4.

1 FACULTAD DE AGRONOMIA UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PAMPA QUMICA III TRABAJO PRACTICO N 4 METODOS SEPARATIVOS La investigacin de uno o varios componentes de una muestra puede hacerse, en algunos casos, en presencia de los dems constituyentes de ella pero lo ms frecuente es la necesidad de realizar separaciones previas de los mismos. Los mtodos separativos ms comunes son los siguientes: Cromatografa. Extraccin con solvente. Precipitacin. Destilacin. Volatilizacin. Otros mtodos fsicos. Es muy importante que el mtodo separativo que se utilice sea eficaz, ya que de una buena separacin depende el resultado analtico, tanto cualitativo como cuantitativo, sea correcto. En este T.P. se har la aplicacin del 1 y 2 mtodo. CROMATOGRAFA: La cromatografa es la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases: una mvil y una fija o estacionaria. Por lo tanto hay dos fases, una de esas fases constituye una fase estacionaria, de gran superficie, la otra es un fluido (gas o lquido) que fluye a travs o a lo largo de la fase estacionaria, es la fase mvil o eluyente. La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido y la fase mvil un lquido o un gas. Teniendo en cuenta el estado fsico de las fases estacionarias y mvil pueden clasificarse los procesos cromatogrficos en: lquido-slido; gas-slido; lquido-lquido; gas-lquido, siendo el primer nombre el correspondiente al estado fsico de la fase mvil. Los procesos cromatogrficos tambin pueden clasificarse en base al mecanismo por el cual se distribuyen los componentes de la muestra en ensayo entre las dos fases. Teniendo en cuenta esto hay tres clases mayores de separacin cromatogrfica. Cromatografa de adsorcin: consiste en la deposicin y retensin selectiva y reversible de sustancias sobre la superficie de slidos finamente divididos por efecto de fuerzas fisicoqumicos (Van der Waals, electrostticas, puente hidrgeno entre soluto y adsorbente). Un solvente adecuado, llamado eluyente o fase mvil separa las sustancias retenidas por el adsorbente. Cromatografa de particin o de reparto: es semejante a la de adsorcin salvo que en este caso el soporte est recubierto con un lquido inmiscible en la fase lquida (eluyente) que debe pasar a travs del soporte. El soporte sirve meramente como sostn de la fase lquida no mvil, estacionaria. Los solutos a separar se reparten o distribuyen entre las fases lquidas (estacionaria y eluyente), en lugar de adsorberse sobre el slido como en cromatografa de adsorcin. Cromatografa por intercambio inico: en ella hay intercambio de iones entre la fase estacionaria slida y la fase mvil. Lo dicho anteriormente se puede resumir en el siguiente cuadro:

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4.2

FASE MOVIL Liquida

Gaseosa

FASE ESTACIONARIA Slida Lquida - Cromatografa por - Cromatografa de intercambio inico. particin con - Cromatografa en columna silicagel. capa delgada. - Cromatografa sobre papel. - Cromatografa gas- Cromatografa gasslido. lquido.

