CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados 43 testes em amostras cujo teor de ureia se situava no intervalo de 14 a 136mg/dL.

Esses ensaios foram realizados em paralelo com uma metodologia de referncia. A comparao do kit de Ureia 500 Doles (Y) com a metodologia mencionada (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 4,72 + 1,004X, sendo o coeficiente de correlao 0,99. Testes mostram uma recuperao de 97,8 2,4%. O erro da mdia foi de 1,07%.
Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 2 amostras, obtendo-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Amostra 2 Concentrao (mg/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) 34,97 0,50 1,43 119,93 1,31 1,09

Na presena de soros lipmicos, fazer um branco com 10mL do soro e os demais reagentes utilizados, omitindo-se a urease. Certas drogas podem interferir nos nveis de ureia. Para controle de tal interferncia, recomenda-se que o paciente seja questionado quanto ao uso de medicamentos. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Searcy, R.L. et. al.: Am. J. med. techn.27D:255; 1961. Tabacco, Alessandro et al.: Clinical chemistry, vol.25 no 2,336-337; 1979. Machado, Milton, Rev. Bras.: Pat. clin. vol.21, no 4, 119-122; 1985. Pesce, J.; Kaplan,L.: Methods in clinical chemistry, 24-25,1987. Jacobs, D.S; Kasten, B.L.: Demott; W.LR.; Wolfson, w1, Laboratory test handbook; 2aed, 349-351;1990. Chernecky, c.c.; Krech, RL.; Berger, B.I. : Laboratory tests and diagnostic procedures; 343; 854-855; 857; 86l; 868; 943-945;1993. Tibrcio, H.M.: Controle interno da qualidade analtica, 1aed. maro/1995. Henry, J.B.: Clinical diagnosis and management by laboratory methods, 19a ed, 162-163,1996. Doles: dados de arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Chcara Retiro, Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: no 10231810007 Reviso: 16 (03/2011)

UREIA 500
FINALIDADE Sistema enzimtico para dosagem da ureia no soro, plasma e urina. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO Determinao enzimtica da ureia, de acordo com a seguinte reao: urease NH2 - CO - NH2 + H2O CO2 + 2NH3 Em meio alcalino, na presena de salicilato, Nitroprussiato de Sdio e hipoclorito, os ons amnios reagem dando origem a um composto cromgeno azul esverdeado. A intensidade da cor formada diretamente proporcional concentrao da ureia na amostra analisada. PARTICULARIDADES DO SISTEMA Ureia 500 Doles resume-se a 3 pipetagens e um tempo total de 10 minutos, sendo crtica apenas a pipetagem do soro por se tratar de um teste quantitativo. A urease apresenta-se pronta para uso. METODOLOGIA Urease modificada. REAGENTES Urease: cada frasco contm um mnimo de 6.000 U.I de Urease e estabilizantes em soluo de Glicerol 0,5M. Reagente 1: mistura de Salicilato de Sdio 60mmol, Nitroprussiato de Sdio 3,4mmol e EDTA dissdico 1,35mmol, sob forma de p. Reagente 2: contm Hipoclorito de Sdio 0,120mol/L e Hidrxido de Sdio 3,75mol/L. Soluo padro 80mg/dL: soluo de Ureia 80mg/dL APRESENTAO Urease Reagente 1 Reagente 2 Soluo padro 80mg/dL NMERO DE TESTES 500 testes / 10L de soro 1 1 1 1 x 28mL x 5,5g x 20mL x 3mL

BIOQUMICA CLNICA

Frasco plstico com capacidade volumtrica de 500mL para o reagente 2. gua destilada ou deionizada. Cronmetro. ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Urease: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Reagente 1: na forma original, armazenar temperatura de 2-8 oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Aps reconstitudo, armazenar em frasco plstico mbar, ao abrigo da luz. Estvel por 2 anos, temperatura 2-8oC. Reagente 2: na forma concentrada, armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Aps reconstitudo, armazenar em frasco plstico ao abrigo da luz. Estvel por 2 anos, temperatura 2-8oC. Soluo padro 80mg/dL : armazenar temperatura de 2-8 o C. Manter o frasco bem vedado para evitar evaporao. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo, obedecidas as condies de armazenamento. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se contato com pele e mucosas. Os reagentes contm material custico. Ocorrendo contaminao acidental, lavar a rea afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar ainda a simbologia constante nos rtulos do produto:

