UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA Divisin Sistema de Universidad Abierta y Educacin Continua Departamento de Patologa

FUNDAMENTOS DE CITOPATOLOGA VETERINARIA

MEMORIAS
9 y 10 de febrero de 2006

DIRECTORIO UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO Dr. Juan Ramn de la Fuente RECTOR Lic. Enrique del Val Blanco SECRETARIO GENERAL Mtro. Daniel Barrera Prez SECRETARIO ADMINISTRATIVO Dra. Rosaura Ruiz Gutirrez SECRETARIA DE DESARROLLO INSTITUCIONAL Mtro. Jos Antonio Vela Capdevila SECRETARIO DE SERVICIOS A LA COMUNIDAD Mtro. Jorge Islas Lpez ABOGADO GENERAL Lic. Nstor Martnez Cristo DIRECTOR GENERAL DE COMUNICACIN SOCIAL FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA Dr. Francisco Trigo Tavera DIRECTOR Dra. Silvia Buntinx Dios SECRETARIA GENERAL MVZ. Norma Silvia Prez Gallardo JEFA DE LA DIVISIN SISTEMA DE UNIVERSIDAD ABIERTA Y EDUCACIN CONTINUA MVZ. Carlos Esquivel Lacroix SECRETARIO TCNICO DE EDUCACIN CONTINUA Dr. Fernando Constantino Casas JEFE DEL DEPARTAMENTO DE PATOLOGA

COORDINACIN ACADMICA
MVZ. Eugenia Candanosa Aranda MVZ. Laura Romero Romero

COORDINACION ADMINISTRATIVA
DIVISION DE EDUCACION CONTINUA MVZ. Patricia Mejia Gutirrez PMVZ. Dina Pescador Cano MVZ. Patricia R. Daz Gemez EDICIN DE MEMORIAS VERSIN ELECTRNICA MVZ. Patricia Mejia Gutirrez MVZ. Patricia R. Daz Gemez Lic. Mariana Figueroa Gmez

La reproduccin parcial o total de los trabajos no podr efectuarse sin la previa autorizacin por escrito del autor y citando estas memorias como referencia.

La informacin contenida, as como estilo y ortografa en cada uno de los escritos es responsabilidad de los autores.

INTRODUCCIN A LA CITOPATOLOGA DIAGNSTICA

Eugenia Candanosa de M. Departamento de Patologa. FMVZ- UNAM ieca@servidor.unam.mx La citopatologa veterinaria puede ser una herramienta diagnstica poderosa cuando se puede hacer un equipo armonioso y comunicativo entre los patlogos y los clnicos. La Citologa diagnstica o citopatologa, es una rama de la Patologa, que incluye la descripcin microscpica de las clulas para determinar los cambios estructurales y describir un proceso de enfermedad. Esta incluye una serie de procedimientos como: toma de muestra, fijacin, tinciones de rutina o especiales, descripcin microscpica detallada y la emisin del resultado con los comentarios pertinentes. La mayora de los dueos de mascotas aceptan rpidamente esta tcnica ya que resulta poco invasiva y de bajo costo, y los resultados que se pueden obtener pueden tener de un 90 a 95% de exactitud, siempre y cuando se tenga una historia clnica detallada, la lesin aporte un material suficiente para su observacin, el procesamiento de la muestra sea adecuado y sea observado por un citopatlogo con experiencia. La citopatologa puede ser empleada en diferentes circunstancias, tanto en la clnica veterinaria, durante la ciruga e incluso en la sala de necropsias. Puede proveer bases racionales para tomar la decisin de la reseccin marginal de una neoplasia o un proceso inflamatorio. Los diagnsticos que se realizan con mayor frecuencia son: 1. Proceso inflamatorio a. Infeccioso: bacterias, parsitos, micosis, entre otros. b. No infeccioso: agudo, crnico y crnico activo. 2. Procesos neoplsicos: epiteliales, mesenquimatosos y de clulas redondas. a. Benignos b. Malignos. De acuerdo a los diferentes mtodos de toma de muestra citolgica, en donde resalta la puncin con aguja delgada, son muchos los rganos y cavidades de donde se puede obtener una buena muestra. La ubicacin de las lesiones, se debe hacer a travs de la palpacin, radiografa o ultrasonido.

Hay varios niveles de interpretacin diagnstica, la que es realizada por los clnicos, la de los patlogos clnicos y la de los anatomopatlogos, todos con formacin en citopatologa. Los clnicos veterinarios pueden llegar a tener mucha preparacin en la interpretacin citopatolgica, debido a que se incluye una materia durante su formacin como especialistas. En algunas ocasiones, cuando observan que un caso les representa dificultad en el diagnstico, lo remiten con el citopatlogo y es la manera de formar un puente de comunicacin entre las dos especialidades. La relacin con los patlogos clnicos es muy importante, principalmente en la interpretacin de los hallazgos en los lquidos corporales. Para emitir un diagnstico slido, no debemos olvidar que la cuantificacin de los componentes fsicos, qumicos y celulares de un lquido corporal, ya que puede ser un complemento importante para el diagnstico de muchas patologas. Un laboratorio de citopatologa esta formado bsicamente por un microscopio ptico, tren de tincin, cubre y portaobjetos, jeringas, hojas de bistur, y materiales para desinfectar la zona anatmica en donde se realizar la toma de muestra. En laboratorios ms sofisticados, se emplean centrfugas y citocentrfugas para el manejo de los lquidos corporales que contienen de abundante a escasa celularidad; campanas de extraccin para colocar el tren de tincin, con el fin de no aspirar los gases emitidos por los alcoholes y los colorantes; una sala de toma de muestras que incluye una mesa de exploracin, un lavabo y refrigerador, entre otras cosas. Sin embargo, es importante considerar que aunque parezca accesible el implementar esta tcnica se debe tener un conocimiento bsico de la interpretacin citolgica. El xito de realizar un buen diagnstico citopatolgico depende en buena parte de una correcta toma y preservacin de muestra. Es muy frecuente que, en la prctica diaria de un citopatlogo veterinario, incluya en el informe de resultados que la muestra fue inadecuada o insuficiente. Lo ms desagradable, es escribir en el comentario: favor de repetir la muestra; cuando sabemos lo que implica para el clnico y dueo de la mascota repetir la consulta. Sin embargo, debemos estar consientes, la citopatologa puede ofrecer muchos beneficios, pero tambin tiene limitaciones. Ciertas lesiones, como algunos tumores mesenquimatosos, estos ofrecen escaso material para el diagnstico, en esos casos la mejor opcin sera emplear otros mtodos diagnsticos, como por ejemplo la biopsia. En la experiencia que hemos adquirido a travs de los aos, los casos diagnsticos en los que se han obtenido mejores resultados fueron en los que hubo comunicacin permanente entre los clnicos y los patlogos.

LITERATURA CONSULTADA
Bibbo M. Comprehensive citopathology. Philadelphia: WB Saunders Company, 1991. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology of the dog and cat. California: American Veterinary Publications, Inc., 1989. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology and hematology of the horse. 2nd ed. St Louis: Mosby, 2002. Proceeding of the 32nd Postgraduate Institute for Pathologists in clinical Cytopathology. The Johns Hopkins University School of Medicine and The John Hopkins Hospital. Maryneland, 1991. Menard M, Papageorges M. Fine needle biopsies: How to increase diagnostic yield. Compendium. 1997; 19:738-740. Rogers K, Barton C, Habron JM. Cytology during surgery. Compendium. 1996; 18:315-328. Ramaiah S, Alleman AR. Cytologic evaluation of the liver: aspiration finding and limitations. Compendium. 2002; 24:798-809.

TOMA, CONSERVACIN Y ENVO DE MUESTRAS CITOLGICAS.

Eugenia Candanosa de M. Departamento de Patologa. FMVZ- UNAM ieca@servidor.unam.mx Una parte fundamental para tener xito en el diagnstico citolgico es un buen manejo de la muestra. El objetivo del presente trabajo es realizar una breve descripcin de los principales mtodos de toma, conservacin, envo de muestras, descripcin citolgica y emisin de resultados de las muestras citolgicas en la prctica veterinaria. Lineamientos bsicos para el diagnstico citolgico. Historia clnica detallada. Contar con el equipo adecuado para la toma de muestra, como: jeringa, aguja, portajeringas, portaobjetos, anestesia, entre otros. Limpieza de la zona lesionada, ya sea empleando algn mtodo de desinfeccin o retirando reas de inflamacin o necrosis. Obtener una muestra representativa. Hacer una fijacin correcta del espcimen: hmeda o seca. Emplear una tincin que nos permita observar todos los componentes de la clula. Preparar el espcimen para el estudio microscopio y su almacenamiento permanente. La citologa es un mtodo til y fcil de realizar. Diferenciacin de alteracin inflamatoria y clulas malignas o benignas en lesiones nicas y generalizadas. En casos en donde la evaluacin citopatolgica no es suficiente, realizar la biopsia quirrgica.

1. Toma de muestra Tracto vaginal Frotis vaginal. Este se realiza empleando un hisopo ligeramente humedecido en solucin salina isotnica, para evitar que se daen las clulas. Posteriormente, se distribuye rodando y presionando ligeramente el hisopo sobre el portaobjetos Raspado cervical. Con una cucharilla se raspan gentilmente las paredes cervicales y hacer el frotis.

Aspiracin endocervical. Este mtodo se emplea cuando hay secreciones abundantes en la vagina. Se recomienda no emplear pipeta de vidrio para evitar que sta se rompa dentro de la vagina.

Aparato respiratorio Frotis nasal. Este se realiza como se mencion anteriormente. Lavado nasal y bronquial. Se introducen diferentes cantidades de solucin salina isotnica empleando una sonda y bomba de vaco, perilla de hule o jeringa; posteriormente se succiona la solucin salina ejerciendo una presin negativa.

Lquidos corporales Pleural y peritoneal. Se debe manipular a la mascota para dirigir el lquido hacia la zona que ofrezca menor riesgo para la puncin, evitando puncionar algn otro rgano. Pericrdico. Se realiza con aguja 20 23 insertndola entre el 3ro y 5to espacio intercostal a nivel de la unin costocondral. Articular. Se emplea cuando existe fiebre de origen desconocido o excesivo lquido en articulaciones. Las articulaciones que con mayor frecuencia se puncionan son las carpales y las tarsales.

