Ontogenia y rganos del sistema inmune

Prof. Siham Salmen Halabi Instituto de Inmunologa Clnica (Idic-ULA) Curso de Pre-grado 2006-2007

Ontogenia de linfocitos
Linfocitos son las nicas clulas del cuerpo con una alta diversidad de receptores, capaces de reconocer a una amplia variedad de antgenos Diversidad generada durante el desarrollo Responder frente a los agentes extraos, con alta especificidad (respetando la integridad de los tejidos propios) y preservando la tolerancia

La inmunidad efectiva requiere de un balance entre la defensa contra los Ag extraos y la no respuesta contra los antgenos propios Preguntas a responder:
A partir de que clula se generan los diferentes linajes? Donde maduran las clulas linfoides? Que factores median este proceso? Cuales son las decisiones que deben tomar los linfocitos? Que factores condicionan la decisin hacia los diferentes linajes?

Ontogenia de linfocitos
Cul es la razn de la existencia de finos mecanismos de regulacin del desarrollo de los linfocitos?
Asegurarse de contar con el repertorio de clulas capaces de reconocer a todos los Ag extraos presentes en la naturaleza Asegurarse que el sistema inmune reconozca como propio a los Ag del individuo (TOLERANCIA) Asegurarse que los linfocitos migren hacia la periferia con las herramientas bsicas para enfrentarse a los Ag extraos

Ontogenia de linfocitos
Cul es la razn de la existencia de mecanismos finos de regulacin del desarrollo de los linfocitos?
Asegurarse que el receptor antignico (BCR, TCR) sean tiles (seleccin positiva) y los receptores potencialmente peligrosos y autorreactivos sean eliminados (seleccin negativa) Asegurarse que los linfocitos puedan comunicarse con las clulas accesorias (aquellos que no lo hacen sufren muerte por negligencia)

Ontogenias de linfocitos
Elementos que participan
Clula progenitora pluripotencial Mediadores solubles Interaccin entre las clulas linfoides con elementos del microambiente

Elementos del sistema inmune

Microambiente dado por los rganos linfoides primarios y secundarios MHC-I y MHC-II Receptor de linfocitos T (TCR) Receptor de linfocitos B (BCR) Mediadores solubles (Ej. Interleukinas)
Molculas del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I y II

rganos rganos del del sistema sistema inmune inmune

rganos rganos primarios primarios
Timo Timo Mdula Mdula sea sea Epitelio Epitelio intestinal intestinal

rganos rganos secundarios secundarios

Ganglios Ganglios y y amgdalas amgdalas Bazo Bazo MALT MALT

Bradley et al Curr Opin Immunol 2003; 15:343

rganos primarios y ontogenia

Ontogenia Ontogenia de de linfocitos linfocitos

Clulas hematopoyticas (HSC):
Se alojan en la mdula sea Fenotipicamente son reconocidas por expresar CD34 Actividad de la Precursor temprano con telomerasa y potencialidad para autorenovacin desarrollar clulas

del linaje linfoide y mieloide (EPLM)

Suda R Trends Immunol 2005; 26:426;

ORIGEN DE LAS HSCs

Arresto en el ciclo celular y adhesin a los osteblastos Inicio de la diferenciacin requiere de activacin de c-Myc, prdida de la expresin de N-caderina e integrinas
Divisin celular asimtrica

Ontogenia:

Caractersticas de las HSCs en reposo 1. Proteccin contra el estrs a) Regulacin de radicales libre, actividad de aldehdo deshidrogenasa 2. Adhesin a los nichos a) Bajo requerimiento de factores de crecimiento, inhibicin de la apoptosis, enlentecimiento del ciclo celular y unin por N-cadherin a osteoblastos 3. Hipoxia en los nichos

Mathias el al Nat Rev Immunol 2005;5:497; Pelayo et al Curr Opin Immunol 2005; 17:100

Ontogenia de linfocitos
CLP: precursor linfoide comn CMP: precurso mieloide comn

Progenitor multipotencial origena el linaje linfoide y mieloide En ciertos estadios de maduracin puede revertirse el desarrollo de un linaje celular
Comienza a expresar Rag (recombinasas)

Primer paso:

Mathias el al Nat Rev Immunol 2005;5:497

Que elementos contribuyen con la decisin: Linaje mieloide vrs linfoide o Lin T vrs B

Factores de transcripcin involucrados en el desarrollo

Ontogenia: SERIE LINFOIDE

Los linfocitos T, B y NK se originan de un precursor
El primer evento es ubicarse en estadio precursor linfoide comn (CLP), dar origen a: T, B, NK y clulas dendrticas de origen linfoide (plasmocitoides) Destinados a originar clulas B permanecen en la MO Destinados a madurar como clulas T egresan de la MO y se ubican en el timo IL-7 indispensable para el desarrollo de linfocitos T y B Mientras IL-15 es requerida para el desarrollo de NK

