AS AUXINAS E OS TROPISMOS NOS VEGETAIS

O estudo dos movimentos vegetais est includo na fisiologia vegetal, contudo, sabe-se hoje, que nem estudo aprofundado deste tema seria capaz sem utilizar conceitos relacionados outras cincias como a Botnica, a Bioqumica, a Gentica, a Morfologia e muitos outros ramos da Biologia Vegetal. A maioria dos movimentos so reaes de crescimento, sendo este, por sua vez, uma manifestao do desenvolvimento morfolgico, como tal, controlado pelos hormnios.

1. ESTMULO/EXCITAO

RESPOSTA/REAO

As respostas das plantas podem ser orientadas em relao ao estmulo, quando so chamadas Tropismos; ou no direcionadas em relao a ele, sendo assim chamadas Nastismos. O crescimento, quando h, pode ocorrer por meio do aumento do tamanho e/ou nmero de clulas, sendo desta forma, irreversvel, ou por meio de variao no turgor, quando ento reversvel. Ambas as respostas, trpicas e/ou nsticas, podem acontecer independentes ou associadas num mesmo organismo. Os movimentos acontecem em trs etapas diferentes e consecutivas, so elas: a percepo, a transduo e a resposta. A percepo consiste na deteco do estmulo ambiental por uma clula, tecido ou rgo especfico, sendo esta etapa de difcil deteco, devido aos vrios estmulos simultneos a que esto submetidos. A transduo a etapa que determina como o estmulo migra dentro da clula, sendo que os sinais enviados, as mudanas bioqumicas, biofsicas e de potencial eltrico envolvidos so os pontos chave para elucidao desta etapa. A terceira e ltima etapa do movimento a resposta, a forma como a planta reage ao estmulo, o que realmente acontece durante o movimento.

2. TROPISMOS So movimentos de curvatura orientados em relao a um excitante, podendo ser negativos ou positivos. So positivos quando a curvatura se faz na direo do excitante; em caso contrrio, so negativos. Dependendo do tipo de estmulo, os tropismos podem ser classificados em: Fototropismo, Gravitropismo ou Geotropismo, Tigmotropismo, Hidrotropismo e Quimiotropismo.

So 3 os principais sistemas de orientao do crescimento vegetal: 1) Fototropismo ou crescimento em relao a luz, expresso em toda a parte area da planta e algumas razes, garante que as folhas recebero luz solar suficiente para a fotossntese.

2) Gravitropismo ou geotropismo ou crescimento em resposta a gravidade, possibilita que as razes cresam em direo ao solo e as partes areas em direo oposta, respostas que so crticas nos estdios iniciais da germinao.

3) Tigmotropismo ou crescimento em resposta ao toque, permite que as razes cresam ao redor de rochas e responsvel pela capacidade das partes areas subirem sobre outras plantas ou estruturas de suporte. Veremos que a curvatura em resposta luz ou gravidade resulta da redistribuio lateral da auxina. Veremos tambm os mecanismos celulares envolvidos na formao dos gradientes laterais de auxina durante a curvatura. O tigmotropismo pouco conhecido embora envolva tambm gradiente de auxina.

1) Fototropismo
Este fenmeno, anteriormente chamado de heliotropismo (resposta luz provinda do sol), acarreta em curvatura da planta, por meio de crescimento diferencial, determinada pela luz., sendo largamente distribudo no reino vegetal. Durante o final do sculo XIX, no ano de 1880, Charles Darwin e seu filho Francis estudaram maciamente os fenmenos do crescimento vegetal envolvendo tropismos, especialmente os fototropismos. Em alguns experimentos, os Darwins utilizaram plntulas de alpiste (Phalaris canariensis), nas quais, como em muitas outras gramneas, as folhas mais jovens so revestidas por um rgo protetor chamado de coleptilo, sendo estes muito sensveis luz, em especial luz azul. Em suas pesquisas, pai e filho verificaram que se os coleptilos fossem iluminados unilateralmente com um pulso curto de luz azul fraca, eles se curvavam (cresciam) em direo fonte de luz, em uma hora e, assim, constataram que o pice do coleptilo percebia a luz, porm tal fato no acontecia se a ponta fosse seccionada ou recoberta por um anteparo opaco (papel alumnio, por exemplo). Quando o recobrimento era feito abaixo da ponta, o fototropismo ainda era observado (Figura 1). No entanto, aumentada a intensidade luminosa, a percepo tambm ocorria fora do pice. Ou seja, este mais sensvel, respondendo mesmo em intensidade luminosa baixa.

