FITOPATOLOGA I

CAPITULO I
INTRODUCCIN
La Granadilla es una planta pasiflorcea originaria de las montaas de los Andes entre Bolivia y Venezuela. Se cultiva desde el norte de Argentina hasta Mxico y en montaas tropicales de frica y Australia, en climas entre 15 y 18 C de temperatura, 600 a 1000 mm. de precipitacin anual y altitud de 1700 a 2600 m.s.n.m. Entre las principales enfermedades esta la mancha alternaria causada por Alternaria spp., que ataca directamente al fruto causando manchas circulares necrticas que penetran al fruto causando su pudricin, tambin tenemos la Dormidera (Fusarium sp), la Antracnosis, el cncer del tallo (Nectiria sp), la Roa (Cladosporium sp). Las principales plagas son: Trips (Thysanoptera: Thripidae), Trigona testacea var. Orizabaensis, Scybalista bifascialis, Ceroplastes cirripediformis, Mosca de las frutas (Anastrepha curitis). Tambin se ha detectado la Roa de tallos y frutos, producida por un hongo del genero Sphaceloma. Para todas estas enfermedades y plagas existen recomendaciones para su control, sobre la base de experimentacin en campo. En este proyecto identificaremos el tipo de hongo del cual esta infectada la planta en estudio, y haremos su respectiva clasificacin. OBJETIVO Identificar la estructura somtica que nos conduzca a la caracterizacin, taxonmica.

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CAPITULO II
REVISIN DE LITERATURA 2.1. GENERALIDADES DE LA GRANADILLA (Pasiflora ligularis Juss)
2.1.1. Origen CALZADA, J. (RABANAL, N. 1987), dice que la granadilla es originaria de Amrica tropical; actualmente se encuentra distribuido en Mxico, Bolivia, Centro Amrica. La granadilla es cultivada en los valles interandinos, desarrollndose en alturas comprendidas entre los 500 y 2500 m.s.n.m. (CALZADA, J. 1975). 2.1.2. Sinonimia y Nombres Vulgares Granadilla, parchita amarilla. En Otros Idiomas: Sweet granadilla, Granadilla Fruetchte. 2.1.3. Variedades Amarilla, Morada y Real. 2.1.4. Morfologa La granadilla es una planta trepadora, vigorosa de tallos cilndricos, hojas grandes son muy llamativas, solitarias, bisexuales, de 5 spalos y 5 ptalos, los estambres estn unidos en un tubo alrededor del ovario y tienen anteras verstiles, el ovario spero tiene una sola celda, con tres estilos clavados y estigmas reniformes y cordiformes; las flores miden de 6 a 9 cm. de dimetro, los spalos son blanquecinos o amarillentos. CALZADA, J. 1975 Y SHOPFLOCHER, RE. (RABANAL, N. 1987). Segn RABANAL, N. (1987), que cita a CALZADA, J. (1975). El fruto es una baya ovoide, de cscara dura, tiene un mesocarpio blanco y esponjoso de 5mm, de espesor; su consumo es generalmente al estado natural, no es empleado en la industria, ni para preparar ccteles, por la baja intensidad de su sabor. 2.1.5. Clasificacin Taxonmica REYNO DIVISIN Sub Divisin CLASE Sub Clase ORDEN FAMILIA GENERO ESPECIE Plantae Embryophita Angiospermae Dicotiledonea Archiclamydeae Violales Plassifleraceae Passiflora Pasiflora ligularis Juss

FITOPATOLOGA I 2.1.6. Composicin Qumica La composicin qumica por cada 100 g. de pulpa es de 2.2 g. de protena, 27 mg. De fsforo, 0.11 mg. De tiamina y 0.3 g. de riboflavina. (CALZADA, J. 1975.) 2.1.7. Rendimientos Se reportan producciones de 35 a 40 TM por hectrea, en cada una de las dos cosechas principales por ao. Al inicio del ciclo productivo el rendimiento es menor, pero ascendente. Existen reportes de altas productividades que superan las 40 TM / ha. En el ciclo del cultivo se presentan cosechas fraccionarias cuyo destino generalmente son los mercados nacionales. (IICA. 2001). 2.1.7.1. Produccin en la ciudad de Cajamarca En lo que respecta a la poblacin de granadillas en las provincias de Cajamarca y San marcos, MACHUCA, R. (1974), indica que los diferentes distritos de Cajamarca, tienen una produccin promedio de 460 unidades por planta y un rendimiento promedio de 15.99 T x Ha-1; destacando el distrito de Cajamarca con una produccin de 751 unidades por planta y un rendimiento de 26.08 T x Ha -1. seguidos por el distrito de Cospn con 600 unidades por planta y 20.03 T x Ha-1. En la provincia de San Marcos Se alcanza una produccin de 522 unidades por planta y un rendimiento de 18.30 T x Ha-1; ocupando un primer lugar el distrito de San Marcos I, con 906 unidades por planta y 31.96 T x Ha-1., Seguido del distrito de San Marcos II con 750 unidades por planta y 26.39 T x Ha-1; teniendo una produccin total para la provincia de Cajamarca de 96.88 Toneladas, y para la provincia de San Marcos de 169.48 Toneladas. (RABANAL, N. 1987). Los principales productores son Per, Mxico, Venezuela, Colombia, Ecuador, Brasil, Sudfrica y Kenia. Los principales importadores son Estados Unidos, Canad, Blgica, Holanda, Suiza y Espaa. (IICA. 2001). 2.1.8. Influencia del Color de Luz Las cubiertas de plstico son estructuras de proteccin, en donde las plantas jvenes y tiernas encuentran condiciones adecuadas para su desarrollo, por existir un control de las fluctuaciones de la temperatura del da y de la noche, de la humedad y de la radiacin directa. HARTMANN, H. 1980. (RABANAL, N. 1987). Segn RABANAL, N. (1987). que menciona a ARANEO, A. (1972). El color de las sustancias depende de la estructura electrnica de sus tomos. Una sustancia coloreada absorbe energa de una longitud de onda comprendida en la parte visible del espectro de luz. La energa absorvida exita a los electrones, de la sustancia, es decir puede provocar de un electrn a un nivel superior de tomo. El color de la sustancia e10s el suplementario del absorbido. Por su parte JAMES, W. (1967), en RABANAL, N. (1987), manifiesta que la clorofila principal pigmento fotosinttico, absorbe con mayor intensidad la luz en la zona roja y azul del espectro, intensidad la luz zonas roja y azul del espectro, en donde ocurre la mxima actividad fotosinttica; pero todas las longitudes de onda son efectivas en cierto grado.

FITOPATOLOGA I 2.1.9. Exigencias del Cultivo Segn CALZADA, J. (1975), esta especie es poco exigente en nutrientes; responde al abonamiento de fsforo y potasio, siendo recomendable cultivarlo en suelos arenosos, ricos en materia orgnica. 2.1.9.1. Agroecolgicas Clima: Sub clido, templado. Temperatura: 12 - 17C (incluso 20 C). Humedad: 70% 85%. Pluviosidad: 600 - 1000 mm. Altitud: 1800 - 2600 m. s. n. m. Formacin ecolgica: Bosque seco montano bajo espinosa montano bajo (ee-MB). Fuente: IICA. 2001. 2.1.9.2. Requerimientos edficos Textura: Acidez: Tipo de suelo: C/N: Salinidad: Fuente: IICA. 2001. Franca, franco arenoso, estructura permeable. pH 5.0 6.5. Sueltos, aireados, ricos en materia orgnica. 13 14. Es susceptible a ciertos niveles de salinidad.