NK

Ontogenia de los linfocitos

El desarrollo de los linfocitos depende de tres procesos bsicos:
Migracin y proliferacin Diferenciacin: adquisicin de fenotipos maduros Seleccin del repertorio: clulas especficas a los antgenos (Ag) extraos y restringidas por las molculas de histocompatibilidad (MHC) propias

Abul Abbas Mol Immunol 2002

BCR

Generacin del receptor antignico funcional en linfocitos B (BCR) Y T (TCR)

Uno de los objetivos fundamentales de la ontogenia:

TCR

Ontogenia de los linfocitos T

TCR: cadenas y ( y ) asociados con CD3 (,,, y ) Molculas que permiten la comunicacin intracelular
CD4 o CD8
www.sanidadanimal.info/cursos/inmun_it/segun2.htm

Ontogenia de linfocitos T
Durante la ontogenia de linfocitos T se toman las siguientes decisiones:
Comisionar hacia el linaje linfoide y decidir hacia linfocito T o B Reordenamiento del TCR Escoger entre TCR o TCR Seleccin positiva y negativa Escoger entre CD4 o CD8

Microambiente tmico
Clulas epiteliales corticales

Corteza

Clulas epiteliales medulares y clulas dendrticas

Regin crticomedular

Mdula
Nat Rev Immunol

Boroski et al Curr Opin Immunol 2002; 14:200; Coste Immunol letters 2006; 102:1

Ontogenia: SERIE LINFOIDE

Que camino tomar?

Ligando de Notch est presente en las clulas epiteliales corticales tmicas

Ontogenia de Linfocitos T
Decisin T vrs T
Clulas T
Comienzan a desarrollarse primero que los precursores de linfocitos T Sin embargo, predomina desarrollo de T Su desarrollo en el timo es inhibido por la expresin del pre-TCR Emigran del timo, para ubicarse en las barreras epiteliales, donde culminan su desarrollo

Reordenamiento de la Cadena del TCR (receptor del linfocito T) Doble negativo (DN=CD4/CD8-)
1 2 3 4 5 6 n

Timocito temprano: Pro-T:

Ontogenia de Linfocitos T

/Tdt/Rag1 /Tdt/Rag1 y y2 2

Mediado por Recombinasas 1 y 2 (Rag1 y 2)

1 2

1 2 3 4 n

1er alelo
Regin constante

Familia de genes de la regin variable, diversidad y unin

Reordenamiento de los genes que codifican para la cadena

Dos alelos: el reordenamiento exitoso de uno de ellos inhibe el reordenamiento del otro: EXCLUSIN ALLICA

Rag1 y Rag2

Bergman et al Curr Opin Immunol 2003; 15:176; Schissel Nat Rev Immunol 2003; 3:890

Ontogenia: REORDENAMIENTO
DEL TCR Y BCR
Modificaciones de las histonas Acetilacin: accesibilidad a la cromatina Demetilacin del ADN
Un solo alelo Exclusin allica

Ontogenia de Linfocitos T
Pre-T: expresin de la cadena y formacin
de pre-TCR
La expresin del pre-TCR determina (cadena + pT): reordenamiento de la cadena del TCR (receptor del linfocito T) Doble negativos (DN= CD4-/CD8-)
1 2 3 4 5 6 n

1 2 3 4 n

1er alelo
Regin constante

Regin variable, diversidad y unin

Ontogenia: LINFOCITOS T
preTCR:

Es expresado seguido al reordenamiento exitoso de TCR. Media seales debido a su localizacin constitutiva en microdominios de membrana ( rafts lipdicos):
Fosforilacin y degradacin de recombinasas (RAG1 y 2), asegura que no ocurra mas reordenamiento de (exclusin allica) Favorece reordenamiento de la cadena

Proliferacin y da paso a timocitos Doble Positivos (co-expresin de CD4 y CD8)

Ontogenia de linfocitos
Mecanismos involucrados en la generacin de la diversidad
Diversidad en las posibilidades de combinacin

Diversidad en los sitios de unin de los genes mediado por la enzima deoxiribonucleotil transferasa terminal o TdT

Familias de genes V, D y J Combinaciones entre las cadenas y (en el caso de linfocitos T) o pesadas y livianas (en el caso de linfocitos B) Mediado por por las las Recombinasas Recombinasas (Rag1 (Rag1 y Rag2)

Ontogenia de Linfocitos T
Timocito doble positivo (DP):
CD4
TCR/CD3 TCR

Expresan TCR y adems CD4 y CD8 (Doble Positivas) en la superficie: da paso a los mecanismos de seleccin positiva y negativa y se define el fenotipo