Figura 1. Fototropismo em coleptiles de aveia desenvolvidos no escuro e depois iluminados lateralmente conforme a seta. As plantinhas com pice cortado ou coberto (B e C) permaneceram retas, e aquelas mantidas intactas (A) ou com seus pices expostos (D) curvaram-se em direo luz. Extrado de KERBAUY, 2004.

A sensibilidade luz expressa intrinsecamente a relao entre dose e resposta, por meio da qual pode-se aplicar a lei da reciprocidade, segundo a qual a resposta proporcional durao da exposio, e a energia ou fluxo fotnico (taxa de fluncia). Ento, o fluxo e durao criam uma reciprocidade entre si; um aumentando, o outro pode diminuir. Isso parece ser verdadeiro para a resposta de primeira ordem (resposta inicial, mais efmera), dentro de certos limites. As respostas de curvatura de segunda ordem (que surgem aps exposies mais prolongadas) so mais duradouras e dependem da durao e da taxa de fluncia de forma cumulativa, de modo a haver saturao dos receptores (Figura 2).

Figura 2. A curva tpica de resposta fluncia para o fototropismo. A1. Pequeno gradiente de p (receptor) causa leve curvatura no pice; A2. Intenso gradiente de p junto ao pice causa curvatura mxima; A3. Ausncia de gradiente de p, no pice e base, curvatura ausente; A4. Curvatura acentuada para um gradiente devido intensa iluminao por tempo longo. B. Modelo de fosforilao para a primeira curvatura positiva (baixa intensidade de fluncia), zona neutra, e a segunda curvatura positiva (como em A4). Extrado de KERBAUY, 2004. As concluses dos experimentos levaram a crer que algum tipo de sinal era produzido no pice, deslocava-se at a zona de crescimento, ocasionando o crescimento mais rpido do lado sombreado do que o lado iluminado. Os resultados desses experimentos foram publicados em 1881, em um livro notvel, intitulado de Power of Moviment in Plants. Aps esta descoberta, seguiu-se, ento, um extenso perodo de contnuas experimentaes envolvendo a essncia do estmulo do crescimento em coleptilos que culminaram com a demonstrao, por Cholodny, com pices de razes e Went, com pices de coleptilos de aveia (Avena sativa), da presena de um composto promotor de crescimento. J havia sido demonstrado que se a extremidade do coleptilo fosse retirada, o crescimento desses rgos cessava. Anteriormente certos pesquisadores tentaram isolar e identificar esse composto, macerando os coleptilos e testando a atividade dos extratos, porm seus experimentos fracassaram diante do fato que, durante a macerao, havia a liberao, no extrato, de substncias inibidoras. Sabendo desta limitao Cholodny e Went evitaram, em suas pesquisas, a etapa da macerao, permitindo que o composto promotor de crescimento se difundisse dos pices removidos de coleptilos diretamente em blocos de gelatina. Se colocados assimetricamente sobre um coleptilo decapitado, tais blocos poderiam ser testados quanto sua capacidade de provocar curvatura na ausncia de uma fonte de luz unilateral. Pelo fato de promover o crescimento das sees de coleptilo, essa substncia foi chamada de auxina, termos originrios do grego auxein,

cujo significado aumentar ou crescer. Dos resultados obtidos postulou-se a hiptese de Cholodny-Went que diz que a iluminao unilateral induz a redistribuio da auxina endgena nas proximidades do pice. Essa assimetria na distribuio da auxina mantida nessas condies, no transporte baspeto desse fitohormnio, observado na regio de alongamento. As clulas do lado sombreado receberiam mais auxina, estimulado o crescimento na parte area e causando inibio deste nas razes (Figura 3).