(bs-MB),

estepa

2.1.10. Sistemas de Propagacin. 2.1.10.1 Semilla: Proveniente de plantas robustas y sanas. Las semillas se extraen del fruto y se dejan en reposo en agua, para luego de 4 6 das extraer fcilmente el muclago. Con este mtodo se puede conseguir germinaciones de hasta el 80%. (Universidad del Pacfico. 2001). 2.1.10.2 Esquejes: Por este mtodo se consiguen materiales germoplsmicos ms homogneos, especialmente en la cosecha. (Universidad del Pacfico. 2001). 2.1. 11. Siembra. 2.1.11.1. Germoplasma: Plantas de 30 a 40 cm de alto, sanos, vigorosos. En sistemas de pilones la altura de la planta puede ser menor que la planta convencional. 2.1.11.2. Distancia: 4 m entre hileras y 3 m entre plantas. 2.1.11.3. Densidad de plantas: 833 por hectrea. 2.1.11.4 poca de siembra: Noviembre, Diciembre, Enero, Marzo. Fuente: IICA. 2001. 2.1.12. Etapas del Cultivo 2.1.12.1. Desarrollo de la plantacin: 2.1.12.2. Inicio de la cosecha: 40 - 44 semanas. Inicio a la 44 semana.

FITOPATOLOGA I 2.1.12.3. Vida econmica: 2.1.13. Manejo del Cultivo 2.1.13.1. Seleccin del sitio de siembra: Suelos sanos, frtiles, planos, poco influenciados. 2.1.13.2. Preparacin del terreno: Arada, rastra a profundidades convenientes, hoyados de 30 cm de profundidad. 2.1.13.3. Trazado de la plantacin: Se debe considerar la orientacin lumnica, proyeccin de la periodicidad de vientos, evitar sitios de poca ventilacin. (IICA. 2001). 2.1.13.4. Fertilizacin orgnica: Materia orgnica bien descompuesta, dos kilos por planta; luego de la cosecha se aade 1 kilo / planta. (IICA. 2001). 2.1.13.5. Fertilizacin qumica: Cuatro meses luego del transplante se deben aplicar abonos compuestos con alto contenido de fsforo, en dosis de 250 gramos por planta, adicionado con oligoelementos. (IICA. 2001). 2.1.13.6. Siembra: Plantas sanas, robustas, producidas en semillero, que posean una altura de 40 a 50 cm de altura y un dimetro de por lo menos 1.5 cm. (IICA. 2001). 2.1.13.7 Control de malezas: Manual o con herbicidas; con los qumicos se debe tener cuidado, puesto que el cultivo es extremadamente susceptible a aplicaciones directas o a su efecto residual. En los estadios de floracin se recomienda el control de malezas en forma manual. (IICA. 2001). 2.1.13.8. Podas: Necesita de un tutor de fibra o de madera, para localizarse finalmente en el emparrado, que generalmente es de plstico. Se deben eliminar los zarcillos excedentes, pues estos son capaces de asfixiar a tallos principales o relacionados con el fruto. La poda de formacin da la estructura a la planta. En la poda de produccin se eliminan los tallos improductivos, dbiles, enfermos, quebrados, etc. (IICA. 2001). 2.1.13.9. Manejo fitosanitario: Es altamente recomendable establecer sistemas de monitoreo, lectura y trampeo de las principales plagas, enfermedades, malezas y fisiopatas que afectan al cultivo, para evitar contaminaciones, toxicidades y niveles de residualidad que por ultimo influya en el rechazo del producto en el mercado internacional. (IICA. 2001). 2.1.14. Fitosanidad y Fisiopatias 2.1.14.1. Plagas. 7 8 aos.

FITOPATOLOGA I 2.1.14.2. Enfermedades.

Nombre Comn Antracnosis Manchas Foliares y Tizones Marchites Pudricin Blanda de los frutos Pudricin de flores Pudricin de las races Pudricin del fruto Pudricin limitada de la raz Pudricin negra de la raz Nombre Cientfico Colletotrichum gloesporioides Alternaria sp. Verticillium sp. Rhizopus sp. Botrytis cinera Fusarium sp. Trichothecium sp. Rhizoctonia solani Pythium sp.

2.1.14.3. Nematodos.

2.1.14.4. Fisiopatias.

2.1.15. COSECHA 2.1.15.1. poca: Se la realiza cuando los frutos estn pintones, es decir cuando por lo menos el 60 por ciento de la coloracin es amarilla clara (no plida porque desmejora la calidad y est ligada a carencia de micro elementos). 2.1.15.2. Tipo: Manual, la cual se debe hacer preferentemente con guantes de algodn, conservando por lo menos 1.5 cm del pednculo; el corte se debe realizar con navaja o tijera de podar. 2.1.15.3. Estacionalidad: Abril Septiembre. 2.1.16. Manejo Post Cosecha. 2.1.16.1. Recoleccin y transporte: El producto de campo se debe recolectar en cajas de plstico de 32 x 40 x 40 cm, procurando no amontonar demasiado los frutos; se recomienda filas de 3 a 4 hileras, no ms. 2.1.16.2. Seleccin: Se la debe realizar de acuerdo al tamao y estado de madurez, segn el mercado de destino. La calibracin se la realiza con una tabla

FITOPATOLOGA I perforada con dimetros especficos en la cual se insertan los frutos: los pequeos pasan y los grandes quedan arriba. 2.1.16.3. Empaque: Preferible de calibre 12 en cajas con peso neto de 1.5 kg. y bruto de 2.00 kg./caja. 2.1.16.4. Almacenamiento: En locales bien aireados. El almacenamiento en cmaras frigorficas se realiza con una humedad relativa de 70-75%, la cual permite una conservacin de 6-8 meses. 2.2. HONGOS FITOPATGENOS EN GRANADILLA 2.2.1. Manipulacin del Hongo Para Su Identificacin 2.2.1.1. Aislamiento de hongos (y bacterias) La mayora de las enfermedades de las plantas se diagnostican al observarlas a simple vista o mediante el microscopio, lo cual hace innecesario el aislamiento del patgeno. Sin embargo, hay muchas enfermedades bacterianas y fungosas en las que es imposible identificar al patgeno que ya se encuentra mezclado con uno o ms contaminantes, porque an no ha producido sus cuerpos fructferos caractersticos y esporas, debido a que una misma enfermedad puede deberse ya sea a uno o a varios patgenos morfolgicamente semejantes o tal vez a algn factor del ambiente, o bien a que la enfermedad es causada por un nuevo patgeno hasta ese momento desconocido, el cual debe aislarse y estudiarse. Como es habitual, los patgenos de enfermedades desconocidas deben aislarse de los tejidos enfermos de una planta a fin de que se pueda llevar a cabo un estudio de sus caractersticas, hbitos, etc. (Agrios, G. 2001) 2.2.1.1.1. Preparativos para el aislamiento Siempre que se desee aislar una bacteria o un hongo patgeno de los tejidos de una planta enferma, deben llevarse a cabo los siguientes procedimientos preliminares. 1. Esterilizacin del material de cristalera, que incluye cajas de Petri, tubos de ensayo, pipetas, etc., mediante calor seco (de 150 a 160'C durante una hora o ms) o autoclave, o bien sumergiendo ese material durante un minuto o ms en una solucin de cido sulfrico - dicromato de potasio, en cloruro mercrico 1:1000, en formalina al 5% o en" alcohol etlico al 95%. Todo el material de cristalera que se trate qumicamente debe enjuagarse por lo menos tres veces en agua estril (esterilizada en autoclave o Mediante ebullicin). 2. Preparacin de soluciones para tratar la superficie del tejido infectado o infestado, con fin de eliminar o reducir notablemente los contaminantes de superficie que pudieran interferir en el aislamiento del patgeno. Estas soluciones se utilizan como un limpiador superficial o como un bao. Los compuestos esterilizantes de superficie que se utilizan con mayor frecuencia incluyen: una solucin de hipoclorito de sodio a2 5.25% (una parte de clorox y 9 partes de agua) la cual se utiliza para limpiar tejidos infectados o para sumergir cortes de esos tejidos en ella, y para limpiar la superficie de las mesas de trabajo antes de efectuar el aislamiento del patgeno; alcohol etlico al 95%, el cual es suave y se utiliza para sumergir hojas durante 3 segundos o ms; cloruro mercrico en la proporcin de 1:1000 durante un periodo de 15 a 45 segundos: finalmente, cloruro mercrico en la proporcin 1:1000 en alcohol etlico al 50% (solucin de Rada). Los tejidos deben secarse con un