CD8

Ontogenia de Linfocitos T
Control de calidad:
Capaz de interactuar con MHC propia (base de toda respuesta inmune) y de esta manera reconoce los antgenos presentados
Ag
MHC

Ontogenia de linfocitos T: CLULAS DEL

ESTROMA TMICO

Klein et al. Curr Opin Immunol 2000; 12:179

Tienen Tienen la la capacidad capacidad de de expresar expresar diversas diversas protenas protenas de de los los tejidos tejidos perifricos perifricos por por va va endgena endgena presentarlos presentarlos a a los los timocitos timocitos y y transferirlas transferirlas a a las las DCs. DCs. Mediado Mediado por por AIRE AIRE (autoimmune (autoimmune regulator) regulator) que que es es un un activador activador transcripcional transcripcional expresado expresado en en TEC TEC Otra Otra va va las las DC DC traen traen Ag Ag perifricos) perifricos)

Ontogenia de Linfocitos T: Seleccin positiva y negativa

Muerte o anergia

Ontogenia: MECANISMOS
DE SELECCIN
Mecanismos involucrados en la anergia

Reciclaje acelerado del TCR, por ubiquitinacin mediado por la fosforilacin constitutiva de Cbl (ligasa de ubiquitina) Proceso reversible

Ontogenia de Linfocitos T
Linfocito T maduro:
MHC-II
TCR/CD3

MCH-I
TCR/CD3

CD4
TCR

CD8

Ontogenia de linfocitos T
Seleccin Seleccin positiva positiva (rescate (rescate de de la la apoptosis): apoptosis): Seleccin Seleccin negativa: negativa:
TCR TCR tenga tenga baja baja afinidad afinidad por por los los Ag Ag propios propios Clulas Clulas epiteliales epiteliales tmicas tmicas TCR TCR con con alta alta afinidad afinidad por por el el Ag Ag propio propio o o incapaz incapaz de de interactuar interactuar con con MHC MHC (I (I y y II) II) Corteza Corteza profunda, profunda, unin unin crtico-medular crtico-medular y y mdula mdula Clulas Clulas interdigitantes interdigitantes

Pica et al Curr Opin Immunol 2005; 17:131

Ontogenia de linfocitos:
DESARROLLO DE CLULAS T REGULADORAS

Seleccin positiva por agonista

Resumen

Ontogenia de los linfocitos B

CD20 CD19 BCR: Inmunoglobulina (IgM e IgD) + cadenas y (comunicacin intracelular)

www.sanidadanimal.info/cursos/inmun_it/segun2.htm

Ontogenia de linfocitos B
Su Su desarrollo desarrollo se se inicia inicia en en el el va-9 na semana hgado hgado fetal fetal 8 8va -9na semana y y luego luego contina contina en en la la mdula mdula sea sea El El repertorio repertorio de de clulas clulas se se genera genera por por recombinaciones recombinaciones de de segmentos segmentos de de los los genes genes del del receptor receptor de de linfocito linfocito B B (BCR) (BCR) Estn Estn sujetos sujetos a a mecanismos mecanismos de de seleccin seleccin positiva positiva y y negativa negativa

Ontogenia: LINFOCITOS B

Ontogenia de Linfocitos B
pro-B:
Reordenamiento gentico de la cadena pesada de las inmunoglobulinas : cadena

IL-7R
Bisagra

IL-3R

Reordenamiento de los genes que codifican para las inmunoglobulinas

Dos alelos: el reordenamiento exitoso de uno de ellos inhibe el reordenamiento del otro: EXCLUSIN ALLICA

Ontogenia de Linfocitos B
pre-B:
-Expresin de la cadena pesada de la Ig (), en el citoplasma y membrana (pre-BCR) asociado con las cadenas sustitutivas (SL) (VpreB y 5)
CD79 CD79 / / Las Las seales seales del del prepreBCR BCR median median la la exclusin exclusin allica allica del del locus locus de de la la cadena cadena pesada pesada -Reordenamiento -Reordenamiento gentico gentico de de las las cadenas cadenas livianas livianas Ig Ig

Linfocito B inmaduro:

Igm

Linfocito B IgM/IgD maduro:

Ontogenia de Linfocitos B

Niiro et al Nat Rev immunol 2002; 2:945

Ontogenia: LINFOCITO B
Emigran de la MO
Tres poblaciones: Foliculares, Zona marginal y peritoneales

Ontogenia:
LINFOCITOS, mecanismos de seleccin
Seleccin positiva Seleccin negativa: Muerte Anergia Re-edicin del BCR Escape de la seleccin negativa por cambio de la especificidad antignica

No es exclusivo de B, tambin se ha demostrado en T

Hardy et al Annu Rev immunol 2001; 19:595; Su et al Curr Opin Immunol 2000; 12:191

Ontogenia de linfocitos B: Subpoblaciones en la periferia

B-1:
CD5+ Ubicadas preferencialmente en cavidad peritoneal Potencialmente autorreactivas No son eliminadas por antgenos propios Predominan en la periferia CD5-

B-2

Resumen

Que eventos regulan la migracin y alojamiento dentro de un tejido o de un tejido a otro?

