2 REUNIO TCNICA ESTADUAL DE PLANTAS BIOATIVAS

Veridiana Krolow Bosenbecker

Efeito de leos essenciais de plantas bioativas no controle de fitopatgenos

Veridiana Krolow Bosenbecker

1. INTRODUO SISTEMAS DE PRODUO

CONVENCIONAL
* Controle radical de pragas e doenas agrotxicos * Efeitos negativos ao homem e ao meio ambiente * Desequilbrios desbalano nutricional da planta desbalano nutricional do solo dimunui inimigos naturais * Apresenta sinais de esgotamento e insustentabilidade

 SISTEMAS DE BASE ECOLGICA * Alimentos mais saudveis * Demanda de menos insumos * Utiliza mo-de-obra familiar * Rendimento equivalente ao sistema convencional * Mantm o meio ambiente equilibrado * Requer maiores conhecimentos cientficos * Sustentabilidade na propriedade * Socialmente mais justa

Uso de plantas bioativas no controle de doenas

Alternativa para o controle de doenas nos sistemas de produo de base ecolgica

Os diferentes compostos presentes nas plantas bioativas podem apresentar propriedades: * Fungicida (carvacrol, terpenos) * Bactericida (timol, 1,8-cineol) * Anti-sptica (cnfora, linalol) * Nematicida (carvacrol, timol) * Herbicida (borneol, terpinen-4-ol) * Insetfuga (mirceno, linalol)

Estes compostos podem atuar como: * Antimicrobianos * Repelentes ou atraentes de insetos * Inibidores de germinao * Inibidores de crescimento * Ativar mecanismos de defesa das plantas * Ativar mecanismos de induo de resistncia doenas

PLANTAS BIOATIVAS MAIS UTILIZADAS NOS EXPERIMENTOS Camomila (Matricaria chamomilla L.)

Alecrim (Rosmarinus officinalis L.)

Alfazema (Lavandula angustifilia Mill.)

Manjerico Ocimum basilicum L.

Funcho (Foeniculum vulgare Mill.)

Hortel (Mentha spicata L.)

Capim-limo (Cymbopogon citratus (DC) Stapt)

OBTENO DOS LEOS ESSENCIAIS

Flores de camomila Extrator de Clevenger

OBTENO DOS LEOS ESSENCIAIS

leo essencial em frasco mbar leo essencial de camomila

Experimentos realizados com leos essenciais de plantas bioativas

BATATA REQUEIMA (Phytophthora infestans)
* Doena de ciclo curto e rpido * Exige at 30 pulverizaes/ciclo * Pode causar perda de 100% da produo * Causa leses nos tubrculos apodrecimento * Controle por agrotxicos

Sintomas de Requeima

EFEITO DE LEOS ESSENCIAIS DE PLANTAS BIOATIVAS NO CONTROLE DE Phytophthora infestans EM BATATA

1. OBJETIVOS
a) Avaliar o efeito fungicida e fungisttico de 10 leos essenciais de plantas medicinais sobre o crescimento micelial e a esporulao de P. infestans in vitro; b) Estudar o potencial in vitro dos diferentes leos essenciais no controle de P. infestans sob condies de telado em diferentes cvs. de batata, relacionando-se a severidade da doena com a produo e atividades enzimticas de algumas enzimas de resistncia da planta.

2. MATERIAL E MTODOS
Espcies de plantas bioativas utilizadas nos ensaios in vitro.
NOMENCLATURA POPULAR NOMENCLATURA CIENTFICA FAMLIA PARTE UTILIZADA

Alecrim Alfazema Alho Camomila Capim-limo Eucalipto Hortel Marcela Manjerico Organo

RosmarInus officinalis L. Lavandula angustifilia Mill. Allium sativum L. Matricaria chamomilla L. Cymbopogon citratus (DC) Stapf. Eucalyptus globulus Labill. Mentha spicata L. Achyrocline satureioides (Lam.) DC Ocimum basilicum L. Origanum vulgare L.