FITOPATOLOGA I trozo de papel estril cuando sean tratados con las dos primeras soluciones, pero deben pasarse por tres cambios de agua estril cuando sean tratados con las dos ltimas soluciones. 3. Preparacin de medios del cultivo en los que se desarrollan los hongos y bacterias patgenos. Puede utilizarse un nmero casi infinito de medios de cultivo para cultivar a las bacterias y hongos fitopatgenos. Algunos de ellos son totalmente sintticos, -hechos a base de cantidades conocidas de ciertos compuestos qumicos- y por lo comn son bastante especficos para ciertos patgenos. Algunos de ellos son lquidos o semilquidos y se utilizan principalmente para el cultivo de bacterias y hongos en ciertos casos. La mayora de los medios de cultivo contienen un extracto de una fuente natural de carbohidratos y otros nutrientes, tal como papa, harina de maz, frijol, lima o habas, o extracto de malta a los que se aaden cantidades variables de agar para solidificar el medio y formar un gel en el que el patgeno se desarrollar y podr ser observado. Los medios de cultivo que con mayor frecuencia se utilizan son papa-dextrosa-agar (PDA), el cual es bueno para la mayora de los hongos (pero no para todos), el agar-agua o agar-glucosa (de 1 a 3% de glucosa en agar-agua), que se utiliza para separar algunos hongos (Pythium Y Fusarium) de bacterias; por ltimo, el agar nutritivo, el cual contiene peptona y extracto de carne y es til para aislar bacterias fitopatgenas. En cultivo los hongos pueden tambin separarse de bacterias, al aadir 1 2 gotas de una solucin de cido lctico al 25% (la cual inhibe el crecimiento de las bacterias) a 10 ml del medio de cultivo antes de vertirlo en las cajas de Petri. Las soluciones de medios de cultivo se preparan en matraces que posteriormente se tapan, y se colocan en un autoclave a 120C y a 15 libras de presin durante 20 minutos. Los medios de cultivo esterilizados se dejan enfriar durante un cierto tiempo posteriormente se vierten en cajas de Petri, tubos de ensayo u otros recipientes apropiados previamente estriles. En caso de que al medio se le aada agar, deber dejarse que este ltimo se solidifique para que el medio de cultivo pueda entonces ser utilizado para cultivar hongos o bacterias. El vaciado del medio de cultivo en cajas de Petri, tubos de ensayo, etc., debe llevarse a cabo lo ms aspticamente posible, ya sea en una sala de cultivo apartada o en una pieza limpia y libre de corrientes de aire y polvo. En cualquiera de los casos, la mesa de trabajo debe limpiarse con una solucin de Clorox al 10%, las manos de la persona deben estar limpias y el material de laboratorio, tal como escalpelos, pinzas o agujas deben sumergirse en alcohol y flamearse para impedir la introduccin de microorganismos contaminantes. (Agrios, G. 2001).

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FIGURA 1. Preparacin de medios de cultivo en placas (cajas Petri) y tubos de ensayo inclinados. (Agrios, G. 2001).

Debe tenerse en cuenta que, de los distintos fitopatgenos, la mayora de los hongos y las bacterias son los nicos organismos en los que todos sus miembros pueden crecer en medios de cultivo. Aun cuando la mayora de los hongos se cultivan con facilidad en medios nutritivos, algunos de ellos tienen requerimientos exigentes y especficos, por lo cual no se desarrollan en la mayora de los medos de cultivo comnmente usados. Los grupos de hongos (denominados Erysiphales) que producen la cenicillas y los Peronosporales (que producen los mildius), se consideran parsitos obligados estrictos, debido a que no se han podido cultivar en medios de Cultivo artificial. Hasta hace poco se pensaba tambin que el grupo de los Uredinales (la causa de las royas de las plantas) estaba constituido por parsitos obligados estrictos. Sin embargo, hasta hace slo algunos aos pudieron mantenerse en cultivo algunas etapas del ciclo de vida de algunas royas al aadir algunos componentes a los medios de cultivo, lo cual permiti que esos hongos ya no fueran considerados como parsitos obligados aunque, de hecho en la naturaleza, se comportan como tales. Aunque hasta ahora ha sido imposible mantener en cultivo a las bacterias fastidiosas vasculares limitadas al floema y xilema de las plantas, cabe decir que se ha Podido cultivar en medios nutritivos especiales complejos. Del resto de los patgenos, slo algunos espiroplasmas se han podido crecer en medio de cultivo. Hasta ahora, no se han podido mantener en medios de cultivo nutritivos ninguno de los 100 o ms organismos semejantes a los micoplasmas, ni a los virus, nematodos o protozoarios pero se espera que en breve se descubran otros medios para cultivar a los organismos semejantes a los micoplasmas. (Agrios, G. 2001)

FITOPATOLOGA I 2.2.1.1.2. Aislamiento del patgeno a. De hojas En caso de que la infeccin de las hojas de una planta avance en forma de tizn o mancha lo fungosa y en caso de que las esporas del hongo aparezcan sobre su superficie, algunas de esas esporas deben depositarse sobre una caja de Petri, que contenga medio de cultivo o bien deben recolectarse con la punta de una aguja estril o un escalpelo y colocarse sobre la superficie del medio de cultivo. Si el hongo crece en cultivo, al cabo de unos cuantos das aparecern colonias de micelio aisladas debido a la germinacin de las esporas. stas se resiembran en placas separadas y de esta forma se asegura que algunas de ellas contengan al patgeno libre de cualquier tipo de contaminante. En ocasiones, el aislamiento del patgeno a partir de tizones y manchas foliares, bacterianas o fungosas se logra mediante la esterilizacin superficial de la zona infectada con soluciones de Clorox o de Rada, separando una pequea porcin del tejido infectado con un escalpelo estril u otro objeto y colocndola en una caja de Petri que contenga un medio nutritivo. Sin embargo, el mtodo ms comn para aislar a los patgenos de las hojas infectadas y de otros rganos de la planta es aquel en el que se seleccionan varios cortes pequeos de 5 a 10 mm2 a partir del borde de la lesin infectada, a fin de que contenga tejidos enfermos y tejidos al parecer sanos. Esos cortes se colocan en una de las soluciones esterilizamos de superficie, lo cual asegura que esas superficies se humedezcan y al cabo de 15 30 segundos los cortes se toman aspticamente uno por uno a intervalos regulares de tiempo (por ejemplo cada 10 15 segundos), a fin de que cada uno de ellos se esterilice (a nivel de su superficie) a diferentes tiempos. Posteriormente, los cortes se secan con trozos limpios de papel estril o se pasan por tres cambios con agua estril, y por ltimo se colocan sobre el medio nutritivo (por lo comn, de 3 a 5 por caja de Petri). Los cortes esterilizados en su superficie durante menos tiempo generalmente contienen al patgeno y a varios contaminantes, mientras que los que se han esterilizado durante ms tiempo no permiten el desarrollo de cualquier tipo d microorganismos debido a que han sido destruidos por el esterilizante de superficie. Sin embargo, algunos de los cortes depositados en el esterilizante de superficie durante periodo intermedios permitirn que slo el patgeno se desarrolle y forme colonias puras en el cultivo ya que se ha permitido que el esterilizante acte el tiempo suficiente para destruir a todos lo contaminantes de superficie, pero no el tiempo necesario para destruir al patgeno, el cual se propagado desde el tejido enfermo hasta el tejido sano. Posteriormente, las colonias del patgeno, se resiembran aspticamente para su posterior estudio. El hecho de que los cuerpos fructferos del hongo (como es el caso de los picnidios y los peritecios) aparezcan sobre las hojas del hospedante, en ocasiones facilita su recoleccin y permite depositarlos durante varios segundos en el esterilizante de superficie, para ms tarde sembrarlos en el medio de cultivo. Sin embargo, este procedimiento requiere que la mayor parte de la tcnica se efecte bajo el microscopio estereoscpico (binocular), debido a que los cuerpos fructferos del hongo generalmente son demasiado pequeos para observarse y manipularse a simple vista. Las estructuras reproductoras (despus de haberlas tratado con un esterilizante de superficie) pueden tambin romperse en una pequea gota de agua estril y diluir despus sus esporas en forma seriada en agua estril en cajas Petri y en pequeos tubos de ensayo. Por ltimo, algunas gotas de cada uno de los tubos de la dilucin seriada se colocan en un medio nutritivo a fin de que se desarrollen en l colonias individuales libres de contaminantes a partir de las esporas que han germinado y que se han obtenido a partir de algunos de los tubos de dilucin seriada.

