UPAP.

Universidad Politcnica y Artstica del Paraguay Sede Gral Elizardo Aquino Carrera: Ciencias Ambientales
Materia:CONTAMINACIN TOXICOLOGICA DE ALIMENTOS
A- DEFINICIONES Y CONCEPTOS Toxicidad. La capacidad intrnseca que posee un agente qumico de producir efectos adversos sobre un rgano. Xenobiticos. Sustancias extraas, es decir, extraas al organismo. Lo contrario son los compuestos endgenos. Entre los xenobiticos figuran los frmacos, las sustancias qumicas industriales, los venenos presentes en la naturaleza y los contaminantes del medio ambiente. Peligro. La posibilidad de que la toxicidad sea efectiva en un contexto o situacin determinados. Riesgo. La probabilidad de que se produzca un efecto adverso especfico. Suele expresarse como el porcentaje de casos de una poblacin dada durante un determinado perodo de tiempo. La estimacin del riesgo puede basarse en casos reales o en una proyeccin de casos futuros a partir de extrapolaciones. TOXICOLOGIA :Las expresiones categoras de toxicidad y clasificacin de la toxicidad se utilizan a veces en el mbito de las actividades de regulacin. Las categoras de toxicidad se refieren a una calificacin arbitraria de las dosis o niveles de exposicin que causan efectos txicos. Se habla as de sumamente txico, muy txico, moderadamente txico. B-Origen De La Toxicologa Para poder remontarnos al origen de la toxicologa, tendramos que remontarnos al origen de la biologa, puesto que se supone que desde el momento en que surge la vida, aparece tambin el riesgo de entrar en contacto con agentes nocivos que ponen en peligro el normal funcionamiento del organismo. Remontndonos a la historia de informacin toxicologa podemos nombrar los siguientes hechos: La Historia de la Toxicologa es tan antigua, tanto como la humanidad misma y en la bsqueda de datos antiguos encontramos en el Papiro de Ebers (1.500 a.c.), citas que se pueden relacionar con txicos de origen natural y an referencias ms antiguas se hacen en papiros egipcios que datan de 1.700 a.c, se advierte el uso de Cannabis indicus y de Papaver Somniferum y an se hace referencia a intoxicaciones por el elemento plomo. En la medicina hind sobresale Veda ( 900 a.c.); en la griega Hipcrates (400 a.c.) quienes ya mencionaron varios venenos en sus escritos, y Theofrastus ( 370- 286 a.C.) estudia los venenos vegetales. La historia de la humanidad contempla casos como los de Scrates que utiliza sus conocimientos sobre Cicuta y el de Cleopatra que se vale de la serpiente cobra para poner fin a sus vidas en forma menos tormentosa.

En la Edad Media se abre el primer centro que se tenga conocimiento para atender exclusivamente a pacientes intoxicados, por la clebre epidemia de ergotismo que se presenta al sur de Francia y estar a cargo de la orden religiosa de los hermanos Antonisti. Adems en esta poca la historia del veneno constituye en cierta forma la savia de la vida poltica y cortesana durante largas etapas. La " pcima" fue factor determinante en la eleccin y deceso de algunos gobernantes. Aparecen nombres de mujeres tan famosas como Madame Toffana, Lucrecia Borgia, Catalina de Mdicis, etc. quienes han pasado a la historia de la Toxicologa por su profesin de envenenadoras. En 1493 nace Felipe Aureolo Teofrasto Bombast de Hohemheim, posteriormente llamado Paracelso, como mdico alemn profesor de la Universidad de Basile e importante estudioso de la Toxicologa, expres la famosa sentencia "Todo es veneno y nada es veneno, la dosis sola hace el veneno" una frase que en su intrnseco significado es incontrovertible. La Toxicologa como ciencia aparece en Holanda (1945), con el primer centro de informacin bajo el comando de la Real Sociedad Holandesa para el Progreso de la Farmacia, y como tal, se dedicaba a la informacin de los farmacuticos mediante un fichero. En ese mismo ao en Dinamarca aparece un centro especializado en reanimacin, con especial nfasis en intentos de suicidio y sobredosis de medicamentos. En Inglaterra (1950), el hospital de Leeds abre el primer centro "completo" de informacin y tratamiento. Luego aparecen Boln y Cheinisse (1969), quienes refuerzan la historia de la toxicologa diciendo: " y el toxiclogo de guardia de un centro de informacin, sentado en su despacho entre sus fichas, su biblioteca y sus telfonos, jams olvidaba que era mdico y con mucha frecuencia proceda espontneamente a misiones de urgencia sobre el terreno que se salan de los limites tericos de su comedia". En 1975 se abre en Pars el primer centro francs. En 1953 en EE.UU. la Academia Americana de Pediatra abre en Chicago uno de los primeros centros estadounidenses. Para 1965 ya existan en Estados Unidos cerca de 600 centros en el siglo XXI.

C-Conceptualizacin De La Ciencia Toxicolgica Con frecuencia se utilizan los nombres de txicos y veneno, denominando como veneno a aquellas sustancias que ha sido suministrada con fines lesivos premeditados y dejando el nombre de txico a la sustancia que aunque pueda ocasionar dao no se suministra con esta intencin. Normalmente veneno es concebido como aquello que tiene naturaleza intrnsecamente peligrosa aun en pequeas dosis, tales como el cianuro, el arsnico, plomo, etc... Y txico, a aquello que puede ocasionar dao pero no por la naturaleza misma de la sustancia, ejemplo de ello seria el agua, oxigeno, etc. a. Cualquier elemento que ingerido, inhalado, aplicado, inyectado o absorbido, es capaz por sus propiedades fsicas o qumicas, de provocar alteraciones orgnicas o funcionales y aun la muerte. La palabra txico viene del latn toxicum y del griego toxikn.

"Toxicologa es el estudio cientfico de estos elementos, su comportamiento, su metabolismo, sus mecanismos de accin, las lesiones que ellos ocasionan, su forma de acumulacin, excrecin y el tratamiento adecuado para proteger el organismo afectado".

Podemos clasificar estos elementos en txicos: qumicos y fsicos. Los txicos qumicos pueden ser a su vez txicos de origen mineral, vegetal, animal. Podemos destacar un grupo que aun perteneciendo al mundo de los qumicos, se destaca por su gran numero y profusin y el cual podra independizarse, como es el grupo de los sintticos, creados por el hombre y que inundan cada vez ms todos los ambientes. b. Txico o Veneno c. Cmo Diagnosticar En Toxicologa Clnica El diagnstico de una intoxicacin aguda, al igual que otras patologas, se basa en:

Anamnesia. Sintomatologa clnica. Exploraciones complementarias.

Tratamiento De Las Intoxicaciones Aunque la mayora de intoxicaciones agudas (80%) son de carcter leve, todas precisan de una valoracin inicial rpida para poder indicar el tratamiento adecuado. Frente a una intoxicacin aguda, el mdico en medio pre-hospitalario actuar de acuerdo con el siguiente orden de prioridades:

Medidas de soporte y reanimacin. Disminuir la absorcin. Administracin de antdotos. Incrementar la excrecin. Medidas no especficas.

D-TOXICOCINTICA Toxicocintica es la ciencia que estudia los cambios que ocurren a travs del tiempo en la absorcin, distribucin, metabolismo y expresin de un txico cuando este ingresa a un organismo. Los mecanismos fisiolgicos que rigen la cintica de los txicos y de los frmacos son similares y puede afirmarse que excepto para los metabolismos de procedencia natural (endgenos), deben contemplarse desde el punto de vista cintico-bioqumico; la farmacocintica y la troxicocintica estn unidas en el marco cintico de las sustancias extraas, exgenas (cenobticas), que invaden al organismo. Son dos caras de una misma moneda, siendo difcil a veces establecer una demarcacin clara entre ambas, ya que cualquier frmaco puede comportarse como un agente txico. Sin embargo, en la cintica de los frmacos se busca una misin benficas al obtener de alguna manera el bienestar; en el caso de los txicos por el contrario el resultado es el deterioro de la salud o de algunas funciones especficas y en muchos casos la muerte. En el estudio cintico se supone el organismo como un sistema de compartimentos, separado por membranas biolgicas interconectadas entre si a travs de la sangre circulante, por medio del cual el txico puede llegar al lugar selectivo donde se va a ejercer su accin, de tal manera que los cambios templares ene la concentracin sangunea o plasmtica permiten inferir las variaciones correspondientes en los tejidos y en los medios de excrecin. El transporte del txico en los organismos se realiza por intermedio de un conjunto de procesos fisicoqumicos, que son comunes a la absorcin, distribucin y excrecin, su transferencia de un lugar a otro depender de un constante (K), cuya magnitud determinar la velocidad de la transferencia, as como la direccin en la que se realiza. Al igual que en la farmacocintica, uno de los objetivos en la aplicacin del conocimiento toxicocintico es el relacionar los datos cinticos con los efectos producidos por el txico que sea til para el diagnstico y pronstico de una intoxicacin que permita comparar, extrapolar, predecir su comportamiento en otro organismo.

Por lo tanto el modificar en alguna manera los eventos de la Toxicocintica reside la base de todo tratamiento en toxicologa.

