- PROTENAS APOSTILA DE EXPERIMENTOS PARA O PROFESSOR

Marco Aurelio Da Silva Carvalho1 Sarah Cristina De Andrade Santos2

Acadmico de graduao em Biologia licenciatura pela Universidade Federal do Tocantins, UFT / Porto Nacional -TO. 2 Acadmica de graduao em Biologia licenciatura pela Universidade Federal do Tocantins , UFT / Porto Nacional -TO.

INTRODUO

Colocar como alternativa para o professor experimentos baseado no ensino de biologia, com a proposta de enfatizar a importncia da experimentao para o processo de ensino e aprendizagem do aluno, tendo como referncias simples para atuao do professor em sala de aula, buscando materiais de fcil acesso, com o intuito de tornar possvel um trabalho vivel e de fcil aplicao. O professor como mediador do conhecimento, tende a buscar experimentos significativos baseando-se em estratgia de ensino-aprendizagem que possa possibilitar a apropriao imediata de competncias, para tornar fcil a maneira pela qual o aluno se sinta encorajado a participar, praticar e elaborar mtodos que facilite sua compreenso no ensino de biologia. Possibilitando que o mesmo reconhea a real importncia daquilo que estar sendo abordado na teoria. Os experimentos so formas prticas e necessrias para que o aluno adquira uma maior facilidade em relacionar a teoria com a prtica, envolvendo o dia-a-dia do aluno e esclarecendo suas dificuldades em relao ao ensino, e preparando-os para situaes problemas. Por exemplo: atuao das enzimas nos processos metablicos. O trabalho tem como objetivo a elaborao de apostila para o professor com experimentos sobre protenas, sem a necessidade de laboratrios a aparelhagem especifica, mas que auxiliam o aluno na problematizao, discusso e significao dos conceitos qumicos, ou seja, promover uma aprendizagem significativa. PROTENAS a classe de substncia mais abundante das clulas, representando mais de 50% do peso seco e responsvel pela imensa variedade de todas as funes celulares. So polmeros lineares de aninocidos. Formado pela unio do grupo carboxila do primeiro aa com o amina do segundo seguida da liberao de uma molcula de gua. CLASSIFICAO DAS PROTENAS

As protenas podem ter uma ou mais cadeias polipeptdicas. Com uma cadeia so chamadas de monomricas. Com mais de uma cadeia so chamadas de multimricas ou polimericas. As multimricas so classificadas em homomultimricas quando as cadeias polipeptdicas possuem apenas um tipo de polipeptdeo, e de heteromultimrica quando possuem mais de um tipo. As multimricas so designadas por letras gregas com ndices para indicar a composio. Por exemplo, A 2 corresponde a um homodmero. A ribonuclease A bovina do tipo A1. J a hemoglobina humana do tipo A2 B2. O comprimento das cadeias polipeptdica varia de 100 aa at 1800 aa (miosina). Normalmente pelo menos um dos 20 aa ocorre nas protenas. S em algumas pequenas que pode faltar um dos 20 aa. Cada protena tem uma sequncia nica de aa que determinada pela sequncia de bases do DNA que lhe deu origem. A leitura da sequncia de aa feita a partir do aminocido N terminal para o aa C terminal, ( C). ENZIMAS As enzimas so catalizadores biolgicos, ou seja, substancias que aumentam a rapidez de reaes bioqumicas, sem serem efetivamente consumidas nessas reaes. A vida, tal qual a conhecemos, s possvel graas a atuao das enzimas. As reaes envolvidas na digesto, na respirao celular, no armazenamento e gasto de energia, na sntese de protenas, aucares e gorduras, apenas para citar alguns poucos exemplos, acontecem graas presena de enzimas altamente especificas e eficientes. MECANISMO DE ATUAO ENZIMTICA Um dos modos mais aceito pra explicar a atividade enzimtica por meio do modelo de chave e fechadura. Ele propem que a enzima possue um formato tal que permite s substancias reagentes, denominados substrato da enzima, se encaixar perfeitamente nela, da mesma maneira como apenas uma chave como formato certo se encaixa numa determinada fechadura e capaz de abri-la. Desse encaixe surge o complexo enzimasubstrato, no qual a disposio geomtrica dos tomos e das ligaes favorecem

tremendamente a reao, qual sofre grande aumento de velocidade. O catalisador aumenta a rapidez de uma reao qumica por que diminui sua energia de ativao.

PRTICA LABORATORIAL DE BIOLOGPRTICA 01

Experimentos atuao de enzimas existentes no corpo humano Objetivo: Compreender a funo das enzimas Material Utilizado Um pedao de fgado de boi; gua oxigenada (disponvel em farmcias); Vidro com tampa; Vareta de madeira. 1- Coloque a gua oxigenada em um vidro. Acrescente o fgado e tampe o recipiente. 2- A CATALASE existente no fgado imediatamente comea a decompor a gua oxigenada. Durante a reao, voc ver diversas bolhas correndo para a superfcie, mas a tampa evitar que escape do vidro.

