Universidad Nacional del Nordeste Facultad de Medicina Ctedra de Bioqumica

METABOLISMO DE COMPUESTOS NITROGENADOS.

Brandan, Nora C.
Profesora Titular. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE.

Aispuru, Gualberto

Ayudante Alumno por Concurso. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE.

INTRODUCCIN.
El Nitrgeno (N) junto a otros elementos, como Carbono, Oxigeno e Hidrogeno participan en la constitucin de las molculas orgnicas fundamentales de la materia viva. Entre los compuestos constituyentes del organismo, el N forma parte de un grupo de compuestos orgnicos de gran jerarqua biolgica a los cuales estn asignadas funciones muy importantes, como lo son las protenas y los nucletidos. Este elemento constituye por si solo el 3% del peso corporal. En la atmsfera, el N molecular (N2), es muy abundante. Esta molcula es casi no reactiva o inerte debido a su triple enlace que la estabiliza. Antes de poder ser utilizado por los animales, el N atmosfrico debe ser fijado mediante una cadena de reacciones. En primer lugar el nitrgeno debe ser reducido de N2 a NH3 (amoniaco) en un proceso llamado amonificacin, llevado a cabo por microorganismos y descargas elctricas en la naturaleza. Posteriormente, el NH3 es oxidado a nitritos y nitratos (NO2- y NO4=) por bacterias saprofitas, proceso llamado nitrificacin. En el suelo, estas formas oxidadas son asimiladas por los vegetales incorporando el N a estructuras biolgicas, los aminocidos, protenas y dems compuestos; de sta manera este elemento pasa a formar parte de la cadena alimentara, en la cual el ser humano es un eslabn ms. El estudio del metabolismo de los compuestos nitrogenados dentro del organismo comprende uno de los grandes temas de la Bioqumica. En esta gua nos ocuparemos en forma prctica, por un lado del metabolismo de las protenas y los aminocidos; y por otro del metabolismo de nucletidos

Equilibrio Nitrogenado.
En el ser humano, la principal fuente de sustancias nitrogenadas son las protenas de la dieta. Como estos compuestos, a diferencia de carbohidratos y grasas, no se almacenan como reserva, los niveles en las clulas se regulan por el equilibrio entre anabolismo y catabolismo, es decir un balance entre biosntesis y degradacin de protenas, a lo que tambin se conoce como recambio normal de protenas. Por tanto, un adulto sano que ingiere una dieta variada y completa se encuentra generalmente en situacin de equilibrio nitrogenado, un estado en el que la cantidad de nitrgeno ingerida cada da es equilibrada por la cantidad excretada por heces, orina y sudor, sin que se produzca ningn cambio neto en la cantidad de nitrgeno del organismo. Sin embargo, en ciertas condiciones, el organismo se halla en equilibrio nitrogenado negativo o positivo (Cuadro 1).
Cuadro 1. Balance nitrogenado. Situaciones de desequilibrio. Equilibrio Nitrogenado Negativo Inanicin Desnutricin proteica Senectud Fiebre severa Diabetes no controlada Neoplasias avanzadas Perodo post-quirrgico Traumatismos Quemaduras extensas Sepsis e infecciones Equilibrio Nitrogenado Positivo Niez (crecimiento y desarrollo) Mujeres gestantes Perodo post-inanicin

En la situacin de equilibrio nitrogenado negativo se excreta mayor cantidad de nitrgeno del que se ingiere. Esto tiene lugar en la inanicin, la desnutricin proteica y en ciertas enfermedades que cursan con catabolismo aumentado. Durante la inanicin prolongada las cadenas carbonadas de los aminocidos son necesarias para la gluconeognsis; el amoniaco (nitrgeno) liberado de los aminocidos es excretado principalmente en forma de urea y no se reincorpora a las protenas. Tambin puede darse un equilibrio negativo durante la vejez, la fiebre severa, proteolisis de la diabetes no controlada y, de gran importancia mdica, en neoplasias, donde el catabolismo se encuentra exaservado. En el otro extremo, puede hallarse equilibrio nitrogenado positivo cuando lo ingerido supera a lo excretado, tal caso se da en nios en edad de crecimiento, puesto que estn aumentando su peso corporal e incorporando ms aminocidos en las protenas somticas. Puede darse equilibrio nitrogenado positivo durante el embarazo y durante la alimentacin postinanicin. La determinacin del balance de nitrgeno en un paciente es un parmetro bastante eficaz para establecer catabolismo, deficiencias o excesos de protenas en su dieta y conocer, junto a otros indicadores, su estado nutricional.

METABOLISMO DE PROTENAS Y AMINOCIDOS.

ALIMENTACIN, DIGESTIN Y ABSORCIN.
Requerimiento de protenas. Las protenas dietarias deben proveer los aminocidos necesarios para mantener el balance nitrogenado. Un adulto debe incorporarse 0.8gr de protenas por kg de peso corporal por da. En embarazadas deben adicionarse al requerimiento para un adulto 30gr por da durante toda la gestacin. Durante la lactancia debe agregarse 20gr por da para cubrir la necesidad de sntesis de protenas de la leche. Lactantes menores de 1 ao deben recibir 2gr/kg/da, nios de 1 a 10 aos 1.2gr/kg/da y adolescentes 1gr/kg/da. En todos los grupos de edades el requerimiento aumenta ante procesos que acrecienten el catabolismo. Alimentos ricos en protenas. Entre estos tenemos a los de origen animal: carnes, huevos y leche; y a los de origen vegetal, donde la soja ocupa el primer lugar en contenido proteico, seguida por los cereales. Los alimentos de origen animal son tambin llamados alimentos con protenas de alto valor biolgico, debido a que contienen gran cantidad de aminocidos que el cuerpo requiere en forma indispensable por no poder sintetizarlos (esenciales); por el contrario, las protenas aportadas por la soja, por ejemplo, son de muy bajo valor biolgico por su bajo contenido en aminocidos esenciales. Una alimentacin pobre en protenas es la causa ms frecuente de desnutricin. Los cuadros ms serios de malnutricin proteica son el kwashiorkor, observado en nios con dietas pobres en protenas de buen valor biolgico y dietas ricas en carbohidratos, caracterizado por retardo del crecimiento, abdomen globoso, disminucin de albmina en plasma, anemia y hepatomegalia; y el marasmo, producido por dficit crnico de protenas y caloras en la dieta, con perdida del tejido graso y gran parte de la masa muscular en un proceso de consumicin severo. Digestin. La hidrlisis de las protenas de los alimentos se inicia en el estmago. Aqu la pepsina, una endopeptidasa secretada como pepsingeno por las clulas parietales de la mucosa gstrica, escinde las protenas en segmentos de menor peso molecular. Estos pasan al duodeno donde se encuentran tres endopeptidasas: tripsina, quimiotripsina y elastasa del jugo pancretico, que los degradan en trozos menores, del tipo polipptidos. Hasta aqu no se han producido aminocidos libres; estos comienzan a aparecer gracias a la accin de dos exopeptidasas que van atacando los pptidos desde sus extremos. La carboxipeptidasa, de origen pancretico, y la aminopeptidasa intestinal. Finalmente quedan tri- y dipptidos, cuya hidrlisis es catalizada por tripeptidasas y dipeptidasas del borde en sepillo del intestino. De esta manera, las protenas de la dieta son degradadas hasta aminocidos libres, di- y tripptidos. Absorcin. Los productos finales de la digestin de protenas son incorporados a los enterocitos utilizando distintos mecanismos. Un grupo de aminocidos libres se incorporan por un cotransporte activo estereoespecfico. El proceso es similar al de absorcin de la glucosa. Se trata de un cotransporte con Na+, dependiente del funcionamiento de la Bomba Na+/K+ ATPasa. Este sistema es utilizado por los aminocidos neutros, aromtico, alifticos, fenilalanina, metionina, aminocidos cidos y prolina. Un grupo menor de aminocidos (bsicos y neutros hidrfobos) ingresan a la clula por difusin facilitada (Na+ independiente). Por otro lado, los di- y tripeptidos son transportados por sistemas propios que dependen del gradiente

qumico del Na+ y una vez dentro de la celula son escindidos a aminocidos libres por peptidasas intracelulares. Los aminocidos liberados en el citoplasma pasan luego al intersticio y a los capilares sanguneos por difusin facilitada. Una vez en el torrente sanguneo portal, los aminocidos ramificados son deportados preferentemente al msculo mientras que los no ramificados se dirigen al hgado (Figura 1). En condicin normal solo llegan a la sangre aminocidos libres; sin embargo, se dan algunas situaciones fisiolgicas y patolgicas en las cuales debe aceptarse la posibilidad de la absorcin de protenas enteras o trozos moleculares de gran tamao. Esto explicara el mecanismo de la enfermedad celaca, en la cual existe un defecto de la mucosa que posibilita la absorcin de polipptidos (gliadina) resultantes de la digestin del gluten, la principal protena del trigo, avena, centeno y cebada. Se produce intolerancia a dicha protena, determinando un cuadro clnico muy severo.

Figura 1. Esquema de la absorcin de aminocidos (AA) en intestino. 1. Co-transporte estereoespecfico (transporte activo secundario Na+ dependiente). 2a. Difusin facilitada sistema y+ (aminocidos bsicos). 2b. Difusin facilitada sistema L (aminocidos neutros hidrfobos). 3. Transportadores de di- y tripptidos Na+ dependiente.

Aminocidos esenciales y no esenciales.