ETAPAS DE LA ACCIN TXICA La interaccin de un toxico con el organismo comienza con la fase de exposicin. Decimos que el individuo esta expuesto cuando el toxico se encuentra en la vecindad inmediata de las vas de ingreso al medio interno del organismo. Estas vas son: las respiratorias (inhalacin), la tegumentaria (piel y mucosas) y la va gastrointestinal; pero solamente habr un efecto biolgico y toxico cuando haya absorcin de la sustancia, exceptuando el caso de exposicin a sustancias radiactivas; la cintica de un toxico que ingresa al organismo se inicia con los procesos que regulan su absorcin y terminan con aqullos que permiten extraerlo inalterado o en forma de metabolismo, ya sean inactivos (no txicos) o activos (que muchas veces pueden resultar ms txicos que el compuesto original). Si se toma en cuenta que la toxicocintica es el curso que toda sustancia toxicolgicamente activa recorre en el organismo, se entender que esta debe constar de etapas. Las principales etapas que comprende son las siguientes: a. b. c. d. Absorcin. Distribucin. Biotransformacin. Eliminacin o Excrecin.

Algunos autores agregan la interaccin con otros frmacos, la excrecin por leche materna y los efectos sobre el embarazo. Entre los factores que influyen en los efectos de un txico est la concentracin de sustancia activa en el receptor. Este, con frecuencia tiene una localizacin anatmica distinta del compartimiento central, donde se toma la muestra para anlisis. De este modo se explica que no exista siempre una correlacin entre el efecto y la concentracin sangunea del txico, no obstante, el modelo de dos compartimientos permite predecir los cambios en la concentracin en sangre o plasma de la mayora de los txicos con eliminacin predominante por va renal. El compartimiento central est representado por la sangre y los rganos de elevada perfusin (corazn, cerebro, rin). A su vez, el compartimiento perifrico est constituido por tejidos de almacenamiento y rganos pobremente prefundidos. Par fines del clculo, los txicos y frmacos son eliminados y absorbidos solamente en el compartimiento central. En la prctica, los niveles en sangre de un txico, Selene considerarse as;

Concentracin Teraputica: Nivel en la sangre, despus de administrar la dosis efectiva en los humanos. Concentracin Txica: Nivel asociado con manifestaciones nocivas en humanos. Concentracin Letal: Nivel en que un txico causa la muerte de una persona. a. Absorcin

La absorcin es el ingreso de una sustancia a la circulacin atravesando las membranas biolgicas. Para ello el producto ha de pasar las diferentes barreras (cutneas, gastrointestinales, alveolares y vasculares) por diferentes vas. Toda absorcin biolgica de una sustancia requiere de un paso a travs de una membrana.

Desde el punto de vista clnico, las vas de absorcin de los txicos, o sea de su ingreso en el organismo, son las siguientes:

i.

ii. iii. iv. v. vi.

vii.

viii. ix.

x.

Va Digestiva: Constituye la ms importante va de acceso de txicos. Par llegar a la ven porta y al sistema linftico, el txico debe atravesar la membrana epitelial y la membrana basal de los capilares. Este pasaje puede llevarse a cabo por: Absorcin Pasiva: Cuando la molcula est ionizada, su absorcin depende del PH y cuando no, depende de la liposolubilidad. Absorcin Convectiva: Depende de la diferencia de la depresin hidrosttica en la concentracin en el intestino y la concentracin en plasma. Transporte Activo Y Facilitado: La molcula se une a un transportador que suele ser proteico, para ser liberado una vez que atraviese la membrana. Absorcin Por Par Inico: Consiste en la unin de cationes y uniones orgnicos. Este par es liposoluble. Pinocitosis: Consiste en la formacin de una membrana celular por la vescula. La vescula engloba la molcula para liberarla una vez que la transporta al lado opuesto de la clula. Va Respiratoria: Constituye la va de acceso de venenos gaseosos (vapores de cido cianhdrico, monxido de carbono, etc...) slidos finamente divididos y lquidos atomizados. Los txicos llegan a la circulacin sangunea por simple difusin en el alvolo pulmonar. Va Cutnea: A travs de la piel sana pueden penetrar sustancias custicas, tinturas y solventes de la grasa de la piel. Un ejemplo son los insecticidas rganofosforados. Va Parenteral: Con sus variedades; subcutnea, intramuscular y endovenosa. Es el caso de las flechas envenenadas, picaduras y mordeduras de animales ponzoosos. Modernamente la ms comn es la administracin de txicos de frmaco dependencia, como la herona y la cocana. Va Mucosa: Comprende la conjuntiva de los prpados (Atropina), la mucosa nasal (inhalacin de cocana), sublingual (cianuros) y rectal (cidos sulfhdricos).

b. Distribucin y Acumulacin El txico absorbido pasa al compartimiento central (sangre) y al compartimiento perifrico (tejidos de depsito). Este proceso de redistribucin constituye un mecanismo de defensa porque permite al organismo degradar lentamente un txico. Los factores que intervienen en la distribucin y fijacin del txico son; el coeficiente de liposolubilidad o de hidrosolubilidad, la unin a protenas, la reaccin qumica y el grado de ionizacin. Despus de la absorcin viene la distribucin, proceso tambin influenciado por varios factores como las propiedades fisicoqumicas del toxico, el coeficiente de lipohidrosolubilidad, el grado de iotizacin, la unin a las molculas o protenas las reacciones qumicas y tambin por el flujo de sangre a los diversos rganos. Independientemente de la va de entrada, el sistema circulatorio desempea un papel importante puesto que desde el pueden las sustancias iniciar procesos txicos y de distribucin a diferentes rganos y sistemas, para luego ser enviados al exterior o a sitios de depsitos en los cuales pueden ser puestos nuevamente en circulacin mediante determinadas circunstancias. Como el gasto cardiaco es aproximadamente de 5 a 6 litros/minutos, resulta que en un minuto la sangre ha recorrido el sistema completo, al menos una vez. Y os txicos no suelen estar en la sangre disueltos en el plasma, sino que se unen a las protenas plasmticas en forma reversible o irreversible, dependiendo de la intensidad de fijacin del tipo de enlace fisicoqumico, el cual en orden decreciente de intensidad, puede ser covalente: se comparten electrones entre dos tomos, inico: se forma entre iones de carga opuesta, puente de hidrogeno: se enlaza al oxigeno o al nitrgeno, fuerzas de Van Der Waals: cuando dos tomos se aproximan mucho son ms dbiles.

Las caractersticas fsicas del txico y el sitio especfico de unin dan a esta fijacin el carcter de una reaccin y enlace qumico, as podramos establecer los siguientes grupos:

cidos y bases. Reaccin covalentes. Alkilantes. Radicales libres. b. Metabolismo o Biotransformacin De Los Txicos

La biotransformacin tiene por objeto eliminar al txico o convertirlos en sustancias menos dainas para el organismo. Comprende dos fases: Fase I: De oxidacin, reduccin e hidrlisis. Fase II: De conjugacin. Los sistemas de biotransformacin ms importantes se encuentran en las clulas del hgado y los de menor importancia en el rin, pulmn, intestino y cerebro. Algunos txicos son eliminados sin sufrir ningn tipo de alteracin: pero la mayora son eliminados sufriendo un proceso de transformacin para lo cual se lleva a cabo una serie de pasos metablicos que tiene como principal objetivo introducir una serie de alteraciones bioqumicas en la molcula que la transforme de liposoluble en hidrosoluble, el cambio en sustancias ms polares, ionizable, que no sean reabsorbidas por el tbulo renal y sean fcilmente excretadas por la orina. Si no se produjeran estas transformaciones los compuestos apolares liposolubles no sean filtrados o sern reabsorbidos por los tbulos renales y slo podran excretarse junto con la bilis en las heces y en menor proporcin en la leche, sudor y saliva. Los txicos siguen diferentes caminos los cuales pueden ser: 1. Eliminados sin sufrir alteracin alguna. 2. Puede experimentar transformaciones que hagan ms fcil su eliminacin. 3. Puede experimentar transformaciones estructurales que aumenten o disminuyan su toxicidad. b. Eliminacin Finalmente los txicos o sus metabolitos son excretados. Las principales vas de eliminacin son las siguientes: i. Pulmn: Por esta va el organismo elimina principalmente los anestsicos voltiles o gases txicos, como el monxido de carbono, cianuros, sulfuro de hidrgeno y de modo parcial el paraldehdo. Bilis: Las sustancias hidrosolubles pasan a la bilis por excrecin activa. Para las sustancias no polares (no solubles en agua) existe una circulacin entero-heptica, por la cual los txicos son excretados en la bilis y absorbido en el intestino delgado (caso de la digosina y espirolanactona). Rin: Constituye la principal va de eliminacin de txicos o de sus metabolitos. Requieren que sean sustancias solubles en agua.

ii.

iii.

Factores que modifican la toxicidad La intensidad de toda reaccin qumico-biolgica, y por tanto txica depende de: 1. la capacidad del producto de atravesar las barreras biolgicas y llegar a su lugar de accin 2. la dosis de producto activo que se encuentra en el sitio de accin.

3. las condiciones de este sitio de accin (receptor, enzima, transportador) Estas circunstancias son funcin de: 1. factores que dependen del medio ambiente 2. factores endgenos propios del individuo 3. induccin o antagonismo por otros productos 1- Factores que dependen del medio ambiente SOCIOLGICOS tnicos Hbitos Costumbres Alimentacin Religin Trabajo AMBIENTALES Geogrficos Contaminacin Altitud Calidad del agua Temperatura

NOCIONES BSICAS DE TOXICOLOGA INTRODUCCION La generacin de efectos biolgicos beneficiosos o perjudiciales es el resultado de la interaccin de un xenobitico con el organismo. Paracelsus (1843-1541), fue el primero que utiliz el concepto de dosis con un sentido cuantitativo y estableci uno de los ms importantes pensamientos toxicolgicos de todos los tiempos: "dosis sola facit venenum", cuya traduccin se hizo famosa y constituye an una realidad en nuestros das: "solamente la dosis determina que sea o no veneno". Este pensamiento lamentablemente olvidado con frecuencia, hace que la posibilidad de que una sustancia pueda generar un cuadro de intoxicacin en dependencia de su dosis, est latente en todo momento y de que una sustancia hasta el momento considerada inocua pueda convertirse en txica en dependencia de su dosis, el ejemplo ms clsico citado es el agua, cabe mencionar las consecuencias txicas de una sobrehidratacin en los nios.

