Validacin de Mtodos: Caso prctico

PONENTE: Ma. Estela Gonzlez Caballero

Documentos de referencia
1. NMX-EC-17025-IMNC-2006(ISO/IEC 17025:2005) 2. Criterios de aplicacin de la norma NMX-EC-17025- IMNC-2006 (ISO/IEC 17025:2005) MP-FE-005 -07 (2012-02-27) 3. Guas tcnicas CENAM 4. Publicacin tcnica CNM-MRD-PT-030. Mtodos analTcos adecuados a su propsito. Gua de Laboratorio para la Validacin de Mtodos y Temas Relacionados. CENAM

Validacin
Vericacin de que los requisitos especicados son adecuados para un uso previsto.(VIM 3 ed.)

Conrmacin mediante el suministro de evidencia objeTva de que se han cumplido los requisitos del mtodo para una uTlizacin o aplicacin prevista. NMX-CH-152-IMNC-2005

La validacin es la conrmacin por examen y la provisin de evidencia objeTva de que se cumplen los requisitos parTculares para un uso especco propuesto. 5.4.5.1 NMX-EC-17025-IMNC-2006

Por qu es necesario validar?

Conabilidad de las mediciones - Fines comerciales - Evaluacin de calidad de los productos - Toma de decisiones Deber Tco - Se Tene evidencia de la medicin - PresTgio para el laboratorio Requisito normaTvo - Acreditacin

NMX-EC-17025-IMNC-2006 (ISO/IEC17025:2005)
5.4.5 Validacin de los mtodos 5.4.5.2 El laboratorio debe validar los mtodos no normalizados, los mtodos que disea o desarrolla, los mtodos normalizados empleados fuera del alcance previsto, as como las ampliaciones y modicaciones de los mtodos normalizados, para conrmar que los mtodos son aptos para el n previsto.

Requisitos
Analista Instrumentos Desarrollo del mtodo Validaci n de mtodos

CaractersTcas del Mtodo

CuanTtaTvo No Normalizados Validacin AnalTcos Fsicos Normalizados Conrmacin AnalTcos Fsicos Clculos Pruebas rpidas Kit comerciales CualitaTvo

CaractersTcas del Mtodo

Mtodos analticos

Propiedades qumicas

Reaccin qumica

Mtodos fsicos

Propiedades fsicas contenido Medios fsicos

Criterios de aplicacin de la norma NMX-EC-17025-IMNC-2006 (ISO/IEC 17025:2005) MP-FE-005 -07

Criterio: S e c o n s i d e r a n m t o d o s o p r o c e d i m i e n t o s normalizados, aquellos publicados en Normas Ociales Mexicanas, Normas Mexicanas o los emiTdos por organizaciones de normalizacin, extranjeras, regionales internacionales, todas reconocidas, tales como ISO, EN, ASTM, AOAC, EPA, USP, Standar Methods, etc.

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Para los mtodos no normalizados, propios o desarrollados por el laboratorio, los mtodos obtenidos de publicaciones ciengcas, as como los mtodos normalizados modicados o ampliados o usados fuera de su alcance propuesto el laboratorio debe realizar y presentar evidencia objeTva de la validacin del mtodo [5.4.5].

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II. Validacin de los mtodos. La validacin de los mtodos debe realizarse de acuerdo a lo siguiente: a. Para los ensayos que involucren mediciones analTcas: 1. Porcentaje de Recuperacin o error relaTvo 2. Lmite de deteccin 3. Lmite de cuanTcacin

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4. Intervalo lineal y de trabajo 5. Reproducibilidad 6. RepeTbilidad 7. Sesgo o error 8. IncerTdumbre 9. Sensibilidad 10. SelecTvidad 11. Robustez

Recuperacin Los mtodos analTcos no siempre miden todo el analito de inters presente en la muestra. El mtodo debe ser designado deliberadamente para determinar solo la forma de inters del analito. Es posible realizar estudios de recuperacin de MR, si estos estn disponibles; de otra forma se busca la recuperacin de la fraccin del analito adicionada a una muestra de prueba (forTcada o con spike) previa al anlisis. CNM-MRD-PT-030

Recuperacin La fraccin del analito adicionada a una muestra de prueba(muestra forTcada o adicionada) se calcula como: C f Csf %R = x100 Ca Donde: Cf= Concentracin del analito en la muestra forTcada Csf= Concentracin del analito en la muestra sin forTcar Ca= Concentracin del analito adicionada