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El mtodo de dilucin seriada con frecuencia se utiliza para aislar bacterias patgenas de tejidos enfermos contaminados por otras bacterias. Despus de haber efectuado la esterilizacin superficial de los cortes de tejidos enfermos a nivel del margen de la infeccin, los cortes se muelen aspticamente (pero con bastante cuidado) en un pequeo volumen de agua estril y posteriormente parte de este homogenizado se diluye serialmente en volmenes iguales o diez veces ms el volumen del agua inicial. Por ltimo, las placas con agar nutritivo se siembran con un asa que ha sido mojada en cada una -de las distintas diluciones seriadas, a fin de que en ellas se desarrollen colonias individuales de la bacteria patgena a partir de las diluciones ms altas que todava contengan bacterias. (Agrios, G. 2001). b. De tallos, frutos y otros rganos areos de la planta La mayora de los mtodos que se han descrito para aislar bacterias y hongos patgenos de las hojas, pueden tambin utilizarse para aislar esos mismos patgenos de las infecciones superficiales de los tejidos ya mencionados. Sin embargo, aparte de esos mtodos, los patgenos con frecuencia pueden aislarse fcilmente de tallos, frutos y otros rganos que han sido infecta (aun cuando hayan penetrado profundamente en ellos) al cortar el tallo de la planta o al separar el fruto del lado sano para despus separarlos de la zona infectada, exponiendo as los teji que antes no se encontraban expuestos a los contaminantes y que anteriormente no haban sido cortados o manipulados y que, por lo tanto, no estaban contaminados. Finalmente, deben ha se pequeos cortes del tejido a partir de la zona carnosa expuesta del foco de infec mediante un escalpelo llameado para despus colocarlos directamente en el medio de cultivo. (Agrios, G. 2001). c. De races, tubrculos, races carnosas y frutos de hortalizas que se encuentran en contacto con el suelo, etctera El aislamiento de los patgenos de cualquier tejido vegetal enfermo que se encuentre en contacto con el suelo, presenta una serie de problemas adicionales que ocasionan nmero organismos saprfitos que invaden al tejido despus de que ha sido destruido por el patgeno. Es por esta razn que debe tenerse en cuenta que, en primer trmino, el aislamiento de patgeno implica el lavado repetido de los tejidos enfermos a fin de quitarles toda la tierra, mayor parte del tejido vegetal descompuesto y descubierto, en el cual la mayora de los organismos saprfitos se encuentran presentes. En caso de que la raz infectada sea pequea debe limpiarse minuciosamente y todos los patgenos que contenga deben aislarse de ella mediante cualquiera de los mtodos descritos para aislar los patgenos de las hojas. Si el aislamiento se efecta de races carnosas u otros tejidos carnosos y la penetracin del patgeno en ellos produce slo lesiones ligeras y superficiales, la tierra que se encuentra impregnada en e tejido debe separarse y deben colocarse en una solucin de Clorox o de Rada varios cortes de tejido obtenidos del borde de las lesiones. Se seleccionan uno por uno los cortes de tejidos en la solucin, se sumergen o lavan en agua estril y se colocan en cajas de Petri que contengan agar. Si el patgeno ha penetrado profundamente en el tejido sano, puede usarse el mtodo descrito anteriormente para tallos y frutos, que consiste en desgarrar los especmenes primero por la parte sana y despus por la zona infectada, tomando porciones de tejido del borde de la pudricin la cual no ha sido expuesta), y colocarlos directamente en el medio de cultivo. (Agrios, G. 2001).

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2.2.2. Ciclo de vida de los hongos Aun cuando los ciclos de vida de los hongos de los distintos grupos varan ampliamente la gran mayora de ellos pasan a travs de una serie de etapas que son bastante similares. As, la mayora de los hongos tienen una etapa de esporas que contiene un ncleo haploide (que posee una serie de cromosomas, o 1N). La espora, al germinar, produce una hifa que contiene tambin ncleos haploides. La hifa produce de nuevo esporas haploides (como ocurre siempre en los hongos imperfectos) o puede fusionarse con otra hifa para producir una hifa fecunda en la que los ncleos se fusionan para formar un ncleo diploide, denominado cigoto (el cual contiene ahora dos series de cromosomas, o 2N). En los Oomicetos, el cigoto se divide y produce esporas haploides, las cuales concluyen el ciclo. En una fase breve del ciclo de vida de la mayora de los ascomicetos y por lo general en todos los, basidiomicetos, el par de ncleos de la hifa fecundada no se fusiona sino que se mantienen separadas en pares dentro de la clula (condicin dicaritica o N+N) y se dividen simultneamente para producir ms clulas hifales que contienen pares de ncleos. En los ascomicetos, las hifas dicariticas se localizan slo en el interior de los cuerpos fructferos, en los cuales dan origen a la hifas ascgenas, ya que los dos ncleos de una clula de cada una de las hifas se fusionan para formar un cigoto (con un nmero diploide de cromosomas o 2N), el cual se divide meiticamente para producir ascosporas que contienen ncleos haploides. En los basidiomicetos, las esporas haploides slo producen pequeas hifs haploides. Cuando stas son fecundadas, se produce un micelio dicaritico (N+N), el cual se desarrolla para constituir el soma del hongo. Dichas hifas dicariticas pueden producir, por va asexual, esporas dicariticas que se desarrollarn de nuevo en un ncelio dicaritico. Sin embargo, en cualquiera de los casos, los ncleos apareados de las clulas se fusionan y forman cigotos, los cuales se dividen meiticamente para producir basidiosporas que contienen ahora ncleos haploides. Por supuesto, en los hongos imperfectos slo se encuentra el ciclo asexual que sigue la secuencia: espora haploide - micelio haploide - espora haploide. Sin embargo, incluso en los dems bongos, el ciclo que con mayor frecuencia se presenta es el asexual, debido a que Puede repetirse varias veces en cada estacin de crecimiento. Por lo comn, el cielo asexual 561o se produce una vez al ao. (agrios. 2001).

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FIGURA 2. Representacin esquemtica de los ciclos de vida generalizada de los principales grupos de fitopatgenos. (Agrios, G. 2001).

