RECONOCIMIENTO DE AZUCARES INTRODUCCION El hgado desempea muchas funciones metablicas, aportando al cuerpo la energa que necesita.

Regula la produccin, almacenamiento y liberacin de azcar, grasas y colesterol. Cuando se ingiere comida, el hgado convierte la glucosa (azcar de la sangre) en glucgeno, el cual se almacena para utilizarlo en el futuro. En el momento en que se necesita energa, el hgado vuelve a convertir el glucgeno en glucosa, en un proceso llamado gluconeognesis. El hgado regula el almacenamiento de las grasas convirtiendo los aminocidos de la comida digerida en cidos grasos, como los triglicridos; cuando el cuerpo no dispone de azcar suficiente, el hgado convierte los cidos grasos en cetonas, las cuales pueden utilizarse como combustible. Adems, el hgado controla la produccin, el metabolismo y la excrecin del colesterol, el cual es un componente fundamental de las membranas celulares y determinadas hormonas.

El hgado sintetiza (elabora) varias protenas esenciales, tales como las enzimas, las hormonas, los factores de coagulacin y los factores inmunitarios. Las enzimas hepticas aminotransferasas o transaminasas (ALAT y ASAT) descomponen los aminocidos de la comida digerida y los utilizan para elaborar nuevas protenas necesarias para el organismo. Cuando las clulas hepticas estn daadas, estas enzimas pueden liberarse y acumularse en grandes cantidades en la sangre; es posible determinar su concentracin mediante un sencillo anlisis de sangre. Varias de las protenas sintetizadas por el hgado son necesarias para el funcionamiento adecuado de la sangre. Entre ellas, destacan ciertas protenas de fijacin (que adhieren y transportan vitaminas, minerales, hormonas y grasas) y la albmina (una protena que ayuda a mantener el volumen sanguneo adecuado). Los factores de coagulacin producidos por el hgado son el fibringeno, la protrombina (Factor II) y el Factor VII. Estos factores permiten a la sangre coagularse despus de sufrir una herida; cuando los niveles son bajos, pueden producirse hematomas con facilidad y hemorragias prolongadas. Otras protenas sintetizadas por el hgado son la alcalina-fosfatasa, la gamma-glutamil-transferasa (GGT) y el factor de crecimiento insulnico.( articulo, Liz Highleyman, Alan Franciscus, Redactor jefe de HCV Advocate)
En esta prctica de laboratorio logramos demostrar que en la composicin de material biolgico (en este caso el hgado) se encuentran carbohidratos, lpidos, y protenas, de acuerdo con su funcin biolgica.

RESUMEN

Iniciamos la prctica de laboratorio tomando el hgado y lo cortamos en trozos pequeos unos 5g, en un mortero y adicionamos ATA en relacin de 1,5ml/g de tejido. Adicionar

aprox 0,5 g de arena lavada, macerar y centrifugar por 10 min en un tubo de ensayo, despus obtuvimos una mezcla heterognea donde el residuo eran lpidos, protenas, cidos nuclecos y arena, y el sobrenadante carbohidratos. Tomamos los carbohidratos y en un vaso de precipitados adicionamos etanol al 95% en una relacin 2:1 con respecto al volumen del sobrenadante y dejamos enfriar en un bao de hielo por 5min. Centrifugamos por 10 min, de esta forma obtuvimos los oligo y monosacridos (residuo), el cual evaporamos a bao maria y glicoeno (sobrenadante), el glicgeno no lo obtivimos pues solo tenamos una muestra homognea la cual nos indicaba que solo tenamos mono y oligosacaridos, tomamos esta muestra y la guardamos para realizar los ensayos de reconocimiento. Luego iniciamos el proceso de separacin del residuo de la primera vez que centrifugamos, (lpidos, protenas, cidos nuclecos y arena, y el sobrenadante carbohidratos) Adicionamos al residuo en una cpsula de porcelana la mezcla de EtanolEter-Cloroformo 2:2:1 en 1,5ml/g de tejido, luego centrifugamos a 2500 rpm por 5 minutos. Obtuvimos lpidos (sobrenadante) lo calentamos a bao mara por unos minutos, y lo guardamos para el ensayo, tambin obtuvimos en el residuo cidos nuleicos protena y arena, los cuales tendrn que pasar por otro proceso para poder obtener las protenas. En una vaso de precipitados agregar el residuo de la ultima vez que centrifugamos agregando NaCl al 10% (1ml/g tejido original),ms 1ml de butanol y a 90C en una bao mara por 25 min(use perlas de ebullicin). Centrifugar a 4000 rpm por 10min. De esta forma obtenemos la protena desnaturalizada como residuo, los cuales guardamos para realizar el ensayo, como sobrenadante estn los acidos nucleicos los cuales no vamos a utilizar, por esta razn son desechados. En el hgado, la sntesis de varia protena y triglicridos est normalmente conectada a la secrecin de lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL, su acrnimo en ingls) y no se considera un sitio de almacenamiento fisiolgico de lpidos. Por tanto, toda acumulacin de triglicridos en este rgano es patolgica, y se denomina indistintamente esteatosis heptica o hgado graso (Wolff Otto), por lo que en nuestra muestra de lpidos tenamos una gran cantidad de lpidos y protenas. De esta forma se pudo iniciar con los ensayos de reconocimiento teniendo las muestras de Oligo y polisacridos, Lpidos y protenas desnaturalizadas. Comenzamos con las pruebas de reconocimiento de carbohidratos, los realizamos con los mono y oligosacaridos ya que no pudimos obtener glicgeno. En un tubo de ensayo para cada prueba la muestra de mono y oligosacaridos.Prueba de lugol: Agregamos 3 gotas de Lugol y observamos.