El material que se emplea para su obtencin: Aguja calibre 21 corta o larga. Un contenedor limpio y de cierre hermtico. Emplear heparina 3 U/ml. S el laboratorio esta cerrado, emplear formalina al 10% o alcohol etlico 95%, en una relacin 3:1 de muestra:fijador. Mezclar cuidadosamente.

Lquido cefalorraqudeo (LCR) En los perros y los gatos el LCR se colecta de la cisterna magna de la articulacin atlanto-occipital. Las contraindicaciones para llevar a cabo ste procedimiento son: incremento de la presin intracraneal (edema cerebral, hidrocfalo y hemorragia intracraneal) y trauma reciente. Es importante considerar anestesiar y asistir con respirador mecnico al animal. La cantidad ideal de LCR es de 3 ml, dependiendo de la cantidad de muestra se recomienda dividirla en 3 partes iguales para su estudio en: Citologa Bacteriologa Bioqumica.

El envo de la muestra tiene que ser inmediato, no mayor de media hora. S el laboratorio esta cerrado, emplear formalina al 10% o alcohol etlico 95%, en una relacin 3:1 de muestra:fijador. Puncin con aguja delgada La aspiracin por puncin con aguja delgada se puede emplear en lesiones inflamatorias y neoplsicas, localizadas en diferentes partes del cuerpo; se incluyen linfonodos y rganos internos. Se utiliza una jeringa de 10 ml con aguja 21 y preferentemente un porta jeringa. Se introduce la aguja en la lesin, realizando presin negativa gentilmente con la jeringa. Realizar ligeros movimientos, adelante-atrs, en la misma direccin donde se introdujo la aguja. Nunca modificar la direccin de la aguja, ya que se puede producir un dao innecesario en la zona. Antes de sacar la aguja del tejido, liberar paulatinamente la presin negativa de la jeringa. Sacar la aguja del tejido. Retirar la aguja de la jeringa. Hacer presin negativa con la jeringa. Colocar la aguja nuevamente en la jeringa. Expulsar el material en el portaobjetos y realizar el frotis.

Raspados Este mtodo se emplea, principalmente, en lesiones cutneas superficiales. Se recomienda seguir los siguientes pasos: Cortar el pelo de la zona. Desinfectar la zona, preferentemente con alcohol. Hacer un raspado profundo y desechar principalmente de escamas, sebo y costras. ste material compuesto

Realizar un segundo raspado enrgico y extenderlo sobre el portaobjetos.

Improntas Estas se preparan a partir de tejidos colectados durante la ciruga, necropsia o lesiones externas ulceradas en el animal vivo. Se puede realizar con una hoja de bistur o con el mismo portaobjetos.

En el caso especfico de los linfonodos: Realizar un corte longitudinal del tejido fresco. Con unas pinzas tomar una mitad del ndulo y presionar su cara interna sobre un portaobjetos. Presionar el rgano uniformemente de manera que se imprima todo sobre la laminilla. Fijarlo inmediatamente. Tambin se puede raspar la superficie de la lesin y hacer un frotis, para fijarlo inmediatamente.

2. Fijacin de las muestras. Esta se realiza inmediatamente despus de realizado el frotis, independientemente de la tcnica de toma de muestra que se haya empleado. Fijacin hmeda. Sumergir los portaobjetos con la muestra en alcohol etlico al 70% o alcohol metlico. Fijacin seca. Secar al aire los especimenes, agitando vigorosamente los portaobjetos, hasta ver el material seco. Tambin, se puede usar secadora de pelo con aire fro. Citospray. Se aplica colocando los portaobjetos en una superficie plana dirigiendo el aerosol en un ngulo de 45 y a 20 cm de distancia.

3. Envo de las muestras. Las muestras deben estar correctamente fijadas, incluir una historia clnica detallada con los datos del animal; as como los datos del clnico y dueo del animal. De preferencia emplear empaques impermeables y resistentes al transporte. El tipo de empaque ser de acuerdo a la forma de transportacin de la muestra al laboratorio de diagnstico, a continuacin se mencionan algunos: Envoltura en hoja de papel seco y limpio. Una vez que la laminillas estn secas se envuelven una a una de manera que no queden pegadas entre s. Cartera con tarjetas de ficha bibliogrfica. Engrapar las fichas como se indica en el diagrama.

Contenedores de laminillas. Estos se venden con los distribuidores de material mdico. Frasco de vidrio o plstico con alcohol al 70%.

Es cierto que la toma, preservacin y envo de la muestra citolgica en forma correcta, ayuda en gran medida al diagnstico. Pero no debemos olvidar que, uno de los aspectos bsicos, es la comunicacin que debe haber entre los clnicos y el patlogo, en beneficio de la salud animal. 4. Tinciones de rutina Las tinciones de rutina dependen de la preferencia del citopatlogo, debido a la habilidad que ste tenga para distinguir los diferentes componentes celulares de la muestra. Las tinciones ms empleadas son: Papanicolaou, Diff quick y Giemsa. Dependiendo de la lesin, se pueden emplear otras tinciones especiales, para identificar clulas o productos celulares especficos; se mencionan las ms empleadas: PAS, Gram, Groccott, azul de tolouidina y Tricrmica de Masson, entre otras. El siguiente cuadro es para que se reflexione en algunos puntos: POR QU SE EQUIVOCA EL CITOPATLOGO? 1. Material insuficiente y/o defectuoso por el manejo quirrgico. 2. Informacin clnica nula o insuficiente. 3. Manejo inadecuado del laboratorio de Patologa. 4. Exceso de confianza o falta de experiencia del Patlogo. 5. Carga de trabajo excesivo.

LITERATURA CONSULTADA
Bibbo M. Comprehensive citopathology. Philadelphia: WB Saunders Company, 1991. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology of the dog and cat. California: American Veterinary Publications, Inc., 1989. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology and hematology of the horse. 2nd ed. St Louis: Mosby, 2002. Proceeding of the 32nd Postgraduate Institute for Pathologists in clinical Cytopathology. The Johns Hopkins University School of Medicine and The John Hopkins Hospital. Maryneland, 1991.

Menard M, Papageorges M. Fine needle biopsies: How to increase diagnostic yield. Compendium. 1997; 19:738-740. Rogers K, Barton C, Habron JM. Cytology during surgery. Compendium. 1996; 18:315-328. Ramaiah S, Alleman AR. Cytologic evaluation of the liver: Compendium. 2002; 24:798-809. aspiration finding and limitations.

TINCIONES DE RUTINA Y ESPECIALES EN MUESTRAS CITOLGICAS

Larisa Chvez S. Departamento de Patologa, FMVZ-UNAM larachs@hotmail.com Las clulas en su estado natural son incoloras siendo difcil determinar que caractersticas morfolgicas presentan bajo el microscopio fotnico. Una manera de hacerlas visibles es teirlas con colorantes orgnicos selectivos. A principio del siglo XIX la demanda de colorantes textiles, produjo un periodo frtil para la qumica orgnica. Se observ que algunos colorantes tean los tejidos biolgicos y sorprendentemente, a menudo mostraban una preferencia por determinados componentes de la clula, el ncleo o las membranas, haciendo visibles las estructuras internas. Por otro lado, en 1936 la histoqumica surgi como un campo cientfico cuando Lison realiz el tratado de Histochimie Animale, desde entonces hubo progreso en la histoqumica y citoqumica surgiendo un gran numero de textos especializados dando una gran contribucin a los campos de la citologa, histofisiologa y patologa. Es importante comprender los principios generales, usos y resultados de los procesos habituales de tincin. En general un colorante es una sustancia qumica orgnica compleja que puede ser clasificada de muchas maneras. El criterio ms simple es basar la clasificacin en el uso con respecto a los componentes tisulares y celulares. Los colorantes pueden ser de uso general para teir el ncleo o el citoplasma o ser ms especficos con respecto a componentes particulares. Los colorantes de uso general pueden ser cidos o bases, pero de hecho son sales neutras que tienen radicales tanto cidos como bsicos. Cuando la propiedad del tinte est en el radical bsico de la sal neutra se dice que es un colorante bsico, las estructuras se tien basfilas y tienen una carga positiva. Las sustancias basfilas que atraen a los colorantes bsicos son cidas por s mismas, como seria el caso de ADN o RNA. En este caso, podemos mencionar a la Hematoxilina de Harris que es una sustancia oxidante de la hematena en el tejido y el color que adquiere es azul. De la misma manera cuando la propiedad del colorante est en el radical cido de la sal neutra se habla de un colorante cido con carga negativa, en donde las estructuras que se tien con los colorantes cidos con carga negativa como sera el caso del citoplasma que es acidfilo. En este caso podemos mencionar a la eosina en donde se tie el citoplasma y sustancia intracelular de color rosa. Con respecto a las tinciones especiales la histoqumica se basa en el hecho de que el depsito de colorantes especficos en ciertas regiones es resultado de propiedades qumicas o fsicas propias del tejido. Este es un campo de investigacin

que se ha expandido con rapidez y cuyo objetivo es la localizacin de compuestos qumicos ya conocidos en zonas especficas o componentes celulares por anlisis bioqumico. Estos compuestos, tanto inorgnicos como orgnicos, se pueden identificar por medio de reacciones qumicas que producen sustancias coloreadas insolubles a partir de iones, cidos nucleicos, proteoglucanos, lpidos, enzimas o glucgeno entre otras. En el caso de las tinciones especiales intervienen reacciones qumicas por las sustancias que presentan algunos tejidos que producirn compuestos del colorante insolubles, como sera el caso de la tincin de Pearls. Este colorante tiene ferrocianuro de potasio el cual reacciona con los iones frricos del tejido y se produce un precipitado de ferrocianuro frrico que es insoluble y azul oscuro. Para que la calidad de la tincin celular al observarse en un microscpio no solo depender del colorante, si no del mtodo de fijacin, del medio utilizado para el montaje, iluminacin, grosor del especmen y el empleo de cubreobjetos. Debido a que la fijacin es uno de los factores primordiales para obtener un material ideal para el diagnstico se deben de conocer los mtodos especiales de fijacin y preparacin del tejido. Entre estos podemos mencionar para teir citologas formalina si se utiliza hematoxilina-eosina y algunas tinciones especiales, etanol 96 para Papanicolaou y secadas al aire, para tinciones tipo Romanowsky como el Diff-Quick y tincin especial de sudan. TINCIONES DE RUTINA: La tincin de hematoxilina-eosina es poco utilizada en el diagnstico citolgico sin embargo, si una muestra es remitida fijada en formol se puede utilizar aunque la caractersticas de las clulas no sern las adecuadas ya que el formol deseca altamente a las clulas ya que no lleva el mismo procedimiento de procesamiento que la histologa. Las caractersticas tintoreales que presentaran las clulas son ncleos acidfilos de color morado o azul y el citoplasma ser de color basoflico o sea rosa. TCNICA DE HEMATOXILINA-EOSINA: 1. Fijacin en formalina al 10% amortiguada a pH de 7.2 durante 15 minutos. 2. Lavarse en agua de la llave 2 pases y 2 cambios. 3. Teirse con hematoxilina de 3-5 minutos. 4. Lavarse en agua de la llave 2 pases y 2 cambios. 5. Sumergirse en alcohol cido al 1% 1 pase. 6. Lavarse en agua de la llave 2 pases y 2 cambios. 7. Sumergirse en agua amoniacal al 1% 1-3 pases. 8. Lavarse en agua de la llave 2 pases y 2 cambios.