2.2.3. Descripcin de los Diferentes Hongos Fitopatgenos Que Atacan a la Granadilla (Passiflora ligularis Juss) 2.2.3.1. GNERO Alternaria 2.2.3.1.1. Descripcin Del Gnero Alternaria Segn Agrios, (2001). Se encuentra entre las enfermedades ms comunes de muchos tipos de plantas en todo el mundo. Afectan principalmente a las hojas, tallos, flores y frutos de plantas anuales, en particular de hortalizas y plantas de ornato, pero afectan tambin a ciertas partes de rboles como los ctricos y el manzano, etc. Por lo comn, las enfermedades causadas por Alternaria aparecen en forma de manchas y tizones foliares, pero pueden ocasionar tambin el ahogamiento de plntulas, pudriciones del cuello, as como pudriciones de los frutos y tubrculos. Algunas de las enfermedades ms comunes ocasionadas por Alternaria, incluyen al tizn temprano de la papa y del tomate, la mancha foliar del frijol, tabaco y geranio, el tizn del tallo de la zanahoria, clavel, crisantemo, petunia y zinnia, la mancha foliar y el tizn de las crucferas, la mancha prpura de la cebolla, las manchas foliar y el fruto de la calabaza y del manzano, la pudricin del corazn de la manzana y la podricin de los limones y naranjas, y muchas otras ms. La fitoenfermedad es de amplia distribucin en la sierra norte del Per. Los sntomas se muestran cuando la planta finaliza el proceso de polinizacin y fecundacin, y es a partir de este estadio que la fitoenfermedad perdura hasta la finalizacin del periodo vegetativo de la planta, facilitando una senectud prematura. (Roncal, M. 2004).

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FITOPATOLOGA I Los sntomas se inician con clorosis que al necrosarse adquieren la forma rectangular, figura que se forma por la delimitacin del parnquima afectado, por las nervaduras secundarias de la hoja. Las infecciones severas permiten la coalescencia de varias manchas formando autnticas estras; es necesario aclarar que cuando las condiciones de humedad y temperatura varan por tiempos prolongados no sufren intoxicacin. Estas reas libre de infeccin se distinguen por mantener el color verde normal. (Roncal, M. 2004). Por lo general, el color de las manchas foliares vara de caf oscuro a negro, a menudo son numerosas y cuando se extienden casi siempre forman anillos concntricos que adquieren la forma de un blanco. Por lo comn, las hojas senescentes de la parte inferior de la planta son atacadas en primer trmino, pero la enfermedad asciende hacia la parte superior de aquella y hace que las hojas afectadas se tornen amarillas y senescentes, se desequen y debiliten o desprendan. (Agrios, G. 2001). En rganos subterrneos, como es el caso de los tubrculos de papa, aparecen lesiones oscuras, ligeramente hundidas, de forma circular o irregular que pueden tener hasta un dimetro de 2cm y una profundidad de 5 a 6 mm. Los frutos afectados por Alternaria casi siempre son atacados cuando se aproximan a la madurez y la infeccin en algunas plantas ocurre a nivel del extremo del tallo, mientras que en otras se produce a nivel del extremo de la inflorescencia o en otros puntos a travs de heridas, grietas dejadas por el desarrollo de un rgano, etc. En algunos frutos, tales como los ctricos y el tomate, una pequea lesin que aparece sobre su superficie puede indicar una distribucin extensa de la infeccin en el corazn central y en las distintas zonas del fruto. (Agrios, G. 2001). Muchas especies de Alternaria producen toxinas, algunas de las cuales, como la tentoxina, que la produce A. tenuis, son no especficas de su hospedante, mientras que otras, como las toxinas AK y AM, que son producidas, respectivamente por A. kikuchiana y A. mali, son especficas de sus hospedantes correspondientes. Alternaria carthami, produce manchas foliares en crtamo.

A. tenuis, como patgeno, desarrolla en el follaje de plantas mal nutridas

o maltratadas por heladas. Los cultivos ms susceptibles son la betarraga. Cebolla y tomate. Produce conidios en cadenas largas.

A. tenuissina, generalmente saprfito, pero en condiciones adecuadas de

humedad y temperatura provoca dao en diferentes cultivos. A. solani, induce, el tizn temprano en papa, tomate y otras hortalizas. El sntoma caracterstico, comprende lesiones caf claro y oscuro distribuido indistintamente en el follaje. En papa, las lesiones se muestran con anillos concntricos, el resto de la hoja se torna clortico, producto de la toxina del hongo. (Roncal, M. 1993).

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FITOPATOLOGA I 2.2.3.1.2. Criterios Morfolgicos A Tomar En Cuenta Para La Identificacin De Alternaria Los conidiforos pequeos, generalmente presentan tres clulas, pero tambin los hay de cuatro y a veces cinco. El proceso de formacin de conidias muriformes catenuladas de este gnero, es peculiar, en comparacin al resto de hongos conforman esta familia. En algunos casos la conidia se forma en los pices de la clula conidiognica, inmediatamente despus de ella aparece otra conidia, la que ejerce presin a la conidia precedente; de esta manera se ven formando la cadena de conidias, destacando que la de mayor edad es la clula superior, que incluso se extiende por tener mayor nmero de septos. En otros casos, la conidia de mayor edad o intermedia de la cadena, da origen a una rama de conidias; ramificacin que tiene origen en la clula apical o en una lateral, haciendo las veces de clula conidiognica. (Roncal, M. 2004). 2.2.3.2. GNERO Fusarium 2.2.3.2.1. Historia Y Descripcin del Fusarium El gnero, Fusarium, involucra diferentes especies de polmica taxonmica. Desde 1935 a nuestros das, an siguen controversias sobre la categorizacin de sus integrantes. Los diferentes trabajos de taxonoma, se bnasan en los aciertos de Wollenwebwer, Reinking y otros (1934 1935). Con dichos principios, Nelson, Toussoun y Marasas (1983), establecen diferentes secciones. La enfermedad es ms destructiva en climas ridos y en suelos clidos y arenosos de las regiones templadas. La enfermedad puede ocasionar prdidas considerables, especialmente en variedades susceptibles y bajo condiciones climticas favorables. El marchitamiento causado por Fusarium se caracteriza por el achaparramiento de las plantas, las cuales en poco tiempo se marchitan y finalmente mueren. Sin embargo, por lo general la enfermedad no ocasiona prdidas considerables, a menos que las temperaturas del suelo y del aire sean muy altas durante gran parte de la estacin. (Agrios, G. 2001). Este gnero esta representado por Fusarium solana (Mart.) Sacc., con capacidad de provocar pudriciones radiculares y pudriciones secas en tubrculos y races tuberosas. En medio de cultivo PDA, es de crecimiento lento. En la plenitud de su desarrollo, forma abundante micelio blanco, que con la edad produce pigmentacin de color rojo; las conidias en forma de canoa son uni y pentacelulares, predominando las tetracelulares. La microconidia es de morfologa gruesa, distinguiendose en esbozo de canoa. (Roncal, M. 2004).

2.2.3.2.2. Criterios Morfolgicos A Tomar En Cuenta Para La Identificacin De Fusarium Ejemplo Fusarium oxysporum f. lycopersici. El micelio es incoloro al principio, pero conforme madura adquiere un color crema o amarillo plido y bajo ciertas condicones adquiere una tonalidad rosa plido o algo prpura. Este patgeno produce tres tipos de esporas asexuales que son: Microconidios: que tienen de una a dos clulas y son las esporas que el

