EQUIPOS LABORATORIO DE BIOLOGA MOLECULAR OBJETIVOS 1. 2. Conocer los equipos presentes en el laboratorio de Biologa Molecular de la Universidad.

Reconocer el funcionamiento bsico y la utilidad de cada equipo.

MARCO TERICO Listado de equipos presentes en el laboratorio: 1. Centrfuga Son muy tiles para precipitar clulas y molculas. Vienen en distintos tamaos y con distintas capacidades en el manejo de muestras. Este aparato somete la muestra a fuerzas de aceleracin que obligan a las molculas a concentrarse en el fondo del envase utilizado, separndolas del medio en que se encuentran. Incluso, bajo ciertos mtodos se puede generar un gradiente de concentraciones dentro del mismo tubo, separando molculas a diferentes niveles o fases dentro del tubo. Con ayuda de jeringas, se puede perforar la pared del tubo y extraer del mismo slo aquella fase donde se encuentren las molculas de inters. El rotor de esta centrfuga puede sostener tubos de 50 ml, pero puede ser intercambiado por rotores que sostienen botellas de cultivo. La velocidad es medida en rpm. 2. Microcentrfuga La microcentrfuga es una versin ms pequea de la descrita anteriormente. Es compacta, se coloca sobre la mesa y procesa muestras de hasta 2 ml. Es muy til para precipitar ADN y otras sustancias que se trabajan en volmenes pequeos. La microcentrfuga no est graduada ni calibrada. En la parte interior tiene un cabezal y un eje que une el cabezal con el motor; y en la parte exterior tiene un temporizador, que mide el tiempo en que realiza cada vuelta, es decir, es el controlador de la velocidad. La velocidad es medida en rpm. 3. Termociclador Tambin conocido como mquina de PCR, es un equipo que permite realizar los ciclos de temperaturas necesarios para una reaccin en cadena de la polimerasa y la amplificacin de ADN. El modelo ms comn consiste en un bloque de resistencia elctrica que distribuye a travs de una placa una temperatura homognea durante tiempos que pueden ser programables, normalmente con rangos de temperatura de 4C a 96 C. Dado que las reacciones incubadas en el aparato son en soluciones acuosas, suelen incluir una placa de tapa calentada constantemente a 103C para evitar la condensacin de agua en las tapas de los tubos donde ocurre la reaccin, y as evitar que los solutos se concentren, que de otra forma modificara las condiciones ptimas para la enzima polimerizante y la termodinmica de la reaccin. 4. Transiluminador Es un equipo que permite la visualizacin de las bandas de ADN en geles de agarosa y/o poliacrilamida teidos. En su base se encuentra equipado con varios tubos fluorescentes de 312 nm (UV-B) y un amplio filtro UV que permite la visualizacin de los fragmentos de ADN. En la parte superior se encuentra un elemento que permite la proteccin del operario. Se recomienda utilizar este tipo de equipos en condiciones de oscuridad con el fin de eliminar interferencias y aumentar el contraste. 5. Cmara de electroforesis Estos son unas cmaras que contienen un circuito elctrico expuesto a un lquido electroltico, llamado amortiguador (buffer). El aparato se usa para separar mezclas de molculas grandes de acuerdo a su carga y/o su tamao. La tcnica consiste en inocular la muestra en un medio semislido, la fase estacionaria, que se somete a un campo elctrico, en una cmara donde en un extremo se encuentra un filamento que acta como polo positivo, y en el extremo opuesto hay otro filamento formando el polo negativo. Las molculas con cargas netas positivas se movern hacia el polo negativo y las de carga negativa se irn hacia el polo positivo. Luego de la muestra ser tratada apropiadamente dependiendo del tipo de electroforesis, las molculas que viajen hacia uno de los polos se separarn por tamao, viajando ms en la fase estacionaria las molculas ms pequeas. El tipo y concentracin de la fase estacionaria depender del tipo de molculas que interesa separar. 6. Cabina de flujo laminar

Estas cabinas han sido diseadas especialmente para trabajar en reas estriles. En trminos generales se pueden clasificar en dos tipos: Las tipo I son aquellas en las que es necesario asegurar la ausencia de contaminacin del producto o muestra durante la manipulacin del mismo, pero no es necesaria la proteccin del operador y del medio ambiente. Por otro lado las cabinas tipo II son aquellas en las que es necesario asegurar tanto la ausencia de contaminacin del producto durante la manipulacin del mismo, como la proteccin bsica del operador y del medio ambiente. 7. Vortex Es un equipo que permite hacer agitacin orbital de cualquier tipo de tubo, a travs de movimientos continuos, circulares y vibratorios. Su frecuencia de agitacin responde a un rango entre los 0 y 3000 rpm. Tiene un interruptor que permite modificar el funcionamiento del equipo (continuo o activado mediante contacto). En la parte superior del equipo se encuentra una pieza de goma que agita los tubos, con un orificio central que permite encajarlos sin necesidad de sostenerlos con mucha fuerza. 8. Cmara de extraccin Han sido diseadas especialmente para trabajar con soluciones particularmente voltiles. Generalmente, cuentan con una base de aluminio lo que facilita el trabajo con sustancias abrasivas o corrosivas. Es indispensable conocer la toxicicidad de las sustancias a utilizar en cada protocolo con el fin de garantizar la proteccin del operador. MANEJO Es diferente para cada uno de los equipos. Sin embargo como precaucin general es importante siempre utilizar los equipos siguiendo las recomendaciones del fabricante, con el fin de realizar un uso adecuado del mismo y prolongar de esta manera su vida til. MATERIALES QUE DEBEN TRAER AL LABORATORIO Guantes de nitrilo o ltex. Durante la sesin de laboratorio, cada estudiante ser seleccionado para que presente a los dems compaeros un determinado equipo de laboratorio. La distribucin ser al azar por lo cual todos los estudiantes deben preparar la informacin de todos los equipos de laboratorio. CAROLINA CAMARGO BURITIC.