9. Teirse con eosina 2 minutos. 10. Deshidratarse con etanol, 70, 80, 96, etanol abdoluto, etanol absoluto-xilol y xilol 10 pases en cada uno. 11. Colocar resina sinttica y cubreobjetos sobre la muesta que se encuentra en el portaobjetos. TINCIN DE PAPANICOLAOU: La tincin de Papanicolaou fue descubierta por Papanicolaou, la cual es una tincin tricrmica que ha sido empleada mundialmente para el diagnstico de la citologa exfoliativa principalmente cancer cervicouterino, sin embargo es utilizada para teir clulas inflamatorias, neoplasicas, etc. Dando un excelente panorama para el diagnstico. Esta tincin tiene la capacidad de acentuar el detalle celular y es valorable en la deteccin de clulas displsicas o malignas. TCNICA DE PAPANICOLAOU: 1. Fijar con etanol 96 durante 15 minutos. 2. Lavar con agua de la llave 10 pases. 3. Teir con Hematoxilina de Harris 1-2 minutos. 4. Lavar con agua de la llave 10 pases en 2 cambios. 5. Virar con alcohol-acido 1% un pase. 6. Lavar con agua de la llave 10 pases en 2 cambios. 7. Introducir en etanol 96 10 pases. 8. Teir con OG-6 2 minutos. 9. Introducir en etanol 96 10 pases 2 cambios. 10. Teir con EA-50 por 2 minutos. 11. Introducir en etanol 96 10 pases 3 cambios. 12. Deshidratar con etanol absoluto 10 pases 3 cambios. 13. Aclarar con xilol 10 pases 3 cambios. 14. Colocar resina sinttica y cubreobjetos sobre la muestra que se encuentra en el portaobjetos.

TINCIN DE DIFF-QUICK: La tincin de Diff-quick es una tincin tipo Romanosky entre las que se encuentra el nuevo azul de metileno es utilizada en la mayora de los laboratorios y clnicas veterinarias para identificar clulas nucleadas, ya que a diferencia de la tincin de Papanicolaou nicamente se utiliza un fijador y dos colorantes, es fcil y rpida de usar. En este caso se sugiere realizar frotis delgados, secar rpidamente la muestra para obtener mejores resultados. TCNICA DE DIFF-QUICK: 1. Secar al aire. 2. Fijar con metanol 20 pases. 3. Teir con Solucin I (naranja) 20 pases. 4. Teir con Solucin II (morada) 20 pases. 5. Lavar con agua de la llave. 6. Dejar secar a temperatura ambiente. 7. Colocar resina sinttica y cubreobjetos sobre la muestra que se encuentra en el portaobjetos. TINCIONES ESPECIALES: En la citologa pueden ser empleadas un sin nmero de tinciones especiales las cuales ponen de manifiesto ciertas estructuras o componentes qumicos para precisar an ms el diagnstico, a continuacin se mencionan las tcnicas ms comunes que se utilizan en el laboratorio de citopatologa. Es importante mencionar que al realizarse una tincin especial se deben tener laminillas testigo para corroborar que la tincin halla sido realizada correctamente. TINCIN DE CIDO PERYDICO DE SHIFF: Los proteoglucanos son compuestos que estn formados por glucosaminoglucanos (mucopolisacridos) unidos por enlaces covalentes a un ncleo proteico. Los glucosaminoglucanos se pueden identificar por una modificacin de la reaccin de Feulgen, conocida como reaccin de Schiff del cido perydico (PAS). Este cido es un agente oxidante que produce aldehdos insolubles a partir de los glucosaminoglucanos. Estos aldehdos reaccionan luego con el reactivo de Schiff, que es la forma incolora de la fucsina bsica para producir un compuesto complejo de color prpura o magenta, que se encarga de teir a los polisacaridos y mucosubstancias que contienen hexosas o deoxihexosas con grupos glicol, los cuales se tien color rosa magenta o rojo. Las mucosustancias neutrales se tien de rojo y por ltimo con respecto al cido hialuronico, sialomucinas y mucosustancias cidas sulfateadas adquieren un color azul.

TCNICA DE CIDO PERYDICO DE SHIFF: 1. Fijar con formalina 15 minutos. 2. Lavar con agua de la llave 10 pases 2 cambios. 3. Oxidar con cido perydico 15 minutos. 4. Lavar con agua de la llave 10 pases 2 cambios. 5. Agregar Reactivo de Schiff durante 15 minutos. 6. Agregar agua tibia para que reaccione a rosa magenta por 10 minutos. 7. Lavar con agua de la llave 10 pases 1 cambio. 8. Colocar en Hematoxilina 1 minuto. 9. Lavar con agua de la llave 10 pases 2 cambios. 10. Diferenciar con alcohol cido 1 pase. 11. Lavar con agua de la llave 10 pases 2 cambios. 12. Diferenciar con agua amoniacal 1 pase. 13. Lavar con agua de la llave 10 pases 2 cambios. 14. Deshidratar (etanol 80%, etanol 96, etanol absoluto y xilol). 15. Colocar resina sinttica y cubreobjetos sobre la muestra que se encuentra en el portaobjetos. TINCIN DE GRAM: La tincin de Gram tiene la caracterstica de diferenciar bacterias Gram positivas de las negativas. Las bacterias Gram positivas sern teidas de azul gracias a la accin sobre las protenas de superficie con el cristal violeta y las gram negativas adquirirn un color rojo gracias a la accin de la safranina. TCNICA DE GRAM: Se secan al aire las laminillas con la muestra. Se agrega cristal violeta al 1% durante un minuto. Se lava con agua de la llave. Se agrega yoduro durante un minuto. Se lava con agua de la llave.

Se agrega acetona durante un minuto. Se lava con agua de la llave. Se agrega safranina durante un minuto. Se lava con agua de la llave. Se deja secar a temperatura ambiente. Colocar resina sinttica y cubreobjetos sobre la muestra que se encuentra en el portaobjetos. TINCIN DE FONTANA MASSON: La tincin de Fontana Masson es un mtodo que tie grnulos argentafines y melanina. La melanina es un compuesto no lipdico ni hematgeno que es de color negro y normalmente esta pigmentando el pelo, piel, retina, iris y ciertas reas anatmicas del sistema nervioso central. Ambas sustancias sern teidas de color negro, los ncleos y el citoplasma de color rosa. TCNICA DE FONTANA MASSON: Fijar con formalina por 15 minutos. Lavar con agua destilada. Colocar en la solucin de trabajo de nitrato de plata, meterla a la estufa durante 1 hora. Dejar enfriar. Colocar en cloruro de oro por 10 minutos. Lavar con agua destilada. Colocar en tiosulfato de sodio 5 minutos. Lavar con agua destilada. Teir con eosina 1 minuto. Deshidratar con etanol 96, etanol absoluto y xilol. Colocar resina sinttica y cubreobjetos sobre la muestra que se encuentra en el portaobjetos.

TINCIN DE TRICROMICA DE MASSON: La tincin de Masson es otro mtodo tricrmico de uso general, en que las fibras de colgena se tien de azul, las estructuras citoplsmicas, keratina, fibras musculares y fibras intercelulares de rojo y los ncleos negro o de prpura. TCNICA DE TRICROMICA DE MASSON: 1. Fijar con formalina durante 15 minutos. 2. Se agrega el mordente de Bouin por una hora a 56 C o durante toda la noche a temperatura ambiente. 3. Se lava con agua de la llave hasta que se quite el color amarillo. 4. Se agrega la hematoxilina de Weigert por 10 minutos. 5. Enjuaga con agua de la llave 10 pases. 6. Se agrega la Fuchsina cida de Biebrich scarlet por 2 minutos. 7. Lavar en agua corriente 10 pases. 8. Se agrega la solucin de cido fosfomolibdico y fosfotungtico por 15 minutos. 9. Se coloca la solucin de azul anilina por 5 minutos. 10. Lavar con agua de la llave. 11. Agregar solucin de cido actico glacial por 1 minuto. 12. Deshidratar con etanol 96, etanol absoluto y xilol. 13. Colocar resina sinttica y cubreobjetos sobre la muestra que se encuentra en el portaobjetos. TINCIN DE ZIEHL-NEELSEN: Esta tincin especial se encarga de teir a las bacterias cido alcohol resistentes como seran las micobacterias y nocardias las cuales adquieren un color rojo, los eritrocitos se tien de color naranja-amarillo y el resto de los tejidos de color azul. TCNICA DE ZIEHL-NEELSEN: 1. Fijar al aire. 2. Se agrega la Fuscsina carbol por 30 minutos. 3. Lavar con agua de la llave. 4. Decolorar con alcohol cido hasta que adquiera una coloracin rosa plido.