Puede decirse que cada poca histrica ha tenido su txico y que si bien en la antigedad los venenos principales eran de origen natural, en la actualidad se ha sumado a ellos un gran nmero de sustancias sintticas y varios factores han contribuido a que el desarrollo de la toxicologa sea paralelo a estos cambios. Entre los factores condicionantes del avance de la toxicologa como especialidad podemos mencionar: el incremento en el nmero y variedad de sustancias qumicas, las cantidades excesivas de algunos productos, la mayor importancia a otros tipos de cuadros de intoxicacin (la crnica), el incremento de la poblacin expuesta y el deficiente conocimiento de los efectos (sobre todo a largo plazo) que pueden producir las sustancias qumicas, tanto en el humano como en el ambiente. La toxicologa es una ciencia multidisciplinaria y de acuerdo al objeto de estudio ha desarrollado diferentes ramas como son la ambiental, clnica, analtica, ecotoxicologa, de los alimentos, etc.

TOXICIDAD DE LOS AGENTES QUMICOS La toxicidad es la capacidad inherente a un agente qumico de producir un efecto nocivo sobre los organismos vivos. Para que la toxicidad se manifieste se requiere la interrelacin de tres elementos: un agente qumico capaz de producir un efecto, un sistema biolgico con el cual el agente pueda interactuar para producir el efecto, un medio a travs del cual el agente y el sistema biolgico puedan entrar en contacto e interactuar. Para referirse a la toxicidad de las sustanciaPara referirse a la toxicidad de las sustancias es clsico utilizar las dosis precisas para producir la muerte tras una sola exposicin, es decir para originar una intoxicacin aguda letal. Esta dosis letal (DL) se calcula por experimentacin con suficiente nmero de animales para obtener valores de significacin estadstica; as se calculan la DL mnima, que mata a un solo individuo, la DL-50 o dosis necesaria para matar el 50% de los animales de experimentacin, la DL 100, etc. Sin embargo, se ha visto que este parmetro es insuficiente para calificar la toxicidad de las sustancias, pues existen muchos factores que pueden modificarla y es de vital importancia el conocimiento de los mismos por varias razones: Los episodios de intoxicaciones no siempre siguen la va tradicional descrita en los libros de textos. Los signos y sntomas que a menudo se dicen ser patognomnicos (caractersticos) para un episodio txico particular pueden o no ser evidentes para cada caso de intoxicacin. Los pacientes pueden a menudo presentar comportamientos totalmente inesperados. Una DL-50 determinada experimentalmente no es una descripcin absoluta de la toxicidad del compuesto en todos los individuos; evala la capacidad inherente del compuesto de producir un dao pero no refleja la habilidad de la vctima para responder de una manera u otra a la predecida.

FACTORES QUE MODIFICAN LA TOXICIDAD Los factores que modifican la toxicidad de un producto pueden esquematizarse de la siguiente forma: Factores que dependen del txico: Composicin del agente qumico, propiedades fsicoqumicas, dosis y concentracin, rutas de administracin, metabolismo del agente txico. Factores que dependen del individuo: Estado de salud, edad y madurez, estado nutricional y factores dietticos, sexo, gentica. Factores que dependen del medio ambiente: Temperatura, presin atmosfrica, actividad lumnica, ocupacin. Cada uno de estos factores puede modificar en gran medida la toxicidad del compuesto y por tanto el efecto que produce. Para ejemplificas es clsico utilizar las dosis precisas para producir la muerte tras una Cada uno de estos factores puede modificar en gran medida la toxicidad del compuesto y por tanto el efecto que produce. Para ejemplificar utilizaremos algunos de ellos: COMPOSICIN DEL AGENTE QUMICO Cuando examinamos un episodio txico, es un error bsico ver al agente responsable como una sustancia "pura". Esto implica que no hay contaminantes presentes, que el vehculo, los coadyuvantes y excipientes y los ingredientes de la formulacin son inocuos; la vctima no ha tomado ninguna droga previamente; y no hay transformaciones en la sustancia o producto. Estos criterios son raramente observados en el "mundo real" de las intoxicaciones. La posibilidad de que la exposicin txica puede ser el resultado de uno o ms agentes txicos es importante. Un ejemplo excelente es la exposicin txica que resulta: de la presencia de la impureza txica, dioxina, en el herbicida 2,4,5-cido triclorofenoxiactico (2,4,5-T). de la presencia de derivados del petrleo como diluyentes en las mezclas de plaguicidas. de la adicin de organofosforados o carbamatos en los compuestos piretroides, lo cual aumenta su toxicidad.

VAS DE ADMINISTRACIN La va a travs de la cual una sustancia potencialmente txica entra al organismo puede influenciar el comienzo, intensidad y duracin del efecto txico. La ruta de administracin puede tambin predecir el grado de toxicidad y los posibles sistemas orgnicos que se vern afectados. Cuando una sustancia txica es inyectada por va intravenosa debe esperarse un comienzo ms rpido del efecto txico y un mayor potencial de exposicin de mltiples rganos.

Cuando es administrada por otras rutas la toxicidad se manifiesta en orden decreciente de la siguiente forma: intravenosa>inhalacin>intraperitoneal>subcutnea>intramuscular>intradrmica>oral>tpi ca TEMPERATURA AMBIENTAL Afecta la toxicidad de las sustancias al influenciar en la velocidad de las reacciones qumicas que son termodependientes y al modificar la vasodilatacin superficial (para favorecer o reducir las prdidas de calor) con lo cual altera el volumen de sangre circulante y, en consecuencia, la cantidad de txico que llega a los receptores. La temperatura puede afectar la absorcin, la distribucin y la accin, un ejemplo de esto es el aumento de la absorcin a travs de la piel y del efecto de plaguicidas como el paratin, cuando son utilizados en momentos del da en que la temperatura est muy alta, es por esto que se recomienda su utilizacin en horas tempranas de la maana.

FACTORES GENTICOS Cada individuo tiene un sistema diferente de respuesta, que influye en su capacidad para funcionar en condiciones normales, o cuando es amenazado por la exposicin a un txico. Esto es obvio cuando se piensa en la resistencia a las enfermedades. Las alteraciones bioqumicas congnitas por carencia de determinadas enzimas, o por poseer algunos individuos formas atpicas de ciertas enzimas, incapaces de actuar en el ciclo metablico en el que estn implicadas, son causa de una mayor susceptibilidad a la accin y riesgo de los txicos.

TOXICOLOGIA AMBIENTAL

concentracin en la superficie interior de la membrana, as que a mayor flujo de sangre en el sitio, se incrementa el gradiente de concentraciones y se reduce la resistencia al transporte por lo que, ser mayor la velocidad de absorcin. En las superficies del organismo cuya funcin principal es la absorcin, normalmente se presentan una o mas de las siguientes condiciones:

alta irrigacin sangunea, tiempos de residencia prolongados superficies expandidas, ejemplo las vellosidades del intestino, pelculas muy delgadas, ejemplo los alvolos pulmonares se pueden presentar combinaciones de estas caractersticas, como en el caso de intestino delgado donde se tiene la superficie expandida y el tiempo de residencia largo.

Los epitelios de absorcin son al mismo tiempo las superficies de contacto del organismo con el ambiente y por lo tanto forman parte de las principales vas de exposicin. Ya se mencion antes que las vas de exposicin a los txicos ambientales son la ingestin, la inhalacin y la exposicin cutnea. Una misma dosis qumica pueden producir diferentes efectos, dependiendo de la va por la cual ingresa. La ingestin es la va de exposicin ms comn, sin embargo la inhalacin y la absorcin cutnea forman parte importante de varias rutas de exposicin en el ambiente de trabajo. La exposicin cutnea es importante, cuando los txicos se encuentran en cuerpos de agua que se pueden usar para recreacin (natacin y deportes acuticos). A continuacin se presentarn los mecanismos de absorcin y los lugares dnde sta sucede para cada una de las vas de ingreso de importancia ambiental.

3. Ingestin Cuando el txico se ingiere, entra al Tracto Gastro Intestinal (TGI), la mayor cantidad se absorbe en el estmago y en los intestinos aunque tambin puede haber absorcin en cualquier lugar del TGI, incluyendo las absorciones sublingual y rectal. El sitio de absorcin depende en parte del estado de ionizacin del compuesto. Los cidos dbiles es ms probable que se absorban en el estmago, donde hay un pH bajo, mientras que las bases dbiles, que estn menos ionizadas a pH alto, se absorben mejor en el intestino donde existen estas condiciones. La gran rea de absorcin del intestino y los largos tiempos de residencia, dependiendo de la movilidad intestinal, permiten que se tengan absorciones considerables aunque el flux, cantidad transportada por unidad de rea y de tiempo, sea pequeo. La absorcin de los xenobiticos usa los mismos mecanismos que tiene el TGI para absorber los nutrimentos. Por ejemplo, el plomo se absorbe en el intestino usando el sistema de transporte del calcio. Para que un compuesto ingerido pueda alcanzar la circulacin general, accesar el resto del organismo y tener la posibilidad de causar un dao, debe primero ser capaz de resistir:

la accin de las enzimas digestivas, el pH del estmago, la biodegradacin por la flora intestinal. la biotransformacin por las enzimas hepticas.