En todas las tcnicas cromatogrficas los solutos a ser separados migran a lo largo de una columna o atraviesan una delgada capa de material inerte y la base de su separacin es la diferente velocidad de migracin para los diferentes solutos. La velocidad de migracin de un soluto es el resultado de la accin de dos factores: uno de adsorcin sobre la superficie del material de la columna esto retarda el movimiento, el otro la disolucin de componente de la muestra en la fase mvil, que tiende a moverlos juntos con stas. Una ligera diferencia entre dos solutos en la intensidad de su adsorcin y en la interaccin con el solvente mvil es la base de su separacin. Una vez separada cromatogrficamente la muestra en sus componente, cada uno puede ser identificado y tambin puede hacerse su determinacin, de manera que la cromatografa es de importancia analtica cualitativa y cuantitativa. Tiene aplicacin para sustancias inorgnicas, orgnicas y biolgicas. Adsorbente de uso en cromatografa La sustancia que se usa como adsorbente no debe entrar en reaccin con la solucin a separar ni con el disolvente, fuera de la interaccin de los mecanismos de adsorcin. En particular el adsorbente ha de ser extremadamente insoluble y qumicamente inerte. Los adsorbentes ms comunes son: celulosa, almidn, carbonato de calcio, dixido de silicio hidratado, (slica gel), xido de aluminio, etc. Estas sustancias difieren considerablemente unas de otras en cuanto a sus propiedades de adsorcin y a su reactividad qumica y ninguna de ellas puede usarse para todas las aplicaciones. Solventes: Los de uso ms comn son los cidos orgnicos, agua, alcoholes, cloroformos, benceno, eter dietlico, etc. Cromatografa de particin sobre papel: El papel, que acta de soporte cromatogrfico, se considera como una urdimbre, al azar, de fibras de celulosa. Los tortuosos capilares intersticiales de la urdimbre se intercomunican y dan origen, tanto a una fuerza impulsora del flujo de una fase mvil como a una resistencia del mismo. La observacin al microscopio de estos papeles permite distinguir zonas amorfas y cristalinas con una orientacin determinada por la fabricacin. El agua y los componentes hidrfilos son absorbidos por las zonas amorfas, constituyendo la fase estacionaria. Sobre el soporte inerte papel, se coloca la solucin cuyos componentes se desean separar, se dice que se siembra la solucin. Luego se hace pasar por el papel la fase mvil o eluyente. Al llegar la fase mvil a la fase estacionaria se produce una particin de los solutos a separar entre las dos fases.

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4.3 La particin es compleja y depende principalmente de las distintas solubilidades de las sustancias en los solventes empleados. Est dada por el coeficiente de particin o factor de desplazamiento. Este se define como la relacin entre la velocidad de desplazamiento del soluto y la del disolvente (fase mvil), medidas ambas por el avance del frente. Rf = Velocidad del frente del soluto____ Velocidad del frente del disolvente Los solutos son arrastrados a travs del papel con distintas velocidades, producindose as la separacin o desarrollo; es decir debido a ser diferente su respectiva velocidad de migracin la posicin que tendr cada componente en el papel luego de la accin del eluyente, ser diferente para cada uno de ellos. Puesto que la relacin entre la distancia recorrida en un tiempo es la velocidad, el factor Rf puede ser expresado como las distancias recorridas por el soluto y disolvente en un mismo tiempo. Rf = Distancia recorrida por el soluto___ Distancia recorrida por el solvente

Las distancias o alturas se toman a partir de la lnea de siembra. Si el soluto es ms soluble en la fase mvil se mover rpidamente y tendr un Rf prximo a 1; si es poco soluble, su Rf ser pequeo. Determinados los Rf y habiendo trabajado en idnticas condiciones de temperatura, solvente, tipo de papel y tiempo de desarrollo se pueden identificar los solutos. Cuando el desplazamiento del soluto es muy pequeo respecto al del disolvente y es necesario pasar mucha fase mvil para que se desarrolle el cromatograma, es preferible medir la distancia recorrida por el soluto frente a otra sustancia tomada como referencia. En este caso el factor se denomina Rx. Rx = Distancia recorrida por el frente de la sustancia problema Distancia recorrida por el frente de la sustancia patrn Como la mayora de los solutos son incoloros en solucin, para localizarlos e identificarlos sobre el papel o placa , debe provocarse una reaccin con un reactivo adecuado, es decir debe revelrselos. Para ello se pulveriza, roca o sumerge el papel o placa en un reactivo que reaccione dando un compuesto perceptible. Resumiendo la tcnica a seguir en cromatografa en placa o papel es la siguiente: 1. siembra de la solucin a investigar. 2. secado. 3. desarrollo con un solvente adecuado. 4. secado. 5. revelacin o identificacin con un reactivo adecuado. La mayor dificultad es encontrar el eluyente adecuado para la mezcla de solutos que interesa, de tal manera que produzca un Rf distantes unos de otros lo suficientemente amplios para que puedan ser medidos, es decir que produzca un buen desarrollo. Tcnicas de la cromatografa sobre papel o placa - una sola direccin (ascendente o descendente) - en dos direcciones o bidimensional - Circular o radial.