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Amostra 2 Concentrao (mg/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) 43,04 0,72 1,67 133,94 1,63 1,21

Especificidade: a presente metodologia especfica para determinao de ureia. Sensibilidade: a absorvncia encontrada, de 0,0055, corresponde a 1mg/dL de ureia, quando realizados os testes em espectrofotmetro, a 600nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio. Diluio da matriz: estudos sucessivos de diluio da matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia de urease modificada. Substncias interferentes: no utilizar plasma colhido com fluoretos, que so potentes inibidores de urease. Demais anticoagulantes no interferem nos resultados, com exceo dos sais de amnio. Traos de amnia no vasilhame utilizado interferem decisivamente na reao. Hemlise moderada e bilirrubina at 20mg/dL no interferem na reao.

Corrosivo

Irritante

EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Espectrofotmetro ou fotocolormetro capaz de medir a absorvncia em 600nm ou filtro laranja. Banho maria (37oC). Tubos de ensaio. Pipetas graduadas. Pipeta semiautomtica de 10L. Ponteiras descartveis. Bales volumtricos de 500mL. Frasco plstico mbar, com capacidade volumtrica de 500mL para o reagente 1.

AMOSTRA Soro, plasma (EDTA, heparina), urina e demais lquidos biolgicos. A ureia permanece estvel por 3 dias, temperatura de 2-8oC ou por 3 meses temperatura de 10oC negativos. No utilizar plasma colhido com fluoretos que so potentes inibidores de urease. Com exceo dos sais de amnio, os demais anticoagulantes no interferem. Traos de amnia no vasilhame utilizado durante a manipulao fator que interfere, decisivamente, nos resultados. Hemlise moderada e bilirrubina at 20mg/dL no produzem alteraes no resultado da reao. Na presena de soros lipmicos fazer um branco utilizando 10L do soro e os demais reagentes omitindo-se a urease.

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SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

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 Sendo a ureia excretada na urina susceptvel de decomposio bacteriana, as amostras, se mantidas temperatura ambiente (20-30oC), devem ser analisadas dentro de poucas horas. No sendo possvel tal procedimento, refrigerar entre 2 e 8oC. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. PROCEDIMENTO TCNICO Preparo do reagente de uso: Reagente 1: transferir o contedo do frasco para um balo volumtrico de 500mL e completar o volume at a marca com gua destilada ou deionizada. Armazenar em frasco plstico mbar, ao abrigo da luz, temperatura de 2-8oC. Estvel por 2 anos aps sua reconstituio. Reagente 2: transferir o contedo do frasco para um balo volumtrico de 500mL e completar o volume, at a marca, com gua destilada ou deionizada. Armazenar em frasco plstico, ao abrigo da luz, temperatura de 2-8oC. Estvel por 2 anos aps sua reconstituio. Identificar 3 tubos de ensaio com B (branco), T (teste) e P (padro). Proceder como segue:
B Reagente 1 Urease Soluo padro Amostra 1,0mL 1 gota - - T P 1,0 mL 1 gota 10L -

CURVA DE CALIBRAO
2.000

1.500

1.000

0.500

0.000

Conc. Padro Absorvncia (mg/dL) 1 0.000 0 2 0.138 20 3 0.275 40 4 0.55 80 5 0.820 120 6 1.110 160 7 1.640 240 8 1.923 280
300

Para a obteno do fator, recomenda-se dosar em triplicata o padro, ler as absorvncias e tirar a mdia aritmtica das mesmas. Exemplo: Padro: 0,548; 0,550; 0,552 0,548 + 0,550 + 0,552 Mdia aritmtica = = 0,550 3 Fator (F)= 80 0,550 = 145,45

50

100

150

200

250

concentrao (mg/dL)