La absortividad del txico ingerido depende de sus propiedades fsicoqumicas. Los compuestos liposolubles de bajo peso molecular y los compuestos no ionizados se absorben mejor.

3.1. Inhalacin La inhalacin es la va de exposicin a gases, vapores de lquidos voltiles, aerosoles y partculas suspendidas en el aire. Los sitios de absorcin son la nariz y los pulmones. La nariz acta como un limpiador o trampa para los gases solubles en agua y los muy reactivos as como, para retener las partculas grandes. La absorcin de gases y vapores que llegan al pulmn usa el mismo mecanismo que existe para el intercambio de oxgeno y bixido de carbono. La velocidad de difusin de los gases en el pulmn es muy grande, debido a que la distancia de difusin es muy pequea, el flujo sanguneo es muy alto y el rea de transferencia es muy grande. Lo anterior produce que la velocidad de absorcin en el pulmn sea alta, independientemente de la naturaleza qumica del agente. Las substancias ionizadas, que son las de ms lenta absorcin, normalmente no son voltiles, por lo que es poco probable que se encuentren en el aire como vapores o gases, aunque desde luego pueden llegar hasta los alvolos si estn absorbidas en las partculas pequeas de polvo. La concentracin de txico que se puede alcanzar en la sangre depende de los coeficientes de particin de la substancia, primero el coeficiente aire/sangre cuando se absorbe y despus, el coeficiente sangre/tejido cuando se distribuye. El coeficiente de particin es la relacin de concentraciones de equilibrio de un soluto a ambos lados de una interface. Las molculas de los gases se absorben en el espacio alveolar de los pulmones, disolvindose en la sangre, hasta que las concentraciones del gas en ambas fases llegan al equilibrio. La solubilidad de gases en la sangre depende fundamentalmente de su solubilidad en agua y de la presin parcial del gas en el aire inhalado. Si se incrementa la concentracin de un gas en el aire, se incrementar su velocidad de difusin en los pulmones, hasta alcanzar la nueva concentracin de equilibrio en la sangre. La sangre distribuye los txicos a todo el organismo. El flujo sanguneo es el factor limitante en la absorcin de los gases con bajo coeficiente de particin. En el caso de los gases con coeficiente de particin alto, el factor limitante en la absorcin es la concentracin del gas en el aire que llega a los pulmones. Las partculas pueden quedar atrapadas en distintos lugares del tracto respiratorio y no llegar al espacio alveolar, con lo cual se disminuye la entrada del txico al organismo. La absorcin de aerosoles y de partculas, depende de su tamao y de la solubilidad acuosa de la sustancia qumica presente en el aerosol o partcula.

Las partculas solubles se pueden disolver en el moco nasal y transportadas a la faringe o bien, pueden ser absorbidas a travs del epitelio nasal hacia la sangre. La regin del aparato respiratorio en el que se depositan las partculas y aerosoles depende de su tamao. Las partculas de 5 m o ms grandes se depositan en la regin nasofarngea, que es la regin ms alta. Las partculas de 1 a 5 m son depositadas en la regin traqueobronquiolar del pulmn, que es la regin intermedia, de aqu pueden ser eliminadas por el moco mediante un movimiento tipo elevador hacia arriba, a las regiones ciliadas de donde se podran eliminar por medio de estornudos o tos, y pueden pasar al TGI. Las partculas de 1 m y ms pequeas penetran a las sacos alveolares de los pulmones. Estas pueden ser absorbidas a la sangre o bien, pueden ser eliminadas a travs del sistema linftico o por medio de macrfagos alveolares. Las partculas inhaladas por la boca son deglutidas y entran al TGI. La inhalacin es la ruta de exposicin para la causa ms frecuente de muerte por envenenamiento, que es la intoxicacin con monxido de carbono y para una de las enfermedades profesionales ms importantes: la silicosis.

3.2 Absorcin cutnea La piel, a diferencia del epitelio del intestino y de los alvolos pulmonares, no est diseada para la absorcin de substancias tiles al organismo. La permeabilidad a travs de la piel es muy baja debido a que est formada, como ya se vio anteriormente, por varias capas, algunas de ellas muy gruesas, y con muy escasa irrigacin sangunea. Para que una substancia se absorba por la piel debe difundirse a travs del estrato crneo y las dems capas de la epidermis, antes de contactar los vasos capilares sanguneos y linfticos de la dermis y pasar al torrente sanguneo. El transporte a travs de la piel es por difusin simple ya que este rgano no cuenta con mecanismos de transporte activo. Por este estrato crneo slo pueden pasar los lpidos. La absorcin en los folculos y en las glndulas se considera despreciable. La velocidad de absorcin depende de varios factores entre los que se incluyen

la concentracin del txico la magnitud y localizacin en el cuerpo del rea expuesta la condicin de la piel. La hidratacin, quemaduras y ciertas enfermedades incrementan la permeabilidad la velocidad de flujo sanguneo temperatura y humedad ambiental la interaccin con otras substancias que puedan modificar la permeabilidad de la piel.

3.3 Distribucin Se entiende por distribucin de un txico su localizacin y concentracin en los diferentes tejidos. La distribucin no es la accin de transportar el txico. Por ejemplo, cuando se dice que un compuesto se distribuye en los rganos A, B y C, no se refiere a como el compuesto se desplaz desde la superficie de absorcin hasta los rganos A, B y C, sino al hecho de que el txico aparece en esos rganos con una concentracin a, b y c respectivamente.

Una vez que el txico ha llegado al torrente sanguneo, se puede transportar a distintos destinos:

sus sitios de accin uno o varios almacenes de depsito. Los almacenes de depsitos son los sitios donde se puede acumular el compuesto y que no es su sitio de accin. Ejemplos de almacenes de depsito son el hgado, los riones, el tejido adiposo y el tejido seo diversos rganos para su biotransformacin

La distribucin depende de:

del flujo sanguneo, la velocidad de difusin en las interfaces sangre-tejido, la cual depende del coeficiente de particin, la permeabilidad de la membrana y de la afinidad del tejido por el compuesto.

En el camino hacia el sitio de accin, el compuesto puede ser:

captado por las protenas plasmticas transportado hacia determinadas clulas ver restringido su paso por membranas selectivas ser lo suficientemente liposoluble como para ser almacenado en el tejido graso

3.4 Transporte a tejidos especiales El hgado y los riones cuentan con mecanismos de transporte activo, por lo que pueden captar muy diversas substancias para almacenarlas, biotransformarlas y/o excretarlas. 3.5 Transporte a tejido graso Los lpidos pasan fcilmente las membranas y se almacenan por disolucin simple en las grasas neutras, pudiendo dar lugar a grandes acumulaciones, ya que las grasas representan entre el 20 y el 50% de la masa corporal. Esta forma de acumulacin puede parecer benigna, sin embargo el compuesto depositado est siempre en equilibrio con su forma libre en la sangre, haciendo que se incremente la permanencia del compuesto en este fluido. Tambin existe el peligro de que se produzca un elevacin sbita de la concentracin de la substancia en la sangre cuando se tiene una rpida movilizacin de grasa por inanicin, o por esfuerzos extenuantes y prolongados, etc. 3.6 Excrecin La concentracin de un txico distribuido se puede disminuir por excrecin. Todas las secreciones corporales pueden excretar compuestos qumicos, pero las tres principales vas son la orina, las heces y el aire exhalado. La excrecin de xenobiticos utiliza los mismos mecanismos que tiene el organismo para excretar los desechos metablicos endgenos. 3.6.1 Orina Los riones son los rganos ms importantes en la excrecin ya que directamente remueven las substancias txicas de la sangre. Para que una substancia sea eliminada por la orina es necesario que sea soluble en agua. Los compuestos liposolubles se tienen que biotransformar en hidrosolubles para poder ser excretados por esta va.

La excrecin est fuertemente influenciada por las propiedades fsicoqumicas del excretando, las bases dbiles pueden excretarse en la orina debido al pH de la orina, aunque los riones tambin pueden excretar activamente aniones y cationes orgnicos. 3.6.2 Heces Las heces son otra ruta importante de excrecin. Consisten de la ingesta no absorbida, secreciones biliares, secreciones intestinales y microflora. Cualquier dosis oral que no se absorbe se elimina con las heces y no existe la absorcin 100%. La flora microbiana puede bioacumular compuestos y como parte de ella es eliminada en las heces, esto contribuye a la excrecin de txicos. Hay tambin una pequea contribucin de la difusin pasiva de algunos compuestos de la sangre al intestino.