CNM-MRD-PT-030

Lmite de Deteccin Es la mas pequea canTdad o concentracin del analito en la muestra de prueba que puede ser conablemente disTnguida del cero. IUPAC La menor concentracin del analito en una muestra que puede detectarse, pero no n e c e s a r i a m e n t e c u a n T c a r s e b a j o l a s condiciones establecidas de la prueba. IUPAC

Lmite de Deteccin Normalmente, para propsitos de validacin es suciente proporcionar un indicaTvo del nivel al cual la deteccin resulta problemTca. Para este propsito la aproximacin blanco + 3s usualmente ser suciente. Cuando el trabajo es para soportar la conformidad con una norma o especicacin, probablemente ser necesaria una aproximacin ms exacta YL = Y bl + Ksbl CNM-MRD-PT-030

Lmite de CuanTcacin

El lmite de cuanTcacin (LoQ) estrictamente es la concentracin ms baja del analito que puede ser determinada con un nivel aceptable de precisin de repeTbilidad y veracidad. Tambin se dene por diversas convenciones como la concentracin del analito correspondiente al valor del blanco de muestra ms 5, 6 10 desviaciones estndar de la media del blanco.

YL = Y bl + Ksbl

Lmite de CuanTcacin

El contenido igual o mayor que el menor punto de concentracin en la curva de calibracin. Tambin se conoce como Lmite de Reporte.

Normalmente el Lmite de CuanTcacin forma parte del estudio para determinar el intervalo de trabajo. ste no deber determinarse por extrapolacin debajo de la concentracin ms baja del blanco forTcado. CNM-MRD-PT-030

Intervalo Lineal y de trabajo Linealidad: Dene la habilidad del mtodo para obtener resultados de la prueba proporcionales a la concentracin del analito.

Nota: Se deduce que el intervalo lineal es el intervalo de concentraciones del analito dentro del cual los resultados de prueba obtenidos por el mtodo son proporcionales a la concentracin del analito.

Intervalo Lineal y de trabajo Intervalo (de Medicin de Trabajo): Conjunto de valores del mensurando para los cuales se pretende que el error de un instrumento de medicin caiga dentro de lmites especicados.

Curva de Calibracin: Representacin grca de la seal de medicin como una funcin de la canTdad de analito.

Intervalo Lineal y de trabajo Dentro del intervalo de trabajo puede exisTr un intervalo de respuesta lineal. La extensin de este intervalo puede establecerse durante la evaluacin del intervalo de trabajo. los clculos de regresin por ellos mismos, son insucientes para establecer la linealidad. Para hacer esto, puede ser suciente una inspeccin visual de la lnea y de los residuales. En general, las revisiones de linealidad requieren de al menos 10 puntos a diferentes concentraciones o valores de la propiedad relacionada.

Intervalo Lineal y de trabajo Dentro del intervalo lineal, un punto de calibracin puede ser suciente para establecer la pendiente de la curva de calibracin pero en el intervalo de trabajo ser necesaria la calibracin con varios puntos (preferentemente ms de 6). La relacin entre la respuesta del instrumento con la concentracin no Tene que ser perfectamente lineal para que un mtodo sea efecTvo pero la curva debe ser repeTble da con da.

RepeTbilidad Precisin bajo condiciones de repeTbilidad Condiciones de repeTbilidad: condiciones bajo las que se obTenen resultados independientes, con el mismo mtodo, sobre muestras idnTcas, en el mismo laboratorio, por el mismo operador, y uTlizando los mismos equipos de medicin durante un corto intervalo de Tempo. ISO 3534-1 (NMX-CH-5725-1-IMNC-2006).

RepeTbilidad La precisin ms pequea esperada: dar una idea de la clase de variabilidad esperada cuando un mtodo se ejecuta por un solo analista, con un equipo en un perodo corto de Tempo, es decir, es la clase de variabilidad que se espera entre resultados cuando una muestra se analiza por duplicado
Analizar Mismo analista, equipo y laboratorio, en un perodo de Tempo corto RepeTciones Qu calcular a parTr (independiente) de los datos Determinar la desviacin estndar (s) (desviacin estndar de repeTbilidad) a cada concentracin

10

Reproducibilidad Precisin bajo condiciones de reproducibilidad

Condiciones de reproducibilidad: condiciones bajo las cuales los resultados de ensayo se obTene con el mismo mtodo, sobre muestras idnTcas, en laboratorios diferentes, con operadores disTntos uTlizando equipos disTntos. ISO 3534-1 (NMX-CH-5725-1-IMNC-2006).