Lamiaceae Lamiaceae Liliaceae Asteraceae Poaceae Myrtaceae Lamiaceae Asteraceae Lamiaceae Lamiaceae

Folhas Folhas Bulbos Flores Folhas Folhas Folhas Flores Folhas Folhas

Experimento 1 - Efeito de leos essenciais de plantas bioativas sobre o crescimento micelial e esporulao de Phytophthora infestans
leo essencial (100 ppm) Meio de Cultura + leo essencial (20mL)

Disco de miclio de P. infestans (5mm)

* Utilizadas 10 placas / tratamento * Testemunha: meio de cultura puro * Dispostas ao acaso em BOD * Fotoperodo de 12h * Temperatura 17C AVALIAES Crescimento micelial Dimetro medido a cada 48h (mm), por 16 dias Nmero de esporngios 3 discos miclio + 3mL gua + 1gota Tween 80 Agitar 30 Contagem cmara de Neubauer

3. RESULTADOS
Tabela 2 Efeito de diferentes leos essenciais sobre o crescimento micelial e nmero de esporngios de P. infestans in vitro.
TRATAMENTOS DIMETRO DAS COLNIAS (mm) REDUO DO CRESCIMENTO (%) NMERO DE ESPORNGIOS

Alho Testemunha Alecrim Marcela Eucalipto Alfazema Manjerico Capim-limo Organo Hortel Camomila

723 673 632 439 389 354 329 277 273 268 138

A A A B B B B C C C D

+ 7,43 - 6,09 - 34,77 - 42,20 - 47,40 - 51,11 - 58,84 - 59,43 - 60,18 - 79,49

1,50.104 2,00.104 1,18.104 9,43.103 1,36.104 1,25.104 5,65.103 1,91.103 4,21.103 2,53.103 0

A A A A A A B B B B C

Mdias seguidas pela mesma letra, na mesma coluna, no diferem entre si pelo teste de Scott & Knott ( = 0,05%).

Crescimento micelial de P. infestans em meio de centeio contendo os leos essenciais de camomila, alecrim, marcela, eucalipto, alho, hortel, capim-limo, organo, alfazema, manjerico e testemunha sem adio de leo (controle).

Experimento 2. Avaliao do efeito sistmico

de diferentes leos essenciais sobre a colonizao e esporulao de P. infestans em discos foliares de batata
5 discos foliares/placa em suspenso com 100 ppm de leo essencial

Folhas de batata: Baronesa Bintje Eliza 15L de suspenso (3.104 esporngios.mL-1)/folha

* Utilizadas 4 placas / tratamento * Controle positivo: apenas suspenso Controle negativo: suspenso + 100ppm metalaxil * Dispostas ao acaso em BOD * Fotoperodo de 16h * Temperatura 17C AVALIAES Colonizao Escalas de notas Nmero de esporngios 1 disco foliar + 5mL gua + 1gota Tween 80 Agitar 30 Contagem cmara de Neubauer

RESULTADOS
Tabela 3 - Porcentagem de colonizao e nmero de esporngios/disco de folhas das cvs. Baronesa, Bintje e Eliza submetidos a diferentes leos essenciais.
TRATAMENTOS CULTIVARES

Baronesa
% de colonizao N de esporngios

Bintje
3 3 3 2 2

Eliza
4 3

% de colonizao

N de esporngios

% de colonizao

N de esporngios

Testemunha Alho Alecrim Marcela Manjerico Alfazema Metalaxil Hortel Organo Eucalipto Capim-limo Camomila

48,00 A 46,67 A 18,67 B 17,33 B 7,67 C 4,17CD 2,00 D 1,50 D 1,50 D 1,33 D 1,00 D 0,83 D

5,50.10 A 5,61.10 A 3,61.10 B 9,57.10 D 6,73.10 DE 8,10. 10 DE 3,33.10 EF

2 2 2,33.10 EF 2 2

48,67 A 34,50 B 34,33 B 26,17 B 12,33 C 7,67 CD 13,33 C

1,32.10 A 7,67.10 B 4,7.10 C 3,66.10 C 3,19.10 C 3,82.10 C 2,23.10 D 4,33.10 D

2 2,23.10 D 3 2 2 3 3 3 3

46,67 A 17,83 B 13,67 B 11,83 B 16,00 B 3,00 C 1,17 C 1,33 C 1,83 C 0,67 C 1,00 C 1,00 C

9,46.10 A 4,34.10 B 2,86.10 C 2,38.10 CD 1,32.10 D 1,66.10 D 3,07.10 E 2,73.10 E

2 3,33.10 E 3 2 2 2 3 3 3 3 3

4,73.10 DEF 2,00 E 2,50 DE 2,50 DE

3 2 2

2,25.10 C

4,24.10 C 4,97. 10 D 1,40.10 D

2 2

1,47.10 D 3,33.10 E 0,83. 10 E

2

3,30.10 DEF 1,50 E 1,93.10 F 1,67 E

Mdias seguidas pela mesma letra, na mesma coluna, no diferem entre si pelo teste de Duncan ( = 0,05%).