3.6.3 Bilis La bilis contribuye a la excrecin de los metabolitos formados en el hgado. Las substancias con peso molecular mayor a 350 se excretan ms fcilmente por esta va. Algunos iones metlicos, cidos orgnicos, bases orgnicas y compuestos neutros se pueden transferir a la bilis por medio de transporte activo. Una vez formada la bilis pasa al intestino para ser excretada con las heces. La microflora intestinal biotransforma algunos compuestos que van en la bilis y los metabolitos resultantes pueden ser reabsorbidos y llevados de nuevo al hgado. Este fenmeno, como se mencion anteriormente, se conoce como el ciclo enteroheptico y es la causa de que se incremente la permanencia del txico en el organismo. 3.6.4 Aire exhalado As como los compuestos pueden ser inhalados tambin pueden ser exhalados. Para que esto ocurra el compuesto debe de ser un gas a temperatura corporal. Los lquidos voltiles estn en equilibrio con su fase vapor en los alvolos. La transferencia de la sangre a los pulmones tiene lugar por difusin pasiva y es inversamente proporcional a su velocidad de absorcin. La baja solubilidad en sangre permite una excrecin rpida y est limitada por la perfusin (flujo de sangre), mientras que para los compuestos con una alta solubilidad en sangre su excrecin est limitada por la ventilacin. 3.6.5 Otros mecanismos Las secreciones corporales, como la leche, el sudor y la saliva constituyen vas menores de excrecin de txicos. La leche constituye una va importante en el caso de transporte de txicos de la madre lactante al hijo y del ganado lechero al hombre. El pH ligeramente menor de la leche, con respecto al plasma, facilita la excrecin de algunos compuestos bsicos pero tambin se pueden excretar algunos compuestos liposolubles y iones similares al calcio. En el sudor y en la saliva se pueden excretar compuestos liposolubles no disociados que en el caso del sudor, pueden causar dermatitis y en caso de la saliva se vuelven a deglutir y empieza de nuevo el ciclo de absorcin, distribucin, metabolismo y excrecin.

Los xenobiticos presentes en el SNC se pueden remover va el flujo de salida del Lquido Cerebro-Espinal (LCE) y tambin se cuenta con mecanismos de transporte activo para remover compuestos ionizados del LCE.

EVALUACIN DE RIESGOS AMBIENTALES 1. Anlisis de riesgos 1.1 Introduccin El anlisis de riesgos es una disciplina relativamente nueva con races antiguas. Como campo del conocimiento se organiz en las ltimas tres dcadas y su auge se debe a que varios pases han aprobado leyes para proteger, tanto a la salud humana como a la biota, de los peligros que puede acarrear la exposicin a substancias peligrosas presentes en el medio ambiente en base a la prevencin y reduccin de riesgos. El anlisis de riesgos es una tcnica multidisciplinaria que utiliza conceptos desarrollados en varias ciencias en las que se incluyen a la toxicologa, epidemiologa, ingeniera, psicologa, higiene industrial, seguridad ocupacional, seguridad industrial, evaluacin del impacto ambiental, etc. El anlisis de riesgos sirve para:

Identificar y evaluar los problemas ambientales y de salud producidos por la realizacin de actividades peligrosas y el manejo de substancias txicas. Comparar tecnologas nuevas y tradicionales que se usan en la determinacin de la efectividad de los diferentes controles y tcnicas de mitigacin diseadas para reducir riesgos. Localizacin de instalaciones potencialmente peligrosas. Seleccin de prioridades entre las posibles alternativas de accin para establecer secuencias de ejecucin de acciones correctivas y/o de elaboracin de reglamentos ambientales.

1.2 Conceptos Bsicos Los trminos riesgo y peligro se definieron anteriormente en la que se dice que riesgo es la posibilidad de sufrir un dao por la exposicin a un peligro y peligro es la fuente del riesgo y se refiere a una substancia o a una accin que puede causar dao. Evaluacin de riesgos se refiere a la tcnica para determinar la naturaleza y magnitud del riesgo. El trmino anlisis de riesgo se ha usado frecuentemente como un sinnimo de evaluacin de riesgos. Debe de interpretarse que adems de la evaluacin, el anlisis incluye los mtodos para hacer un mejor uso de los resultado de la evaluacin. En el manejo de los riesgos se disea la respuesta de control, reduccin o eliminacin de riesgos utilizando la informacin producida por la evaluacin y el anlisis, en el contexto de los recursos tcnicos, valores sociales, econmicos y polticos. La diferencia entre evaluacin y manejo de riesgos no es muy clara. La controversia se centra en el grado en el cual la evaluacin se puede mantener libre de los juicios y valores que tpicamente corresponden a las decisiones de manejo.

Las percepciones de los riesgos son factores importantes que influyen tanto a la evaluacin como al manejo. Los riesgos se perciben en forma diferente, dependiendo de quines son los afectados, qu tan probable es que los daos se produzcan, las caractersticas de los daos, tal cmo qu tan catastrficos son, qu tan acostumbrada est la poblacin a ese tipo de dao, qu tan grande es la fraccin de la poblacin afectada, cmo se afecta a los individuos en forma personal y si stos han aceptado en forma voluntaria enfrentar los riesgos. Las percepciones de los riesgos estn influenciadas por los beneficios que se obtienen de enfrentar tales riesgos. 1.3 Usos del anlisis de riesgos Las tcnicas de anlisis se pueden aplicar a un amplio rango de situaciones de riesgo para la salud y el medio ambiente, incluyendo:

La introduccin o el descubrimiento de una substancia en el ambiente La exposicin ocupacional a una substancia o radiacin. Contaminacin del aire, tanto en espacios interiores como en el ambiente exterior Disposicin de residuos peligrosos Presencia de substancias peligrosas en la cadena alimentaria Instalaciones que manejan o crean substancias txicas El anlisis de riesgos tambin se puede aplicar a muy diferentes situaciones, por ejemplo, el riesgo asociado al uso de un producto farmacutico o tratamiento mdico, a la construccin de obras tales como presas y puentes etc.

1.4 Metodologa y Tcnicas El anlisis de riesgos usa una serie de tcnicas que se aplican cuando las respuestas no son obvias y la informacin es ambigua e incierta. Se utilizan las herramientas de la ciencia, la ingeniera y la estadstica para analizar la informacin relacionada con los riesgos y, para estimar y evaluar la probabilidad y magnitud del riesgo ambiental y de la salud. El anlisis de riesgos no proporciona una frmula para tratar la problemtica de riesgos. No resuelve las complicadas negociaciones polticas y sociales que se tienen que hacer en la toma de decisiones sobre riesgos. Lo que s mejora es la capacidad de los cientficos y tomadores de decisiones en la identificacin, evaluacin, control y reduccin de riesgos asociados con actividades del hombre. El proceso de anlisis de riesgos se puede pensar como formado de cuatro fases interrelacionadas, cada una con ciertos mtodos y tcnicas. 1.4.1 Identificacin del Peligro En esta fase la pregunta que se trata de contestar es: existe el peligro? Para contestar esta pregunta se tiene que recurrir a la toxicologa, la cual hace uso de estudios epidemiolgicos, estudios in vivo en modelos animales, pruebas realizadas in vitro utilizando cultivo de clulas y de tejidos, as como estudios de estructura/actividad.
2. Caracterizacin de riesgos

La caracterizacin de los riesgos a la salud pblica en un sitio contaminado consiste en determinar si es tolerable el nivel de riesgo de que se produzcan daos asociados a la exposicin a los txicos presentes en el sitio.

Para hacer lo anterior se evalan las exposiciones que sufren los pobladores, lo cual, consiste en: hacer la seleccin de las poblaciones que se consideran en riesgo y de los txicos capaces de producir esos riesgos, identificando las condiciones de exposicin cuantificar las exposiciones que tienen lugar, estimando las dosis suministradas/absorbidas calificar la calidad de los resultados del cmputo de las exposiciones.

Por otro lado se evala la peligrosidad de los txicos presentes, lo cual consiste en:

obtener los ndices de toxicidad, que estn basados en informacin confiable, para todos los txicos que se seleccionaron en la evaluacin de la exposicin, y sean aplicables a las condiciones presentes en el sitio calificar la calidad de la informacin obtenida.

En la mayora de los sitios contaminados, los individuos estn expuestos a varios txicos al mismo tiempo y cada uno de los txicos pueden llegar a hacer contacto con las poblaciones por ms de una ruta. En esta seccin se revisar cmo se integran ambos conocimientos para la evaluacin de riesgos por exposicin a substancias txicas, tanto si se trata de exposiciones a una sola substancia por una ruta, como de exposiciones mltiples. Los riesgos asociados a la exposicin de substancias no-cancergenas, se evalan por separado de los riesgos por exposicin a cancergenos. Las metodologas para evaluar estos dos modos de toxicidad qumica son diferentes. Para caracterizar efectos no-cancergenos, las comparaciones se hacen entre las dosis de exposicin estimadas para cada una de las substancias y sus dosis de referencia y al cociente de estas dos cantidades (exposicin /dosis de referencia), que se le conoce como Cociente de Peligro. Los efectos cancergenos o sea , la probabilidad de que un individuo desarrolle cncer por exposicin vitalicia a una substancia, se estima a partir de las dosis de exposicin estimadas y la informacin sobre la probabilidad especfica de desarrollar cncer (riesgo de cncer por unidad de dosis o factor de pendiente), para la substancia de inters. Al producto del valor de la exposicin por el factor de pendiente se le llama: Riesgo de Cncer. Una evaluacin de riesgos no se puede considerar completa, a menos que las estimaciones numricas del riesgo se califiquen, a la luz de las suposiciones ms importantes que se hicieron para llegar a los resultados obtenidos y el anlisis de las incertidumbres que se introdujeron en los resultados como producto de esas suposiciones. 3. Evaluacin de la exposicin Cmo se transportan los txicos en el ambiente desde la fuente de emisin y cmo parte de esos txicos liberados llegan en estado activo a contactar a algunos miembros de las poblaciones en uno o ms escenarios, y cmo se determina qu rutas son significativas. Se vio tambin, cmo se define y calcula la dosis que reciben los individuos expuestos. Se mencion varias veces que los modelos matemticos que normalmente se utilizan en estos clculos pueden representar sobre-simplificaciones de la realidad.