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FITOPATOLOGA I hongo produce con una mayor frecuencia y en una mayor abundancia en todas las condiciones. Son las esporas que el hongo forma con ms frecuencia en el interior de los vasos de las plantas hospedantes que ha infectado. Macroconidios: Son las esporas tpicas del Fusarium, estan constituidos de 3 a 5 clulas, se adelgazan gradualmente y se encorvan hacia ambos extremos. Aparecen con gran frecuencia sobre la superficie de plantas que han sido destruidas por el patgeno y por lo comn se forman en grupos similares a los esporodoquios. El ultimo tipo de espora son las clamidosporas, que estn constituidas por una o dos clulas, son de pared gruesa y son esporas redondas que se forman Terminal o intercalarmente en el micelio ms vuejo o en los macroconidios del hongo. Estos tres tipos de esporas se forman en los cultivos del hongo y quiz tambien en el suelo, qunque cabe decir que slo las clamidosporas sobreviven en este ltimo sustrato durante ms tiempo. (Agrios, G. 2001). 2.2.3.3. GNERO Rhizopus 2.2.3.3.1. Descripcin Del Gnero Rhizopus La pudricin blanda de frutos y hortalizas ocasionadas por Rhizopus se encuentra ampliamente distribuida en todo el mundo y aparece en rganos carnosos de hortalizas, en plantas florales y en frutos que han sido cosechados, y es importante slo durante el almacenamiento, transporte y venta en el mercado de estos productos. Entre las plantas de cultivo que son atacadas con mayor frecuencia por esta enfermedad se encuentran las fresas, camotes, todas las cucurbitceas, los duraznos, cerezas, cacahuates y varios otros frutos y hortalizas. El hongo afecta el maz y a otros cereales bajo condiciones altas de humedad. Los bulbos, cormos y rizomas de plantas florales, como es el caso de las gladolos y los tulipanes, tambin son susceptibles a esta enfermedad. (Agrios, G. 2001). 2.2.3.3.2. Sntoma Al principio, las zonas infectadas de los rganos carnosos aparecen como si estuvieran embebidas de agua y son muy blandas. An cuando la cscara de los tejidos que han sido infectados se mantenga intacta, el rgano carnoso ablandado pierde humedad gradualmente hasta que se arruga y momifica. Sin embargo, es ms frecuente que la cscara ablandada se rompa durante su manipulacin o cuando se le aplica cierta presin, como ocurre cuando se amontonan los frutos; esto hace que de ellos salga un lquido amarillo blanquizco. En poco tiempo, las hifas del hongo crecen hacia fuera a travs de las heridas del fruto y cubren las zonas afectadas al producir grupos de esporangiforos filamentosos de color gris que producen esporangios negros en sus puntas. Cuando la humedad disminuye con gran rapidez, los rganos infectados finalmente se secan y momifican o bien se degradan y desintegran hasta formar una masa putrefacta y aguanosa. (Agrios, G. 2001). 2.2.3.3.3. Signo Desde el inicio de la infeccin, se observa el signo del hongo, primero como masas algodonosas hirsutas con fructificaciones blancas, que ms tarde se tien de negro, como consecuencia de la maduracin de las esporas. (Roncal, M. 2004).

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FITOPATOLOGA I 2.2.3.3.4. Desarrollo de la Enfermedad Las hifas producidas secretan enzimas pectinolticas que degradan y disuelven las sustancias pcticas de la lmina media de las clulas, es decir, disuelven las sustancias que mantienen fijas a las clulas en los tejidos. Esto da como resultado la prdida de cohesin entre las clulas, dado que ahora se rodean de una sustancia lquida, y cuando se les aplica una cierta presin pueden moverse libremente, dando como resultado una pudricin blanda. (Agrios, G. 2001). Las enzimas pectinoltica que secreta el hongo avanzan por delante del micelio y separan a las clulas antes de que el micelio se fije en ellas. Las clulas de los tejidos macerados son entonces atacadas por las enzimas celulolticas del hongo, las cuales degradan las celulosa de la pared celular y, debido a ello, las clulas de desintegran. El micelio del hongo crece intercelularmente y al parecer no invade a las clulas; slo lo hace cuando han muerto y han empezado a desintegrarse. Todo esto parece indicar que el micelio nunca entra en contacto con las clulas vivas del hospedante y que queda rodeado por clulas muertas y sustancias orgnicas inertes, de ah que viva ms bien como una forma saprfita que como parsito. (Agrios, G. 2001). 2.2.3.3.5. Criterios Morfolgicos A Identificacin De Rhizopus Tomar En Cuenta Para La

La caracterstica fisiolgica de intercambio gentico entre cepas de distinta polaridad han facilitado la determinacin de razas fisiolgicas, las mismas que son identificadas por la velocidad degradativa del tejido carnoso y la especificidad que presentan. La raza universal, se caracteriza por degradas, sin preferencia, todo tipo de tejido carnoso; en cambio existen otras que muestran cierto grado de preferencia por frutos y otros rganos carnosos. (Roncal, M. 2004). Presenta esporangiforos en grupos con rizoides y estolones; las esporas sin flagelos (aplanosporas) se forman en la cavidad esporangial entre la columnela y la pared del esporangio. (Roncal, M. 2004). El micelio del hongo carece de septas y produce esporangiforos largos areos que en sus puntas forman esporangios esfricos pequeos. (Agrios, G. 2001). 2.2.3.4. GNERO Trichothecium 2.2.3.4.1. DESCRIPCIN DEL GNERO Trichothecium Segn Rodrguez S. J. et.al. (1971). La enfermedad que ocasiona este hongo es conocida como la podredumbre amarga o podredumbre rosa (pink-rot de los americanos). Suele penetrar a travs de las lesiones producidas por el moteado (Venturia sp.) cuando est en el rbol. Sin embargo, en almacn puede hacerlo sin ayuda. Igualmente las semillas sufren daos que hacen dificultosa la germinacin.

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FITOPATOLOGA I 2.2.3.4.2. Criterios Morfolgicos A Tomar Identificacin De Trichothecium En Cuenta Para La

En la parte central se desarrolla una masa de micelio que se extiende por los canales estilares, y en la superficie produce eflorescencias de conidiforos color rosa. En las eflorescencias rosadas aparecen conidiforos, aglomerados en una cabezuela de 12-19 por 8-10 micras y de forma de pera. La caracterstica ms notable es el amargor que transmite a la fruta, incluso a la parte no atacada, que en ocasiones llega a momificarse. (Rodrguez S. J. et.al. 1971). 2.2.3.5. GNERO Verticillium 2.2.3.5.1. Descripcin Del Gnero Verticillium Estas enfermedades se encuentran ampliamente distribuidas por todo el mundo, pero revisten una mayor importancia en las reas de las zonas templadas. Verticillium ataca a ms de 200 especies de plantas, la mayora de ellas hortalizas, como es el caso del tomate, berenjena, pimiento, meln y sanda; flores, como el crisantemo, ster y dalia; rboles frutales, como por ejemplo, el albaricoque, cerezo y durazno; ataca tambin a las fresas, frambuesas y rosales; cultivos mayores, como es el caso del algodn, papa, alfalfa, cacahuates y menta, y 1 algunos rboles forestales y de sombra, como es el caso del arce y del olmo. Los sntomas de marchitez por Verticillium son casi idnticos a los que ocasiona Fusarium y en los hospedantes afectados por ambos gneros es imposible diferenciarlos excepto mediante pruebas de laboratorio. Sin embargo, en muchos de los hospedantes y en la mayora de las reas, Verticillium induce marchitez a temperaturas ms bajas que Fusarium y los sntomas se desarrollan ms lentamente; con frecuencia aparecen solos sobre la parte inferior de la planta o sobre su superficie o nicamente sobre algunas de sus ramas. En algunos hospedantes, como es el caso del algodn, la marchitez por Verticillium se desarrolla principalmente en las plntulas, las cuales a menudo mueren poco despus de haber sido infectadas, pero ms comunes son las infecciones tardas, que ocasionan la epinastia de las hojas superiores, seguida por la aparicin, en las hojas, de manchas clorticas irregulares que posteriormente se vuelven necrticas. Las plantas adultas infectadas por Verticillium habitualmente sufren varios grados de achaparramiento y sus tejidos vasculares muestran una decoloracin caracterstica. En muchos hospedantes, la infeccin por Verticillium da como resultado la defoliacin, marchitez gradual y muerte de ramas sucesivas o un colapso repentino y muerte de toda la planta. Los brotes iniciales de marchitez por Verticillium en un campo son tpicamente moderados y locales. En aos posteriores, los ataques son ms severos y se distribuyen ms ampliamente, a menos que las plantas dejen de ser cultivadas o sean sustituidas por variedades resistentes. La severidad cada vez mayor de la enfermedad ao tras ao se debe a un incremento tambin cada vez mayor del potencial del inculo, por la aparicin de cepas del hongo ms virulentas que la origina, o a ambos.