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4.4

Objetivos:
Adquirir nociones y destrezas respecto a mtodos separativos de aplicacin agronmica. Diferenciar cromatografa de particin de la de adsorcin y clculos de Rf

PARTE EXPERIMENTAL 4.1. Extraccin con solvente: se aplicar a la extraccin de pigmentos vegetales. Reactivos y materiales - Solucin extractiva: 2 partes de ter de petrleo y 1 parte de acetona. - Na2SO4 (s). -Ampollas de decantacin. Mortero Procedimiento: extraccin de los pigmentos. En un mortero se colocan hojas verdes y se extrae con la solucin extractiva, transformndose el conjunto en una papilla, luego de unos minutos se traspasa la suspensin (evitar que la parte ms grosera llegue a la ampolla) a una ampolla de decantacin, se lava con agua destilada, se deja decantar y se desecha la parte acuosa. Se repite la operacin dos veces. Se agrega Na2SO4 y se deja reposar; con ese lquido que queda en la ampolla se realizar la cromatografa. 4.2 Cromatografa en placa- tcnica ascendente. Se aplicar a la separacin de los pigmentos extrados en 4.1. Estos pigmentos corresponden a las xantfilas (derivados de los carotenos), contienen un grupo OH- : licoxanteno, criptoxanteno (en maz amarillo), rubixanteno (calndula), gazaniaxanteno; contienen dos grupos OH : lutena (yema de huevo), zeaxantina (maz) y con tres grupos OH- violaxanteno (pensamiento amarillo, capullo de gusano de seda), flavoxanteno (Ranunculus acer). Reactivos y Materiales: - Placas de gel de slice de 0.25 mm de espesor activadas en estufa a 100-105 C, durante 30 minutos y de 20 x 20 cm. - Solvente: mezclar 20 partes de benceno y 30 partes de acetona. Ej. 95 partes de benceno y 5 partes de acetona, se logra una mejor separacin de clorofila alfa y beta. - Micropipetas. Procedimiento 4.2.1. Siembra y elucin. Se siembra sobre la placa de gel de slice pequeas gotitas del extracto de pigmentos; dejar secar. Introducir la placa en una cuba cromatogrfica, cuidando que la lnea de siembra no quede sumergida en el solvente. Tapar la cuba y cuando el frente del solvente llegue a 2 cm por debajo del borde superior, se extrae la placa y se observa la coloracin de los distintos pigmentos. No requiere revelado.

* ^ / :

Caroteno (amarillo-rojizo) Clorofila alfa (verde-azulada) Clorofila beta (verde) Xantfilas (amarillo) Lnea de siembra.

4.3 Cromatografa sobre papel:

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4.5 Ventajas: es simple, rpida y requiere un pequeo equipo: papel de filtro adecuado (en tiras o discos), micropipetas, vasos, probetas, cubetas, cajas de petri, pulverizadores de reactivos y secadores. Dificultades: La mayor dificultad es encontrar el solvente adecuado para la mezcla de solutos que interesa, de tal manera que produzca un Rf distantes unos de otros lo suficientemente amplios para que puedan ser medidos, es decir que produzca un buen desarrollo. Cromatografa sobre papel ascendente: La fase mvil asciende por capilaridad. Sobre una lnea de lpiz trazada a 3 cm del borde de una tira de papel adecuado para este fin, se siembran varias gotas de la solucin a investigar separadas entre s unos 3 cm. Cuando han secado se introduce el papel, por el borde ms prximo a la siembra, dentro de un recipiente de vidrio en el cual se coloc una pequea cantidad de eluyente. El recipiente debe mantenerse cerrado, de manera que el espacio dentro de l se sature de vapor del mismo. Hay distintas formas de disponer el papel donde se realiz la siembra, puede ser una tira que se suspende en un soporte que pende del tapn del recipiente que contiene el eluyente o bien puede enrollarse formando un cilindro asegurado con broches, clips u otro recurso. Se sumerge la base de la tira o del cilindro en el eluyente, cuidando que el papel no toque las paredes ni la tapa. La siembra debe estar por encima del nivel del solvente en el recipiente. Cuando el frente del solvente que avanza, ha llegado a unos 2 cm del borde superior de la hoja se saca, se seca y luego se revela.