Reproducibilidad Si la muestra se analiza por varios laboratorios para nes comparaTvos, entonces una medida de precisin ms signicaTva a usarse es la reproducibilidad; sta es la medida de precisin ms grande normalmente encontrada. la precisin medida entre diferentes analistas, en perodos de Tempo prolongados, dentro de un solo laboratorio se conoce como precisin intermedia. La precisin se determina por lo general en trminos de la desviacin estndar o la desviacin estndar relaTva

Reproducibilidad

Analizar Diferente analista y equipo, mismo laboratorio, perodo de Tempo prolongado

RepeTciones (independiente)

Qu calcular a parTr de los datos Determina la desviacin estndar de reproducibilidad dentro del laboratorio a cada concentracin

10

Sesgo (veracidad) La diferencia entre el valor esperado de los resultados de prueba y un valor de referencia aceptado. [ISO 3534-1] Caracteriza al error sistemTco en un procedimiento analTco dado y es la desviacin (posiTva o negaTva) de la media de los resultados analTcos con respecto al valor verdadero (conocido o aceptado). [IUPAC Compendium of Chemical Technology, 1985]

La diferencia entre la media lmite () y el valor verdadero (); es decir, = - . [IUPAC Orange Book]

Sesgo (veracidad) Para vericar la veracidad uTlizando un material de referencia, se determina la media y la desviacin estndar de una serie de rplicas de una prueba y se compara contra el valor caracterizado del material de referencia.

Sesgo (veracidad) MR

MRC

MR adicionados Con MRC puros

MR internos Caracterizados en el laboratorio. Control de calidad interna

Matriz similar trazabibilidad

IncerTdumbre Parmetro asociado al resultado de una medicin que caracteriza la dispersin de los valores que podran atribuirse razonablemente al mensurando. [VIM 1993] IncerTdumbre Estndar u(xi) - la incerTdumbre del resultado de una medicin expresada como una desviacin estndar. [ISO GUM]

IncerTdumbre La incerTdumbre de medicin es un parmetro nico (usualmente una desviacin estndar o un intervalo de conanza) que expresa el intervalo de posibles valores sobre la base de los resultados de medicin. Una esTmacin de la incerTdumbre de medicin considera todos los efectos reconocidos que inuyen en el resultado; las incerTdumbres asociadas a cada efecto son combinadas de acuerdo a procedimientos bien establecidos.

Sensibilidad

sta es efecTvamente la pendiente de la curva de respuesta, es decir, el cambio en la respuesta del instrumento que corresponde a un cambio en la concentracin del analito. Cuando se ha establecido que la respuesta es lineal con respecto a la concentracin (o sea, dentro del intervalo lineal del mtodo) y se ha determinado la intercepcin de la curva de respuesta, la sensibilidad es un parmetro Tl para calcular y usar en frmulas de cuanTcacin.

SelecTvidad (o Especicidad):
La capacidad de un mtodo para determinar exactamente y especcamente el analito de inters en presencia de otros componentes en una matriz de muestra bajo las condiciones de prueba establecidas.

[NATA Tech Note #13] La capacidad de un mtodo para medir solamente lo que se pretende que mida. [AOAC - PVMC] La especicidad es la capacidad de determinar el analito inequvocamente en presencia de componentes los cuales se espera que estn presentes. [ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95]

SelecTvidad (o Especicidad): Usualmente, la selecTvidad de un mtodo se invesTga mediante el estudio de su capacidad para medir el analito de inters en porciones de prueba a las cuales deliberadamente se han introducido interferencias especcas (aqullas que se cree probable estn presentes en las muestras). Si no se est seguro de que las interferencias estn presentes, la selecTvidad de un mtodo se puede invesTgar estudiando su capacidad de medir el analito comparado con otros mtodos o tcnicas independientes.

Robustez

La robustez de un procedimiento analTco es una medida de su capacidad de permanecer inalterado por variaciones pequeas pero deliberadas en los parmetros del mtodo y proporciona una indicacin de su conabilidad durante su uso normal. [ICH Q2A, CPMP/ICH/381/95]

Robustez En cualquier mtodo habr ciertas etapas que, si no se llevan al cabo con suciente cuidado, tendrn un efecto severo sobre el desempeo del mtodo y pueden dar como resultado que el mtodo no funcione. Esto incluye aplicar variaciones deliberadas al mtodo y estudiar el efecto resultante en el desempeo. De esta manera es posible idenTcar las variables que Tene el efecto ms signicaTvo y en base a ello, controlarlas cuidadosamente cuando se aplica el mtodo. Cuando se requiere mejorar el mtodo, las mejoras se pueden realizar sobre aquellas partes que se sabe, son crTcas.