3- Acenda a extremidade da vareta e sopre-a at apagar. Abra a tampa do vidro e coloque a vareta em seu interior. A vareta se inflamar, pois h mais oxignio dentro do vidro que no ar ao seu redor. Concluso: O fgado humano como uma fbrica que produz milhares de produtos qumicos. Para isso, utiliza enzimas, como a catalaze, que decompe a gua oxigenada. Com essa experincia voc viu como atuam as enzimas. Alem disso, o fato de a vareta se reacender prova que o oxignio produto de uma reao qumica. Compreendemos que essas protenas especiais atuam em vrias reaes e so responsveis pelo bom andamento de processos qumicos. Na digesto, por exemplo, a atuao das enzimas essencial. Ficou claro que as enzimas diminuem a energia de ativao e aumentam a velocidade das reaes qumicas, por isso so conhecidas como biocatalisadores - essa a funo principal das enzimas. Com todo esse estudo e alm do que foi dito, podemos afirmar que a principal coisa que devemos saber sobre as enzimas que sem a ao cataltica delas, certamente no haveria vida na face da Terra.

PRTICA LABORATORIAL DE BIOLOGPRTICA 02

TESTE DE PROTENAS Objetivo: Identificar a quantidade de protenas presentes em diversos alimentos.

Material utilizado: Placa de reaes, basto de vidro, tubo de ensaio, pipeta. Reagentes: Soluo de CuSO4 0,1 %; soluo NaOH 10 % Procedimento: Preparar 5 clulas colocando em cada uma, respectivamente, 5 gotas de clara de ovo, carne moda, arroz, feijo, batata. Adicionar 10 gotas de gua em cada clula, agitar bem para diluir as substncias a serem analisadas. Adicionar 2 gotas de NaOH 10 % e 5 gotas de CuSO4 0,1 % em cada clula. Agitar com o basto de vidro e observar a colorao adquirida. Comentrio: Este teste denominado teste de biureto. A mudana da cor azul para a prpura indica a presena de protenas no material. As reaes envolvidas so muito complexas e ocorrem com as ligaes

peptdicas que ligam as vrias molcula de aminocidos. A intensidade da colorao obtida depende da quantidade de protena presente no meio. Catalisando a Hidrlise da Ureia em Urina

PRTICA LABORATORIAL DE BIOLOGPRTICA 03

CATALISANDO A HIDRLISE DA URIA EM URINA Objetivo ilustra a reao de decomposio da uria em urina humana, catalisada por urase obtida de sementes de melancia.

Material utilizado

Estante para tubos de ensaio 4 tubos de ensaio Pipeta 5,0 mL Extrato de repolho roxo Sementes de melancia Soluo aquosa de uria 1,0% (a uria pode ser facilmente adquirida em lojas de produtos agropecurios) Urina humana Liquidificador Filtro de papel Funil Erlenmeyer lcool etlico (comercial)

Procedimento Para identificao, enumerar 4 (quatro) tubos de ensaio. Adicionar aproximadamente 100 mL de gua e cerca de 40 sementes de melancia em um liquidificador e triturar por 15 segundos. Filtrar a mistura e recolher a parte lquida. Dividir a frao lquida em duas partes iguais e levar uma delas a fervura a 100C por 1 minuto (inativao enzimtica). Deixar em repouso para atingir a temperatura ambiente. Para a obteno do extrato de repolho roxo, triturar no liquidificador 3 folhas de repolho roxo. Picadas com aproximadamente 100 mL de lcool etlico comercial. Filtrar a mistura e utilizar o extrato alcolico como indicador cido-base. A extrao das antocianinas

(pigmentos da classe dos flavonoides, responsveis pelas cores azul, violeta, vermelho e rosa de flores e frutas e indicadores cido-base naturais) pode inclusive ser realizada por imerso da folha de repolho roxo em etanol, seguido de repouso por 24 ou 48 horas (Terci e Rossi, 2002; Couto e cols.,1998). Tubo 1 No tubo de ensaio nmero 1, adicionar 1,0 mL de extrato de repolho roxo, 2,0 mL de urina recm-coletada e acrescentar 1,0 mL da frao lquida resultante da triturao de sementes de melancia em gua (sem fervura). Agitar e observar a cada 10 minutos.Tubo 2 No tubo de ensaio nmero 2, adicionar 1,0 mL de extrato de repolho roxo, 2,0 mL de urina recmcoletada e acrescentar 1,0 mL do lquido.resultante da triturao de sementes de melancia (fervido). Agitar e observar a cada 10 minutos. Repetir os procedimentos (acimapara os tubos 3 e 4, substituindo a urina pela soluo de uria a 1%.