Tambin se dijo, que muy frecuentemente no se tiene informacin propia del sitio y/o de la poblacin que se est estudiando y, que en ese caso se tienen que asignar valores a los parmetros de los modelos, basndose en estadsticas nacionales o en base a la experiencia de los encargados de hacer la evaluacin de riesgos. La presentacin de toda esta informacin numrica y cualitativa acompaada de los juicios de valor sobre las suposiciones hechas en el proceso de obtenerla es lo que denominamos evaluacin de la exposicin. Es la informacin que se necesita para hacer la evaluacin de riesgos. 3.1. Informacin contenida Los resultados del estudio de la exposicin que se necesitan son los siguientes:

Concentraciones qumicas de todas las substancias txicas en el punto de exposicin Frecuencia y duracin de las exposiciones Clasificacin de las exposiciones observadas de acuerdo al perodo de exposicin (crnicas, subcrnicas y agudas) y la va de exposicin (oral, inhalacin y cutnea) Caractersticas de la poblacin expuesta identificando subpoblaciones especiales Caractersticas del sitio Descripcin de las rutas de exposicin significativas Dosis Suministradas y/o Absorbidas de cada substancia por cada ruta significativa, por cada va y por cada perodo de exposicin Relacin de las rutas completas que se clasificaron como no significativas y porqu. Posible efecto de las exposiciones que no se estn evaluando Lista de las rutas de exposicin que pueden contribuir a la exposicin de los mismos individuos en forma simultnea Modelos de transporte y destino utilizados en el anlisis de las rutas de exposicin Suposiciones hechas en el proceso de modelaje de las exposiciones Valores utilizados para los parmetros de exposicin y fuentes de informacin Identificacin y caracterizacin de las incertidumbres.

3.1 Evaluacin de las incertidumbres La evaluacin de las incertidumbres es un aspecto muy importante en la evaluacin de riesgos. Algunas de las fuentes de incertidumbre se pueden cuantificar, a las otras se les da un tratamiento cualitativo, pero siempre se analizan. Es conveniente conocer las posibilidades de que las incertidumbres se magnifiquen a lo largo del proceso de evaluacin. Identificacin. Las incertidumbres ms importantes son las siguientes:

calidad de los datos de muestreo. Por ejemplo; si los datos de concentracin de un determinado txico en el suelo no provienen de muestras representativas calidad de la informacin que se consult para asignar categora del uso actual del suelo y para hacer la estimacin de las probabilidades de cambio del uso del suelo la eliminacin de substancias de la lista de txicos a considerar en el estudio la eliminacin de rutas de exposicin completas.

Se debe de revisar esta informacin para confirmar o revocar las decisiones que se hayan tomado antes. Los errores que se cometan en estos aspectos pueden llegar a invalidar los resultados del anlisis de riesgos.

Otras fuentes importantes de incertidumbre son las inherentes a la evaluacin de la exposicin de los individuos a todas las substancias. Estas incertidumbres son introducidas por:

los datos de muestreo los modelos usados para estimar concentraciones de exposicin, en la ausencia de datos experimentales la seleccin de niveles de los parmetros de insumos que no estn basados en datos experimentales Las incertidumbres adicionales que se introducen cuando se combinan las exposiciones a varias substancias por varias rutas de exposicin.

Es conveniente tener en cuenta y evaluar el posible efecto de las suposiciones ms importantes que se tienen que hacer en la derivacin de los modelos como son:

la de suponer linearidad de respuesta homogeneidad condiciones de rgimen estacionario o de equilibrio, etc.

Las distintas suposiciones pueden tener efectos diferentes en los resultados. Es necesario identificar las suposiciones claves, indicando el orden de magnitud de la sobrestimacin o subestimacin del riesgo. Si no se dispone de datos de campo para validar un modelo, se puede hacer un anlisis de sensibilidad limitado, para indicar la magnitud de la incertidumbre asociada al uso de ese modelo. Es conveniente identificar cules de estos parmetros tienen ms influencia en los resultados y los efectos sobre los resultados del hecho que se hayan dado valores estndar a los parmetros de exposicin y de transporte. Lo anterior se determina por anlisis de sensibilidad o por opinin de expertos. En el anlisis de sensibilidad se calculan los riesgos dando diferentes valores a los parmetros y observando su efecto sobre los resultados. Anlisis. Idealmente se debera hacer un seguimiento a lo largo de todo el proceso de evaluacin de riesgo de cada una de las incertidumbres asociadas al clculo de las exposiciones y as, caracterizar sus efectos sobre los resultados finales. A continuacin se describen algunas formas de cmo evaluar las incertidumbres en forma cuantitativa, semicuantitativa y cualitativa. Mtodo Cuantitativo.- El mtodo cuantitativo se puede aplicar cuando los modelos son sencillos y se conocen bien los valores de los parmetros de insumo. En este caso, el primer paso ser la caracterizacin de las distribuciones de probabilidades de los valores de las variables y, el segundo ser el estudio de la propagacin de las incertidumbres de los valores de las variables, a travs del proceso de clculo, usando mtodos analticos (series de Taylor de primer orden) o por mtodos numricos (simulacin Montecarlo). Los mtodos analticos son posibles cuando se trata de pocas variables con distribuciones conocidas y de funciones lineales. En los casos ms complejos se usan los mtodos numricos.Los anlisis de primer orden, con series de Taylor, estn basados en la suposicin de que la varianza total de la variable de salida del modelo, es una funcin de las varianzas de las variables individuales de entrada al modelo y que la sensibilidad de la variable de salida es una funcin de las variables de entrada.

La sensibilidad de la variable de salida se define como la primera derivada de la funcin o modelo. La derivada se puede generar en forma analtica o numrica. En la simulacin Montecarlo se estima una distribucin de exposiciones o riesgos por medio de la resolucin repetitiva de las ecuaciones del modelo. Se necesita definir la distribucin de probabilidades para cada variable del modelo. De la distribucin de riesgos que resulta se puede seleccionar un determinado percentil (por ejemplo el 95 en el caso de distribucin de exposiciones). Las tcnicas cuantitativas requieren de la definicin de las distribuciones de todas las variables de entrada y de la covarianza que existen entre ellas. El valor de estos mtodos disminuye rpidamente, si no se conocen bien las distribuciones de una o ms variables y, si se tienen que suponer los valores y las distribuciones de algunos de los parmetros. Las tcnicas cuantitativas se vuelven ms difciles de documentar y revisar, a medida que aumenta el nmero de variables en el modelo. El llevar acabo el anlisis cuantitativo de las incertidumbres a veces lleva a una falsa percepcin de confiabilidad en los resultados. An en los anlisis ms completos no se puede estar seguro de que se tomaron en cuenta todas las fuentes de incertidumbre y que se tomaron en cuenta todas las covarianzas. Mtodos Semicuantiativos.- Con frecuencia la informacin disponible es insuficiente para describir la distribucin de valores de las variables, pero s se pueden conocer los rangos dentro de los cuales toman valores los parmetros. En esta situacin se pueden hacer estudios de sensibilidad de la variable de salida, determinar cules variables tienen ms influencia en los resultados y calcular los rangos dentro de los cuales puede tomar valores la variable de salida. Se calcula el rango de la variable de salida del modelo (exposicin) que resulte de suponer las combinaciones de valores extremos o medios de los parmetros de entrada. La caracterizacin de las incertidumbres por medio de este mtodo, se puede hacer presentando los rangos de las exposiciones o riesgos calculados en el anlisis de sensibilidad y, por la descripcin de las limitaciones en los datos que se usaron para estimar rangos plausibles de las variables de entrada del modelo. Mtodo cualitativo.- En la mayora de los casos este es el mtodo ms adecuados para presentar el anlisis de incertidumbres. Se describe en forma cuantitativa o cualitativa la incertidumbre de cada parmetro y se indica simplemente la influencia posible de estas incertidumbres en la estimacin final del riesgo en base al conocimiento que se tenga de cada modelo. En seguida se hace un resumen de la informacin y las incertidumbres que pueden estar asociadas a esas informaciones, que es conveniente tener a la mano cuando se est haciendo este tipo de anlisis:

lista de los parmetros de evaluacin de la exposicin tales como: velocidad de infiltracin, duracin de la exposicin, factores de bioconcentracin, peso corporal, etc. lista de los valores usados para cada parmetro y la razn para seleccionar ese valor distribucin de valores de cada parmetro sean estos medidos o supuestos, considerando, si es posible, los siguientes: rango total, tipo de distribucin, media (geomtrica o aritmtica), desviacin estndar y percentiles especficos (mediana, percentil 95) incertidumbre en valores estadsticos usados en la evaluacin de riesgos (por ejemplo, el error estndar de la media) o la falta de datos y calificadores direccin y magnitud potencial de las desviaciones en las estimaciones de riesgos introducidas por las suposiciones hechas y por la falta de datos.