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b. Para los ensayos que involucren mediciones }sicas: 1. Vericacin del desempeo del equipo contra los requerimientos establecidos en el mtodo. 2. Uso de los materiales de referencia requeridos por el mtodo, cuando aplique. 3. Conformidad de las instalaciones y condiciones ambientales del laboratorio con lo establecido en el mtodo.

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4. Perl, competencia y habilidades del personal que realiza el mtodo conforme a lo establecido por el propio laboratorio o los requerimientos del mtodo o procedimiento. 5. Estudio de repeTbilidad y reproducibilidad en cumplimiento con los criterios de aceptacin cuando lo especique el mtodo, o en su caso los criterios establecidos por el laboratorio mediante los datos de desempeo.

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6. La evidencia de la evaluacin de la veracidad y la precisin del mtodo de medicin mediante experimentacin, que permita evaluar el sesgo y la repeTbilidad del mtodo en el laboratorio, ya sea uTlizando materiales de referencia o mediante una comparacin interlaboratorios, consultar la serie de normas NMX-CH-5725-IMNC.

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Para todos los Tpos de mtodos anteriormente la v a l i d a c i n d e l m t o d o d e b e i n c l u i r l a s especicaciones de los requisitos, determinacin de las caractersTcas del mtodo, una vericacin de que se pueden cumplir los requisitos usando dicho mtodo y una declaracin en la validez. La evidencia de la validacin puede estar contenida en un procedimiento, incluidos o referenciados en el manual de la calidad o incluso en los mismos procedimientos tcnicos.

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Para la validacin adicionalmente el laboratorio debe: a) Mantener registros de la validacin en mtodos desarrollados por el laboratorio de que el mtodo o procedimiento se ajusta al uso propuesto [5.4.3]. b) Documentar la inuencia de los cambios realizados en los mtodos no normalizados previamente validados. c) Documentar y validar las modicaciones a los mtodos normalizados. Cuando un mtodo est escrito de una forma y se realiza de otra, es una desviacin al mtodo no una modicacin.

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Para los mtodos de ensayo que involucren realizar otras pruebas para la determinacin del resultado nal, dichas pruebas sern sujetas a evaluacin y deben cumplir con los requisitos de la calidad establecidos por el laboratorio, la norma tcnica y la norma 17025.

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Para las determinaciones basadas exclusivamente en clculos matemTcos que requieran resultados de otras pruebas, el laboratorio debe solicitar la acreditacin de todas las pruebas que se involucran para obtener los datos para el clculo nal.

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En el caso de que el laboratorio desee acreditar paquetes de marca comercial (kits con reacTvos preparados y precalibrados): Se aclara que los mtodos de paquetes de marca comercial solo son Tles como mediciones semicuanTtaTvas o de campo y en ningn momento pueden susTtuir o ser mtodos alternos a los mtodos normalizados, ya que no son mtodos que puedan demostrar que son tcnicamente similares o superiores a los establecidos en las normas mexicanas o internacionales.

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Las pruebas rpidas publicadas en normas ociales, nacionales y/o internacionales o por organizaciones tcnicas reconocidas, son acreditables cuando el laboratorio se apegue en su totalidad a lo establecido en el mtodo publicado.

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Las pruebas rpidas descritas en textos o publicaciones ciengcas importantes o por fabricantes de equipo, as como las desarrolladas o adaptadas por el laboratorio podrn acreditarse siempre y cuando demuestren mediante evidencia objeTva el cumplimiento de los siguientes requisitos que se mencionan de manera enunciaTva ms no limitaTva: - Prueba de repeTbilidad y reproducibilidad (r&R). - Comparacin de resultados contra el mtodo de referencia ocial.