El hombre solo puede sintetizar 11 de los 20 -aminocidos necesarios para la sntesis de protenas. Aquellos aminocidos que no pueden ser sintetizados por el organismo se denominan esenciales, ya que deben obtenerse de los alimentos de la dieta que los contienen (Cuadro 2).
Cuadro 2. Aminocidos esenciales y no esenciales. Esenciales
Arginina * Histidina * Isoleucina (0.7g) Leucina (1.1g) Lisina (0.8g) Metionina (1.1g) Fenilalanina (1.1g) Treonina (0.5g) Triptfano (0.25g) Valina (0.8g) Alanina Asparagina Aspartato Cistena Glutamato Glutamina

No esenciales
Glicina Hidroxiprolina Hidroxilisina Prolina Serina Tirosina

* Semiesenciales, incrementando su demanda en el crecimiento. Los valores en parntesis corresponden al requerimiento mnimo diario para un adulto normal.

Metabolismo de aminocidos.
Los aminocidos introducidos por la dieta (exgenos) se mezclan con aquellos liberados en la degradacin de protenas endgenas y con los que son sintetizados de novo. Estos aminocidos se encuentran circulando en sangre y distribuidos en todo el organismo sin que exista separacin alguna entre aminocidos de diferente origen. Existe, de esta manera, un conjunto de estos compuestos libres en toda la circulacin que constituyen un fondo comn o pool de aminocidos, al cual las clulas recurre cuando debe sintetizar nuevas protenas o compuestos relacionados (Figura 2). El destino ms importante de los aminocidos es su incorporacin a cadenas polipeptdicas durante la biosntesis de protenas especficas del organismo. En segundo lugar, muchos aminocidos son utilizados para la sntesis de compuestos nitrogenados no proteicos de importancia funcional. Finalmente los aminocidos en exceso, como no pueden almacenarse, son eliminados por orina o bien se utilizan principalmente con fines energticos. En ste caso sufren primero la prdida de la funcin amina, lo cual deja libre el esqueleto carbonado. El grupo nitrogenado que se desprende como amonaco, es eliminado en el ser humano principalmente como urea. Las cadenas carbonadas siguen diferentes rutas, que las llevan a alimentar el ciclo del cido ctrico o de Krebs para oxidarse completamente en l hasta CO2 y H2O y producir energa. Alternativamente, dichas cadenas pueden ser derivadas a las vas de gluconeognesis (aminocidos glucognicos) o de sntesis de cidos grasos o cuerpos cetnicos (aminocidos cetognicos). En la figura 2 se esquematiza lo expuesto.

Catabolismo de aminocidos.
La degradacin de aminocidos si inicia generalmente con la separacin de su grupo -amino (desaminacin). Luego el resto nitrogenado seguir un camino distinto del que tomar la cadena carbonada. Antes de la degradacin los aminocidos se interconvierten entre ellos, transfiriendo el grupo amino de una esqueleto carbonado a otro (transaminacin).

Figura 2. Metabolismo de los aminocidos en el organismo. Opciones metablicas de los aminocidos y de los esqueletos carbonados y grupo amino constituyente.

Reaccin de Transaminacin.
La reaccin de transaminacin comprende la transferencia de un grupo -amino de un aminocido a un cetocido. El aminocido se convierte en un cetocido y el cetocido aceptor del grupo amina, en el aminocido correspondiente (Figura 3). Esta transferencia es realizada por las enzimas aminotransferasas o tambin llamadas transaminasas. Mientras que la mayora de los aminocidos sufren transaminacin, existen algunas excepciones: lisina, treonina, prolina e hidrixiprolina. Puesto que las transaminaciones son libremente reversibles, las transaminasas pueden funcionar tanto en el catabolismo como en la biosntesis de aminocidos. Las reacciones que involucran aminocidos esenciales son mayormente unidireccionales, puesto que el organismo no puede sintetizar el -cetocido esencial, pudiendo existir pequeas cantidades de stos provenientes de la dieta. A modo de ejemplo puede verse lo que sucede con la valina, la cual al ser

metabolizada da -cetoisovalerato, este a continuacin es rpidamente convertido en succinil-CoA y utilizado como energa en el ciclo de Krebs, sin posibilidad de volver a transaminarse. Las transaminasas catalizan una reaccin bimlocular, donde el par aminocido/-cetocido, formado por el L-glutamato y el -ceto-glutarato constituyen un par obligado.
Aminocido (A)

-cetocido(2)

Transaminasa
Piridoxal fosfato.

-cetocido (1)
(-cetoglutarato)

Kq1

Aminocido (B) (Glutamato)

Figura 3. Transaminacin: ecuacin general. La constante de equilibrio de esta reaccin es cercana a 1, considerndose libremente reversible mientras excitan los sustratos y productos correspondientes en ambos lados de la ecuacin.

El piridoxal fosfato se localiza en el sitio activo de todas las transaminasas. Este es una coenzima derivado de la piridoxamina (vitamina B6), la cual cumple una importante funcin en el metabolismo de los aminocidos. En todos los casos, la coenzima forma con el aminocido un compuesto intermediario, unindose a ste por un enlace CH=N, denominado Base de Schiff. Intervienen adems interacciones inicas e hidrfobas para estabilizar el complejo. El piridoxal fosfato acta como aceptor transitorio y transportador del grupo amina en el proceso de transferencia de la transaminacin. Por otro lado, las aminotransferasas tienen la funcin de guiar la reaccin en un determinado sentido y asegurar selectivamente la naturaleza del cambio a producir. As tenemos que la reaccin de cada par aminocido/cetocido es catalizada por una enzima especifica, cuyo nombre deriva de los compuestos participantes en la transferencia: ejemplos de ello son la glutmico oxalactico transaminasa (GOT), tambin llamada aspartato amintransferasa (AST), forma oxalacetato y glutamato a partir de aspartato y -cetoglutarato. La glutmico piruvato transaminasa (GPT) o alanina amintransferasa (ALT), produce piruvato, utilizando el par obligado y alanina. A propsito de estas dos enzimas, son particularmente abundantes en hgado, msculo y corazn, razn por la cual en ciertos procesos patolgicos que afectan a estos rganos, produciendo una injuria tisular y liberacin de estas enzimas desde sus compartimentos celulares, se produce un aumento de sus concentraciones en plasma, lo cual se utiliza para diagnostico y pronostico. Como ejemplo podemos ver que el aumento de GOT en plasma es seal de injuria heptica severa. Algo similar ocurre con el dao del miocardio, dando se produce un aumento de ambas transaminasas en apenas 6 horas luego de un infarto agudo, permaneciendo elevadas durante varios das, pasibles de ser dosadas.

Desaminacin Oxidativa.
Teniendo en cuenta los componentes del par obligado, todos los grupos -amino de los aminocidos son finalmente transferidos al -cetoglutarato mediante transaminacin, formando L-glutamato. A partir de este aminocido el grupo nitrogenado puede ser separado por un proceso denominado desaminacin oxidativa, una reaccin catalizada por la L-glutamato deshidrogensas, una enzima omnipresente de los tejidos de mamferos que utiliza como coenzima NAD+ o NADP+ como oxidante. En la reaccin directa, generalmente se utiliza NAD+ y se forma -cetoglutarato y amonaco: NH3 (Figura 4); este ltimo, al pH fisiolgico del medio se carga con un protn, presentndose casi en su totalidad como in amonio (NH4+). La reaccin es reversible, por lo que el amonio pude unirse a una -cetoglutarato para formar glutamato, usando como coenzima NADPH+. Es probable que in vivo la reaccin tenga mayormente una direccin hacia la formacin de amonaco. La concentracin de amoniaco que sera necesario para que la reaccin se

desplace hacia la produccin de glutamato es txica y, en condiciones normales, sera raramente alcanzada, exceptuando la regin periportal del hgado, donde llega el amonaco absorbido en el intestino y transportado al hgado.

NH4 + -cetoglutarato
NADH + H+ ADP-GDP NAD+ NADPH + H+ ATP-GTP NADP+

Glutamato
Figura 4. Reaccin de desaminacin oxidativa. Catalizada por Glutamato deshidrogensa. NAD+ y NADP+ participan como cofactores y tanto los nucletidos trifosfatos (ATP y GTP) como los difosfatos (ADP y GDP) ejercen control como moduladores alostricos positivos segn el sentido de la reaccin.

El glutamato forma parte del par obligado de la transaminacin de los aminocidos y por tanto es la puerta de acceso (access door) del amoniaco libre a los grupos amino de la mayora de los aminocidos; y a la inversa, es la puerta de salida (exit door) del nitrgeno de estos compuestos. El papel predominante de la L-glutamato deshidrogensas en la eliminacin del amoniaco queda marcado por su localizacin preponderante en las mitocondrias del hgado en donde, como veremos ms adelante, tienen lugar las reacciones iniciales del ciclo de formacin de urea. La enzima se implica tambin en la produccin de amonaco a partir de aquellos aminocidos que son requerido para la produccin de glucosa o para dar energa cuando se agotan las reservas de otras molculas: azucares y lpidos. Basndose en esto, la Lglutamato deshidrogensas se regula alostricamente por los nucletidos purnicos. Cuando es necesario la oxidacin de aminocidos para la produccin de energa, la actividad en la direccin de la degradacin del glutamato es incrementada por el ADP y GDP, que son indicadores de un estado de bajo nivel de energa en la clula. El GTP y ATP, indicativos de un nivel de energa alto, son activadores alostricos en la direccin de la sntesis de glutamato (Cuadro 3).
Cuadro 3. Regulacin alostrica de la l-glutamato deshidrogensas. Estado Energtico - Favorable - Desfavorable [ATP/GTP] Alta Baja [ADP/GDP] Baja Alta Producto Glutamato -cetoglutarato + NH4+

Toxicidad del amonaco.