5. Lavar con agua de la llave por 8 minutos. 6. Contrateir con azul de metileno hasta que adquiera una coloracin azul plido. 7. Lavar con agua de la llave. 8. Deshidratar con etanol 96, etanol absoluto y xilol. 9. Colocar resina sinttica y cubreobjetos sobre la muestra que se encuentra en el portaobjetos. CONCLUSIONES: La citoqumica es una herramienta importante para poder determinar las caractersticas celulares y tipos celulares para poder dar un diagnstico, por lo que es importante mencionar que la toma de la muestra, fijacin de la muestra, caractersticas de los colorantes como el pH, madurez, preparacin del colorante entre otros nos ayudaran a tener una muestra valorable. Con respecto a las tinciones especiales nos permiten un acercamiento del posible componente o agente etiolgico que este involucrado en una lesin. El rea de la histoqumica y citoqumica puede sufrir variaciones dependiendo de la temperatura ambiental, pH y componentes del agua, madurez de las sustancias empleadas por lo que frecuentemente se realizaran modificaciones con respecto a tiempos de coloracin. LITERATURA CONSULTADA: http://dieumsnh.qfb.umich.mx/patologIa_pract/practica_6.htm http://familydoctor.org/e138.xml
http:www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/fontana_masson.htm

http://www.joseacortes.com/practicas/tincionaar.htm http://www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones.shtml
http://html.rincondelvago.com/practicas-de-laboratorio_1.html Henry, M.J., Burton, L,G., Stanley, M.W. Y Horwitz, C.A.: Application of a modified Diff-Quick stain to fine needle aspiration smears: Rapid staining with improved cytologic detail. Acta Cytol., 31:254955 (1987) Jorundsoon, E., Lumsden, J.H y Jacobs, R.M.: Rapid staining techniques in cytopatology: A review and comparison of modified protocols for hematoxylin and eosin, Papanicolaou and Romanowsky stains. Vet. Clin. Pathol ., 8:100-108 (1999) Junqueira, L.C., Carneiro, J. y Acontopoulos, A.: Basic histology. Lange Medical Publications, Los Altos, California, United States of America, 1971.

Koss, G.L., Woyke, S. y Olszewski, W.: Biopsias por Aspiracin: Interpretacin citolgica y bases histolgicas. Panamericana, Buenos Aires, Argentina, 1988. Lee,G.L. Manual of Histologic staining methods of the Armed Forces Institute of Pathology. McGrawHill Book Company, United States of America, 1960. Leeson, T.S., Leeson, R.C. y Paparo, A.A.: Atlas de Histologa. Raskin, R.E. y Meyer, J.D.: Atlas of Canine and Feline Cytology. W.B. Saunders Company, United States of America, 2001.

EVALUACION DE DAO CELULAR, INFLAMACIN Y REPARACIN

Laura P. Romero R. Departamento de Patologia, FMVZ-UNAM Las clulas pueden responder a un estmulo fisiolgico o patolgico desarrollando un proceso de adaptacin, lo cual permite su viabilidad, sin embargo, algunas de estas adaptaciones implican cambios morfolgicos y de funcin en estas clulas. Algunas de las respuestas de adaptacin incluyen hiperplasia, metaplasia, displasia, as como el almacenamiento intracelular excesivo de sustancias endgenas o exgenas. Hiperplasia se refiere al incremento en el nmero de clulas de un tejido, por lo tanto, solo puede presentarse en clulas con capacidad mittica. Los tejidos sufren hiperplasia en respuesta al aumento de un estmulo normal. Por ejemplo, la glndula mamaria sufre hiperplasia en respuesta a la estimulacin hormonal durante la gestacin y la lactancia; la corteza adrenal experimenta hiperplasia en respuesta a niveles elevados de ACTH; por otro lado, la hiperplasia prosttica est causada por un desequilibrio en las hormonas sexuales. La hiperplasia de la tiroides puede ser secundaria a la deficiencia de yodo, exceso de yodo, o a la incapacidad de sintetizar tiroglobulina o tiroxina. Las caractersticas citolgicas de las clulas epiteliales hiperplsicas son similares, sin importar el estmulo causal. Generalmente aparecen agrupadas, aunque tambin pueden encontrarse de forma aislada. La relacin ncleo/citoplasma est aumentada en comparacin con las clulas normales. Los ncleos son monomrficos y con un patrn de cromatina finamente granular o filamentoso. En algunos casos, la hiperplasia debe considerarse una transformacin preneoplsica, por ejemplo, la hiperplasia prosttica cuando no se acompaa de inflamacin. Metaplasia es un proceso celular de adaptacin, reversible, en el cual una clula madura diferenciada, es sustituida por otro tipo de clula madura ajena a ese tejido. Este proceso no ocurre como resultado de alteraciones en las clulas maduras existentes, sino que depende de la proliferacin de clulas germinales o troncales, cuya progenie sufre diferenciacin modificada. La metaplasia, en clulas epiteliales, se presenta como respuesta a una irritacin crnica, incluyendo inflamacin. Por ejemplo, la irritacin crnica de las clulas del epitelio columnar ciliado de los bronquios, provoca su sustitucin por clulas epiteliales estratificadas escamosas. Es decir, clulas sensibles a un estmulo, son sustituidas por clulas menos sensibles a dicho estmulo. El epitelio prosttico tambin puede experimentar metaplasia escamosa bajo la influencia estrognica de un tumor testicular de clulas de Sertoli. Citolgicamente, las clulas

metaplsicas son grandes, de apariencia aplanada y flexible, con citoplasma acidoflico y ncleos picnticos, que imitan al epitelio escamoso en maduracin, y no deben confundirse con clulas neoplsicas. Displasia significa literalmente crecimiento anormal, sin embargo, en un sentido estricto, describe una respuesta proliferativa acompaada de prdida de diferenciacin regular y de atipia celular, la cual se caracteriza por pleomorfismo e hipercromacia. En este proceso, hay prdida de la progresin regular de clulas germinales a clulas completamente diferenciadas, y se observan mitosis en posiciones anormales. Por definicin, displasia es una lesin no-neoplsica, y por lo tanto, reversible cuando la causa es eliminada. La displasia indica asincrona en el desarrollo celular, por lo que se observa variacin en el tamao y forma de las clulas, aumento de la proporcin ncleo/citoplasma, clulas teidas mas obscuras, y mayor cantidad de clulas inmaduras. Estos cambios pueden ser difciles de diferenciar de una neoplasia, y de hecho, se ha comprobado que algunas de estas lesiones corresponden a carcinomas incipientes, por lo que generalmente son consideradas como lesiones preneoplsicas. INFLAMACIN Con frecuencia la principal distincin que se debe hacer al interpretar una muestra citolgica, es la que existe entre inflamacin y neoplasia, para poder decidir el tipo de intervencin teraputica. En general, las muestras que contienen nicamente clulas inflamatorias y algunas clulas tisulares no displsicas, indican una lesin inflamatoria; en cambio, en muestras que contienen nicamente clulas tisulares, es necesario descartar un proceso neoplsico. Una mezcla de clulas inflamatorias y tisulares puede sugerir neoplasia, inflamacin secundaria o inflamacin con displasia celular secundaria. Cuando hay confusin respecto a si un proceso es inflamatorio o neoplsico, se puede recomendar tratar la lesin con la terapia antibitica y antiinflamatoria adecuada, si remite, se confirma que la lesin es inflamatoria. Si no remite, se recomienda repetir la muestra citolgica para que una vez resuelto el componente inflamatorio, se pueda reconocer la lesin neoplsica. O bien, se puede recomendar la extirpacin quirrgica para su examen histopatolgico. Para determinar el tipo de lesin inflamatoria se deben evaluar la cantidad y proporcin de las diferentes clulas inflamatorias, las cuales incluyen neutrfilos, eosinfilos, macrfagos, clulas gigantes y linfocitos. El tipo de clulas inflamatorias indicar si se trata de un proceso de curso agudo o crnico. Se considera un proceso agudo cuando ms del 70% de las clulas inflamatorias son neutrfilos, mientras que en los crnicos predominan las clulas mononucleares, principalmente linfocitos, clulas plasmticas y macrfagos. Asimismo, la respuesta inflamatoria puede clasificarse como purulenta o supurativa

si mas del 85% de las clulas son neutrfilos; granulomatosa si hay abundantes macrfagos, clulas epitelioides y clulas gigantes; eosinoflica cuando se observan muchos eosinfilos y linfocitaria cuando predominan los linfocitos y las clulas plasmticas. El tipo de infiltrado tambin depende del agente etiolgico involucrado, por ejemplo, en los procesos bacterianos encontraremos predominio de neutrfilos, adems de observarse la presencia de flora bacteriana. Habr formacin de granulomas en el caso de micobacteriosis, brucelosis o micosis, y aparecern abundantes detritus celulares, clulas gigantes y clulas epitelioides, bacilos ZiehlNielsen positivos o estructuras micticas especficas. En los procesos inflamatorios virales predominan los linfocitos, aunque tambin puede haber clulas plasmticas, y en ocasiones pueden encontrarse los cuerpos de inclusin intracelulares caractersticos. En la inflamacin causada por parsitos se observan numerosos eosinfilos y a veces el agente causal, ya sean protozoarios, o bien, organismos pluricelulares como helmintos, caros, insectos, o en su defecto, fragmentos del cuerpo del parsito como ganchos, cubierta de quitina, etc. REPARACIN El proceso de reparacin en cualquier tejido, depende de la naturaleza del dao y de la composicin celular de ese tejido. En piel, que es en donde ms observamos este proceso, se caracteriza por la formacin de tejido de granulacin, el cual est formado por fibroblastos proliferativos, pequeos vasos sanguneos de nueva formacin y clulas inflamatorias, como macrfagos y neutrfilos. Debido a que los fibroblastos son clulas poco diferenciadas, con caractersticas anaplsicas, con frecuencia es difcil diferenciarlos citolgicamente de clulas neoplsicas de tejido conectivo, por lo que es recomendable realizar una biopsia de la lesin para diferenciarlo definitivamente a travs del estudio histopatlogico. LITERATURA CONSULTADA
Baker R. Color atlas of cytology of the dog and cat. Ed. Mosby. St. Louis Missouri, 2000. Bibbo M. Comprehensive cytopathology. Philadelphia: WB Saunders Company, 1991. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology and hematology of the horse. 2nd ed. St Louis: Mosby, 2002. De Buen N. Citologa Diagnstica Veterinaria. 1 ed. Mxico DF: El Manual Moderno, 2001. Slauson DO and Cooper BJ. Mechanisms of Disease. 3rd ed. St Louis: Mosby, 2002.