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- Estandarizacin empleando MRC o MR. - EsTmacin de lmites de deteccin y cuanTcacin. - Robustez. - EsTmacin de incerTdumbre. - Aseguramiento de la calidad del mtodo y sus resultados Sin embargo, en caso de que un laboratorio desee acreditar este Tpo de mtodos, su solicitud ser presentada a los rganos colegiados correspondientes para su anlisis y decidir si es facTble su acreditacin

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Conrmacin de los Mtodos. Para mtodos o procedimientos normalizados el laboratorio debe realizar y presentar evidencia objeTva de la conrmacin del mtodo para demostrar que cumple las especicaciones del mismo y cuenta con la competencia tcnica para realizarlo adecuadamente tomando en consideracin sus propias instalaciones, equipo, personal [5.4.2].

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La conrmacin del mtodo debe realizarse de acuerdo a lo siguiente: a. Para los ensayos que involucren mediciones analTcas: 1. Porcentaje de Recuperacin o error relaTvo 2. Lmite de deteccin 3. Lmite de cuanTcacin 4. Intervalo lineal y de trabajo 5. Reproducibilidad 6. RepeTbilidad 7. IncerTdumbre

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b. Para los ensayos que involucren mediciones }sicas: 1. Vericacin del desempeo del equipo contra los requerimientos establecidos en el mtodo. 2. Uso de los materiales de referencia requeridos por el mtodo, cuando aplique, 3. Conformidad de las instalaciones y condiciones ambientales del laboratorio con lo establecido en el mtodo,

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4. Perl, competencia y habilidades del personal que realiza el mtodo conforme a lo establecido por el propio laboratorio o los requerimientos del mtodo o procedimiento. 5. Estudio de repeTbilidad y reproducibilidad en cumplimiento con los criterios de aceptacin cuando lo especique el mtodo, o en su caso los criterios establecidos por el laboratorio mediante los datos de desempeo o mediante la aplicacin de cualquier otra tcnica estadsTca reconocida.

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La conrmacin del mtodo puede demostrarse tambin mediante un ensayo de apTtud o una i n t e r c o m p a r a c i n e n t r e l a b o r a t o r i o s o intralaboratorio (consultar la serie de normas NMX- CH-5725-IMNC).

Criterios de aplicacin de la norma NMX-EC-17025-IMNC-2006 (ISO/IEC 17025:2005) MP-FE-005 -07

Para conrmacin de mtodos cualitaTvos cuyo resultado no sea a parTr de una medicin, la conrmacin del mtodo ser aceptada mediante la correcta aplicacin del mtodo por parte del laboratorio, considerando sus propias instalaciones, equipo y personal [5.4.2].

Criterios de aplicacin de la norma NMX-EC-17025-IMNC-2006 (ISO/IEC 17025:2005) MP-FE-005 -07

La validacin y/o conrmacin del mtodo se deber realizar en forma inicial y/o cuando existan cambios crTcos en la metodologa, equipos, instalaciones, etc. [5.4.2].

GUAS TCNICAS CENAM

Guas Tcnicas CENAM

Reproducibilidad Intervalo Lineal y de Trabajo Limite de cuantificacin Incertidumbre Recuperacin Repetibilidad Sensibilidad Selectividad Validacin Limite de deteccin (1) (1) (3)
-

Robustez

Mtodo

Cromatografa de Total gases (CG) y de lquidos (CLAR) Parcial Conductividad electroltica Espectrometra por Absorcin Atmica e ICP Espectrometra Ultravioleta Visible Total Parcial Total Parcial Total Parcial

(3)
-

Sesgo

(1) (1) (1) (1) (1) (1)

(2) (2)

(3)

(1) (1) (1) (1)

(3) (3)

(2) (2)

(3)

Guas Tcnicas CENAM

Reproducibilidad Intervalo Lineal y de trabajo Limite de cuantificacin Recuperacin Repetibilidad Sensibilidad selectividad Incertidumbre Validacin Limite de deteccin Robustez

Mtodo

Titulacin volumtrica Temperatura en slidos Temperatura en Lquidos Temperatura en Gases pH

Total Parcial Total Parcial Total Parcial Total Parcial Total Parcial

Sesgo

(1) (1)

Se debe seguir lo mencionado en 5.4.5

Se debe seguir lo mencionado en 5.4.5

Se debe seguir lo mencionado en 5.4.5 -

Guas Tcnicas CENAM

(1) Para el caso donde las mediciones de elementos qumicos sean a niveles de concentracin de masa altos, no es requisito indispensable la determinacin del lmite de deteccin ni del lmite de cuanTcacin. (2) Medicin durante al menos tres das. (3) Sesgo, en algunos casos es evaluado a parTr de la Recuperacin.

Por su parTcipacin GRACIAS!