El amonaco es txico y afecta principalmente al sistema nervioso central. La encefalopata asociada a defectos severos del ciclo de la urea se debe a aumento de amonaco en sangre y tejidos. Como el hgado es el principal rgano encargado de la eliminacin del amonaco, cuando hay una falla o insuficiencia heptica grave, la amonemia asciende y se produce un cuadro de intoxicacin, que pude llevar al coma e incluso la muerte. Como se menciono anteriormente, al pH fisiolgico de los fluidos del organismo, la casi totalidad, alrededor del 99%, del amonaco que es una molcula neutra se convierte en in amonio, el cual no puede atravesar la membranas celulares. Se han postulados diferentes mecanismos que podran contribuir a la notable toxicidad del amonaco.

1. Acumulacin de glutamina. Los niveles de esta sustancia se incrementan notablemente en las hiperamonemias. La acumulacin de glutamina en el cerebro, especialmente en astrositos, produce efecto osmtico, aumentando la PIC (presin intracraneana) y dando hipoxia cerebral. 2. Inhibicin de la lanzadera malato-aspartato. La sntesis exagerada de glutamina reduce los niveles de glutamato, esto inhibe la lanzadera. Se produce aumento de lactato y disminucin del pH cerebral. 3. Actividad de la gluclisis. El amonaco estimula la fosfofructoquinasa y con ello la actividad glucoltica. Aumenta el lactato y el valor de la relacin NADH/NAD+. 4. Inhibicin del ciclo de Krebs. El aumento de amonaco en la mitocondria desva la reaccin de la glutamato deshidrogenasa hacia la aminacin de -cetoglutarato para formar glutamato. Este drenaje de uno de los intermediarios del ciclo del cido ctrico deprime la marcha de esta va de oxidacin, de la cual depende exclusivamente el cerebro para proveerse de energa. El descenso de la concentracin de ATP en las neuronas ocasiona graves trastornos en su actividad, lo que conlleva en ltima instancia a su muerte (Cuadro 4).
Cuadro 4. Toxicidad del amonaco. [NH4+] uso de -cetoglutarato TCA [ATP] Necrosis Celular

TCA: Ciclo de los cidos tricarboxilicos o de Krebs.

Transporte del amonaco: glutamina y asparagina.

Segn vimos, el amonaco libre es txico, por lo que en la sangre es transportado preferentemente en forma de grupos amina o amida. El 50% de los aminocidos circulantes est constituido por glutamina, un transportador de amonaco. El grupo amida de la glutamina es importante como dador de nitrgeno para varias clases de molculas entre las que se encuentran las bases purnicas y el grupo amino de la citosina. El glutamato y el amonaco son el sustrato de la glutamina sintetasa, la cual requiere ATP para la catlisis (Figura 5). Por otro lado, la eliminacin del grupo amida es catalizada por la glutaminasa.
Glutamina sintetasa Glutamato + NH4
ATP ADP + Pi

Glutamina (Gln)

Glutamina (Gln)

Glutaminasa Glutamato + NH 4
H2O

Figura 5. Formacin y degradacin de glutamina. La formacin de glutamina es un proceso que demanda gasto de energa a diferencia de su proceso inverso.

El hgado contiene ambas enzimas, situadas en las clulas del parnquima, en diferentes segmentos de este rgano. La regin periportal est en contacto con la sangre que proviene del msculo esqueltico y contiene glutaminasa (y las enzimas del ciclo de la urea). Las clulas del rea perivenosa, 5% del parnquima, contienen glutamina sintetasa; la sangre fluye de este lugar haca el rin. Este ciclo intercelular de la glutamina puede ser considerado un mecanismo para recoger y eliminar el amonaco que no ha sido incorporado al ciclo de la urea. El ciclo de la glutamina permite controlar el flujo de amonaco bien hacia la urea, bien hacia la glutamina, y por tanto hacia la excrecin de amonaco por el rin en diferentes condiciones de pH. Una reaccin similar a la de la glutaminasa es catalizada por la asparaginasa, que hidroliza la asparagina a aspartato y amonaco. En su formacin, el grupo amida de la asparagina proviene de la glutamina y no del amonaco libre como en la sntesis de la primera. La asparagina es sintetizada en la mayora de las clulas por una asparagina sintetasa dependiente de ATP, cuyos sustratos son aspartato y glutamina; y sus

productos asparagina y glutamato. La funcin de la asparagina es igual a la de la glutamina, pero con menor intensidad, ms bien es un refuerzo al ciclo intercelular de la glutamina. Un transportador de amoniaco extra lo constituye la alanina, la cual, en su ciclo intertisula (ciclo de la alanina), moviliza, no solo su esqueleto carbonado hasta el hgado para que este realice gluconeogenesis, sino tambin su grupo amino para que sea transaminado a glutamato, posteriormente desminado de este aminocido y sea convertido en urea.

Biosntesis de Urea.
El metabolismo de los aminocidos concluye con su catabolismo y formacin de sustancias factibles de ser excretadas como lo es la urea. En forma prctica, la biosntesis de este metabolito final encierra cuatro etapas, incluyendo las reacciones recin tratadas: 1. Transaminacin 2. Desaminacin oxidativa 3. Transporte de amonaco 4. Ciclo de la urea. Estas etapas constituyen el flujo global del nitrgeno en el anfibolismo de los -aminocidos, representado en la figura 6. -aminocido
TRANSAMINACIN

-cetocido

-cetoglutarato
DESAMINACIN TRANSPORTE NH3

L-glutamato

CO2

CICLO DE LA UREA

Urea
Figura 6. Flujo global del nitrgeno en el catabolismo de los aminocidos. Las transaminaciones confluyen el nitrgeno amdico al glutamao, desde el cual se lo extrae (exit door) por desaminacin para ser transportado en sangre (amoniaco libre, glutamina, asparagina y alanina) hasta el higado para sintetisar urea y ser excretada luego por el rion.

Ciclo de la urea.
Un hombre que consume 300g de carbohidratos, 100g de grasa y 100g de protenas diariamente, excreta alrededor de 16,5g de nitrgeno al da: 95% por la orina y 5% por las heces. Para los sujetos que consumen una dieta occidental, la urea sintetizada en el hgado, liberada hacia la circulacin y eliminada por los riones, constituye de 80 a 90% del nitrgeno excretado.

Figura 7. Molcula de urea. Compuesto rico en nitrgeno sintetizado por el hgado.

El ciclo de la urea y el de los cidos tricarboxlicos (TCA) fueron descubiertos por Sir Hans Krebs y colaboradores. De hecho, el ciclo de la urea fue descrito antes que el ciclo TCA. En los mamferos terrestres el ciclo de la urea es el mecanismo de eleccin para la excrecin del nitrgeno y se lleva a cabo exclusivamente en el higado. Los dos nitrgenos de cada molcula de urea (Figura 7) provienen de dos fuentes, el amonaco libre y el grupo amino del aspartato. El ciclo se inicia y finaliza en el aminocido ornitina. A diferencia del ciclo TCA, en donde los carbonos del oxalacetato al principio son diferentes de los del final, los carbonos de la ornitina final son los mismos que posea la molcula inicialmente.

MITOCONDRIA
Glucosa C Oxalacetato Malato H2O
6 7

Glutamato -cetoglutarato Pi

NH3 CO2

2 ATP
N-acetilglutamato

Aspartato

2 ADP +

Carbamoil fosfato
2

Fumarato

Ciclo TCA

Citrulina

Ciclo de la Urea
Citrulina
3 5

Ornitina

Aspartato

Transportadores Citrulina/Ornitina

Ornitina

CITOSOL

ATP 2 ADP + PPi

Arginino succinato

Arginina H2O

UREA

Fumarato

RIN

Figura 8. Reacciones e intermediarios en la biosntesis de urea; relacin con el ciclo de Krebs. Los compuestos sombreados con gris corresponden a los que contribuyen con nitrgeno para la formacin de urea. A.Desaminacin oxidativa, B.Transaminacin, C.Gluconeognesis; 1.Carbamoil fosfato sintetasa I, 2.Ornitina transcarbamoilasa, 3.Argininosuccinato sintetasa, 4.Argininosuccinasa, 5.Arginasa, 6.Fumarasa, 7.Malato deshidrogenasa.