Figura 3. A auxina transportada para a regio inferior da extremidade do coleptilo de aveia posicionado horizontalmente. (A) A auxina das metades superiores e inferiores de um pice na posio horizontal difunde-se em dois blocos de gar. (B) O bloco de gar da metade inferior (esquerda) induz uma curvatura maior no coleptilo decapitado do que o bloco de gar da metade superior (direita). Extrado de Taiz & Zeiger, 2004. Alternativamente, foi proposto que, no lado mais iluminado, haveria maior destruio das auxinas pela AIA-oxidase, que seria fotodependente. Concebida quase que concomitantemente a teoria de Cholodny-Went, surgiu, com pouqussimos adeptos, uma hiptese alternativa sugerida por Blaauw, a qual props que a produo ou liberao de um inibidor de crescimento no lado mais iluminado limitaria ou impediria o crescimento celular. Mais recentemente esta hiptese foi retomada por Pilet e colaboradores. na Frana, que sustentaram o fato que existe um gradiente entre a parte iluminada e a menos iluminada, com mais inibidor de crescimento (cido abscisico) em maior concentrao no lado mais iluminado. Briggs e colaboradores., repetiram cuidadosamente alguns experimentos de Went utilizando coleptilos de milho, demonstrando a ocorrncia de dois fenmenos na distribuio da auxina: (1) havia distribuio assimtrica do fitohormnio, se o pice no fosse totalmente isolado; (2) a quantidade total de fitohormnio no lado mais iluminado, comparada com a da parte menos iluminada, era a mesma, se o pice fosse totalmente fendido (Figura 4).

Figura 4. Evidncia de que a redistribuio lateral da auxina estimulada pela luz unidirecional em coleptilos de milho. Extrado de Taiz & Zeiger, 2004. Alm disso, Cholodny e Went, constataram que a iluminao com radiao azul, poderia ser compensada colocando-se um bloco de gar com auxina do lado no iluminado (Figura 5). H evidncias bioqumicas e fisiolgicas de que a FALVOPROTENA (fototropinas 1 e 2) com 116KDa associada membrana plasmtica (NPH1) so os fotorreceptores para fototropismo, sendo responsvel pelas respostas fototrpicas no comprimento de onda azul. Nessa faixa do espectro, ocorre autofosforilao das flavoprotenas, o que induz o deslocamento da auxina para o lado mais sombreado do coleptilo, garantindo as respostas de curvatura. Foi demonstrado, tambm, que a iluminao com luz azul unilateral causa um gradiente de fosforizao da NPH1, e esse gradiente de concentrao do receptor de incio maior junto ao pice. A continuidade por mais tempo do estmulo e/ou maior intensidade provoca o aparecimento do receptor fosforilado mais distante do pice, sendo essa condio a mais comum na natureza.

Figura 5. Experimentos de F. Went. A. A extremidade dos coleptiles foram removidos e colocados por 1 hora sobre blocos de gar. B. O gar, aps retirada dos pices de coleptiles, foi cortado em pequenos pedaos e colocados assimetricamente sobre o coleptile no induzido. C. Curvatura do pice para o lado oposto ao pedao de gar. Os experimentos foram conduzidos no escuro, e a curvatura do coleptile decapitado deu-se semelhana daqueles intactos iluminados lateralmente. Concluso chegada por Went: era qumico o fator que provocava o encurvamento, e este se acumulava no lado oposto ao iluminado. Extrado de KERBAUY, 2004.