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FITOPATOLOGA I Dos especies de Verticillium, V. albo-atrum y V. dahliae, son la causa de los marchitamientos por Verticillium en la mayora de las plantas. El hongo se propaga por medio de las clulas infectadas, tubrculos y esquejes vegetativos, pas y yemas, as como a travs del viento, el agua superficial del terreno y por el suelo mismo, el cual puede contener incluso ms de 100 microesclerocios por gramo; entre 6 y 50 microesclerocios por gramo son suficientes para causar una infeccin del 100% en la mayora de los cultivos susceptibles. Muchos terrenos han sido contaminados por primera vez por Verticillium al plantar tubrculos de papa infectados u Otros cultivos, y se sabe que las solanceas como la papa, la berenjena y el tomate incrementa el nivel de inculo en el suelo. (Agrios, G. 2001).

2.2.3.5.2.

Criterios Morfolgicos A Tomar Identificacin De Verticillium

En

Cuenta

Para

La

V. albo-atrum y V. dahliae Ambas especies producen conidios que son viables por poco tiempo. Verticillium dahliae tambin produce microesclerocios, mientras que V. albo-atrum forma un micelio oscuro de pared gruesa y parecido a microesclerocios, pero no estos ltimos. V. alboatrum crecen mejor a una temperatura que flucta entre 20 y 25'C, mienuas que V. dahliae prefiere temperan= un poco mayores (de 25 a 28'C) y es un poco ms comn en regiones clidas. (Agrios, G. 2001)

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FITOPATOLOGA I

CAPTULO III
MATERIALES Y MTODOS
3.1. Lugar experimental El presente experimento se ha conducido en el laboratorio de Fitopatologa, (Edificio 2G -106) de la Universidad Nacional de Cajamarca, con una ubicacin geogrfica de 2680 m. s. n. m., con latitud 07 10 06.35 S y una longitud de 78 29 42.70 W. Datos Obtenidos del Software Google Eart Imgenes Satelitales. 3.2. Materiales 3.2.1. Material Experimental. a. Raz. Se utiliz la raz de granadilla (Passiflora ligularis Juss) recolectado directamente del suelo en la Ciudad de Cajamarca. b. Hoja. Se recolect hojas de granadilla (Passiflora ligularis Juss), obtenido directamente del campo en la Ciudad de Cajamarca. c. Fruto. Este fruto de granadilla (Passiflora ligularis Juss), fue obtenido del mercado de la Ciudad de Cajamarca. 3.2.2. Material de Laboratorio. Agujas y jeringas esterilizadas. Alcohol. Cmara de Flujo laminar. Cmara hmeda. Cultivo PDA (Potato Dextrosa Agar). Estufa. Incubadora. Jabn. Microscopio. Navaja Estril. Pomitos de vidrio (de ampollas vacas y esterilizadas). Porta y cubre objetos. 3.2.3. Material de Gabinete. Cmara fotogrfica. Computadora. Disquetes.

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FITOPATOLOGA I Materiales de escritorio. Scanner. 3.3. Metodologa 3.3.1. Instalacin y conduccin del experimento. 3.3.1.2. Cmaras Hmedas. La preparacin de una cmara hmeda se realiz cortando dos botellas del mismo tamao y grosor, (empezando por la base) una se corta de 20 cm. (que har de base) y otra de 10 cm. (que har la vez de tapa) luego, en la base se coloca arena lava de ro, desinfectada con agua hervida por 5 minutos, para prevenir cualquier enfermedad fungosa o de otro tipo, en sima de esta se coloca papel planchado, tambin para evitar cualquier tipo de microorganismo. 3.3.1.3. Incubacin del Material experimental. Se coloca cada uno de los materiales experimentales, dentro de cada cmara, (una muestra experimental en cada cmara respectivamente). Luego se procede a tapar hermticamente sin ninguna entrada de aire y as evitar el ingreso de cualquier tipo de microorganismo. Estas cmaras cerradas hermticamente, se colocan en un lugar fresco, sin presencia directamente de rayos de sol, y se espera por das hasta que, se vean seales de algn microorganismo. 3.3.2. Evaluaciones registradas durante el experimento. El procedimiento que a continuacin se detalla se hizo para cada una de las cinco sepas fungosas a. Aislamiento y observaciones. Luego que un hongo a prosperado en el material experimental (raz, hoja, tallos, o frutos) que est dentro de la cmara hmeda, procedemos a separar una pequea muestra (parte de este hongo), para colocarlo con la ayuda de las agujas esterilizadas, en un pomo pequeo de vidrio conteniendo cultivo PDA (Papa Dextrosa Agar), luego a este pomito se tapa con un pedazo de algodn y dejamos en la incubadora a 21 C, durante un periodo para observar su desarrollo y proceder debidamente a su clasificacin. b. Anlisis. Cada 24 horas por el lapso de una semana, se extrae una pequea muestra del hongo que se encuentra en el pomito con la ayuda de las agujas esterilizadas y, se coloca en un porta y cubre objetos, para luego llevarlo al microscopio, se procede a su observacin y fotografiado. Luego estas son analizadas para su respectiva clasificacin, a travs de las claves taxonmicas que nos proporciona el profesor. c. Evaluaciones. Para la evaluacin se tomaron los siguientes datos: Si el micelio es cenoctico o presenta septas.

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FITOPATOLOGA I Si presenta o no conidios. Si se producen o no dentro de un acrvulo Si su conidia y conidioforo es hialino o brillantemente coloreado. Si sus conidiforos son unidos o no en esporodquio o sinema. Si sus conidiforos son ramificados. Si forma de fialide. Si sus conidiforos tienen ramificacin verticilada. Con los datos obtenidos de esta evaluacin se determinar su respectiva clasificacin de este patgeno.

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FITOPATOLOGA I

CAPITULO IV
RESULTADOS Y DISCUCIN
4.1. Hongos Encontrados en la Granadilla (Passiflora ligularis Juss) GNERO Alternaria Fusarium Rhizopus Trichithecium Verticillium Encontrado en: Hoja Raz Fruto Fruto Raz

4.2. Caractersticas Morfolgicas de los diferentes cinco gneros de hongos encontrados en la granadilla (Passiflora ligularis Juss) 4.2.1. Gnero Alternaria Se encontr ocasionando una mancha foliar de color marrn oscuro, en hoja de granadilla (Passiflora ligularis Juss); la cual se coloc en cmara hmeda, cuando se not la presencia de el micelio, se decidi aislar el hongo en un frasquito de PDA, y colocarlo a la incubadora. Luego de 24 horas el hongo empez a salir, presentando primero micelio algodonoso de color plomo oscuro a negro; presenta hifas y conidias de color oscuro. Se tom una pequea muestra y se observ al microscopio; donde se not hifas septadas, y conidias muriformes catenuladas, as como tambin cadena de conidias, en donde se observa que la clula que esta en la parte superior tiene mayor nmero de septos. 4.2.1.1. Clave Para la identificacin del Gnero Alternaria Segn Barnet (1960). A2. Micelio no cenoctico con frecuentes septas; normalmente presenta conidias, excepto en algunos gneros ..HONGOS IMPERFECTOS B1. C2. Conidia y conidiforo no producidos dentro de pignidio o Acrvulo.MONILIALES. Conidia no enrollada.

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FITOPATOLOGA I D2. Conidiforo o conidias conteniendo pigmentacin oscura, conidiforo no unidos dentro de esporodoquio o cinema ..DEMATIACEA Conidia con clulas diferentes, muriformes, dictyosporaus; o cuatro clulas, en forma de cruz. Conidia catenulada. Conidia que se diferencia del conidiforo, alta, delgada..Alternaria

E4. F1. G2.

Figura 03. Fotografa tomada al microscopio compuesto, del gnero Alternaria que ataca a la hoja de granadilla (Passiflora ligularis Juss).