Resultados e discusso Tubos de ensaio 1 e 3 A enzima urease (ativa), em meio aquoso e em contato com o substrato, decompe a uria em amnia (NH3) e dixido de carbono (CO2). Pela estequiometria dessa reao qumica, verifica-se que a decomposio de um mol de uria, em meio aquoso, origina a formao de dois mols de NH3 e um mol de CO2, conforme a reao: 1(NH2)2CO (s) + 1H2O (l) 2NH3 (g) + 1CO2 (g) Sabe-se que o gs carbnico est presente na atmosfera e advm naturalmente da respirao de animais, da decomposio de resduos orgnicos e indiscriminadamente da queima de combustveis fsseis. Alm de ocasionar o efeito estufa, o gs carbnico (e outros gases poluentes) acidificam as guas das chuvas. O carter cido da molcula de CO2, em gua, se deve formao do cido carbnico: CO2 (g) + H2O (l) H2CO3 (aq) H2CO3 (aq) H+ (aq) + HCO3-(aq) Em razo da presena de CO2 nomeio reacional, poderamos esperar que houvesse uma variao do pH do meio para nveis inferiores ao pH 7,0 (neutro). Contudo, a mudana de colorao do indicador (passando de violeta para verde) indicou que o pH da soluo aumentou para um nvel igual ou superior ao pH 11,0 (indicando um pH maior do que sete soluo bsica).

PRTICA LABORATORIAL DE BIOLOGPRTICA 04

Ao das proteases bromelina e papana na digesto do colgeno Nome: __________________________ N_____ Srie: _____ Data: ________ Objetivo da aula prtica: Executar experimentos para responder aos desafios: Os sucos industrializados de abacaxi conservam a atividade proteoltica da bromelina?

A permanncia do suco de abacaxi fora da geladeira influencia na atividade proteoltica da bromelina?

Protocolo Experimental Materiais: Alquota do extrato de abacaxi preparada na aula 1, mantida no congelador; Alquota do extrato de abacaxi preparada na aula 1, mantida temperatura ambiente; Suco de abacaxi industrializado (longa vida); P para suco de abacaxi; Caixa de isopor com gelo ou geladeira; Gelatina; 5 tubos de ensaio; Pipetas volumtricas ou seringas graduadas; 1 esptula ou colher de ch; Basto de vidro; Bquer 200 mL; Bquer 500 mL ou frasco de vidro de 500 mL de boca larga.

Procedimento: 1. Descongelar temperatura ambiente a alquota de suco de abacaxi reservada para essa aula. 2. Preparar a gelatina conforme as instrues na embalagem e mant-la temperatura ambiente. 3. Preparar os sucos industrializados de acordo com as instrues da embalagem. 4. Utilizar o extrato de abacaxi mantido temperatura ambiente. 5. Numerar os tubos de ensaio de um a cinco e preparar uma sequncia de acordo com a tabela abaixo:

Tabela 1: Sequncia de tubos com a composio de cada teste observado no experimento. TUBO 1 2 3 4 5 COMPOSIO 4 mL gelatina + 2 mL gua 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi (temp. ambiente) 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi industrializado 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi reconstitudo (p) TESTE Controle 1 Controle 2 no congelado longa vida suco em p

6. Colocar os tubos na caixa de isopor comgelo (ou em geladeira) at que o tubo 1 (controle 1) gelifi-que. Isto dever ocorrer aps alguns minutos. A ocorrncia ou no da protelise ser avaliada por meio da gelificao, observada

indiretamente, mediante observao da viscosidade do meio. A inclinao dos tubos de ensaio aps um banho de gelo de alguns minutos (at ocorrer a gelificao docontrole 1 tubo 1) possibilita que se realize o moni-toramento da viscosidade da gelatina. Anote na tabela 2 os resultados experimentais.

Tabela 2: Resultados do teste de gelificao. TUBO 1 2 3 4 5 COMPOSIO 4 mL gelatina + 2 mL gua 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi (temp. ambiente) 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi industrializado 4 mL gelatina + 2 mL suco de abacaxi reconstitudo (p) RESULTADO (GELIFICAO)

Questes: 1.Elabore uma hiptese para explicar os resultados dos tubos 3, 4 e 5. 2.Para que serve uma amostra controle num procedimento experimental? Tarefa individual para casa: 3.Pesquisar como ocorre o processamento industrial de uma fruta a sua escolha.

BIBLIOGRAFIA GALLO, Prof. Dr. Luiz Antonio. Aminocidoas e protenas. Universidade de So Paulo, Escola superior de Agricultura Luiz Queiroz ESALQ. Depto. Cincias biolgicas. PERUZZO, Francisco Miragaia e CANTO, Eduardo Leite. Qumica Na abordagem do cotidiano, Cap. 10, 3 edio, editor: Moderna, So Paulo, 2003.