2 ) Gravitropismo ou Geotropismo
Este fenmeno, anteriormente denominado de geotropismo, consiste na resposta de crescimento na qual a planta se orienta em relao ao vetor gravidade. Normalmente, as razes orientam-se positivamente em relao ao estmulo gravidade, permitindo a ancoragem da planta ao solo, facilitando, desta forma, a absoro de gua e nutrientes. A parte area, por sua vez, responde negativamente ao estmulo, tornando possvel assim a captura mais eficientemente da energia radiante necessria para a realizao e/ou controle de fenmenos essenciais ao desenvolvimento, entre eles a fotossntese.

O sentido do crescimento dos rgos pode ser uma medida classificatria destes em relao gravidade. Assim, existem rgos como estoles, rizomas e galhos laterais que crescem em ngulo reto fora da gravidade e so denominados de diagravitrpicos (Figura 6) e outros que crescem em ngulos diferentes de 0 ou 90, como muitas razes secundrias, denominados de plagiogravitrpicos (Figura 7). Ao contrrio da temperatura, ventos e quantidade de insolao, a fora da gravidade constante num mesmo local. Assim, um balizador muito regular do desenvolvimento, e as plantas encontram-se bem adaptadas a este estmulo. Isso induz a pensar que as plantas devem ter percepo da fora da gravidade.

Figura 6. Araucaria angustifolia no sul do Brasil, na qual se pode observar o diagravitropismo dos galhos. Extrado de KERBAUY, 2004.

Figura 7. Diagrama ilustrando os vrios tipos de respostas gravitrpicas em plantas. Extrado de KERBAUY, 2004.

A percepo da gravidade em razes ocorre por meio dos estatlitos, descritos inicialmente para os crustceos e identificados nas plantas como gros de amido encerrados na regio da coifa em amiloplastos, junto ao pice meristemtico. A idia que os gros sedimentar-se-iam junto s membranas no lado inferior das clulas (estatcitos), e este seria o sinal gravimtrico para o desenvolvimento. Isso explicaria as observaes feitas anteriormente por Darwin de que razes com pontas seccionadas no respondiam fora da gravidade. Essa teoria foi contestada mais tarde, pois, em plantas deixadas no escuro, nas quais o amido era consumido, ainda assim ocorriam reaes gravitrpicas. Em mutantes de Arabiclopsis deficientes na formao de gros de amido, observou-se que ocorriam reaes fora da gravidade, embora em intensidade menor, graas ao movimento dos cloroplastos (Figura 8). A frmula que expressa a estimulao gravitacional envolve o produto entre a intensidade do estmulo e o tempo de aplicao, sendo a dose limiar dependente da temperatura. Outros parmetros se tornam interessantes quando se definem graviestmulos, so eles: tempo de apresentao, tempo de reao e intensidade limiar.

Figura 8. A percepo da gravidade pelos estatcitos em Arabidopsis. (A) Electromicrografia da extremidade da raiz, apresentando o meristema apical (M), a columela (C) e as clulas perifricas (P). (B) Vista ampliada da clula da columela, indicando os amiloplastos sedimentados sobre o retculo endoplasmtico na base da clula. (C) Diagrama das muda que ocorrem durante a reorientao da posio vertical para a horizontal. Extrado de Taiz & Zeiger, 2004. .

O tempo de apresentao a durao mnima do estmulo para induzir a curvatura, sendo, tambm, funo da temperatura. Este conceito no deve ser confundido com o tempo de reao, pois, at haver a transduo da seqncia de sinais, pode ocorrer um tempo bem maior. Para o coleptilo de milho, o tempo mnimo de apresentao foi de 9 segundos, mas o incio visvel da curvatura s se iniciou aps 210 segundos. A intensidade limiar varia de planta para planta e de rgo para rgo. As razes so cerca de 10 vezes mais sensveis que a parte area. As etapas de transduo e resposta do gravitropismo positivo apresentado pela maioria das razes esto vinculadas distribuio de um inibidor (Figura 9), o qual se torna mais concentrado do lado inferior da raiz. Dois fitohormnios prevalecem, AIA e ABA. Embora o ABA possa inibir o crescimento das razes, a concentrao necessria encontrada experimentalmente foi de 100 a 1.000 vezes maior do que a ocorrente nas razes que respondem fora da gravidade. Outros pesquisadores clamam por uma interao entre AIA e ABA. Porm, as evidncias mais fortes apontam para o AIA, que nas razes funcionaria como inibidor do crescimento do lado inferior. A remoo da ponta da raiz, com colocao de um bloquinho de gar contendo AIA no lado inferior da raiz posicionada horizontalmente, provoca encurvamento semelhante ao da raiz intacta (Figura 10).