4.2.2. Gnero Fusarium Se tom de campo, un pedazo de raz de granadilla (Pasiflora ligularis Juss), pero no se encontr sntoma externo de la enfermedad, luego se procesdi a lavarlo con una solucin de una gota de leja en un litro de agua, para su respectivo desinfectado superficial; se puso en cmara hmeda y se lo dej por una semana al cabo de este tiempo apareci un micelio de color blanquecino, por lo cual se decidi aislar el hongo en un frasquito de PDA, y colocarlo en la incubadora. Luego de 24 horas el hongo empez a crecer, presentando un micelio incoloro al principio, pero conforme madura adquiere un color rosa plido. Cuando este es llevado al microscopio se observ que contena conidias de unas 35 clulas, que se adelgazan gradualmente y se encorvan a ambos extremos. Tambin despus de dos semanas que el hongo esta incubado, observamos al microscopio y vemos clamidosporas, son de pared gruesa y son esporas redondas que se forman Terminal o intercalarmente en los micelios ms viejos o en los macroconidios del hongo.

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FITOPATOLOGA I 4.2.2.1. Clave Para la identificacin del Gnero Fusarium Segn Barnet (1960). A2. Micelio no cenoctico con frecuentes setas; normalmente presenta conidias, excepto en algunos gneros HONGOS IMPERFECTOS B1. C2. D3. E1. F3. G1. Conidia y conidiforo no producidos dentro de picnidio o AcrvuloMONILIALES Conidia no enrollada. Conidiforos unidos en esporodoquio sinema. Conidia producida en esporodoquioTUBERCULARIACEAE Algunas conidias pequeas con dos clulas hialinas u oscuras. Conidia hialina o brillantemente coloreada.

H2. Conidia grande, pequeas, coloreadas, juntas. I2. Esporodoquio sin setas. J1. Macroconidia en forma de canoa (tambin puede estar presentes muchas microconidias.Fusarium

Figura 04. Fotografa tomada con microscopio compuesto, al micelio de Fusarium que ataca a la raz de granadilla (Passiflora ligularis Juss).

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FITOPATOLOGA I

Figura 05. Fotografa tomada con microscopio compuesto a una conidia de Fusarium que ataca a la raz de granadilla (Passiflora ligularis Juss).

Figura 06. Fotografa de clamidosporas de Fusarium. Tomada con microscopio compuesto. 4.2.3. Gnero Rhizopus Se obtuvo un fruto de granadilla donde no encontramos sntomas externos de alguna enfermedad, luego fue lavado, con agua corriente y colocado en cmara hmeda, y se lo dej por una semana. Al cabo de este tiempo se observ el signo del hongo, como masas de algodn de color blanquecino con presencia de un esporangio, en la parte terminal del esporangiforo. Visto en el estereoscopio, se observa esporangios, esporangiforos simples o ramificados, en la parte basal de los esporangiforos se nota la presencia de rhizoides. El genero Rhizopus, ya que corresponde al Clase Zygomicetes no lo identificamos con clave ya que solo tenemos clave taxonmica para la Clase Deuteromycetes.

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FITOPATOLOGA I

Figura 07. Fotografa de Rhizopus sp. Donde se muestra la presencia de rhizoides, esporangiforo y esporangios.

Figura 08. Fotografa de Rhizopus sp. donde observamos al esporangiforo con su esporangio, y el esporangio con esporangiosporas. Tomada con microscopio compuesto. 4.2.4. Gnero Trichothecium Al igual que en Rhizopus, se obtuvo un fruto de granadilla donde no encontramos sntomas externos de alguna enfermedad, luego fue lavado, con agua corriente y colocado en cmara hmeda, donde se dej por el lapso de una semana. Al cabo de este tiempo se observ el signo del hongo, que consista en una felpa de color blanco, que se fue expandiendo en el peciolo del fruto. Luego se tom una muestra de este hongo, y se coloc en un frasquito pequeo, con PDA, despus de 24 horas notamos el crecimiento de este hongo, despus de 4 das se observ un micelio como felpa de color un poco rosado. Visto en el microscopio, se observa conidiforos con conidias de dos clulas, en forma de una pera.

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FITOPATOLOGA I 4.2.4.1. Clave Para la identificacin del Gnero Trichothecium Segn Barnet (1960). A2. Micelio no cenoctico con frecuentes setas; normalmente presenta conidias, excepto en algunos gneros ..HONGOS IMPERFECTOS B1. C2. D1. Conidia y conidiforo no producidos dentro de picnidio o AcrvuloMONILIALES Conidia no enrollada. Ambos conidios y conidiforos presentes, hialinos o brillantemente coloreados, conidiforos no unidos dentro de esporodoquio o cinema..MONILIACEAE Conidia con ms de dos clulas ovoide, cilndrica o irregular. Distintos conidiforos, simples, o espiralados ramificados. No acutico.

E2. F3. G2.

H2. Conidiforo usualmente simple, comnmente saprofito. I3. Conidiforo delgado, llevando esporas en la porcin o en diferentes niveles sobre el conidiforo. J1. Conidia pegada solamente sobre la cima.Trichothecium

Figura 9. Fotografa del gnero Trichothecium sp. Donde notamos, conidiforos y conidias con dos clulas. 4.2.5. Gnero Verticillium Se recogi del suelo, races de granadilla, sin ningn sntoma externo de alguna enfermedad, luego fue lavado, con agua corriente y colocado en cmara hmeda, donde se dej por el lapso de una semana. Al cabo de este tiempo se observ el micelio de color blanco en algunas zonas de la raz. Se tom una pequea muestra y se lo sembr en un frasquito pequeo con PDA, a los 4 das siguientes notamos el crecimiento del micelio de este hongo de color

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FITOPATOLOGA I blanco, visto al microscopio se observan hifas con ramificaciones, en cada ramificacin hay un promedio de dos ramificaciones ms, terminando en punta cada hifa ramificada, sus conidias son de forma rectangular - redondeadas. 4.2.5.1. Clave Para la identificacin del Gnero Verticillium Segn Barnet (1960). A2. Micelio no cenoctico con frecuentes setas; normalmente presenta conidias, excepto en algunos gneros ..HONGOS IMPERFECTOS B1. C2. D1. Conidia y conidiforo no producidos dentro de picnidio o Acrvulo..MONILIALES Conidia no enrollada. Presenta conidias y conidiforos hilinos o brillantemente coloreados, conidiforos no unidos dentro de esporodoquio o sinema..MONILIACEAE Conidia con clula globosa corta. Conidiforos presentes aunque a veces cortos. Conidiforos cuyas ramificaciones son distintas a las de los conidios.

E1. F2 G2.

H2. Conidiforos comnmente ramificados, a veces simple, presenta filides en grupos o racimo. I2. Conidio no catenulado. J2. Clamidosporas grandes ausentes. K1. Conidia producida apicalmente, sobre filides o en ramificaciones del conidiforo. L1. Conidiforos de ramificaciones verticiladas. M3. Conidiforos ramificados, frtiles, delgadas conidias separadas o en mucilago.Verticillium

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FITOPATOLOGA I

Figura 10. Fotografa del gnero Verticillium sp.

Figura 11. Fotografa del gnero Verticillium sp.

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FITOPATOLOGA I

CAPITULO IV
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
1. Las muestras de raz extradas desde plantas con sntomas de peor estado dan mayor resultado. 2. La alta patogenicidad del hongo en nuestras condiciones puede significar un serio problema dado a su carcter de atacar a un amplio rango de huspedes. 3. El hongo puede estar en el suelo hasta que encuentra las condiciones apropiadas y se empieza a reproducir. 4. Mientras trabajemos con mayor cuidado y aseo vamos a obtener mejores resultados. 5. Cuando en un mismo frasquito de PDA, se encuentran dos tipos de hongos diferentes, este ser desechado (eliminado), ya que los resultados que nos van a dar son de mala calidad.

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FITOPATOLOGA I

CAPITULO VII
BIBLIOGRAFA
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