BASES DE LA INTERPRETACIN CITOPATOLGICA DE LAS NEOPLASIAS

Eugenia Candanosa de M. Departamento de Patologa. FMVZ- UNAM ieca@servidor.unam.mx El diagnstico de neoplasias en los animales domsticos implica una serie de procedimientos clnicos que llevan a la toma de decisiones acerca de la direccin que se debe tomar la terapia, lo que puede tener como resultado final la cura, recurrencia local o metstasis. El papel que lleva la citopatologa en la prctica veterinaria es la de dar informacin inmediata y certera del proceso neoplsico. El diagnstico citolgico nos permite reconocer una gran variedad de lesiones, las principales son lesiones inflamatorias y neoplsicas. Esto parece una tarea simple, sin embargo puede implicar un verdadero reto para un citopatlogo. En las neoplasias generalmente esta presente la inflamacin, incluso algunas llegan a desarrollar centros necrticos debido a la rpida multiplicacin de las clulas malignas y el pobre aporte sanguneo de la neoplasia. Tambin, hay que considerar que en neoplasias de piel o glndulas subcutneas, estas pueden sufrir el roce frecuente con el piso, muebles, entre otras cosas, produciendo ulceracin y necrosis. Se puede llegar a diagnosticar como neoplasia, una muestra que es colectada de un proceso inflamatorio, ya que algunas clulas como los macrfagos y los fibroblastos reactivos pueden alterar su apariencia semejando un proceso neoplsico. Por medio de la citopatologa, un buen porcentaje de neoplasias pueden ser identificadas con exactitud, como sera el caso del carcinoma de clulas escamosas, tumor venreo transmisible o el mastocitoma, entre otros. Sin embargo, sobre todo en las neoplasias mesenquimales, es complicada la identificacin de la estirpe celular. A. El proceso habitual para la descripcin citolgica de una muestra obtenida de una neoplasia es: 1. Fondo de la laminilla: puede estar compuesto por glbulos rojos, detritus celulares o clulas inflamatorias; incluso bacterias. 2. Componente celular de la neoplasia: se deben describir la forma celular, apetencia tintorial, la apariencia de ncleo, nucleolo (s es evidente) y citoplasma; adems sealando s se encuentran sueltas o en grupos y el arreglo de los grupos (sbanas, racimos, papilas, etc.).

B. Las tres categoras bsicas de neoplasias que pueden ser distinguidas citolgicamente son las epiteliales, mesenquimales y de clulas redondas. a. Epiteliales. Generalmente exfolian en grupos ya que las clulas se encuentran unidas por uniones intercelulares, y pueden adoptar arreglos como cordones, papilas, lbulos, sbanas, etc. Las clulas epiteliales presentan bordes citoplsmicos bien definidos. Su forma puede ser cbica, cilndrica, polidrica y aplanada, principalmente. El citoplasma puede ser vacuolado, sobre todo en clulas de origen epitelial glandular. b. Mesenquimales. La mayora de las veces, se obtiene escaso material a partir de la toma de muestra. Sus clulas exfolian individualmente, adquiriendo diferentes formas, la ms caracterstica es la fusiforme. Los bordes citoplsmicos son pobremente definidos. c. Clulas redondas En este grupo se incluye al mastocitoma, linfoma, histiocitoma, tumor venreo transmisible y plasmocitoma, entre otros menos frecuentes. Como su nombre lo dice, las clulas son redondas, aunque tienen diferente relacin ncleo:citoplasma, su citoplasma puede tener vacuolas o grnulos, principalmente. La cantidad de clulas que exfolian es abundante y los hacen en forma individual. C. Las caractersticas celulares de malignidad que se deben considerar son: Relacin ncleo:citoplasma, este vara dependiendo de la malignidad del proceso, la mayora de las veces por que el ncleo incrementa su tamao. En clulas normales puede ser entre 1:3 a 1:8, en los linfocitos es de 1:1. Un ncleo mayor de 5 micrones sugiere malignidad. Multinucleacin. Se considera una caracterstica de malignidad. No hay que olvidar que la binuclacin es normal en hepatocitos, epitelio transicional, epitelios germinales y clulas plasmticas reactivas. Mitosis atpicas numerosas. Hay que ser prudentes en su evaluacin ya que muchas veces son artificios de la conservacin de la muestra. Incremento del nmero y tamao del nucleolo.

No pasar por alto, que algunas neoplasias tienen diferentes componentes celulares de diferentes orgenes, como el tumor mixto de glndula mamaria en la perra que puede tener componente epitelial y mesenquimatoso. Finalmente, se interpretan todos los hallazgos citolgicos y se emite el resultado.

D. Comentario El comentario de los resultados, tal vez sea, una de las partes ms importantes del informe de resultados de una muestra citolgica. Generalmente, para la mayora de los usuarios de este servicio de diagnstico, el lenguaje que se emplea en la descripcin citolgica es incomprensible por la terminologa empleada. Sin embargo, en el comentario se emplea una prosa ms entendible, en donde se debe informar, entre otras cosas, el comportamiento de las neoplasias o bien el pronstico. Tambin, no menos importante, los problemas que presenta el material por un mal manejo de la muestra citolgica y es necesario repetir la muestra. En el departamento de Patologa de Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional Autnoma de Mxico se reciben aproximadamente 800 citologas anualmente, donde el 40% son diagnosticadas como neoplasias. Las neoplasias ms frecuentes son las de glndula mamaria, linfoma, tumor venreo transmisible y mastocitoma. La citopatologa es entonces una herramienta muy til para el diagnstico de neoplasias en los animales domsticos y silvestres, y debe ser considerada como complementaria con otros mtodos diagnsticos para la mejor descripcin del proceso de enfermedad. LITERATURA CONSULTADA
1. Bibbo M. Comprehensive citopathology. Philadelphia: WB Saunders Company, 1991. 2. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology of the dog and cat. California: American Veterinary Publications, Inc., 1989. 3. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology and hematology of the horse. 2nd ed. St Louis: Mosby, 2002. 4. Proceeding of the 32nd Postgraduate Institute for Pathologists in clinical Cytopathology. The Johns Hopkins University School of Medicine and The John Hopkins Hospital. Maryneland, 1991 5. Smith-Maxie LL, Parent J, Rand J, Wilcock BP, Norris AM. Cerebrospinal fluid analysis and clinical outcome of eight dogs with eosinophilic meningoencephalomyelitis. J Vet Inter Med; 3:167- 174. 6. Vandevelde M, Spano J. Cerebrospinal fluid cytology in canine neurologic disease. Am J Vet Res 19977; 38: 1827- 1832. 7. Santiago H, De la Torre FE. Patologa del ganglio linftico. Curso- taller. XXXIV Reunin Anual en Provincia, Chihuahua, Chih. Asociacin Mexicana de Patlogos, AC. Mayo, 1991. 8. Jacobs RM, Messick JB, Valli VE. Tumors of hemolymphatic System. In: Meuten DJ. Tumors in domestic animals. 4th ed. Iowa State Press: USA, 2002. 9. Jain NC. Essentials of veterinary hematology. Lea & Febiger: Philadelphia, 1993.

CITOLOGA DE LESIONES DE PIEL

Eugenia Candanosa de M. Departamento de Patologa. FMVZ- UNAM ieca@servidor.unam.mx Un buen nmero de consultas en la clnica veterinaria se deben a la presencia de lesiones cutneas. La piel es el rgano de mayor extensin en el cuerpo, por lo que es muy susceptible de sufrir o reflejar una amplia variedad de enfermedades de los animales domsticos y silvestres. Con el empleo de la citopatologa diagnstica es posible llegar a un diagnstico definitivo e implementar una terapia adecuada en un corto periodo de tiempo. Las tcnicas de toma de muestra citolgica ms empleadas son la puncin con aguja delgada, improntas y el raspado. a. Puncin con aguja delgada: esta se emplea en lesiones palpables, que generalmente se observan a simple vista; tambin se emplea en lesiones inflamatorias profundas y recurrentes o lesiones vesiculares recientes. b. Improntas: esta tcnica resulta de mucha utilidad cuando las lesiones estn ulceradas o bien cuando se realiz la reseccin quirrgica de un ndulo c. Raspado: este se realiza en lesiones superficiales de la piel, como sera el caso de sarnas o micosis. Es necesario seguir las indicaciones de un buen raspado, ya que frecuentemente solo se obtiene material contaminante, escamas y pelo, que no siempre brindan informacin diagnstica. 1. Evaluacin de los procesos inflamatorios. Los procesos inflamatorios se deben evaluar de acuerdo a la clula que predomina en el frotis y su estado de conservacin. Es importante observar con cuidado el fondo del frotis, en donde se pueden encontrar eritrocitos, escamas, cristales de colesterol, bacterias (en ocasiones contaminantes), entre otros. lo cual es de ayuda para identificar la causa del proceso. Proceso inflamatorio etiologa posible Predominancia de neutrfilos Abundantes neutrfilos bacterias, abscesos, cuerpo extrao, degenerados neoplasia. Pocos neutrfilos degenerados bacterias, hongos, protozoarios, cuerpos extraos, enfermedades inmunomediadas, dao qumico o traumtico, abscesos. Neutrfilos no degenerados bacterias, paniculitis, dao qumico o traumtico, abscesos, hongos, cuerpo extrao.

Exudado mixto 15% - 40% macrfagos > 40% macrfagos clulas gigantes > 10% eosinfilos

bacterias, hongos, ectoparsitos, protozoarios, neoplasias, paniculitis, reparacin. hongos, cuerpo extrao, protozoarios, reparacin, inflamacin crnica alrgica. hongos, cuerpo extrao, protozoarios, colagenolsis, paniculitis, ectoparsitos. alergia, parsitos, colagenolsis, mastocitoma.