Cinco enzimas catalizan las reacciones de ste ciclo. De los seis aminocidos que participan, solo el Nacetilglutamato funcionan como activador enzimtico; los otros actan como transportadores de los tomos que finalmente se convertirn en urea. En los mamferos, la principal funcin de la ornitina, citrulina y argininosuccinato es la sntesis de la urea. Las reacciones del ciclo estn bicompartimentalizadas, algunas reacciones se llevan a cabo en la matriz mitocondrial, en tanto que otras ocurren en el citosol (Figura 8). En forma esquemtica podemos enumerar las etapas de la biosntesis de urea de la siguiente manera:

1. Inicio de la biosntesis: Carbomoil fosfato sintetasa I. La biosntesis de urea comienza con la condenacin de bixido de carbono, amonaco y 2 ATP, para formar carbamoil fosfato, reaccin catalizada por la carbamoil fosfato sintetasa I (CPSI). En los tejidos humanos existen dos formas de CPS. La carbamoil fosfato sintetasa I, del la sntesis de la urea, es una enzima mitocondrial heptica. La carbamoil fosfato sintetasa II (CPSII), una enzima citislica que emplea glutamina en vez de amonaco como donador de nitrgeno, participa en la biosntesis de pirimidinas. La CPSI es la enzima limitante de la velocidad, o marcapaso, del ciclo de la urea. Esta enzima reguladora es activa slo en presencia del activador alostrico N-acetilglutamato, cuya unin induce un cambio conformacional que aumenta la afinidad de la sintetasa por el ATP. 2. Formacin de citrulina. La L-ornitina transcarbamoilasa cataliza la transferencia de la porcin carbamoil del carbamoil fosfato a un aminocido ornitna, formando citrulina y ortofosfato. Esta reaccin se lleva a cabo en la matriz mitocondrial; la formacin del sustrato ornitina y la metabolizacin subsecuente del producto, citrulina, se lleva a cabo en el citosol. Por tanto la entrada como la salida de ornitina y citrulina de la mitocondria implica la participacin de un sistema de transporte situado en la membrana interna de esta organela, formado por un contratransportador citrulina/ornitina. 3. Formacin de argininosuccinato. La reaccin de la argininosuccinato sintetasa une aspartato y citrulina a travs del grupo amino del aspartato, y suministra el segundo nitrgeno de la urea. La reaccin requiere ATP para formar un intermediario citrulina-AMP y luego, desplazando el AMP por aspartato forma citrulina. 4. Formacin de arginina y fumarato. La escisin del argininosuccinato, catalizado por la argininosuccinasa o arginino succinato liasa, retiene nitrgeno en el producto arginina y libera el esqueleto del aspartato como fumarato. La adicin de agua al fumarato genera malato, y la oxidacin de ste, dependiente de NAD+, forma oxalacetato. Estas dos reacciones, correspondientes a ciclo TCA, se catalizan por la fumarasa y la malato deshidrogenasa citoslicas. La transaminacin del oxalacetato con el glutamato forma de nuevo aspartato. El esqueleto carbonado del aspartato/fumarato, acta como un transportador para el paso del nitrgeno del glutamato a un precursor de la urea. 5. Formacin de ornitina y urea. La reaccin final del ciclo de la urea, la ruptura hidroltica de la arginina caltalizada por la arginasa heptica, libera urea. El otro producto, ornitina, reingresa a la mitocondria heptica para ser utilizada nuevamente en el ciclo de la urea. Cantidades menores de arginasa tambin se encuentran en los tejidos renal, cerebral, mamario, testicular y en la piel. La ornitina y la lisina son inhibidores potentes de la arginasa, y por tanto, compiten con la arginina.

Regulacin del ciclo de la urea.

La regulacin de la formacin de urea se realiza en dos niveles, en la carbamoil fosfato sintetasa I y por induccin enzimtica. La CPSI necesita de forma obligada el activador alostrico N-acetilglutamato. Este compuesto es sintetizado a partir de glutamato y acetil-CoA por la N-acetilglutamato sintetasa, que es activada por la arginina. El acetil-CoA, el glutamato y la arginina son necesarios para suministrar intermediarios o energa (ATP desde el ciclo TCA) al ciclo de la urea, y la presencia de N-acetilglutamato indica que todos ellos estn disponibles y en abundancia. Es comprensible que una ruta que controla el nivel de amonaco en plasma, potencialmente txico, y que es adems altamente dependiente de energa, est finamente regulado. La induccin enzimtica del ciclo de la urea (de 10 a 20 veces) tiene lugar cuando aumenta el suministro de amonaco o aminocidos al hgado. La concentracin de los intermediarios del ciclo tambin desempea un papel en su regulacin a travs de la ley de accin de masa. Una dieta rica en protenas (exceso de aminocidos) o la inanicin (exceso de amonaco por utilizacin de cadenas carbonadas de aminocidos para obtener energa), tienen como resultado la induccin de las enzimas del ciclo de la urea.

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Relacin del ciclo de la urea con el ciclo TCA.

Los dos ciclos descriptos por Krebs se relacionan por medio del fumarato, producto de la argininosuccinasa en el ciclo de la urea, ste metabolito puede ingresar a la mitocondria y seguir, como vimos, el ciclo TCA, llegando a la formacin de oxalacetato, el cual puede seguir tres vas (Figura 9): 1. Continuar el TCA para dar energa. 2. Dar glucosa, va fosfoenolpiruvato, en la gluconeognesis. 3. Transaminarse con glutamato y dar -cetoglutarato y aspartato; este ltimo es sustrato en el citosol de la argininosuccinato sintetasa, aportando uno de los dos grupos nitrogenados para la formacin de urea.
Glucosa
2
Oxalacetato

Glutamato -cetoglutarato
3

Aspartato

Ciclo TCA

Ciclo de la Urea

Urea Fumarato Figura 9. Relacin entre el ciclo TCA y de la urea. Destino del fumarato. 1. Produccin de energa, 2. Formacin de glucosa y 3. Formacin de aspartato.

Destino de la urea.
El producto final del metabolismo de los aminocidos es la urea, esta es transportada por la circulacin hasta el rin para su excrecin. Un adulto normal, con una dieta equilibrada elimina alrededor de 25 a 35g de urea diarios por orina, lo cual corresponde al 90% del nitrgeno total excretado por esta va. La urea es una sustancia soluble, fcilmente difusible a travs de las membranas celulares. Adems, es completamente atoxica. Se encuentra en sangre circulante en una concentracin de 20 a 40mg/dL (mg por 100ml) o 0,4mM. Este nivel aumenta en caso de insuficiencia renal. Comnmente se habla de uremia en las situaciones en las cuales la falla de la funcin renal impide la excrecin del metabolito.

Destino de los esqueletos carbonados de los aminocidos.

Los estudios sobre nutricin reforzados por las investigaciones mediante aminocidos marcados con istopos establecieron la interconversin de los tomos de grasa, carbohidratos y protenas, y pusieron de manifiesto que la totalidad, o una porcin del esqueleto carbonado de los aminocidos, se puede convertir en carbohidratos (13 aminocidos glucognicos), grasa (un aminocido cetognico) o ambos (cinco aminocidos). El cuadro 6 presenta los aminocidos clasificados segn el destino de su esqueleto carbonado y el cuadro 7 segn el metabolito intermediario que de l se forma.

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Cuadro 6. Destino de los esqueletos carbonados de los aminocidos. Glucognicos Alanina Arginina Aspartato Cistena Glutamato Glicina Histidina Metionina Prolina Serina Treonina Valina Cetognicos Leucina Glucognicos y Cetognicos Isoleucina Lisina Fenilalanina Triptofano Tirosina

Cuadro 7. Conversin de los esqueletos carbonados en intermediarios metablicos.

Piruvato y Acetil-CoA Alanina Hidroxiprolina Cistena Serina Glicina Treonina Acetil-CoA y Aceto acetato Fenilalanina Tirosina Leucina Triptofano Lisina Glutamato (-cetoglutarato) Arginina Histidina Glutamina Prolina Succinil CoA Isoleucina Valina Metionina Fumarato Fenilalanina Tirosina Oxalacetato Aspatato Asparagina

Biosntesis de aminocidos.
Como hemos visto, el ser humano no tiene capacidad de sintetizar un grupo de aminocidos, los llamados esenciales. Los restantes aminocidos pueden ser sintetizados en el organismo. Existen procesos metablicos que permiten la conversin de un aminocido en otro; as se forman algunos de los aminocidos no esenciales. Puede afirmarse, en trminos generales, que siempre que existan mecanismos para sintetizar el cetocido correspondiente, est asegurada la formacin del aminocido mediante la reaccin de transaminacin.

Metabolismo de Fenilalanina y Tirosina.

Adems de los procesos metablicos generales mencionados, cada aminocido puede seguir vas que le son especficas y dar origen a diferentes productos. Dentro de todas esas vas, slo nos ocuparemos, a modo de ejemplo, del metabolismo de la fenilalanina (Phen) y la tirosina (Tyr). Estos aminocidos se tratan conjuntamente, puesto que la Tyr se produce por hidroxilacin de la Fhen y es el principal producto de la degradacin de sta. Por esta razn, no se considera habitualmente que la tirosina sea esencial, mientras que la fenilalanina si lo es. Tres cuartas partes de la Fhen ingerida son metabolizadas a

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Tyr. Esta conversin esta catalizada por la fenilalanina hidroxilasa, enzima dependiente de tetrahidrobiopterina. Esta reaccin tiene lugar solamente en la direccin de la formacin de la tirosina, por tanto que la fenilalanina no puede obtenerse a partir de la tirosina. La biopterina, a diferencia del cido flico, al que se parece estructuralmente, no es una vitamina, sino que se sintetiza a partir de GTP.

Aplicacin Clnica: Fenilcetonuria.