Recirculacin y alojamiento de los leucocitos: De qu depende?

Qu determina esta distribucin y trfico diferencial?

Interacciones entre las clulas endoteliales, la matriz extracelular, quemokinas y las molculas de adhesin

Expresin y activacin diferencial de receptores de quimiocinas y de integrinas

Migracin de leucocitos:
Quemokinas y sus receptores Integrinas Cadherinas Selectinas ICAM
Interleukinas con capacidad quimiotctica

ELEMENTOS QUE PARTICIPAN

Una vez maduras las clulas migran a travs de las vnulas endoteliales altas hacia los rganos linfoides secundarios

Von Adrian et al N Engl J Med 2000; 343:1020

Recirculacin de linfocitos

Quemokinas

Selectinas

Integrinas/ICAM

Bradley et al Curr Opin Immunol 2003; 15:343

Migracin celular:
QUEMOKINAS

CXCR5: expresado sobre Th, permitir interaccin con clulas B

Durante Durante la la activacin activacin inicial inicial los los linfocitos linfocitos pierden pierden el el receptor receptor CCR7 CCR7 y y adquieren adquieren otros, otros, lo lo que que le le permite permite salir salir hacia hacia los los tejidos tejidos inflamados inflamados

CCR7: Expresado sobre los linfocitos T naive y DC maduras

rganos secundarios y maduracin final de los linfocitos

rganos secundarios
Funcin:
Facilitan el trabajo de los linfocitos Sitios de encuentro entre clulas presentadoras de antgeno (APC) y linfocitos Proveen el microambiente adecuado para la expansin de linfocitos T Optimizan la activacin de linfocitos B naive

rganos secundarios: ndulos linfticos, sitio de activacin de la respuesta inmune Seno Vaso
subcapsular Cpsula Manto Centro germinal aferente

Folculo primario
culo Fol ndario secu

Paracorteza

Reticulina Mdula Vlvula Vaso eferente

rganos secundarios: Folculo

secundario
Zona externa Cel. T

Centro germinal
Apical

Manto folicular Red de C. Dendrticas foliculares Pocas C. Dendrticas foliculares

Zona clara

Centrocitos

Basal

Zona obscura

Centroblastos

rganos secundarios: ndulos linfticos

F

Cordones paracorticales:
Unin cortico-medular

Cordones paracorticales Corredores Sinusoides

SC Red de fibroblastos

Corteza

Mdula

CPV

HEV
CRF

Todo el proceso de ontogenia permite a los linfocitos estar preparados para reconocer de manera especfica a los antgenos extraos

Problema
La protena BTK (una tirosin kinasa de los linfocitos B), involucrada en la ontogenia de los linfocitos B, media la transicin de clulas pro-B a pre-B y participa en la activacin de los linfocitos B maduros. Ciertas mutaciones en el gen que codifica para esta protena conducen a fallas en su expresin originando un sndrome conocido como Agammglobulinemia ligada al cromosoma X o Sndrome de Bruton.

Interrogantes
a) Cual elemento del sistema inmunolgico se encuentra alterado en estos pacientes? b) Explique la ontogenia de los linfocitos B c) Si se realiza post-mortem una biopsia de los ndulos linfticos, Que modificaciones en el microambiente esperara encontrar? d) Uno de los productos finales de la activacin de los linfocitos B es la secrecin de anticuerpos (inmunoglobulinas). qu niveles de inmunoglobulinas esperara encontrar en el suero del paciente?

 La falta de expresin de la molcula de histocompatibilidad de clase II (MHC-II) en la superficie de las clulas presentadoras de antgeno profesionales, es debida mutaciones en los factores de trascripcin responsables de activar la trascripcin del gen que codifica para MHCII (RFX5, CIITA). Este trastorno molecular conduce a un cuadro de inmunodeficiencia severa causado por alteracin en el desarrollo de los linfocitos T.

Problema 2

Interrogantes
a) Explique cual es el papel de la presentacin de antgenos en el contexto de MHC- II y MHC- I a nivel de los rganos linfoides primarios. b) Explique como se genera el proceso de seleccin positiva y negativa durante la ontogenia de los linfocitos y cual es el papel de las molculas de histocompatibilidad en este proceso. c) Que consecuencia tiene sobre la tolerancia a los tejidos propios la alteracin de los mecanismos de seleccin positiva o negativa?