Colonizao de P. infestans em discos foliares de diferentes cvs. de batata na presena de diferentes leos essenciais (A=testemunha cv. Bintje, B=testemunha cv. Baronesa, C=testemunha cv. Eliza, D= camomila cv. Bintje, E=camomila cv. Eliza, F=organo cv. Eliza, G=organo cv. Bintje, H=horel cv. Baronesa, I=hortel cv. Eliza, J=cidreira cv. Eliza, K=cidreira, cv. Baronesa e L=eucalipto cv. Baronesa).

Experimento 3 - Efeito de leos essenciais de plantas bioativas no controle de P. infestans em diferentes cultivares de batata sob condies de telado
leos essenciais selecionados: camomila, capim-limo e organo Plantas de batata em vasos 45 dias aps plantio: pulv. c/ leos essenciais 72h aps a pulv.: inoculao 3.104esporngios.mL-1 Pulv. a cada 7 dias 5 pulv. Testemunha: pulv. c/ suspenso 15 repeties/tratamento Plantas dispostas ao acaso

AVALIAES
Avaliao da requeima
Escala de notas Reifschineider (1987) 5 avaliaes a cada 5 dias Clculo da AACPD (Maffia, 1986) Mdias comparadas Duncan a 5%

Avaliao da produo
N e massa de tubrculos Mdias comparadas Duncan a 5%

 Anlises de enzimas
1 coleta: antes da 1 pulv. com leos 2 coleta: 48h aps 2 pulv. Polifenol oxidase (PFO) Metodologia de Hyodo & Yang (1971) modif. Campos et al.(2003) Leitura a 395m Peroxidase (PO) Metodologia deMatsuno & Uritani (1972) modif. Campos et al.(2003) Leitura a 450m Correlao entre PFO e PO e AACPD (Statpak)

RESULTADOS
AVALIAO DA SEVERIDADE DA REQUEIMA (AACPD)
Tabela 4 rea abaixo da curva do progresso da doena (AACPD) de P. infestans em trs cvs. de batata Eliza pulverizadas com os leos essenciais de capim-limo, camomila e organo.
CULTIVARES Baronesa Bintje Eliza LEOS ESSENCIAIS Controle1 Camomila Capim-limo Organo 1797,83 A* a** 1844,98 A a 1847,38 A a 1699,26 A a 1788,33 A a 1749,20 AB a 1817,43 A a 1587,60 B b 816,35 A b 553,13 B b 722,94 A a 853,58 A a

*Mdias seguidas pela mesma letra, na mesma linha no diferem entre si pelo teste de Duncan ( = 0,05%).**Mdias seguidas pela mesma letra, na mesma coluna no diferem entre si pelo teste de Duncan ( = 0,05%). 1- Pulverizao com gua.

AVALIAO DA PRODUO
Tabela 5 Valores do nmero de tubrculos por planta e da produo em gramas por planta das cvs. Baronesa, Bintje e Eliza ppulverizadas com os leos essenciais de camomila, capim-limo e organo.
TRATAMENTOS Baronesa
N tub/pl g/planta

Cultivares Bintje
N tub/pl g/planta

Eliza
N tub/pl G/planta

6,11 a 111,16 a 9,08 a 88,77 ab 5,65 a 137,96 a 3,76 b 77,47 a 7,99 a 81,13 b 5,43 a 132,65 a 5,28 ab 77,30 a 7,77 a 128,97 a 4,32 a 115,63 a 6,03 a 79,55 a 7,70 a 74,73 b 5,66 a 141,19 a Mdias seguidas pela mesma letra, na mesma coluna, no diferem entre si pelo teste de Duncan ( = 0,05%).

Camomila Capim-limo Organo Testemunha

AVALIAO DAS ENZIMAS

Tabela 6 - Valores das isoenzimas peroxidase (PO) e polifenol oxidase (PFO) em EU.min-1.mg-1.tecido nas cvs. de batata Baronesa, Bintje e Elizapulverizadas com os leos essenciais de camomila, capim-limo e organo.
TRATAMENTOS

PFO inicial
269,68 195,42 228,28 329,54 281,31 243,78 309,02 187,42 250,86 253,66 328,35 253,66

PFO Final 305,33 285,33 176,00 238,67 182,00 357,33 385,33 196,00 206,67 468,00 600,00 468,00

INCREMENTO

PO inicial 477,01 386,64 543,12 482,81 507,47 304,39 254,18 272,53 461,30 596,15 681,09 596,15