Figura 9. Experimentos de microcirurgia demonstrando que a coifa produz um inibidor que regula o gravitropismo da raiz. Extrado de Taiz & Zeiger, 2004.

Figura 10. A. pice de raiz intacta de uma plantinha em posio normal vertical. B. Colocada na posio horizontal, quando intacta, apresenta gravitropismo; quando secionada, no apresenta. C1. Razes com a ponta secionada na qual se adicionou um bloco de gar com AIA. C2. gar sem AIA; no houve reao. C3. Bloco sem AIA colocado no lado de cima, sem reao. D1. Curvatura da raiz, apesar de secionada, pela adio assimtrica do bloquinho de gar com AIA. D2 e D3. No foi observada nenhuma reao. Extrado de KERBAUY, 2004. O lado inferior da raiz intacta, depois de a planta permanecer certo tempo na posio horizontal, mais cido do que o lado superior, e sabe-se que o crescimento de paredes depende de uma maior acidez, na qual est envolvido o efeito da auxina. Alm do gradiente diferencial de auxina, supe-se que tambm o on clcio (Ca+2) parece estar envolvido nas respostas gravitrpicas. Da mesma forma que os blocos com auxina colocada assimetricamente substituem a ponta da raiz seccionada, gar com ons de Ca+2 podem provocar o mesmo efeito. A explicao evocada de que os estatlitos depositados sobre as membranas, como as do retculo endoplasmtico, a plasmtica e mesmo as dos vacolos, alterariam a permeabilidade destas e provocariam a entrada de grande quantidade de clcio no citoplasma. Os ons clcio complexar-se-ia com a calmodulina, ativando vrias enzimas, tendo como expresso morfognica final a curvatura da ponta da raiz para baixo por crescimento inibido na parte inferior, mas no na parte superior. Caules e coleptilos apresentam, em geral, gravitropismo negativo. Essa manifestao de gravitropismo negativo pode ser facilmente verificada, colocando-se na horizontal uma planta envasada. Este experimento deve ser realizado no escuro, a fim de evitar mascaramento dos resultados por influncias fototrpicas. Aps 24 a 48 horas, poder se observar que o caule assume uma posio ereta a partir de uma poro mediana (Figura 11).

Figura 11. Gravitropismo em plantinhas e milho (Zea mays), colocadas, aos 4 dias de idade, na posio horizontal por 3 horas. Na parte area, observa-se o gravitropismo negativo, enquanto na raiz ele positivo. Extrado de KERBAUY, 2004. Nos caules adultos, coleptilos e hipoctilos os lados de percepo e resposta so os mesmos, inclusive sob condies de remoo do pice. De fato, no tecido parenquimtico perivascular, encontram-se gros de amido que desempenham um papel de estatlitos, sendo clulas desse tecido os estatocistos do sistema. No tecido perivascular dos coleptilos e dos hipoctilos, tambm podem ser encontrados esses estatocistos. As etapas de transduo e resposta gravitrpicas indicam que as auxinas mover-se-iam para a parte inferior do caule colocado na posio horizontal, promovendo o crescimento nesse lado, similaridade do modelo de Cholodny Went . Porm, existem crticas dessa interpretao, j que as respostas so muito rpidas para haver tempo de migrao do fitohormnio, e nem sempre parece que se estabeleceriam gradientes entre a parte superior e a inferior. Uma das explicaes encontradas de que o gradiente se estabeleceria nos tecidos epidrmicos, mais sensveis s auxinas, pouco influenciando os tecidos das camadas mais internas, o que dificultaria a deteco dos gradientes. Outra coincidncia em favor das auxinas que, usando-se inibidores de transporte de auxinas, o crescimento foi inibido e no houve respostas gravitrpicas. H evidncias de que outros fitohormnios, como giberelinas e etileno, poderiam estar envolvidos no processo. Assim, tecidos tratados com AVG (amino-etoxivinilglicina), inibidor de produo de etileno, no apresentaram respostas gravitrpicas negativas. No entanto, respostas ao etileno no so gerais, ou