Hay que recordar, que tambin se pueden enviar muestras a diferentes laboratorios, como bacteriologa, micologa o parasitologa, para complementar el diagnstico. 2. Evaluacin de neoplasias cutneas, subcutneas o asociadas a mucosas. Debido a la gran cantidad de neoplasias cutneas, en este trabajo solo se mencionarn ms frecuentes, de acuerdo al servicio de diagnstico en el Departamento de Patologa de la FMVZ de la UNAM. Mastocitoma. Estas neoplasias son muy frecuentes en perros, poco comn en otras especies. Los hallazgos citolgicos dependern del mastocitoma. Son clulas redondas de ncleo ligeramente excntrico que se tie plido la mayora de las veces; el citoplasma es moderado y generalmente contiene gran cantidad de grnulos metacromticos. Se pueden observar la presencia de eosinfilos y el fondo puede ser hemorrgico. Linfoma La poblacin de linfocitos normales en un rgano linfoide es de 70 a 95% de linfocitos pequeos y de 5 a 30% de linfoblastos. En los linfomas esta problacin se ve reemplazada por una poblacin homognea de clulas linfoides de proliferacin autnoma. Estas pueden ser de tamao o forma uniforme o ser pleomrficas. La mayora de las veces presentan numerosas mitosis atpicas. El fondo tiene abundantes cuerpos linfoglandulares. Tumor venreo transmisible. Es un tumor muy frecuente en pases donde no se cuenta con un buen control de la poblacin canina. Se desconoce el origen de las clulas que componen esta neoplasia, pero se sabe que tiene 59 cromosomas, que es menor al normal que se encuentra en el perro. Se transmite a travs del coito o el rascado. El frotis se caracteriza por clulas que exfolian en forma abundante. Su ncleo es grande redondo con ncleolo evidente central con cromatina marginal. El citoplasma es moderado ligeramente vacuolado. Son frecuente las figuras mitticas; as como tambin el fondo hemorrgico y neutroflico.

Carcinoma de clulas escamosas. Es un tumor agresivo de clulas epidermales en los cules se presenta una diferenciacin a queratinocitos. En el frotis se presentan abundantes clulas epiteliales planas queratinizadas pleomorficas con anisocariosis y cambios de la polaridad; as como canibalismo y mitsis atpicas. Tambin, hay escamas, hiperquetatosis, detritus celulares, exudado inflamatorio. Para la identificacin de otras neoplasias es necesarios documentarse de los componentes citolgicos de las mismas, y tratar de armar el rompecabezas. No olvidar el comentario final, mencionando el pronstico final. LITERATURA CONSULTADA
Bibbo M. Comprehensive citopathology. Philadelphia: WB Saunders Company, 1991. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology of the dog and cat. California: American Veterinary Publications, Inc., 1989. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology and hematology of the horse. 2nd ed. St Louis: Mosby, 2002. Proceeding of the 32nd Postgraduate Institute for Pathologists in clinical Cytopathology. The Johns Hopkins University School of Medicine and The John Hopkins Hospital. Maryneland, 1991 Smith-Maxie LL, Parent J, Rand J, Wilcock BP, Norris AM. Cerebrospinal fluid analysis and clinical outcome of eight dogs with eosinophilic meningoencephalomyelitis. J Vet Inter Med; 3:167- 174. Vandevelde M, Spano J. Cerebrospinal fluid cytology in canine neurologic disease. Am J Vet Res 19977; 38: 1827- 1832. Santiago H, De la Torre FE. Patologa del ganglio linftico. Curso- taller. XXXIV Reunin Anual en Provincia, Chihuahua, Chih. Asociacin Mexicana de Patlogos, AC. Mayo, 1991. Jacobs RM, Messick JB, Valli VE. Tumors of hemolymphatic System. In: Meuten DJ. Tumors in domestic animals. 4th ed. Iowa State Press: USA, 2002. Jain NC. Essentials of veterinary hematology. Lea & Febiger: Philadelphia, 1993.

CITOLOGA DE LA GLNDULA MAMARIA

Laura P. Romero R. Departamento de Patologa, FMVZ-UNAM La citologa es de gran ayuda diagnstica en lesiones de glndula mamaria debido a la gran incidencia de patologa mamaria en la perra, adems de ser un mtodo diagnstico de alta sensibilidad y especificidad. El material de glndula mamaria para estudio citolgico puede ser obtenido por diferentes mtodos: secrecin (espontnea o inducida), impronta (a partir de biopsias quirrgicas) o puncin con aguja delgada. La puncin con aguja delgada (PAD) es el mtodo de eleccin en lesiones de mama, ya que puede realizarse en varias reas de la lesin, lo que permite obtener material ms representativo para realizar el diagnstico correcto. Las principales indicaciones para la PAD de glndula mamaria son: la determinacin de la naturaleza de un ndulo, es decir, la distincin entre una lesin inflamatoria y una neoplsica; la evaluacin de ndulos multiples; y el drenaje terapetico cuando se trata de una lesin qustica. No existen contraindicaciones para la PAD de mama, sin embargo, puede haber complicaciones como la formacin de un hematoma, lo cual se puede evitar ejerciendo presin firme inmediatamente despus de la aspiracin. Tambin pueden llegar a ocurrir infecciones, las cuales normalmente no son de importancia y pueden controlarse fcilmente. La precisin del diagnstico depende en gran medida de la calidad de la muestra, y en la evaluacin del espcimen siempre deben considerarse los datos clnicos, los cuales deben ser lo ms completos posible. Las clulas que se pueden observar en la citologa normal de glndula mamaria son las siguientes: Clulas ductales. Son clulas epiteliales de forma y tamao uniforme, con ncleos ovales y pequeos, con escaso citoplasma, aparecen aisladas o en grupos, formando lminas o monocapas de diferentes tamaos. Clulas mioepiteliales. Son clulas fusiformes de ncleo central, que aparecen generalmente como ncleos desnudos, los cuales son ovales y ligeramente hipercromticos.

Clulas espumosas. Son histiocitos que presentan abundante citoplasma espumoso o finamente vacuolado, con ncleo oval o arrionado, por lo general excntrico y con cromatina gruesa. Estn presentes generalmente en lesiones benignas. Adems se pueden observar clulas adiposas acompaadas de fibroblastos y vasos sanguneos. A continuacin se describen algunas entidades que pueden ser diagnosticadas mediante el estudio citolgico de glndula mamaria: Mastitis. La mastitis juega un papel importante dentro de la patologa de glndula mamaria. Puede presentarse de forma focal o difusa, abarcar una o varias mamas, y pueden estar asociadas a cuadros de pseudogestacin, a postparto, o a infecciones diseminadas por va hematgena o por va ascendente, aunque tambin pueden ser aspticas y originarse a partir de traumatismos, particularmente en las glndulas inguinales. En casos de inflamacin difusa, la secrecin puede ser til para el diagnstico citolgico, mientras que para lesiones locales es necesario la PAD. Las muestras normalmente tienen una alta celularidad y contienen abundantes restos celulares. La mastitis aguda suele estar asociada a infecciones por coliformes, estreptococos y estafilococos; la imagen citolgica muestra gran cantidad de clulas inflamatorias, principalmente neutrfilos y clulas espumosas, asi como fibrina, histiocitos y escasas clulas ductales, las cuales pueden ser muy atpicas y representar un problema para el diagnstico. La mastitis granulomatosa puede ser de etiologa bacteriana o mictica, y muestra en el frotis abundantes detritus celulares, histiocitos, clulas epitelioides y/o clulas gigantes de cuerpo extrao, y algunos leucocitos polimorfonucleares. En este tipo de mastitis es necesario realizar tinciones especiales con el objeto de determinar el agente causal. Quistes. Son frecuentes en perras de edad media o viejas y son un componente frecuente en lesiones benignas o malignas de glndula mamaria. Los quistes mamarios son el resultado de un proceso displsico en el que los conductos dilatados se expanden y forman cavidades. Pueden presentarse como ndulos aislados o como masas multinodulares. A travs de la PAD suele obtenerse gran cantidad de lquido. La citologa del material obtenido de los quistes se caracteriza por presentar un fondo de material proteinceo con abundantes detritus celulares, macrfagos vacuolados, y a veces clulas ductales y de metaplasia apcrina. En las neoplasias, este material generalmente no contiene clulas malignas, por lo que se deben puncionar otras reas no qusticas de la lesin, con el fin de descartar un proceso maligno. Necrosis grasa. Se asocia a lesiones traumticas. En el frotis aparecen gotas de grasa, adipocitos de diferentes tamaos, clulas plasmticas, leucocitos polimorfonucleares, histiocitos y clulas gigantes.

Hematomas. Los hematomas, particularmente los organizados, presentan clulas gigantes multinucleadas, eritrocitos lisados, macrfagos con hemosiderina y cristales de colesterol que se ven de forma romboide, los cuales pueden pasar desapercibidos si se observa la laminilla con poco aumento. Lactancia. Durante la lactancia, un dato citolgico importante es el fondo del frotis, de aspecto proteinceo, y la escasa celularidad; se pueden ver algunas clulas epiteliales aisladas o en grupos, con bordes definidos, el citoplasma de estas clulas suele presentar granulaciones de color azulado, as como numerosas vacuolas. NEOPLASIAS Las neoplasias de glndula mamaria ocupan el segundo lugar de las neoplasias en la perra, aproximadamente el 50% se clasifican como tumores mixtos benignos, el 40% como adenocarcinomas y el resto corresponden a adenomas, carcinosarcomas, mioepiteliomas y sarcomas. Todas ellas representan un reto para el diagnstico citolgico, ya que este suele ser muy sensible pero poco especfico, debido a que no siempre se encuentran las caractersticas citolgicas que permiten establecer con precisin el tipo de neoplasia. Adenoma. Las preparaciones de aspirados de este tipo de lesiones contienen grupos de clulas ductales monomorfas dispuestas en lminas o estructuras tubulares. El ncleo de estas clulas es central, grande y regular, con nuclelo aparente y escaso citoplasma, en ocasiones vacuolado. En el adenoma compuesto se observan adems de las clulas ductales, numerosas clulas mioepiteliales, as como conglomerados de colgena. Tumor mixto benigno. Es el tumor ms frecuente en la perra. Los frotis suelen ser muy celulares, y presentan numerosos grupos de clulas ductales muy cohesivas dispuestas en sbanas o en empalizadas. Se encuentran tambin grupos de clulas mioepiteliales, deben observarse adems osteoclastos, material osteoide, pequeos fragmentos de tejido conectivo, grasa y/o cartlago. Papiloma. En el frotis aparecen grupos de clulas ductales de formas irregulares, con proyecciones digitiformes, o agrupadas formando estructuras glandulares con luces, asi como clulas mioepiteliales o ncleos desnudos en el fondo del frotis. Adenocarcinoma. Es la neoplasia maligna ms comn de glndula mamaria y derivan del epitelio glandular. Los criterios citolgicos son clulas grandes, pleomrficas, con prdida de la relacin ncleo-citoplasma. Los ncleos son excntricos de formas y tamaos variables, con nuclelo prominente nico o mltiple, de formas irregulares. Presentan variable cantidad de citoplasma basoflico, el cual se aprecia laxo o vacuolado. Cuando las clulas se encuentran aisladas, indica pobre diferenciacin, mientras que si aparecen agrupadas o formando papilas, se considera bien diferenciado. El pleomorfismo celular, la actividad mittica, multinucleacin, moldeamiento nuclear y canibalismo, son variables y se relacionan con el grado de malignidad de la neoplasia.