PO Final 4227,56 5006,22 1512,89 4622,22 1365,33 5290,67 4720,89 2542,22 2371,56 5456,89 3400,89 5456,89

INCREMENTO 3483,55 4619,58 969,77 4139,41 857,86 4986,28 4466,71 22,69,69 1910,35 4860,74 2719,8O 4860,74

Baronesa controle Baronesa camomila Baronsa capim-limo Baronesa organo Bintje controle Bintje camomila Bintje capim-limo Bintje organo Eliza controle Eliza camomila Eliza capim-limo Eliza organo

+ 35,65 + 89,91 - 52,28 - 90,87 - 99,31 + 113,55 + 76,31 + 8,51 - 44,19 + 214,34 + 271,65 + 214,34

Mdias seguidas pela mesma letra, na mesma coluna, no diferem entre si pelo teste de Duncan ( = 0,05%).

ANLISE DE CORRELAO ENTRE AACPD E AS ENZIMAS PFO E PO Os incrementos de PFO e de PO obtidos foram correlacionados com os valores de severidade da doena (STATPAK, 1986), verificou-se correlao negativa entre os valores de severidade (AACPD) e os valores de PFO (R2 = 0,61 e P <0,05). Para a correlao. isoenzima PO, no houve

4. CONCLUSES
Os leos essenciais de manjerico, capim-limo, organo, hortel e camomila inibiram o crescimento micelial e a formao de eporngio de P. infestans in vitro; Os leos essenciais de camomila, hortel, organo, capim-limo, manjerico, alfazema, eucalipto, marcela e alecrim afetam a colonizao e a formao de esporngios de P. infestans, sob discos foliares de batata; A pulverizao de folhas de batata com leos essenciais de camomila e organo reduz a severidade da requeima nas cvs. Eliza e Bintje, respectivamente;

 A pulverizao da folha de batata com o leo essencial de organo promove aumento da produo, entretanto, este incremento est associado a cv. utilizada; Os valores de severidade de P. infestans em plantas de batata pulverizadas com os leos essenciais de organo e camomila esto negativamente correlacionados com os respectivos nveis da enzima de resistncia PFO.

Efeito de leos essenciais de plantas bioativas no controle de P. infestans em diferentes cultivares de batata sob condies de campo (junho/2006)

Vista do ensaio conduzido sob condies de campo avaliando o efeito de leos essenciais de plantas bioativas no controle de P. infestans.Testemunha (esquerda); leos essencial de camomila (direita).

EFEITO DE LEOS ESSENCIAIS DE PLANTAS BIOATIVAS NO CONTROLE DE M. javanica (Treub) Chitwood EM BATATA

 NEMATIDE DAS GALHAS (Meloidogyne javanica)

* Afeta a absoro de nutrientes

* Altera a fisiologia da planta * Antecipa a senescncia da planta * Provoca estresses ambientais * Predisposio a outras doenas * Deprecia o tubrculo * Controle feito por agrotxicos

Sintomas de M. javanica

1. OBJETIVOS
a) Estudar o potencial nematicida e nematosttico in vitro de leos essenciais das plantas bioativas funcho e hortel sobre a ecloso de ovos e mortalidade de juvenis de segundo estgio de M. javanica; b) Avaliar o potencial nematicida in vivo destes mesmos leos essenciais no controle de M. javanica em plantas de batata, casa de vegetao.

Experimento 1. Efeito de leos essenciais de funcho e hortel sobre a mortalidade de juvenis de segundo estgio de M. javanica

Peneirado (500 meshes)

Razes de tomateiro

NaCl 0,1%

Teste de ecloso

Teste de mortalidade

Teste de mortalidade
A

10l

20L

60L PBS

10l de DMSO + 10l de leo essencial

10l de A + 90l de gua

30 J2 em 20L de gua/cavidade

Incubao por 24 h a 25C

3 Repeties (30 J2/cavidade) Testemunhas: gua destilada gua destilada + DMSO 2% em PBS

AVALIAO
Aps 24h: Adio de 10L de NAOH 1N Contagem de J2 mortos Transformao em % Comparao pelo teste Duncan a 5%

Teste de ecloso
B
20L 60L PBS

30 ovos em 20L de gua/cavidade

Incubao por 11 dias a 25C

3 Repeties (30 ovos/cavidade) Testemunhas: gua destilada gua destilada + DMSO 2% em PBS

AVALIAO
Aps 11 dias: Contagem de ovos eclodidos Transformao em % Comparao pelo teste Duncan a 5%