no puderam ser evidenciadas para hipoctilos de tomateiro. H evidncias experimentais de que poderia haver mais sensibilidade ou maior quantidade de receptores capazes de ligar auxina na parte inferior do caule deitado do que na parte superior, alm de que o on clcio (Ca+2) seria mais abundante na parte superior. Sabe-se que esse on inibe o crescimento. O que se pode observar que as respostas gravitrpicas negativas num caule acontecem por um maior crescimento das clulas no lado inferior, enquanto as do lado superior no crescem ou at so amassadas pela distenso e mudana de direo do crescimento do caule.

3) Tigmotropismo
a curvatura orientada em relao a um excitante de contato (Figura 12). Apresentam este tropismo as gavinhas que, a princpio, apresentam crescimento normal. Elas so dotadas de um pequeno gancho na sua extremidade; com crescimento da gavinha, esse ganchinho pode encontrar um suporte qualquer onde se prende; isto causa uma irritao que produz retardamento do crescimento do lado excitado ao passo que o lado oposto aumenta seu crescimento, acarretando um enrolamento da gavinha no suporte. A desigualdade de crescimento iniciada pela excitao da gavinha dura certo tempo; se a irritao no for repetida a curvatura se desfaz, crescendo agora o lado excitado mais do que o oposto que, agora, retarda seu crescimento. possvel que a reao seja similar ao gravitropismo, ou seja, que envolva fitohormnios, ons clcio e calmodulina. As curvaturas apresentadas pelas gavinhas so verdadeiras molas que fixam a planta ao suporte de um modo bem elstico. Apresentam o tigmotropismo as gavinhas do chuchu, da uva, do maracuj, etc...

Figura 12. Gavinhas de Cucumis anguria. A curvatura foi causada por diferentes taxas de crescimento entre os lados interno e externo da gavinha, provocando o enrolamento do rgo. Extrado de KERBAUY, 2004.

4) Quimiotropismo
a curvatura orientada em relao a uma substncia qumica. Exemplo tpico o crescimento do tubo polnico em direo ao vulo nas flores, direcionamento esse induzido por arabinogalactanos, glicoprotenas e lipoprotenas, alm de um potencial eletroqumico produzido por ons potssio (K+). A real natureza desse quimiodirecionamento a partir do ovrio ainda controversa, mas certamente essencial para o fenmeno da fertilizao. Outro exemplo prtico a atrao das hifas dos fungos por substncias nutritivas.

5) Hidrotropismo
Quando o quimiotropismo se refere gua chama-se hidrotropismo que pode ser: positivo como no caso das razes e negativo no caso dos fungos que, durante a frutificao, abandonam o substrato mido. Observvel em razes, particularmente de plantas lenhosas arbreas, as quais investem mais fitomassa no crescimento de razes localizadas em regies do solo onde o potencial hdrico menos negativo, ou seja, onde mais fcil a absoro de gua para funcionamento da planta, respondendo s perdas hdricas.

6) Aerotropismo
Quando se refere ao oxignio o quimiotropismo toma a denominao particular de aerotropismo como apresentam as razes respiratrias que, saindo da terra, procuram oxignio atmosfrico.