Frente del solvente

Lnea de siembra

Solvente PARTE EXPERIMENTAL:

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4.6

Cromatografa sobre papel- tcnica ascendente. Se aplicar a la separacin de los cationes Ag+, Pb2+, Hg22+,que luego se identificarn. Solvente: 400 mL de cido actico ( 12 moles dm-3) 400 mL de agua destilada 200 mL N- butanol. Revelador: solucin acuosa de K2CrO4. Procedimiento: 1- Siembra y elucin: Se siembra sobre la hoja de papel de filtro Whatman N1 pequeas gotas de solucin de cada catin y sobre otra marca una mezcla de los tres cationes juntos, (colocando una gota de cada catin y volviendo a sembrar). Hacer con l un cilindro, colocar en la parte superior un clip metlico. En una tapa de una caja de petri, se coloca la fase mvil y sumergida en ella el cilindro de papel, cuidando que la lnea de siembra no quede sumergida en el solvente. Tapar el cilindro de papel con un vaso de precipitado. Cuando el frente del disolvente llegue a 2 cm del borde superior del cilindro de papel, se saca, se cuelga y se seca. 2-Revelado o identificacin: Rociar la hoja de papel donde se ha hecho la siembra y elusin de los cationes con solucin de K2CrO4. (revelador). Aparecern distintas manchas correspondientes a los diferentes cationes detallados (en posiciones diferentes respecto de la lnea de siembra). Ag+ + Pb2+ + Hg2 2+ + Ejercitacin 1- Mencione que mtodos separativos son los ms utilizados en qumica analtica. 2.1-Qu es un precipitado? Qu condiciones deben cumplirse para que se forme un precipitado? 2.2- Qu factores inciden en el tamao y forma de las partculas de un precipitado? 2.3- Cmo puede modificarse la sobresaturacin relativa durante la formacin de un precipitado? 2.4- Qu es digestin de un precipitado y por qu es necesario efectuarla? 2.5- Por qu es necesario lavar los precipitados obtenidos con fines cuantitativos? 2.6- Por qu los lquidos de lavado suelen contener un electrolito? Qu requisitos debe reunir este electrolito, si el precipitado se va a determinar cuantitativamente? CrO42------------------- pardo rojizo CrO42- --------------- amarillo. CrO42-------------------anaranjado

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4.7 3- Marque con una cruz la respuesta que usted crea conveniente. Un medio acuoso que contiene partculas cuyo dimetro es menor a 1 m y mayor a 0.001 m corresponde a: 3.1- A una solucin verdadera. 3.2- A un sistema coloidal. 3.3- A una solucin coloidal. 4- Qu caractersticas presentan las partculas coloidales (relacin superficie /volumen, carga, etc.). Efecte el esquema de una partcula coloidal con carga positiva y negativa. Indique las distintas maneras que se puede flocular en coloide. De un ejemplo de cada uno de ellos. 5- Qu es la peptizacin de un precipitado y cmo se evita? 5.1- Cmo se define el poder de floculacin? 5.2- Una solucin acuosa contiene NaNO3 y KSCN. El ion tiocianato (SCN-) se precipita como AgSCN(s) por la adicin de AgNO3. Despus que se ha agregado un exceso de reactivo precipitante. Indicar: La carga en la superficie de las partculas coloidales coaguladas. El origen de la carga. Los iones que predominan en la capa de contraion o secundaria. 6- En la extraccin con solvente (lquido-lquido) plantee un ejemplo, marque el equilibrio correspondiente y defina el coeficiente de distribucin. Qu significa que el coeficiente de distribucin sea grande? Bibliografa: Burriel, Mart, F.; Lucena Conde F.; Arribas Jimeno, S y Hernndez Mndez, J. 1998. Qumica Analtica Cualitativa. Paraninfo. 1050 p.( Cap. 8) Day, R.A. JR y Underwood, A.L. 1989. Qumica Analtica cuantitativa. 5ta. Ed. Prentice Hall 841 p. Domnguez ,X. A.S. 1982. Cromatografa en Papel y en Capa Delgada. Serie Qumica. Monografa 16 .Organizacin Estados Americanos. Gary D Christian. 1990. Qumica Analtica. 2da. Reimpresin. Limusa. 684p. Harris, D. C. 2001. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 ed. Reverte 981 p. Skoog, D.A, West, D.M y Holler, J.F. 1997. Qumica analtica McGraw-Hill. 612p.

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