Las curvas de nivel de riesgo que se calculan en base de exposiciones modeladas, son tiles para visualizar el efecto posible de contaminaciones actuales o futuras sobre las comunidades que viven cerca o en el sitio. 3.2 Evaluacin de la toxicidad En la segunda parte de este libro, la cual se denomina Toxicologa Ambiental, se analiz qu pasa cuando un txico entra al organismo y cmo cada individuo expuesto tiene sistemas bioqumicos para responder a la agresin qumica, que mecanisticamente pueden ser iguales, pero que pueden ser cuantitativamente diferentes, dependiendo de diversos factores ya sean, ambientales o propios de cada organismo. Se presentaron los mecanismos por medio de los cuales los txicos causan daos, as como los factores que tienen influencia sobre esa respuesta. Lo presentado en esas secciones ayuda a explicar la respuesta txica y su variabilidad. Tambin se vio cmo la magnitud de las respuestas txicas estn determinadas por la cantidad del txico que llega activo al tejido blanco. Evaluacin de la toxicidad, es la seleccin de los valores adecuados de los parmetros que miden la peligrosidad de las substancias txicas presentes en el sitio, acompaados por la calificacin de la calidad de esa informacin. El parmetro que se usa en evaluacin de riesgos es el ndice de toxicidad. 4.Ensayos de toxicidad Los ensayos de toxicidad son los bio ensayos empleados para reconocer y evaluar los efectos de los contaminantes sobre la biota. En los bioensayos se usa un tejido vivo, organismo, o grupo de organismos, como reactivo para evaluar los efectos de cualquier sustancia fisiolgicamente activa. Estos ensayos, bsicamente, consisten en la exposicin de grupos de organismos, a determinadas concentraciones del txico por un tiempo determinado. Los organismos deben estar en buenas condiciones de salud, previamente aclimatados a las condiciones del ensayo, y se mantienen en condiciones ambientales constantes. Adems se dispone de grupos de control (que no se exponen al txico). Luego se miden y registran los efectos biolgicos observados en cada uno de los grupos control y tratados y, posteriormente, se efecta un anlisis estadstico de los datos obtenidos . Los efectos txicos a evaluar pueden ser: mortalidad, inmovilidad, inhibicin del crecimiento de la poblacin, alteracin del comportamiento, etc. Se determinan distintas variables como, por ejemplo, la concentracin letal 50 (CL 50), que es la concentracin letal para el 50 % de los individuos expuestos. Las condiciones de los cultivos y los ensayos deben estar altamente estandarizadas para permitir la comparacin de los resultados. Los ensayos de toxicidad permiten establecer los lmites permitidos para los distintos contaminantes, evaluar el impacto de mezclas sobre las comunidades de los ambientes que las reciben y comparar la sensitividad de una o ms especies a distintos txicos o a diferentes condiciones para el mismo txico. Es til para la investigacin bsica del fenmeno de toxicidad, establecer criterios o patrones de calidad de aguas superficiales o efluentes, la evaluacin del impacto ambiental y del riesgo ecolgico y el monitoreo de las condiciones de un cuerpo de agua. Generalmente, no es suficiente para proteger la biota registrar en un ecosistema dado las concentraciones de las sustancias qumicas; los programas para monitorear tales sustancias suelen ser muy caros, y aquellas de alta toxicidad generalmente deben detectarse en concentraciones muy bajas, usando equipo costoso y personal muy entrenado; y en un solo ambiente puede haber cientos de contaminantes con efectos muchas veces no aditivos.

Por lo tanto, se necesitan los ensayos biolgicos que son relativamente simples, rpidos y econmicos, y pueden brindar informacin adicional sobre el riesgo potencial, incluyendo efectos txicos como generacin de cncer, malformaciones, desrdenes de conducta, efectos acumulativos, antagonismos y sinergismos. Los ensayos pueden ser de laboratorio (con un nmero reducido de especies, y en condiciones estandarizadas que reproducen slo en forma muy parcial las condiciones naturales en el ambiente), o de campo (con encierros sometidos a las condiciones del medio). Mediante los ensayos de toxicidad se estudian las relaciones dosis o concentracin, efecto y dosis o concentracin - respuesta (efecto: cambio biolgico evaluable por una escala de intensidad o severidad; respuesta: proporcin de la poblacin expuesta que manifiesta un efecto definido). Los organismos empleados para los ensayos deben tener alta sensibilidad a los txicos, ya que al establecer las concentraciones seguras para ellos se espera proteger a todo el ecosistema, pero hay que tener en cuenta que distintas especies tienen diferente sensitividad a distintas sustancias qumicas. Ms de 150 especies desde bacterias hasta mamferos se usaron como organismos para test, pero slo unas 40 tuvieron cierta aprobacin oficial. De todos modos, ninguna especie aislada podra representar adecuadamente un ecosistema entero en sensitividad toxicolgica, por lo que hay organizaciones que recomiendan una serie de ensayos crnicos incluyendo, por ej: algas, dfnidos y peces . Se utilizan mtodos integrados (secuencial, para evaluar la toxicidad de sustancias qumicas puras, y simultneo, para deshechos que contienen varias sustancias diferentes). Los ensayos deberan complementarse con monitoreos biolgicos y el uso de indicadores ecolgicos. ENSAYOS DE TOXICIDAD IN VITRO

La aparicin de complejas tecnologas en la biologa molecular y celular ha impulsado una evolucin relativamente rpida en las ciencias de la vida, entre ellas la toxicologa. En efecto, la toxicologa no se est centrando tanto en animales completos y poblaciones de animales completos como en las clulas y molculas de animales y seres humanos individuales. A mediados del decenio de 1980 los toxiclogos empezaron a aplicar estos nuevos mtodos a la evaluacin de los efectos de las sustancias qumicas sobre los sistemas vivos. Como progresin lgica, esos mtodos se estn adaptando a los fines de los ensayos de toxicidad. Estos avances cientficos han contribuido junto con factores sociales y econmicos a modificar la evaluacin de la seguridad de los productos y del riesgo potencial. Los factores econmicos estn especficamente relacionados con el volumen de materiales que se ha de ensayar. Cada ao se introducen en el mercado gran cantidad de nuevos cosmticos, frmacos, plaguicidas, sustancias qumicas y productos para el hogar. Y ha de evaluarse la toxicidad potencial de todos ellos. Hay adems un retraso acumulado, pues sustancias qumicas que ya se estn utilizando no se ensayaron suficientemente en su da.

La inmensa tarea de obtener informacin detallada sobre la seguridad de todas esas sustancias qumicas utilizando los mtodos de ensayo tradicionales con animales completos sera muy costosa en tiempo y en dinero, si es que fuera posible realizarla. Se plantean asimismo cuestiones sociales relacionadas con la salud y seguridad pblicas, y hay una creciente preocupacin pblica acerca del empleo de animales en ensayos de seguridad de productos. En lo que se refiere a la seguridad humana, los grupos de defensa del inters pblico y del medio ambiente han presionado considerablemente a los organismos gubernamentales para que apliquen normas ms estrictas en materia de sustancias qumicas. Un ejemplo reciente ha sido la peticin de algunos grupos de defensa del medio ambiente de los Estados Unidos de que se prohibieran el cloro y los compuestos que contienen cloro. Una de las razones de esta actitud extrema reside en el hecho de que la mayora de esos compuestos no ha sido objeto de ensayos suficientes. Desde la perspectiva de la toxicologa, la idea de prohibir toda una clase de sustancias qumicas diversas slo porque contienen cloro es cientficamente poco slida e irresponsable. Con todo, desde la perspectiva del pblico es comprensible la peticin de que se den garantas de que las sustancias qumicas que se liberan en el medio ambiente no comportan un riesgo importante para la salud. Esta situacin subraya la necesidad de elaborar mtodos de evaluacin de la toxicidad que sean ms eficientes y ms rpidos. La otra preocupacin social que ha afectado al mbito de los ensayos de toxicidad es el bienestar de los animales. Los grupos que en todo el mundo se dedican a la proteccin de los animales, cada vez ms numerosos, han expresado una considerable oposicin al empleo de animales completos en ensayos de seguridad de productos. Se han lanzado campaas activas contra los fabricantes de cosmticos, productos para el hogar y de cuidado personal y frmacos en un intento de detener los ensayos con animales. En Europa, ello hizo que se aprobara la sexta modificacin de la Directiva 76/768/CEE (la llamada directiva sobre cosmticos). La directiva dispone que los productos cosmticos o ingredientes de cosmticos que se hayan ensayado en animales a partir del 1 de enero de 1998 no podrn comercializarse en la Unin Europea, a menos que no haya otros mtodos alternativos suficientemente validados. Aunque la prohibicin no es aplicable a la venta de tales productos en los Estados Unidos o en otros pases, la directiva afectar notablemente a las empresas que tienen mercados internacionales en los que est incluida Europa. El concepto de otros mtodos alternativos, que constituye la base del desarrollo de ensayos distintos de los que se realizan con animales completos, se define por la regla de la triple R: reducir el nmero de animales empleados; refinar los protocolos, de manera que los animales sufran menos tensin o molestia, y remplazar los actuales ensayos con animales por ensayos in vitro (es decir, ensayos realizados fuera del animal vivo), modelos informatizados o ensayos en especies de invertebrados o de vertebrados inferiores

. La regla de la triple R se propuso en un libro que publicaron en 1959 dos cientficos britnicos, W.M.S. Russell y Rex Burch, y que se titulaba The Principles of Humane Experimental Technique. Russell y Burch mantenan que la nica manera de conseguir resultados cientficos vlidos pasaba por el tratamiento humano de los animales, y pensaban que deban desarrollarse mtodos para reducir y en ltima instancia sustituir el uso de animales. Pero los principios enunciados por Russell y Burch notuvieron mucho eco en su da, y tuvieron que esperar a que a mediados del decenio de 1970 resurgiera el movimiento de defensa del bienestar de los animales. Hoy el concepto de las tres R est presente, y en primera lnea, en las actividades de investigacin, realizacin de ensayos y formacin. En resumen, puede afirmarse que en el desarrollo de los mtodos de ensayo in vitro han convergido diversos factores a lo largo de los ltimos 10-20 aos. No es fcil saber si cualquiera de esos factores por s slo hubiera tenido un efecto tan profundo sobre las estrategias de los ensayos de toxicidad.