La fenilcetonuria (PKU) es la principal enfermedad provocada por deficiencia de una enzima del metabolismo de los aminocidos. Su nombre proviene de la excrecin por orina del cido fenilpirvico, una fenilcetona. Tambin se excreta fenil-lactato y fenilacetato que le da un olor caracterstico. Estos metabolitos y otros se encuentran solo en niveles traza en la orina de una persona normal. Exciten varios tipos de PKU, clase I a IV, siendo clase I o clsica la ms frecuente (Figura 10). La PKU clsica es una deficiencia autosmica recesiva de la fenilalanina hidroxilasa, debido a una mutacin del gen. En algunos casos, se producen sntomas neurolgicos graves, valores de coeficiente mental muy bajo y retraso mental, lo cual se atribuye generalmente a los efectos txicos de la Phen, probablemente debido a la reduccin del transporte y metabolismo de los otros aminocidos aromticos en el cerebro, debido a la competencia de la elevada concentracin de fenilalanina. Otra caracterstica es la coloracin clara de la piel, pelo y ojos (albinismo), debido a la falta de pigmentacin causada por dficit de tirosina, la cual interviene en la formacin de melanina, pigmento pardo negruzco que le da el color a la piel y faneras. El tratamiento convencional consiste en alimentar a los nios con una dieta sinttica baja en fenilalanina, pero que incluya tirosina, durante los primeros 4-5 aos, y en la restriccin de protenas en la dieta por varios aos ms, o de por vida. Vale decir que en stas personas la Tyr se a convertido en un aminocido esencial. En el mercado argentino algunos pocos productos poseen inscripcin en sus envases sobre la presencia o ausencia de fenilalanina en su composicin qumica. Ciertas bebidas deshidratadas (jugos en polvo) poseen Phen libre como constituyente, siendo potencialmente txicas para pacientes fenilcetonricos.

Figura 10. Localizaciones de las alteraciones en las distintas formas de fenilcetonuria.

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METABOLISMO DE NUCLETIDOS.
DIGESTIN Y ABSORCIN DE CIDOS NUCLEICOS.
Los cidos nucleicos que ingresan con los alimentos son degradados en el intestino, sobres ellos actan nucleasas (ribo y desoxiribonucleasa) pancreticas e intestinales, que los separan en sus nucletidos constituyentes. Estos sufren entonces la accin de fosfatasas intestinales que liberan el resto fosfato de los nucletidos convirtindolos en nuclesidos, los cuales pueden ser absorbidos como tales, o ser degradados por nucleosidasas intestinales, que separan las bases nitrogenadas pricas o pirimdicas de la pentosa ribosa o desoxirribosa. La mayora de las bases liberadas en la luz intestinal son degradadas aqu por accin de bacterias de la flora normal; el resto es absorbido y pasa a la circulacin portal. Aun cuando los humanos consuman una dieta rica en nucleoprotenas, las bases pricas y pirimdicas de estas no se incorporan de manera directa a los cidos nucleicos de las clulas tisulares, sino que se biosintetizan de novo a partir de intermediarios anfiblicos. Sin embargo, los anlogos de purinas y pirimidinas inyectados (incluyendo medicamentos potenciales contra el cncer) pueden incorporarse al DNA, lo cual se utiliza como terapia curativa. El ser humano no depende de las bases nitrogenadas de la dieta para atender a las necesidades de la sntesis de cidos nucleicos y nucletidos libres. Las bases son producidas en casi todas las clulas con tal eficacia, que el organismo puede prescendir totalmente del aporte exgeno.

FUNCIN METABLICA DE LOS NUCLETIDOS.

Los nucletidos y sus derivados desempean papeles fundamentales en el metabolismo celular. En las clulas de mamferos se encuentran muchos tipos diferentes de nucletidos. Entre las funciones de stos se incluyen las siguientes: 1. Papel en el metabolismo energtico. El ATP es la principal forma de energa qumica asequible a la clula. Se genera en la fosforilacin oxidativa y en la fosforilacin a nivel de sustrato. Esta molculas se utiliza como un agente fosforilante, para impulsar reacciones metablicas diversas. Tambin se lo utiliza como dador de fosfato necesario para la generacin de otros nuclesidos 5-trifosfato. 2. Unidades monomricas de los cidos nucleicos DNA y RNA. 3. Mediadores fisiolgicos. Los nucletidos y nuclesidos actan como mediadores de procesos metablicos claves. La adenosina es importante en la regulacin del flujo sanguneo coronario; el ADP es crtico para la agregacin plaquetaria y, por tanto, de la coagulacin de la sangre; el cAMP y cGMP actan como segundos mensajeros; el GTP es necesario para terminacin del mRNA, la transduccin de seales mediante protenas de unin al GTP, y la formacin de microtbulos. 4. Funcin como precursores. El GTP es el precursor para la formacin del cofactor tetrahidrobiopterina, necesario para la reacciones de hidroxilacin y la generain de xido ntrico. 5. Componentes de coenzimas. Coenzimas tales como el NAD+, NADP+, FAD, sus formas reducidas y la coenzima A contienen como parte de sus estructuras una porcin 5-AMP. 6. Intermediarios activados. Los nucletidos tambin sirven como portadores de intermediarios activados necesarios para diversas reacciones. Un compuesto tal como la UDP-glucosa es un intermediario clave en la sntesis de glucgeno y de las glucoprotenas. Lo mismo sucede con el CTP, que interviene como intermediario de la sntesis de fosfolpidos. Otro intermediario es la S-adenosilmetionina (SAM), que acta como donador de metilos en las reacciones de las bases y residuos glucdicos del ARN y el DNA, as como la formacin de compuestos tales como la fosfatidilcolina. 7. Efectores alostricos. Muchos de los pasos regulados en las vas metablicas estn controlados por las concentraciones intracelulares de nucletidos. Tal es el caso, como veremos, de la sntesis de los nucletidos, donde son ellos mismos quienes regulan su biosntesis.

QUMICA DE LOS NUCLETIDOS.

Los cidos nucleicos contienen cinco bases heterocclicas principales, las purinas adenina (A) y guanina (G); y las pirimidinas citosina (C), timina (T) y uracilo (U). Las estructuras de estas bases se muestran en la

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figura 11. Todos los cidos nucleicos contienen A, G y C pero slo el DNA contiene adems T, mientras que el RNA contiene en su lugar U. El agregado de un azcar cclico, especficamente una D-ribosa o una 2-desoxi-D-ribosa, por enlace covalente en posicin N-9 de una purina, o en N-1 de una pirimidina, forma un nuclesido. Ahora bien, se en el grupo oxidrilo del carbono 5 de la pentosa se produce una fosforilacin, se obtendr un mononucletido, o simplemente llamado nucletido; dependiendo de cual es el azcar implicado tendremos: ribonucletido, cuando se trata de D-ribosa, o bien desoxirribonucletido para el caso de 2-desoxi-D-ribosa. En el cuadro 7 se hace una lista de las principales purinas y pirimidinas, as como de sus derivados nuclesidos y nucletidos. Por ltimo, la unin entre el carbono 5 y el carbono 3 de las pentosas de dos nucletidos consecutivos, utilizando un grupo fosfato como puente de ensamble, llamado a esto enlace fosfodister, formar, con la sucesin de ms nucletido, una cadena a la que se denomina polinucletido. Esta estructura bsica de la cadena es vlida para todos los tipos de cidos nucleicos: cidos desoxirribonucleicos (DNA) y ribonucleicos (RNA).

Figura 11. Estructura de las bases nitrogenadas pirimdicas y pricas constituyentes de los cidos nucleicos.

Cuadro 7. Bases, nuclesidos y nucletidos. Bases

Purinas

Nuclesido (base + pentosa)

Ribosa Desoxirribosa

Nucletido (nuclesido + fosfato)

Ribonuclesido Desoxirribonuclesido

Adenina (A)

Adenosina

Desoxiadenosina

Adenosina monofosfato (AMP) Guanosina Monofosfato (GMP)

Desoxiadenosina monofosfato (dAMP) Desoxiguanosina monofosfato (dGMP)

Guanina (G)

Guanosina

Desoxiguanosina

Pirimidinas Citosina (C) Citidina Desoxicitidina Citidina monofosfato (CMP) Uridina monofosfato (UMP) Desoxicitidina monofosfato (dCMP) Desoxitimidina monofosfato (dTMP) -

Timina (T) Uracilo

Uridina

Desoxitimidina -

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METABOLISMO DE LAS BASES NITROGENADAS.

El metabolismo de los nucletidos esta centrado en el anfibolismo de las bases nitrogenadas que los forman. Como sucede con los aminocidos, en el organismo puede hacerse una separacin virtual entre exgeno y endgeno formndose dos pools metablicamente independientes. Las bases procedentes de los alimentos son degradadas y sus productos finales excretados, mientras que la sntesis de nuevos nucletido y polinucletidos se realiza con purinas y pirimidinas formadas en las clulas. Los cidos nucleicos del organismo, al igual que las protenas, estn en continuo recambio. Una parte de las bases liberada durante los procesos de degradacin puede ser reutilizada para la sntesis de nucletidos y cidos nucleicos, a travs de la va llamada de reciclaje. El resto termina siendo catabolizado y los productos finales son excretados (Figura 12).

Figura 12. Esquema del metabolismo de las bases nitrogenadas en el organismo.

METABOLISMO DE PURINAS.
Biosntesis de purinas.
El anillo purnico se sintetiza de novo en las clulas del organismo utilizando como materia prima: aminocidos, como dadores de carbonos y nitrgeno, y otras molculas pequeas que completan el esqueleto de la base. Estudios con istopos han permitido establecer el origen de cada uno de los tomos constituyentes del ncleo purina (Cuadro 8 y Figura 13).
Cuadro 8. Contribuciones al anillo purnico. Glicina Grupo amida de glutamina Aspartato Restos formilos transportados por tetrahidrofolato (THF) CO2 (HCO3-) Carbono 4, 5 y nitrgeno 7 Nitrgenos 3 y 9 Nitrgeno Carbonos 2 y 8 Carbono 6.