Prueba de Molisch: adicionamos 1ml de agua destilada, 2 gotas de reactivo de Molisch y mezclamos cuidadosamente. Agregamos 1ml de cido sulfrico concentrado y observamos Prueba de Benedict: Colocamos a bao mara por 2 min y luego adicione 2ml de reactivo de Benedict, observamos y seguimoscalentando. Seguimos con las pruebas de reconocimiento para los lpidos, con un tubo de ensayo con la muestra para cada prueba. Prueba de Liebermann: Adicionamos 3ml de cloroformo y mezclamos, luego adicionamos 1ml de anhdrido actico cuidadosamente por la paredes del tubo y agite, agregamos 3gotas de cido sulfrico y observamos. Prueba de saponificacin: Agregamos 3ml de NaOH al 15% y una perla para ebullicin, y c a bao mara durante 20min, adicione 3ml de agua destilada, agitamos y observamos La ultima en realizar es la prueba de milln realizada a la muestra de protenas Adicionando 1 ml de agua destilada, agregamos 1ml del reactivo de milln y calentamos por unos minutos a bao mara. Observe

TABLAS DE RESULTADOS ENSAYO DE LUGOL MUESTRAS Mono y oligosacaridos OBSERVACION No se observa ninguna reaccin, las sustancias no son solubles (mono y oligosacaridos con el reactivo de lugol) el reactivo se queda al fondo del tubo de ensayo. RESULTADO Coloracin amarilla-negativo

ENSAYO DE MOLISH

MUESTRAS Mono y oligosacaridos

OBSERVACION Al adicionar agua destilada y alfa-naftol no observamos cambio alguno excepto por una propiedad aceitosa. Al adicionarl el cido sulfrico se formo un anillo morado en la parte inferior del tubo de ensayo.

RESULTADO Anillo morado-positivo.

REACTIVO DE BENDECIT

MUESTRAS Mono y oligosacaridos

OBSERVACION Al adicionar el reactivo obtenemos una mezcla heterognea, en la cual la sustancia del fondo tiene un color azul ms intenso que la de menor densidad. Despus de pasar por bao mara queda una mezcla homognea de color verde.

RESULTADO Coloracin verde rojizapositivo.

ENSAYO DE LIBERMAN

MUESTRAS Lpidos

OBSERVACION 1. VISCOSO DOS FASES ABAJO VISCOSO ARRIBA LQUIDO. 2. COLOR AMARILLO LADRILLO 3. SE FORMO UN ANILLO EN LA PARTE SUPERIOR DE COLOR CAF Y UNA INTERFASE DE COLOR VERDE OPACO Y EN LA PARTE INFERIOR UN AMARILLO LADRILLO.

RESULTADO POSITIVO

ENSAYO DE SAPONIFICACION

MUESTRAS lpidos

OBSERVACION Despus de agregar el reactivo y dejar calentar de bao mara no hubo cambio visible. Pero al adicionar 3 ml de agua destilada observamos q al instante sala espuma y cada vez que se mezclaba se repeta este suceso. Color verde opaco

RESULTADO Coloracin verde, espumapositivo

ENSAYO DE MILLON

MUESTRAS Protena

OBSERVACION

RESULTADO Precipitado rojo-positivo

ANALISIS DE RESULTADOS

REACCION DEL LUGOL: Solucin de yodo en yoduro de potasio, dio negativo ya que el lugol solo reacciona con algunos polisacridos como almidones, glucgeno y dextrinas formando un complejo de inclusin termolbil. Al ser mono y oligosacaridos no poda entrar el yodo a la molcula.
MOLISCH: Obtuvimos reaccin positiva ya que el acido sulfrico concentrado que contienehidroliza y deshidrata

los azucares obtenindose furfural o hidroximetil furfural comoproducto final, los cuales son capaces de reaccionar con naftol formando un compuesto violetaes muy sensible a soluciones de glucosa de hasta .001%tambien da positiva a aldehdos, cetonas y algunos cidos orgnicos como frmico, oxlico y ctrico. La sacarosa se hidroliza a sus monmeros (Glucosa y fructosa) y ocurre el mismo procedimiento anterior, as:

ENSAYO DE BENDEDICT Obtuvimos resultado positivo en esta reaccin al iniciar con la adicion del reactivo de benedict y poner a bao mara en los primeros minutos no haba cambio alguno solo la misma coloracin azul debido al color del reactivo con una diferencia de densidades notable, al dejarlo ms tiempo vimos el cambio de coloracin a verde rojiza , podriamos suponer que la mezcla tenia mas azucares reductores, con el grupo (OH) libre, casi todos los monosacridos y algunos oligosacaridos. El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de carbohidratos reductores, el de Benedict contiene ion cprico (Cu2+) en medio alcalino que se reduce hasta xido cuproso (Cu2O Rojo) en presencia de azcares con el hidroxilo hemiacetlico libre. Que en un medio alcalino, el ion cprico (otorgado por el sulfato cprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo Aldehdo del azcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al xido cuproso (Cu 2O). Reaccin monosacaridos:

Los monmeros de glucosa en la sacarosa se oxidan, pero la fructosa al ser una cetosa no se puede oxidar

BIBLIOGRAFIA
1.
El Higado Espaol . Organo De La Fuerza Vital, Wolff Otto

2. Introduccin sobre el hgado, Liz Highleyman, Alan Franciscus, Redactor jefe de HCV Advocate. HEPATITIS C SUPPORT PROJECT VERSIN 1.0 SEPTIEMBRE DE 2003 ; 2008