sin embargo, en la actualidad con el uso del nitrgeno lquido los procedimientos han sido simplificados permitiendo trabajar el semen de manera estable a temperaturas bajas (-196 C). Con el mejoramiento de los mtodos de congelacin y conservacin de semen congelado se obtiene una serie de ventajas como, el poder realizar cruzamientos selectivos con el semental deseado, conservacin de material gentico de 10 a 25 aos, bajo costo en el almacenamiento y facilidad de transporte para el semen, entre otras. Desde el momento de la coleccin de semen, este debe ser protegido de la luz solar, conservando la temperatura con la finalidad de evitar un choque trmico por lo que es importante identificar y llevar lo ms rpido posible el semen al laboratorio. Una vez que el semen se tiene en el laboratorio ste debe ser diluido con la finalidad de proporcionar nutrientes, proporcionar un medio isotnico y una temperatura adecuada para su conservacin. Esto se logra utilizando diferentes diluyentes como la leche, la yema de huevo o bien diluyentes especiales para su conservacin. La relacin es de 1:1 muestra:diluyente. Con esto se controla el pH, teniendo la muestra estable y mantenindola a 30 C con el fin de evitar el choque trmico, en especial para el semen de ovino, el cual es muy sensible a los cambios bruscos de temperatura. El pH del carnero oscila entre 5.9 y 7.3 para lo cual se utilizan amortiguadores como el hidroximetil aminometrano o TRIS, el TES, HEPES y MOPS. Estos actan penetrando al espermatozoide para incrementar la resistencia de la clula a los cambios osmticos por el paso a travs de la membrana de iones de sodio, potasio, calcio, magnesio y cloro. Componente importante de los diluyentes son los azcares, los cuales son utilizados como fuente energtica y entre estos se encuentran la lactosa, la sacarosa, fructuosa y la glucosa. Con la finalidad de evitar posible contaminacin por bacterias y hongos se recomienda adicionar al diluyente antibiticos y antimicticos. Para evitar el choque trmico, es conveniente reducir la temperatura paulatinamente hasta 5 C, con ello los procesos bioqumicos intracelulares se retrasan, prolongando

la viabilidad espermtica. Se recomienda mantener en refrigeracin a 5 C por dos horas, a lo que se denomina perodo de equilibrio. Una vez estabilizada la temperatura se procede a adicionar el agente crioprotector, entre los cuales se encuentra el dimetilsulfxido (DOMOSO), el etilenglicol y el glicerol, siendo ste ltimo el ms utilizado. La concentracin de glicerol es del 10% y se recomienda adicionarlo en una proporcin de 1:1 con el objetivo de evitar la cristalizacin del agua en el interior de la clula. De ah que la funcin del crioprotector es permitir la deshidratacin paulatina de la clula evitando la formacin de cristales de hielo en el interior celular lo que provocara la destruccin de los espermatozoides. Una vez que se tienen los medios preparados y el semen estabilizado se procede a empacarlo en pajillas de plstico con capacidad de 0.5 o de 0.25 ml en concentraciones variables, dependiendo el tipo de inseminacin que se pretende realizar. As, la concentracin espermtica puede ser de 10 millones de espermatozoides para inseminacin intrauterina por laparoscopia hasta 100 millones para el caso de inseminacin artificial por va cervical. El proceso de congelacin es un procedimiento rpido, donde las pajillas se colocan horizontalmente a una distancia de 3 cm entre la superficie de nitrgeno y las pajillas con lo cual el semen se congela con los vapores que desprende el nitrgeno dentro del recipiente. El semen se deja en los vapores de nitrgeno por un perodo de tiempo de 5 a 10 minutos donde la temperatura desciende de 5 C a -75 C con lo que el crioprotector cumple su funcin de evitar la formacin de cristales en el interior de la clula. Una vez congelado el semen, este puede ser almacenado en los tanques de nitrgeno pasando de -75 C a -196 C que es la temperatura en que se encuentran los tanques de almacenamiento. El proceso de descongelacin del semen se realiza, para el caso del semen congelado en pajillas de plstico en bao Mara a 35 C durante 30 segundos. Algunos autores mencionan que es conveniente dejar al aire las pajillas durante 10 segundos para posteriormente pasarlos a bao Mara con la finalidad de evitar un choque trmico, mientras que otros lo hacen de manera directa del tanque de almacenamiento al bao Mara, sin presentar problema alguno. Para el semen congelado en ampolletas, ste se descongela introduciendo las ampolletas en agua enfriada con hielo a 5 C durante 10 minutos para posteriormente pasar el semen a pajillas de 0.5 o 0.25 ml y realizar la inseminacin artificial.