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Figura 13. Esquema de la contribuciones al anillo purnico.

El ensamblaje de los segmentos se realiza en una secuencia de reacciones llevadas a cabo por enzimas que se hallan en el citosol de la mayora de las clulas (Figura 14). Desde el comienzo participa ribosa-5-fosfato, sobre la cual se van realizando todas las adiciones, por consecuente el producto final de la va no es una base libre, sino un nucletido (IMP). La ribosa-5-fosfato se genera en la va de las hexosas monofosfato, sta debe ser activada para ingresar a la sntesis usando una ATP, el cual le transfiere pirofosfato en el carbono 1. Esta reaccin es catalizada por la fosforribosilpirofosfato sintetasa, dando como producto 5-fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP), compuesto que participa tanto de la sntesis de novo de purinas y pirimidinas como en la va de reciclaje.

Va de las Pentosas

Ribosa-5-fosfato PRPP sintetasa 5-fosforribosil-1-pirofosfato

+

Gln
-

GlnPRPPamidotransferasa Glu 5-fosforribosil-1-amina Gly ATP

Fosforribosilglisinamida sintetasa ADP+Pi 5-fosforribosil glicinamida

IMP
GTP ATP +

AMP

GMP GDP GTP

ADP ATP
Figura 14. Biosntesis de nucletidos purnicos.

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La siguiente reaccin, catalizada por la glutamina PRPP amidotransferasa, transfiere el grupo amida de una glutamina en el carbono donde se encuentra el pirofosfato de la PRPP, al cual desplaza formado un enlace CN que ser el enlace N-glucosdico entre el C1 de la pentosa y el N9 de la purina en el nuclesido que se ha de formar. El producto es 5-foforribosil-1-amina, la cual reacciona con glicina y ATP para dar 5fosforribosilglicinamida, reaccin llevada a cabo por la fosforribosilglicinamida sintetasa. Los dems tomos del heterociclo purina se agregaran en 8 etapas sucesivas. La actividad enzimtica de varios pasos de sta va, residen en dominios separados de protenas enzimticas multifuncionales. De toda estas etapas el primer nucletido que se obtiene es inosina monofosfato (IMP), cuya base nitrogenada es la hipoxantina.

Formacin de AMP y GMP.

A partir del IMP se produce una bifurcacin de la va de sntesis, debido a que el IMP se convertir en AMP o GMP. Posteriormente estos nucletidos formarn ATP y GTP respectivamente, utilizando las enzimas 5monofosfato quinasa y nuclesido-5-disfosfato quinasa. La conversin hacia uno u otro nucletido no es al azar; la formacin de GMP requiere energa de ATP, mientras que la formacin de AMP requiere GTP. Esto se interpreta como una reaccin reciproca, es decir, un aumento de ATP provoca un aumento de GMP y viceversa, mucho GTP aumenta la produccin de AMP. Esto es una forma de regulacin que equilibra las cantidades de GTP y ATP sintetizadas dentro de la clula.

Regulacin de la sntesis de purinas.

La biosntesis de nucletidos purnicos se regula fundamentalmente por feed-back (Figura 14). La formacin de 5-fosforribosil-1-amina a partir de glutamina y 5-fosforribosil-1- pirofosfato es la etapa comprometida de la va y en la enzima que la realiza se halla el punto principal de regulacin. La glutamina PRPP amidotransferasa es regulada alostricamente por los productos finales de la va IMP, AMP y GMP que actan como efectores negativos; mientras que los sustratos PRPP y glutamina, son efectores positivos. En realidad se podra considerar al PRPP como verdadero efector por la alta Km de la enzima para este sustrato. La enzima es un monmero enzimtico activo, pero en presencia de IMP, AMP y GMP forma un dmero menos activo. La PRPP favorece la forma monomrica. La enzima posee dos centros alostricos, en uno se fijan IMP y GMP, nucletidos oxopurnicos; y en el otro AMP, nucletido aminopurnicos. La fijacin simultanea de AMP y IMP o GMP produce un efecto aditivo o sinrgico en la inhibicin del enzima. No se conoce control alguno entre la formacin de 5-fosforribosil-1-amina y el IMP. Por el contrario si se sabe que existe regulacin en la bifurcacin del IMP a AMP o a GMP. Debido a que el IMP se convierte en AMP o en GMP, un aumento de estos productos inhibe por competicin a la enzima que los forman. Tambin debe destacarse que al usarse ATP para formar GMP y, a la inversa, GTP para formar AMP se crea un dispositivo regulador para el funcionamiento coordinado de ambas ramas. Un exceso de ATP producir un aumento de GMP y luego GTP, el cual favorecer la formacin de AMP y consecuentemente ATP. Debe haber adems otros mecanismos, hasta ahora desconocidos, que regulen el cociente ATP/GTP, dado que en la mayora de las clulas, la concentracin total de nucletidos de adenina (AMP, ADP y ATP) es de 4 a 6 veces la de nucletidos de guanina.

Va de Reciclaje, recuperacin o salvataje de purinas.

Esta es una va alternativa para formar nucletidos a partir de bases preformadas procedentes de la degradacin de cidos nucleicos en tejidos o absorbidos de la dieta. La va necesita de las enzimas fosforribosil transferasas, las cuales son dos: 1. Adenina fosforribosil transferasa (APRTasa): sus sustratos son adenina y PRPP, y su producto es AMP. Adenina + PRPP
APRTasa

AMP

PPi

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2. Hipoxantina-guanina fosforribosil transferasa (HGPRTasa): utiliza hipoxantina o guanina ms PRPP para formar los nucletidos correspondientes: IMP y GMP. Hipoxantina + Guanina PRPP IMP + GMP PPi

HGPRTasa

Ambas enzimas se regulan por feed-back, inhibicin competitiva de los productos. Estas vas alternativas de sntesis de nucletidos interrumpen eficazmente la sntesis de novo de estos compuestos. En primer lugar, por el uso de PRPP, activador de la Gln PRPPamido transferasa, lo que provoca una gran disminucin de su velocidad de catlisis; y en segundo lugar, la formacin de AMP, GMP y IMP provocan efecto negativo sobre la misma enzima. Esto evita el uso de energa innecesario, pero ms importante an, desciende marcadamente la sntesis de AMP y GMP as como el metabolito de su degradacin, el cido rico. Esto se ve reflejado en el sndrome de Lesch-Nyhan, enfermedad neurolgica hereditaria ligada al cromosoma X, donde la actividad de la HGPRTasa esta disminuida de forma importante, dando hiperuricemia, retraso mental y trastornos sensoriales que pueden llevar a la automutilacin.

Catabolismo de purinas.
La degradacin de DNA y RNA por nucleasas produce nucletidos (ribo y desoxiribonucletidos) y estos a su vez son sometidos a hidrlisis de nucleotidasas con accin fosfatasa dando nuclesidos libres, en el caso de las purinas, adenosina y guanosina; esta ltima es degradada a guanina y ribosa-1-fosfato por la nuclesido purnico fosforilasa. El nuclesido adenosina, por accin de la adenosina desaminasa, se convierte en inosina, luego una nuclesido fosforilasa divide a la inosina en hipoxantina y pentosa-1-fosfato. La hipoxantina se oxida a xantina por la xantina oxidasa, flavoprotena que contiene Fe y Mo (molibdeno). Por otro lado la guanina, por accin de la guanasa, se convierte tambin en xantina. Tanto adenina como guanina convergen en xantina. Este metabolito es sustrato de la xantina oxidasa, nuevamente en escena, que lo convierte en cido rico, producto terminal de la degradacin de purinas, el cual es escretado principalmente por orina. La figura 15 muestra la va de degradacin de las purinas.
cidos Nucleicos Nucleasas Nucletidos de Guanina Pi Guanosina
Nuclesido fosforilasa

Nucletidos de Adenina Nucleotidasas Pi Adenosina

Adenosina desaminasa

Pentosa-1-P Guanina Guanasa NH3 Xantina O2

NH3 Inosina

Nuclesido fosforilasa Xantina oxidasa Xantina oxidasa

Pentosa-1-P Hipoxantina Alopurinol

cido rico Figura 15. Catabolismo de purinas. Sitio de accin del alopurinol.

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cido rico.
En el adulto normal se producen unos 500mg por da de cido rico, 80% del cual se excreta por orina, el resto se degrada a CO2 y NH3 o urea. En el plasma normal, el cido rico alacanza una concentracin de 4 a 6mg por 100ml. Los varones tienen niveles de 1mg por 100ml ms que las mujeres, diferencia que desaparece despus de los 45-50 aos de edad, lo cual se relaciona a diferencias hormonales entre ambos sexos.

Consideracin de la solubilidad del cido rico.

El cido rico posee un pKa de alrededor de 5,75, lo que indica que a pH plasmtico normal (7,4) este cido libera su protn del grupo OH del C8 y se convierte en la forma inica urato. A pH 5,75 la forma inica se equilibra con la no ionizada, mientras que a pH menor predomina la forma no disociada. Esto tiene importancia, ya que el cido rico es menos soluble en agua que el urato, por lo que una orina acidificada aumenta la cantidad de cido rico y este tiende a precipitar; en cambio, si la orina se alcaliniza se produce un aumento de urato, con mayor posibilidad de excrecin en el medio acuso de la orina.

Consideraciones de los alimentos hiperurimiantes.