En el adenocarcinoma compuesto se observa tambin colgena, y el componente mioepitelial tiene caractersticas de malignidad. Carcinoma papilar. Es un tumor frecuente en la perra. Suelen presentar un fondo hemorrgico y sobre ste, aparecen clulas ductales de forma cbica o cilndrica agrupadas en forma de papilas, algunas se encuentran aisladas, son uniformes, de ncleo redondo en ocasiones hipercromtico, y nuclelo prominente. Normalmente muestran escaso estroma fibrovascular. Carcinosarcoma. Son poco comunes, y contienen poblacin celular tanto epitelial como mesenquimal. En ste, las clulas ductales se presentan menos agrupadas, son pleomrficas, con prdida de la relacin ncleo-citoplasma y nuclelos prominentes. Se observan tambin clulas malignas de tejido conectivo, as como clulas mioepiteliales y osteoclastos malignos. Carcinoma anaplsico. Estos tumores se componen de clulas grandes, muy pleomrficas, con ncleos anormales de cromatina granular y nuclelos evidentes, las cuales se presentan aisladas o en pequeos grupos. Las figuras mitticas y multinucleaciones son frecuentes en estas neoplasias. LITERATURA CONSULTADA
Baker R. Color atlas of cytology of the dog and cat. Ed. Mosby. St. Louis Missouri, 2000. Bibbo M. Comprehensive cytopathology. Philadelphia: WB Saunders Company, 1991. Cowell RL, Tyler RD. Diagnostic cytology and hematology of the horse. 2nd ed. St Louis: Mosby, 2002. De Buen N. Citologa Diagnstica Veterinaria. 1 ed. Mxico DF: El Manual Moderno, 2001. Slauson DO and Cooper BJ. Mechanisms of Disease. 3rd ed. St Louis: Mosby, 2002.

CITOLOGA DE LQUIDOS CORPORALES: PERITONEAL Y PLEURAL

MVZ Asela Berenice Meza Len Prctica clnica privada PMVZ Luca Rangel Luna Departamento de patologa, FMVZ-UNAM La acumulacin inapropiada de lquido fuera de los conductos vasculares o linfticos y de estructuras viscerales se conoce como efusin. Las efusiones, ya sea que se presenten en la cavidad abdominal o torcica, no representan una enfermedad por si misma, pero son indicativas de un proceso patolgico en la produccin o en el sistema de drenaje de lquido, o por un acumulo proveniente de una fuente ectpica. El anlisis de las efusiones ha sido aplicado desde 1867 y tiene varias ventajas, entre las que puede destacarse que es rpido, fcil, barato y rinde frutos en el diagnstico, pronstico y tratamiento, ya que va encaminado a determinar si existe hemorragia, inflamacin (con o sin infeccin), o una exfoliacin de clulas neoplsicas, as como otros procesos que producen acumulacin de lquido en abdomen y trax.

TCNICAS DE COLECCIN. Toracocentesis. El animal se coloca en decbito esternal y se toman las medidas adecuadas de asepsia en el sitio de puncin, no suele ser necesaria la tranquilizacin y/o la anestesia local. Se utiliza un catter con jeringa de 10 ml y aguja calibre 18-20Ga. En especies pequeas se punciona ventralmente entre el 7 u 8 espacio intercostal, se acopla la jeringa al catter y se aspira la cantidad de liquido necesaria (5 a 10 ml), posteriormente se retira el catter junto con la jeringa. En caballos, del lado derecho se punciona entre el 6 y 7 espacio intercostal 10 cm dorsal al nivel de la articulacin costocondral y del lado izquierdo usualmente se punciona del 6 al 9 espacio intercostal 4 a 6 cm dorsal a nivel de la articulacin costocondral. Abdominocentesis. Se realiza con el animal en pie o en decbito lateral y el sitio de puncin ms frecuente es lnea media del abdomen 1-2 cm caudal a la cicatriz umbilical utilizando un catter con aguja calibre 20Ga. Si existe una incisin quirrgica previa la aguja se inserta al menos a 1.5 cm de esta para evitar las vsceras abdominales. Se ha

comprobado que la tcnica con aguja abierta es ms sensible que la aspiracin con jeringa. TCNICAS DE CONSERVACIN Y ENVO. Una vez recolectado el lquido deber enviarse inmediatamente al laboratorio, en tubo con anticoagulante etil diamino tetra actico (EDTA) para realizar el conteo de clulas nucleadas, determinacin de protenas y examen citolgico; en el caso que se requiera el estudio bioqumico, el lquido deber remitirse en un tubo sin anticoagulante. Si el lquido tarda en ser evaluado las clulas aparecern picnticas y la morfologa celular ser difcil de evaluar, por lo que deben realizarse varios extendidos; en el caso de lquidos muy claros se hace un frotis del sedimento despus de centrifugar por 5 minutos a 165-360G, en caso de no contar con centrfuga se realiza un extendido lineal, y en lquidos de aspecto turbio un frotis terminal (igual a la tcnica sangunea). Deber consultarse con el laboratorio si requieren fijacin hmeda de los extendidos. Otro mtodo de conservacin es aadir alcohol etlico al 96% en partes iguales para realizar el estudio citolgico. PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA. Examen fsico-qumico. Aspecto y color. Es de utilidad ya que puede orientar el proceso patolgico; de esta forma, un lquido claro y transparente sugiere poca celularidad; uno opaco-cremoso sugiere la presencia de leucocitos; rojizo, la presencia de eritrocitos; verdoso, la presencia de bilis y blanco lechoso, presencia de quilo. Cuenta celular. Puede realizarse por medio de mtodos manuales o automatizados, sin embargo estos ltimos tienen la desventaja de que contabilizan restos celulares por lo que se recomienda el uso del hemocitmetro y se contabilizan las clulas nucleadas. No es de valor realizar la cuenta de eritrocitos, ofrece mayor informacin la determinacin del hematocrito en efusiones hemorrgicas. Determinacin de protenas totales. Puede ser determinado bioqumicamente o por refractometra. Junto con la cuenta de clulas nucleadas, la determinacin de protenas se utiliza para clasificar las efusiones. Densidad. Refleja la cantidad de solutos disueltos en el lquido como protenas, glucosa, urea, bilirrubina y electrolitos. Pruebas bioqumicas. Existen algunas patologas donde la determinacin de algunos analitos sirven para corroborar el diagnstico. En el caso de sospechar de peritonitis biliar debe medirse la bilirrubina en suero y en el lquido, en el que los valores sern mayores. En el caso de uroperitoneo los valores de creatinina del

lquido sern mayores que en suero. En una efusin quilosa, se determinan triglicridos y colesterol para confirmar el diagnstico. Valores de amilasa en lquido mayores que en suero, confirman la presencia de pancreatitis. Examen citolgico. La preparacin de la muestra para su estudio citolgico depende de la cantidad y caractersticas del lquido. Si se obtienen solo unas gotas la prioridad es la citologa. En el laboratorio, los extendidos de lquidos claros se realizan utilizando citocentrfuga (1500 rpm/5 min.), la cual brinda la ventaja de concentrar el material en un rea determinada de la laminilla y la fijacin de estos depende de la tincin a utilizar. Para tinciones como Diff-Quick se fijan al aire, y en alcohol al 96% durante por lo menos 10 minutos si la tincin a utilizar es Papanicolaou. Los frotis de lquidos densos son directos. CLASIFICACIN DE LAS EFUSIONES A continuacin se presentan las caractersticas de las efusiones.
TRASUDADO TRASUDADO MODIFICADO FISIOLOGA Presin hidrosttica y permeabilidad, onctica. Presin hidrosttica y o vasos permeabilidad vascular EXUDADO

presin permeabilidad capilares linfticos.

de por inflamacin.

COLOR CONTEO CELULAR PROTENAS

Claras e incoloras < 1.5 x 109/L Caballo 1.5-5x109/L < 25 g/L Caballo < 25 g/L

mbar a blanco y rojo < 5 x 109/L Caballo < 5 - 10 x 109/L > 25 g/L Caballo > 25 50 g/L Mesotelial/macrfago, algunos neoplsicas. 60% Caballo neutrfilos. renal, ICCD, hasta 60%

mbar a blanco y rojo. > 5 x 109/L Caballo > 10 x 109/L > 25 o 30 g/L Caballo > 30 g/L Neutrfilos y macrfagos.

CLULAS

Mononucleares macrfagos), neutrfilos. Caballo neutrfilos. hasta

(mesoteliales, linfocitos y neutrfilo.

Clulas Sptico o asptico.

CAUSAS

Glomerulopata insuficiencia protenas.

uroabdomen, Inflamacin, Proceso y neoplasias.

PIF,

heptica, neoplasias,

trastornos uroperitoneo, pancreatitis

enteropata perdedora de hepticos.

intestinal (caballos), PIF.

