CARACTERIZAO DE PROTENAS FUNDAMENTO A caracterizao de protenas pode ser feita utilizando reaes de colorao ou precipitao.

As reaes de caracterizao atravs da colorimetria pode ser realizada a partir de grupos aminos (reao com ninidrina) ou a partir das ligaes peptdicas (reao com biureto). A caracterizao de protenas utilizando o mtodo de biureto ocorre devido a interao do cobre com os grupos amidas das ligaes peptdicas, originando um complexo de cor prpura (violeta). O reagente de biureto contem sulfato de cobre que apresenta uma colorao azul. Quando o cobre entra OBJETIVOS Caracterizar a presena de protenas em material biolgico; Demonstrar as reaes de colorao para protenas. em contato com as ligaes peptdicas de peptdeos e protenas ele forma um complexo de colorao violeta. Quanto maior for a quantidade de protenas no meio maior ser a intensidade de cor.

O ... C

C C C ... NH H NH H Cu2+

cor violeta

...

NH H NH H C C C C ... R O R O

VIDRARIA E EQUIPAMENTO REAGENTES TCNICA 1. Enumerar os tubos de ensaio de 1 a 3; 2. Adicionar os reagentes como mostrado na tabela abaixo; Tubos 1 2 3 Questes Clara 1,0mL 1,0mL 2,0mL NaOH ---------3 gotas 3 gotas Reagente de 1,0mL 1,0mL 2,0mL gua 4,0mL 4,0mL 2,0mL Volume final 6,0mL 6,0mL 6,0mL observaes Pipetas de 2 e 5 mL Estantes e tubos de ensaio Clice de 15mL Bquer Pra Reagente de biureto Hidrxido de sdio Clara de ovo gua destilada

1. 2. 3.

Compare o tubo 1 e 2 e explique o que aconteceu? O que voc pode afirmar ao comparar a intensidade de cor dos tubos 2 e 3? A reao de biureto aconteceria se ocorresse a hidrlise das protenas da clara do ovo?

DESNATURAO PROTECA FUNDAMENTO As protenas so as molculas mais diversificadas quanto a forma e funo. Suas unidades fundamentais so os aminocidos. Estes, em nmero de 20, so organizados em seqncias diferentes para formar inmeras protenas. Quando esses aminocidos se organizam em cadeias maiores, so chamadas de protenas. Logo, as protenas so macromolculas formadas por aminocidos que se ligam por ligaes peptdicas. Desnaturao por definio a modificao que ocorre na estrutura nativa( protena no estado normal) de uma protena, alterando assim suas propriedades. A desnaturao envolve alteraes nas estruturas quaternria, terciria e secundria de protenas, sem que haja rompimento de ligaes peptdicas. Existem vrios agentes desnaturantes: calor, cidos, solventes orgnicos, sais de metais pesados etc. As alteraes que se observam em decorrncia da desnaturao podem ser, entre outras, a diminuio da solubilidade e,ou a perda atividade biolgica. A diminuio da solubilidade pode ser explicada pela exposio de radicais hidrofbicos e outros que prejudiquem a interao protena-gua e favorecem a interao protena-protena.

OBJETIVOS Verificar experimentalmente a precipitao de protenas a partir da desnaturao.

VIDRARIA E EQUIPAMENTO REAGENTES Pipetas de 2 e 5 mL Estantes e tubos de ensaio Clice de 15mL Pina de madeira Bquer Pra Clara de ovo cido ticloroactico - TCA Nitrato de Prata - AgNO4 gua destilada

TCNICA 1. Enumerar os tubos de ensaio de 1 a 4; 2. Adicionar os reagentes como mostrado na tabela abaixo; Tubos 1 2 3 4 Questes 1. Em quais tubos ocorreu a precipitao? 2. O que a desnaturao protica? Clara 2,0mL 2,0mL 2,0mL 2,0mL AgNO4 TCA ----2,0mL --------2,0mL ---------------Aquecer No No No Sim observaes

3. Cite duas alteraes provocadas pela desnaturao das protenas?