Una dieta rica en cidos nucleicos aumenta la cantidad de purinas y en consecuencia la produccin de cido rico. Los alimentos que contribuyen a esto son aquellos con alta cantidad de nucleoprotenas, tales como carnes, vsceras, tejidos glandulares, extractos de carne (picadillos), legumbres, hongos y espinaca. Ciertos compuestos qumicos del caf (cafena), cacao (teobromina), t (teofilina), mate (matena) y algunas bebidas carbonatadas contienen gran cantidad de xantinas metiladas, purinas que favorecen la formacin de cido rico.

Aplicacin clnica: Gota.

Definicin. Con el trmino de gota se designa a la enfermedad caracterizada por niveles elevados de cido rico en plasma (hiperuricema). Cuadro Clnico. Muchos de los sntomas, sino todos, relacionados con la hiperuricemia, aparecen como resultado de la escasa solubilidad del cido rico, esto junto a su abundancia, lleva a la formacin y precipitacin de cristales de urato sdico que se depositan principalmente en las articulaciones de las extremidades, produciendo artritis (inflamacin de las articulaciones) muy dolorosas. Se afectan preferentemente las articulaciones interfalngicas y del metatarso, siendo tpico el compromiso del dedo grueso del pie (Figura 16). Tambin se producen precipitados de urato sdico en cartlagos, siendo el cartlago de la oreja el ms frecuentemente comprometido, formndose ndulos indurados que se conocen con el nombre de tofos.

Figura 16. Artritis en la gota. Inflamacin interfalngica del dedo grueso del pie

Fisiopatologa. La mxima cantidad de uratos que puede disolverse en sangre es de 7mg/dL, razn por la cual cuando se excede este nivel se produce el precipitado. El urato de sodio precipitado es fagocitado por macrfagos residentes del tejido, una vez dentro de la clula, los cristales de urato interaccionan con la

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membrana dando su ruptura, liberndose, en consecuencia, enzimas lisosomales que pueden atacar al tejido circundante producindose productos de degradacin que interaccionan con monocitos sanguneos los que son atrados al lugar y se activan a macrfagos. Estos producen numerosas citoquinas que inician el proceso inflamatorio. Etiologa. Gota primaria: causada por trastornos metablicos de origen gentico, que lleva a la formacin excesiva de cido rico o de sus precursores. Los siguientes son ejemplos de alteraciones enzimticas: 1. Aumento en la actividad de la PRPPsintetasa: esto produce un incremento de PRPP, efector positivo de la Gln PRPP amidotransferasa lo que da un aumento de la sntesis de novo de purinas. 2. Actividad parcial de la HGPRTasa: una disminucin parcial de la actividad de sta enzima tiene dos consecuencias con respecto a las ruta de sntesis de novo de nucletidos purnicos. En primer lugar, al haber una disminucin en el reciclaje de hipoxantina y guanina, el PRPP no se consume por la reaccin de la HGPRTasa y puede activar la Gln PRPP amidotransferasa. En segundo lugar, al disminuir el reciclaje de hipoxantina y guanina, no se forma IMP y GMP a travs de esta va, de manera que la regulacin de la etapa de la PRPP amidotransferasa por el IMP y GMP como efectores negativos se ve comprometida. 3. Deficiencia de glucosa-6-fosfatasa: en pacientes que presentan enfermedad de Von Gierke se da tambin frecuentemente hiperuricemia y gota. La prdida de actividad glucosa-6-fosfatasa tiene como consecuencia que una mayor cantidad de glucosa-6-fosfato se desve hacia la ruta de las hexosas monofosfato, se genere ms ribosa-5-fosfato y se incremente el nivel de PRPP intracelular. El PRPP es un efector positivo de la PRPP amidotransferasa. Gota secundaria: se debe a una complicacin de hiperuricemia producida por otra enfermedad de base como leucemia, nefritis crnica, policitemia, entre otras. Tratamiento: Para el control del dolor en caso de un cuadro agudo se recurre a analgsicos. Para el control a largo plazo, uno de los frmacos de primera eleccin es el alopurinol, compuesto con estructura similar a la hipoxantina que tiene la capacidad de inhibir a la xantina oxidasa en forma competitiva, lo que reduce la formacin de xantina y cido rico, pero tambin produce aumento de hipoxantina, sustrato de la HGPRTasa, enzima del salvataje que genera IMP, efector alostrico negativo de la Gln PRPP amidotransferasa, adems de consumir PRPP, otro efector alostrico, pero positivo, de esta ltima. El efecto global del alopurinol es la disminucin de la formacin de cido rico como de la sntesis de novo de nucletidos purnicos. Como complemento al tratamiento medicamentoso, se recomienda una dieta baja en purinas para no contribuir con bases adicionales en la formacin de cido rico y abundante liquido para alcalinizar la orina.

METABOLISMO DE PIRIMIDINAS.
Biosntesis de pirimidinas.
De la misma forma que las purinas, el ncleo pirimidina se forma de precursores diversos. Su sntesis conduce a la formacin de uridina-5-monofosfato (UDP), a partir del cual se deriva la formacin de CTP, TMP y TTP (Figura 17).

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Glutamina + CO2
-

PRPP

2 ATP Carbamoilfosfato sintetasa II Glu 2 ADP+Pi Carbamoil fosfato + Asp Asp carbamoil transferasa Pi Carbamoil aspartato cido ortico UMP UDP UTP Gln CTP
Figura 17. Biosntesis de nucletidos pirimidnicos.
-

ATP ATP

dUDP dTMP

CH3 (THF)

Las contribuciones al heterociclo de pirimidina son las siguientes (Figura 18): Aspartato: otorga el mayor aporte, los carbonos 4, 5 y 6; y el nitrgeno 1. CO2: corresponde al carbono 2. Amida de glutamina: aporta el nitrgeno 3. El primer paso es la formacin de carbamoil fosfato en una reaccin catalizada por la carbamoil fosfato sintetasa II (CPSII), que usa NH3 dado por glutamina, y CO2 libre, requiere adems 2 ATP. Esta reaccin es similar al primer paso del ciclo de la urea, donde participa la carbamoil fosfata sintetasa I, la cual es mitocondrial y requiere N-acetilglutamato para funcionar, en cambio la CPSII no lo necesita y es citoslica (Cuadro 9).

Figura 18. Contribuciones al anillo pirimidina.

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Cuadro 9. Diferencias entre enzimas carbamoil fosfato sintetasa I y II. CPSI Sntesis de urea Ubicacin mitocondrial Presente slo en hepatocitos Efector alostrico: N-acetilglutamato Usa NH3 de cualquier origen (mayormente de desaminacin del glutamato) CPSII Sntesis de pirimidinas Ubicacin citoslica Omnipresente en los tejidos Efector alostrico: PRPP Usa NH3 slo dado por glutamina

Formado el carbamoil fosfato se combina con aspartato para dar carbamoilaspartato, reaccin catalizada por la aspartato transcarbamilasa (o aspartato carbamoil-transferasa), enzima alostericamente regulada, siendo el principal punto de regulacin de la va. El carbamoilaspartato se cicla y forma cido orotico, el cual reacciona con fosforibosil pirofosfato (PRPP) para formar el primer nucletido: uridina monofosfato (UMP). La formacin de cido orotico se realiza en la mitocondria, las dems reacciones se realizan en citosol, en donde las enzimas se hallan asociadas en protenas multifuncionales, una bifuncional llamada CAD y otra bifuncional la UMP sintetasa.

Formacin de CTP y TTP.

La fosforilacin del UMP, por accin de la nucletido difosfoquinasa, produce UDP y UTP. Es entonces cuando el C4 de la uridina-5-trifosfato se transamina con un grupo amida de una glutamina, formando citidina-5-trifosfato (CTP), siendo la CTP sintetasa quien participa en esta reaccin. Por otro lado, el UDP, proveniente de UMP, se reduce en el C2 por la nucleosido-5-difosfato reductasa dando 2-desoxiuridina-5difosfato (dUDP) que luego pierde un grupo fosfato y se forma dUMP, el cual es metilado en el C5 por accin de la timidilato sintetasa, dando timidina-5-monofosfato (TMP). Por ltimo, la fosforilacin consecutiva de TMP deriva en timidina-5-trifosfato o TTP.

Regulacin de la sntesis de pirimidinas.

Al igual que la va de sntesis de purinas, esta va se regula por feed-back. Las enzimas que son punto de regulacin de esta cascada de reacciones son dos: 1. Carbamoil fosfato sintetasa: esta enzima es inhibida por UTP, uno de los productos finales de la va. Por el contrario es activada por PRPP, que no es su sustrato. 2. Asapartato carbamoil transferasa: por su parte, esta enzima es inhibida por UMP y CTP, tambin productos finales; y es activada por sus sustratos carbamoil fosfato y Aspartato. Adems, se da un feed-back negativo en la formacin de CTP a partir de UTP, lo que asegura niveles equilibrados de CTP y UTP, este ltimo factible de convertirse en TTP.

Va de Reciclaje, recuperacin o salvataje de pirimidinas.

El reciclaje de pirimidinas es realizado por la pirimidina nuclesido monofosfato transferasa, cuya reaccin general se puede representar como sigue: Pirimidina + PRPP Pirimidina nuclesido monofosfato (UMP, CMP y TMP)

La biosntesis de pirimidinas posee semejanzas y diferencias respecto de las purinas, en forma sinttica se las presenta en el cuadro 10.