Las protenas son el criterio ms importante para separar trasudados de trasudados modificados, y la celularidad lo es para distinguir trasudados modificados de exudados. Citolgicamente no pueden diferenciarse los dos tipos de trasudados. Las principales clulas que se observan en los lquidos normales son clulas del epitelio de revestimiento (mesoteliales), macrfagos, neutrfilos, linfocitos, eosinfilos, clulas plasmticas y eritrocitos. Clulas mesoteliales. Recubren el epitelio de revestimiento de la cavidad pleural y peritoneal y descaman fcilmente. Son grandes, miden de 10 a 20 m, suelen presentarse aisladas o en grupos formando papilas o rosetas. El ncleo es redondo u oval generalmente central, cromatina granular fina, citoplasma ligeramente basfilo. Durante procesos inflamatorios pueden aparecer reactivas, mostrar multinucleaciones, nuclolos evidentes, y el citoplasma puede contener restos fagocitados ya que las clulas activadas pueden convertirse en fagocticas. Pueden observarse abundantes mitosis. Macrfagos. Tienen un nico ncleo oval o en forma de haba, el patrn de cromatina es homogneo, y el citoplasma contiene vacuolas y, a veces, restos fagocticos. En algunos casos puede resultar difcil determinar si se trata de clulas mesoteliales o macrfagos. Neutrfilos. Estn presentes en varios grados en la mayora de las efusiones, sobretodo en aquellas asociadas a inflamacin. La hipersegmentacin y picnosis son cambios tpicos de envejecimiento. La presencia de clulas banda o granulocitos ms inmaduros sugiere inflamacin aguda y movilizacin de reservas. Adems pueden observarse neutrfilos txicos en casos de septicemia o inflamacin no controlada. Linfocitos. Los linfocitos que se observan son pequeos o medianos, similares a los observados en sangre perifrica. Se encuentran frecuentemente en procesos crnicos, sin dejar a un lado leucemias o linfomas. Eosinfilos. Son reconocidos fcilmente por sus grnulos naranja. Pueden encontrarse en efusiones secundarias a mastocitoma, infecciones por gusano del corazn y reacciones alrgicas e hipersensibilidad. Eritrocitos. Suelen aparecer en efusiones secundarias a hemorragias. La eritrofagocitosis y la presencia o ausencia de plaquetas puede diferenciar la hemorragia de ms de un da o la hemorragia crnica persistente, de la contaminacin por sangre. Clulas plasmticas. Su presencia puede sugerir inflamacin crnica o neoplasias como mieloma.

La mayora de las efusiones torcica y abdominal generalmente no son detectadas por el propietario del animal hasta que stas se vuelven severas. En el caso de efusin pleural leve los signos clnicos que pueden presentar los animales son letargia y falta o poca resistencia al ejercicio. Cuando la efusin es severa suelen presentar disnea, extensin de la cabeza y cuello, respiracin abdominal, postracin en decbito esternal y miembros anteriores separados de trax. En la efusin abdominal pueden manifestar letargia, debilidad y distensin abdominal. Esta ltima suele ser confundida por parte de los propietarios, en muchos de los casos, con ganancia de peso, ingesta excesiva o presencia de gases. A continuacin se mencionarn las etiologas que con mayor frecuencia se pueden encontrar en lquido torcico y abdominal, de acuerdo a su clasificacin (trasudado, exudado asptico, exudado sptico), as como neoplasias y otras entidades. Al momento de tomar la muestra del lquido, sta se puede contaminar con diversos agentes contaminantes, los cuales pudiesen dificultar o enmascarar el diagnstico, por lo que tambin sern mencionados. Trasudado Entre las principales causas se encuentran: Falla cardiaca congestiva (en el perro desarrollan con mayor frecuencia ascitis, en cambio, el gato desarrolla hidrotrax). Se aprecian eritrocitos, macrfagos, neutrfilos no degenerados, clulas mesoteliales reactivas y linfocitos Hipoproteinemia (albmina). Insuficiencia heptica severa. Enfermedad renal glomerular. Enteropata perdedora de protenas. Sndrome abdominal agudo (caballo).

Citolgicamente se observa escasa celularidad, principalmente clulas mesoteliales y macrfagos. El diagnstico definitivo de cualquiera de las patologas antes mencionadas se complementa con examen fsico completo, estudios radiogrficos y/o de ultrasonografa, as como anlisis fsico-qumico del lquido.

Exudado asptico Al examen citolgico se encuentran numerosas clulas inflamatorias como son neutrfilos, macrfagos, linfocitos, eosinfilos y clulas plasmticas. Las etiologas que se asocian a este tipo de exudado son: Peritonitis infecciosa felina (PIF): El fondo es denso y finamente granular azulviolceo, ya que contiene grandes cantidades de protena. El infiltrado est compuesto por neutrfilos, macrfagos, linfocitos y ocasionalmente clulas plasmticas. La mayora de las clulas mesoteliales pueden exhibir nuclolos evidentes (reactividad) y presentar corona radial (membrana citoplasmtica). Enfermedades inmunomediadas. Presencia de cuerpo extrao. Parasitosis: Se observan eosinfilos en mayor cantidad que el resto de las clulas inflamatorias antes mencionadas. Entre los agentes etiolgicos se encuentran nemtodos pulmonares (Aelurostrongyllus sp) y a microfilarias (Dirofilaria immitis).

Exudado sptico Este tipo de exudado se asocia principalmente a agentes bacterianos. Citolgicamente se encuentran clulas polimorfonucleares, las cuales se caracterizan por presentar cambios degenerativos nucleares (hipersegmentacin o fragmentacin del ncleo), macrfagos y flora bacteriana libre o fagocitada. En menor cantidad se pueden encontrar linfocitos y clulas plasmticas, lo cual va a depender de la cronicidad del proceso infeccioso. Las principales causas son: Agentes bacterianos (diseminacin por va sangunea): Comnmente se involucran Fusobacterium sp, Nocardia sp, Actinomyces sp, Pasteurella sp, Clostridium sp, Mycoplasma sp y escasos agentes fungales. Abscesos internos. Cirugas. Aspiraciones pleurales o peritoneales repetidas. Traumatismo (cavidad abdominal) con ruptura de rganos internos. Neumona. Gastroenteritis.

En el caso de Nocardia sp, la bacteria presenta forma bacilar o filamentosa. Cuando est involucrado Actynomices sp se pueden llegar a observar grnulos azurfilos entremezclados con las clulas inflamatorias.

Efusiones de quilo El quilo est conformado por linfa rica en quilomicrones, las cuales son lipoprotenas ricas en triglicridos, que se absorben en el intestino. Las efusiones de quilo se producen por: Obstruccin del flujo linftico o Fsica: Se asocia generalmente a neoplasias, alteracin inflamatoria en el mediastino y granulomas. o Funcional: Se puede presentar en patologas cardiovasculares (cardiomiopata, parasitosis, efusiones pericrdicas) y en casos de congestin heptica, siendo sta menos frecuente en medicina veterinaria. Ruptura del conducto torcico: Posquirrgica y/o traumatismo. Idioptica.

Estas efusiones son inodoras y su color puede variar de blanco lechoso, amarillo o rosa. Esto va a depender de la dieta y al nmero de eritrocitos que contenga. Citolgicamente se aprecian numerosos linfocitos pequeos (maduros) y en menor cantidad se pueden observar neutrfilos y macrfagos. Se puede realizar tincin especial de Sudn III para confirmar que se trata de lquido quiloso, ya que pone de manifiesto a la grasa disuelta. Sin embargo, aunque no resulte positiva la muestra a la tincin antes mencionada, no se puede descartar sta posibilidad. Para diferenciar de una efusin quilosa y un pseudoquilo, es recomendable realizar medicin de triglicridos en el lquido y en suero. En el caso de efusin quilosa, la concentracin de triglicridos es mayor en la efusin que en el suero. Por el contrario la concentracin de colesterol es mayor en el suero que en el lquido. Hemorragia Su etiologa es multifactorial, entre las causas ms frecuentes se encuentran: Traumatismo. Neoplasias. Defectos en la hemostasis. Es importante destacar que al momento de la toma de muestra se puede contaminar la misma, por lo que puede enmascarar el diagnstico, por lo que es importante poder diferenciarlas. Se puede encontrar eritrofagocitosis y ausencia o presencia de plaquetas en una hemorragia aguda, mientras que en una hemorragia crnica se observa solamente eritrofagocitosis. En una muestra contaminada con sangre se observan numerosas plaquetas, pero ausencia de eritrofagocitosis. Uroperitoneo Este puede producirse por ruptura renal, urteres, vejiga o uretra. En el lquido se pueden aprecian neutrfilos no degenerados, macrfagos y clulas mesoteliales reactivas. El diagnstico se confirma por medio de la medicin de urea y creatinina en sangre y en el lquido, siendo sta ltima la ms confiable.

Peritonitis biliar La causa puede ser ruptura de conductos y/o vescula biliar, ocasionando peritonitis qumica. Se observan neutrfilos, clulas mesoteliales reactivas y macrfagos, en cuyo citoplasma hay pigmento verde azulado o amarillo verdoso (pigmento biliar). Se recomienda hacer medicin de bilirrubina. Neoplasias Puede haber efusiones secundarias a neoplasias por medio de 2 mecanismos: 1. Que la neoplasia se encuentre en la membrana serosa (siendo tumor primario o por implante) 2. Por proceso inflamatorio secundario a la neoplasia, trastorno circulatorio (compresin u obstruccin). Es importante hacer notar que no todas las neoplasias descaman, por lo tanto, no siempre se observarn clulas neoplsicas en las efusiones torcicas y/o abdominales. Al encontrar clulas neoplsicas en frotis se debe de establecer si son epiteliales, mesenquimales o mesoteliales con el fin de definir su origen. La neoplasia que con mayor frecuencia ocasiona efusiones es el mesotelioma, en el cual, las clulas mesoteliales neoplsicas pueden tener caractersticas similares a las normales, sin embargo, las caractersticas ms representativas son una abundante celularidad, agrupamiento, aumento del tamao nuclear, nuclolos prominentes, multinulceaciones y vacuolizacin discreta del citoplasma. Debido a que el mesotelioma tiene caractersticas citolgicas similares a los adenocarcinomas, es importante tener en cuanta a stos como diagnsticos diferenciales, ya que se tendra que descartar probable metstasis. Otras neoplasias que pueden ser diagnosticadas mediante efusin torcica y/o abdominal son: Linfomas. Carcinoma: colon, estmago, pncreas, endometrio, pulmn y ovario. Contaminantes Es importante reconocer a los contaminantes que se pueden encontrar frecuentemente en especimenes citolgicos de lquidos peritoneal y torcico, ya que se podran identificar como posibles agentes causales de enfermedad y por ende, emitir un diagnstico errneo. Generalmente se pueden observar eritrocitos y plaquetas, fibras vegetales (lo que poda indicar ruptura de estmago y/o intestinal), partculas de talco, fibras de msculo estriado y adipocitos. Estos ltimos normalmente se obtienen al momento de realizar la toma de la muestra. Es frecuente encontrar como hongo contaminante a Alternaria, el cual tiene aspecto de tambor, o bien, se observan ramificados cuando se encuentran en gemacin. Lo anterior indica que el tren de tincin est sucio y por lo tanto, mal manteniento de la tincin.

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