Concepto de los ensayos de toxicidad in vitro

En esta seccin nos ocuparemos nicamente de los mtodos de evaluacin de la toxicidad que se realizan in vitro, como una de las varias alternativas a los ensayos con animales completos. Los estudios in vitro se realizan generalmente en clulas o tejidos animales o humanos fuera del cuerpo. La expresin in vitro (en vidrio) se refiere a los procedimientos que se realizan sobre material vivo o componentes de material vivo en placas petri o en tubos de ensayo en unas condiciones definidas. Lo contrario son los estudios in vivo, es decir, realizados en elanimal vivo. Aunque es difcil, si no imposible, proyectar los efectos de una sustancia qumica sobre un organismo complejo cuando las observaciones se limitan a un nico tipo de clulas en una placa, los estudios in vitro s que proporcionan una notable cantidad de informacin sobre la toxicidad intrnseca, as como sobre los mecanismos celulares y moleculares de la toxicidad. Adems, ofrecen muchas ventajas sobre los estudios in vivo, sobre todo que son en general ms baratos y que pueden controlarse mejor las condiciones en que se realizan. A ello hay que aadir que, pese a que sigue siendo necesario contar con algunos animales para obtener las clulas que se van a cultivar in vitro, estos mtodos pueden considerarse como alternativas vlidas en el sentido de la reduccin (pues se emplean muchos menos animales que en los estudios in vivo) y del refinamiento (porque eliminan la necesidad de someter a los animales a las consecuencias txicas adversas inevitables en los experimentos in vivo). Para interpretar los resultados de los ensayos de toxicidad in vitro, determinar su utilidad potencial en la evaluacin de la toxicidad y relacionarlos con el proceso toxicolgico general in vivo, es necesario comprender qu parte del proceso toxicolgico se est examinando.

El proceso toxicolgico completo consiste en unos fenmenos que se inician con la exposicin del organismo a un agente fsico o qumico, prosiguen con las interacciones celulares y moleculares y acaban manifestndose en la respuesta del organismo completo. Los ensayos in vitro suelen limitarse a la parte del proceso toxicolgico que se desarrolla al nivel celular y molecular. Los estudios realizados con este mtodo pueden proporcionar informacin sobre por ejemplo las rutas metab- licas, la interaccin de metabolitos activos con dianas celulares y moleculares y parmetros o puntos finales de la toxicidad que pueden medirse y que por lo tanto pueden utilizarse como biomarcadores moleculares de la exposicin. Lo ideal sera conocer el mecanismo de toxicidad de todas las sustancias, desde la exposicin hasta la manifestacin en el organismo, de tal manera que la informacin obtenida en los ensayos in vitro pudiera interpretarse y relacionarse ntegramente con la respuesta del organismo en su conjunto. Pero ello es prcticamente imposible, pues hasta el momento son relativamente pocos los mecanismos toxicolgicos que se ha logrado elucidar en su totalidad. Por ello, los toxiclogos se enfrentan a una situacin en la que los resultados de un ensayo in vitro no pueden utilizarse como una prediccin totalmente exacta de la toxicidad in vivo porque se desconoce el mecanismo. No obstante, es frecuente que durante el proceso de desarrollo de un ensayo in vitro se logren comprender algunos componentes del mecanismo o mecanismos celulares y moleculares de la toxicidad. Una de las cuestiones clave que estn sin resolver en cuanto al desarrollo y realizacin de ensayos in vitro es la que se refiere a la consideracin siguiente: deben tener una base mecanicista, o basta con que sean descriptivos? Desde una perspectiva cientfica es incontestablemente mejor utilizar slo ensayos de base mecanicista para sustituir a los ensayos in vivo. Pero, ante la ausencia de conocimientos mecanicistas completos, la posibilidad de desarrollar ensayos in vitro que sustituyan totalmente a los ensayos con animales enteros en el futuro prximo es casi nula. No obstante, ello no descarta la utilizacin de tipos de ensayos ms descriptivos como instrumentos de deteccin precoz, como es el caso en la actualidad. Con esos mtodos de deteccin se ha conseguido reducir notablemente el uso de animales. Por consiguiente, hasta que llegue el momento en que se genere ms informacin mecanicista, puede ser necesario emplear de manera ms limitada ensayos cuyos resultados simplemente tengan una buena correlacin con los obtenidos in vivo.

Ensayos de citotoxicidad in vitro En esta seccin se describirn varios ensayos in vitro que se han desarrollado para evaluar el potencial citotxico de una sustancia qumica. Son en su mayora ensayos fciles de realizar, y el anlisis puede automatizarse. Un ensayo de citotoxicidad in vitro que se utiliza habitualmente es el ensayo rojo neutro. Se realiza en clulas en cultivo, y en la mayora de las aplicaciones las clulas pueden mantenerse en placas de cultivo que contienen 96 pocillos, cada uno de 6,4 mm de dimetro.

Como cada pocillo puede utilizarse para una sola determinacin, este sistema permite emplear mltiples concentraciones de la sustancia as como controles positivos y negativos con un nmero suficiente de replicaciones para cada caso. Tras el tratamiento de las clulas con diversas concentraciones de la sustancia que se ensaya, que abarcan al menos dos rdenes de magnitud (por ejemplo, de 0,01 mM a 1 mM), as como con sustancias de control positivo y negativo, las clulas se lavan y tien con rojo neutro, un colorante que puede absorber y retener nicamente las clulas vivas. La tincin puede realizarse nada ms retirar la sustancia ensayada, y entonces se observan los efectos inmediatos, o puede realizarse tambin en diversos momentos posteriores para observar los efectos acumulados o retardados. La intensidad del color en cada pocillo corresponde al nmero de clulas vivas en ese pocillo. La intensidad del color se mide mediante un espectrofotmetro, que puede estar equipado con un lector de placas. El lector se programa para que proporcione mediciones individuales de cada uno de los 96 pocillos de la placa de cultivo. Esta metodologa automatizada permite al investigador realizar rpidamente un experimento de concentracin-respuesta y obtener datos tiles desde el punto de vista estadstico. Otro ensayo de citotoxicidad relativamente sencillo es el que se realiza con la prueba MTT. El MTT (bromuro de 3[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio) es un colorante de tetrazolio que se reduce a color azul por la accin de enzimas mitocondriales. Slo las clulas con mitocondrias viables conservan la capacidad de efectuar esa reaccin; por lo tanto, la intensidad del color est directamente relacionada con el grado de integridad de las mitocondrias. Es un ensayo til para detectar compuestos citotxicos generales, as como los agentes que tienen a las mitocondrias como diana especfica. Tambin se utiliza como ensayo de citotoxicidad de amplio espectro la medida de la actividad de la lactico deshidrogenasa (LDH). Esta enzima est presente normalmente en el citoplasma de las clulas vivas y se libera en el medio de cultivo celular al permeabilizarse la membrana de las clulas muertas o moribundas que se han visto afectadas por un agente txico. Tras la aplicacin de la sustancia ensayada a las clulas se retiran en diversos momentos pequeas cantidades del medio de cultivo de las clulas para medir la cantidad de LDH liberada y determinar el curso temporal de la toxicidad. Aunque no permite ms que una evaluacin muy general de la citotoxicidad, el valor del ensayo de liberacin de LDH reside en que es fcil de hacer y en que puede realizarse en tiempo real. Se estn desarrollando muchos mtodos nuevos de detectar el dao celular. Los ms sofisticados emplean sondas fluorescentes para medir diversos parmetros intracelulares, como la liberacin de calcio y las alteraciones del pH y del potencial de la membrana. En general, esas sondas son muy sensibles y pueden detectar cambios celulares ms sutiles, con lo que se reduce la necesidad de utilizar la muerte celular como punto final de la toxicidad.

Adems, muchos de esos ensayos de fluorescencia pueden automatizarse utilizando placas de 96 pocillos y lectores de placas fluorescentes. Una vez que se han acopiado datos sobre una serie de sustancias qumicas utilizando uno de estos ensayos, pueden determinarse las toxicidades relativas. La toxicidad relativa de una sustancia qumica, tal como se determina en un ensayo in vitro, puede expresarse como la concentracin que produce un efecto del 50 % en la respuesta de punto final en clulas no tratadas. Esta determinacin se suele denominar CE50 (concentracin efectiva en el 50 % de las clulas) y puede utilizarse para comparar las toxicidades de diferentes sustancias qumicas in vitro. (En las evaluaciones de la toxicidad relativa se utiliza tambin una expresin anloga, CI50, que indica la concentracin de una sustancia que provoca una inhibicin del 50 % de un proceso celular, como por ejemplo la capacidad de absorber el rojo neutro.) No es fcil determinar si la toxicidad relativa in vitro de las sustancias qumicas es comparable a sus toxicidades relativas in vivo, pues en el sistema in vivo intervienen muchos factores que crean confusin, como la toxicocintica, el metabolismo y los mecanismos de reparacin y defensa. Adems, como la mayora de esos ensayos mide parmetros de la citotoxicidad general, no tienen una base mecanicista. Por consiguiente, la concordancia entre las toxicidades relativas in vitro e in vivo es meramente correlativa. Pese a los muchos problemas y dificultades que plantea la extrapolacin de in vitro a in vivo, estos ensayos in vitro estn resultando muy valiosos porque su realizacin es sencilla y poco costosa y porque pueden utilizarse como mtodos de deteccin con los que seleccionar frmacos o compuestos muy txicos en las fases tempranas de su desarrollo.