3.RESULTADOS
MORTALIDADE DE JUVENIS E ECLOSO DE OVOS DE M. javanica
Tabela 1 - Efeito in vitro dos leos essenciais de hortel e funcho sobre as porcentagens de mortalidade de juvenis e ecloso de ovos de M. javanica.
TRATAMENTOS Funcho Hortel DMSO (controle) gua (controle) Mortalidade de M. javanica (%) 90,49 a* 86,34 ** 80,30 b 7,46 c 4,15 c 76,15 Ecloso de ovos de M. javanica (%) 40,19 b* 51,69 ** 34,80 b 64,35 ab 77,74 a 44,76

* Mdias seguidas pela mesma letra, na mesma coluna, no diferem entre si pelo teste de Duncan ( = 0,05%). ** Percentagem de J2 de M. javanica mortos ou ovos eclodidos em relao a testemunha em gua.

Experimento 2. Avaliao do potencial dos leos essenciais de funcho e hortel no controle de M. javanica em plantas de batata 2. MATERIAL E MTODOS
Casa

de vegetao Plantas de batata em vasos com solo esterilizado 30 dias aps plantio: pulv. c/ leos essenciais na parte area ou solo a cada 7 dias 37 dias aps plantio: inoculao c/ 5000 ovos M. javanica 6 plantas /tratamento dispostas inteiramente ao acaso

AVALIAES
40 dias aps inoculao: * n de galhas nas razes Razes processadas Hussey & Barker (1973) mod. Boneti & Ferraz (1980) * n ovos/planta * populao final * n e massa dos tubrculos * massa das razes
Valores comparados Duncam a 5%

3. RESULTADOS
NMERO DE GALHAS, FATOR DE REPRODUO, POPULAO FINAL E % DE REDUO DA POPULAO FINAL
Tabela 2 Efeito dos leos essenciais de hortel e funcho sobre o nmero de galhas formado, fator de reproduo, populao final (PF) e porcentagem de reduo da populao de M. javanica em plantas de batata cv. Eliza.
TRATAMENTOS Controle Hortel (parte area) Hortel (solo) Funcho (parte area) Funcho (solo) N de galhas 190,04 a* 84,57 ab 82,75 ab 76,81 ab 33,54 b Fator Reproduo 1,40 a 1,16 a 1,03 a 0,19 b 0,56 ab (PF) 6468,91 a 4992,60 a 3241,43 ab 923,64 b 2637,25 ab Reduo PF (%) _ 22,82 49,89 85,72 59,23

* Mdias seguidas pela mesma letra, na mesma coluna, no diferem entre si pelo teste de Duncan ( = 0,05%).

4. CONCLUSES
Os leos essenciais de hortel e de funcho apresentam propriedades nematicida e nematosttica sobre M. javanica in vitro; A aplicao do leo essencial de funcho aplicado na parte area de plantas de batata afeta a reproduo de M. javanica.

MORANGO
Mancha de Gnomonia Gnomonia comari

Ensaio com 3 cvs. de Morango Estao Experimental da Cascata

Plantas e frutos de morango das cultivares Camarosa, Aromas e Oso grande pulverizadas com leo essencial de camomila.

Ensaio com 6 cvs. de Morango Sede da Embrapa

ARROZ
Influncia da gua de xisto em estado natural ou em mistura com leos essenciais no controle de Meloidogyne graminicola em arroz.

RESULTADOS
Efeito dos leos essenciais de alfazema e capim-limo sobre o nmero de galhas, nmero de ovos, fator de reproduo (FR) de Meloidogyne graminicola, atividade das enzimas peroxidase (PO) e polifenol oxidase (PFO) e de compostos fenlicos (CF) em plantas de arroz irrigado Br-IRGA-410
TRATAMENTOS Capim-limo Alfazema Testemunha n de galhas
202,10 A 169,30 A 220,40 A

N de ovos
21.305 B 18.948 B 34.660 A

FR
3,45 A 2,13 B 1,90 B

PO
0,35 B 0,38 B 0,74 A

PFO
0,26 A 0,28 A 0,29 A

CP
0,09 0,08 0,09

CONSIDERAES FINAIS De acordo com os resultados obtidos, evidencia-se o potencial de utilizao dos leos essenciais de plantas bioativas no controle de fitopatgenos em diferentes culturas, podendo contribuir como mtodo alternativo de controle em sistemas de produo de base ecolgica, sendo necessrios, portanto, estudos adicionais sobre seus efeitos sobre as plantas.

Obrigada!

veri@cpact.embrapa.br

Laboratrio de Fitopatologia Embrapa Clima Temperado