Obs.: No utilizar esta curva para determinar o resultado de seu ensaio. A curva de calibrao a representao grfica da relao entre os valores das absorvncias com os valores das concentraes de um conjunto de solues padro. A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear entre 0 e 280mg/dL (ver curva acima). Obtendo-se valores mais elevados, dilui-se a amostra com soluo fisiolgica e procede-se a nova dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. O kit de Ureia 500 Doles possui padro no intervalo de linearidade conforme explicitado na curva de calibrao. O laboratrio deve realizar o ensaio com o padro que acompanha o kit e calcular seu fator de calibrao (F), a exemplo do demonstrado nos clculos abaixo. O fator deve ser refeito periodicamente e a cada lote do produto. As solues padro utilizadas foram ajustadas em seus valores com os recursos do Sistema Cobas Mira plus e com Calibrador Roche lote T1237A. CLCULOS absorvncia teste Ureia (mg/dL ) = x 80 absorvncia padro Exemplo: Padro: 0,550 Teste: 0,200

Leitura do teste: 0,200 Ureia (mg/dL) = 0,200 x 145,45 = 29,09 URINA Ureia/urina (mg/dL) = T-BU P

x 80 x 50 (50 fator de diluio)

Exemplo: Volume urinrio 24hs: 1.400mL T = 0,500 BU = 0,180 P = 0,550 (0,500 - 0,180) x 80 x 50 Ureia/urina ( mg/dL) = = 2.327 0,550 ureia (mg/dL) x volume urinrio 24hs/mL Ureia/urina (mg/24hs) = 100 Ureia/urina (mg/24hs) = 2.327 x 1.400 100 = 32.578

CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1. A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2. A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade. 3. Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4. As pipetagens devem ser precisas. 5. O nvel da gua do banho maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio. A temperatura (37oC) deve ser rigorosamente observada. 6. O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles). VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao, sugerimos os seguintes valores: Soro Adultos 15 - 40mg/dL Crianas 10 - 38mg/dL Recm-nascidos 6 - 25mg/dL Urina 26 - 43g/volume de 24hs

1,0 mL 1 gota - 10L

absorvncia

Para expressar o resultado em gramas/24hs, divida o resultado encontrado por 1.000. Exemplo: ureia (mg/24hs) Ureia/urina (g/24hs) = 1.000 Ureia/urina (g/24hs) = 32.578 1.000 = 32,578

Incubar os tubos a 37oC, por 5 minutos Reagente 2 (soluo de uso) 1,0mL

o

1,0 mL

1,0 mL

Homogeneizar e incubar a 37 C, durante 5 minutos. Ler as absorvncias em espectrofotmetro ou fotocolormetro, em 600nm ou filtro laranja, acertando o zero com o branco. A cor final permanece estvel por 60 minutos. URINA 1. Diluir a urina 1:50 (1mL de urina + 49mL de gua destilada ou deionizada). 2. Proceder de maneira idntica ao soro, com a seguinte ressalva: constatada a presena de amnia, fazer um branco de urina (B-U), de forma semelhante ao teste, omitindo-se a urease. 3. Proceder s leituras de B-U e P contra o branco B.

0,200 Ureia (mg/dL) = x 80 = 29,09 0,550 Como a reao corada segue estritamente a lei de Beer, basta a determinao de um fator (F) para clculo dos resultados. Fator (F) = 80 absorvncia padro

EXPRESSO DOS RESULTADOS EM UNIDADES SISTEMA INTERNACIONAL (S.I.) ureia (mmol/L) = ureia (mg/dL) x 0,166 LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder levar a resultados errneos. A complementao diagnstica de pacientes nefropatas poder ser melhor avaliada atravs do perfil metablico se portador de nefrolitase.

Ureia (mg/dL) = absorvncia do teste x F

SIGNIFICADO CLNICO A ureia, principal produto final do metabolismo proteico, responsvel por 80% do nitrognio no proteico excretado na urina em condies normais. O aumento do teor de ureia no sangue classificado em 3 fases: pr-renal, renal e ps-renal. Na fase prrenal destacam-se: choque traumtico (traumatismo craniano); choque hemorrgico (hemorragia psparto, lcera perfurada); desidratao aguda ou perda de eletrlitos (acidose diabtica, doena de Addison); descompensao cardaca; infeco e toxemia. A elevao da taxa de ureia de causa renal mais observada nas glomerulonefrites, nefroscleroses, rins policsticos e naquelas condies em que h necrose tubular. A uremia ps-renal engloba a obstruo renal por clculos ou compresso, tumores compressivos da bexiga e obstrues de origem prosttica. A taxa de ureia encontra-se reduzida, principalmente, na insuficincia heptica aguda e na inanio.

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SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

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