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Cuadro 10. Diferencias y semejanzas en la sntesis de purinas y pirimidinas. Bases Diferencias El ensamble de la base es sobre la pentosa. El esqueleto de la base es glicina. La va se lleva a cavo solo en citosol. El ensamblaje de la base no requiere la pentosa. El esqueleto de la base es aspartato. La va se lleva a cabo en el citosol y en mitocondria. Semejanzas

Purinas

Ambas vas requieren glutamina, un aminocido constituye el esqueleto del heterociclo. La regulacin se realiza por feed-back.

Pirimidinas

Catabolismo de pirimidinas.
El recambio de los cidos nucleicos da lugar a la liberacin de nucletidos de pirimidina y purina. La degradacin de los nucletidos pirmidnicos siguen la ruta que los convierte en nuclesidos por accin de fosfatasas inespecficas. La citidina y desoxicitidina son desaminadas a uridina y desoxiuridina, por la nuclesido pirimidina desaminasa. La uridina fosforilasa cataliza la fosforlisis de la uridina, desoxiuridina y timidita, para formar las bases pirimdinicas uracilo y timina como producto final Las bases pirmdicas son degradadas hasta productos muy solubles y fcilmente eliminados o utilizados por las clulas. El uracilo recibe dos hidrgenos donados por NADPH para convertirse en dihidrouracilo. Posteriormente se produce, por hidrlisis, apertura y ruptura del anillo pirimidnico para formar -alanina, CO2 y NH3 como producto final. Ninguno de estos productos es exclusivo de la degradacin del uracilo, por lo que no puede estimarse el recambio de los nucletidos de citosina y de uracilo a partir de los productos finales de esta va. La timina es hidrogenada a dihidrotimina en una reaccin en la cual participa NADPH. Luego el ciclo se abre y se produce -aminoisobutirato, CO2 y NH3. Eventualmente, el -aminoisobutirato puede convertirse en succinil-CoA, que puede ingresar al ciclo del cido ctrico. Por otro lado, el cido -aminoisobutrico es excretado por la orina en el hombre, y se origina exclusivamente a partir de la degradacin de timina. Se puede, por tanto, estimar el recambio de DNA o de los nucletidos de timidina midiendo la excrecin de amino-isobutirato. Pacientes con cncer sometidos a quimioterapia o radioterapia, procesos en los que se matan grandes cantidades de clulas y se degrada DNA, excretan niveles aumentados de cido aminoisobutirico.

Formacin de Desoxirribonucletidos.
La enzima ribonuclesido-5-difosfato reductasa, cataliza la reaccin en la que se reduce el C2 de la ribosa de los ribonucletidos difosfato (ADP, GDP, UDP y CDP) para dar los correspondientes 2desoxirribonucletidos difosfatos. La enzima requiere una coenzima de bajo peso molecular llamada tiorredoxina, quien reduce el C2 del azcar, previa reduccin de sta por un NADPH. La regulacin se da por los productos, que actan como efectores negativos.

Fosforilacin de nuclesidos y nucletidos. Papel de nuclesido y nucletido quinasa.

Los nuclesidos exgenos o endgenos de la clula son sustratos de la nuclesido quinasa especfica para cada uno de ellos. El producto, un nucletido monofosfato (NMP), es el sustrato de una nucletido monofosfato quinasa, dando un nucletido difosfato (NDP) para que luego este se convierta en un trifosfato (NTP) por accin de una nucleotido difosfato quinasa. Las dos ltimas enzimas no son especficas para los distintos nucletidos. En cada reaccin de fosforilacin se utiliza un ATP como dador del grupo fosfato.

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Estas reacciones son particularmente importantes en una clula como el eritrocito que no puede formar nucletidos de novo.

Aplicacin Clnica. Compuestos que obstaculizan el metabolismo de los nucletidos: utilizacin como agentes quimioterpicos.
La sntesis de novo de nucletidos purnicos y pirimidnicos es crtica para la replicacin, mantenimiento y funcin celular normales. La regulacin de estas vas es importantes ya que defectos en las enzimas reguladoras producen estados patolgicos. Se han sintetizado o aislado (como productos naturales de plantas, hongos o bacterias) muchos compuestos que son anlogos estructurales de las bases o los nuclesidos utilizados en la reacciones metablicas. Estos compuestos son inhibidores relativamente especficos de enzimas implicadas en la sntesis o interconversin de nucletidos. Estos frmacos, tiles en terapia de cuadros clnicos, se han clasificados en antimetabolitos, antifolatos, antagonistas de la glutamina y otros compuestos. Antimetabolitos: son, generalmente, anlogos estructurales de las bases o nuclesidos purnicos y pirimidnicos que obstaculizan centros metablicos muy especficos. Mucho de los actuales quimioterapicos pertenecen a este grupo. Antifolatos: compuestos que obstaculizan la formacin de tetrahidrofolato (THF) a partir de dihidrofolato (H2folato) por inhibicin de la dihidrofolato reductasa. Antagonistas de la glutamina: en la clulas tienen lugar muchas reacciones en las que la glutamina acta como dador de grupos amino. Estas reacciones de amidacin son muy crticas para la sntesis de novo del anillo purnico (N3 y N9), en la conversin de IMP en GMP, en la formacin del carbamoil fosfato citoslico, en la conversin de UTP a CTP y en la sntesis de NAD+. Los compuestos que inhiben estas reacciones se conocen como antagonistas de la glutamina. El cuadro que a continuacin se presenta describe algunos agentes quimioterpicos, muchos de los cuales son de muy frecuente uso en la clnica mdica.
Cuadro 11. Compuestos que obstaculizan el metabolismo de nucletidos y su uso como agentes quimioterpicos. Clasificacin Aplicacin clnica Mecanismo de accin. A. Antimetabolitos. Antitumoral. Tratamiento de la Sustancias antipurnicas, 6-mercaptopurina leucemia aguda linfoblstica y no citotxicas, detienen el ciclo linfoblstica. celular. Estos agentes se 6-tioguanina convierten en ribonucletidos que actan como efectores negativos de la PRPP amidotransferasa de la sntesis de novo de purinas. Adems inhiben las enzimas de la formacin de GMP y AMP a partir de IMP. Tambin se incorporan al DNA alterandolo. Azatiopurina Inmunosupresor en pacientes con transplante. Antiproliferativo. Se asocia a un grupo sulfhdrilo (SH) y se convierte en mercaptopurina que se incorpora al DNA alterando o retardando el ciclo celular. Es un anlogo pirimidina del uracilo (antipiridnico) su forma activa es el fluorouridina trifosfato (FUTP) y fluorodesoxiuridina (FdUTP). El FUTP se incorpora al RNA e inhibe la maduracin del rRNA y aaltera el corte y

5-Fluorouracilo

Tratamiento del cncer del tubo digestivo bajo y de mama, donde ejerce gran actividad. Activo en carcinoma de cuello, cabeza, tero, prstata, vejiga y algunos tipos de cncer de pulmn.

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empalme del mRNA. El FdUTP inhibe ireversiblemente la timidilato sintetasa, la que deja de formar dTMP dando una muerte por carencia de timina de la clula. Aciclovir ACV (acicloguanosina) 3-azido-3-desoxitimidina AZT Se emplean en el tratamiento para control (pero no cura) de infecciones por virus herpes (HSV) y el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). En la actualidad el AZT es droga de primera lnea contra el HIV. Ambos compuestos deben fosforilarse para ser activos y solo actan sobre clulas infectadas por virus. El ACV es un anlogo purnico que debe ser fosforilado por la timidina quinasa especfica del herpesvirus, codificada en su genoma. Luego, las quinasas celulares lo convierten en acilguanocina trifosfato que la DNA polimerasa viral utiliza y la incorpora en la cadena de DNA viral en formacin provocando su alteracin e inutilidad. El AZT, por otro lado, es fosforiliado por quinasas celulares a la forma AZT-tifosfato. Este metabolito bloquea la replicacin del HIV al inhibir la DNA polimerasa reversa del virus que es 100 veces ms sensible al AZT fosforilado que las polimerasas celulares. Inhibe la xantina oxidasa en forma competitiva, disminuyendo la sntesis de cido rico.

Alopurinol

Prevencin y tratamiento de la gota y cuadros de hiperuricemia.

B. Antifolatos Metotrexato MTX Antitumoral. Indicado en la leucemia linfoblstica aguda del nio, linfomas no-Hodgkin y en numerosos tumores slidos. Tambin se indica en psoriasis y artritis cuando no responden a otras drogas. Es una droga muy citotxica a bajas concentraciones por lo acarrea muchos efectos adversos, pero es de gran eficacia. Anlogo estructural al cido flico. Su modo de accin es inhibir la enzima dihidrofolato reductasa, impidiendo que el cido flico sea reducido a cido tetrahidrofolico (THF), necesario para el transporte de carbonos a la sntesis de bases nitrogenadas, provocando la interrupcin de la va de sntesis de novo, por lo cual se impide la divisin celular por no poder duplicar el DNA.

C. Antigulaminas
Azaserina 6-diazo-5-oxonorleucina No tiene aplicacin clnica. Inhibidores muy efectivos de las enzimas que utilizan glutamina como dador de amino, muchas de las cuales son etapas claves de cascadas enzimticas, por lo que son compuestos extremadamente txicos.

Fuente: Confederacin Mdica de la Rep. Argentina (COMRA). Formulario teraputico Nacional. 20036. Devlin, T. Bioqumica, libro de texto con aplicacin clnica. 20001

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