MTL

Hospital Padre Alberto Hurtado Laboratorio de Qumica Clnica - Urgencia
MANUAL DE TCNICAS
UNIDAD DE APOYO CLNICO LABORATORIO CLNICO
2009
ENTRADA EN VIGENCIA: 2000 PRIMERA REVISION : 14/08/2003 SEGUNDA REVISION : 25/07/2007 TERCERA REVISION : 27/10/2009
Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central
Con fecha 27 de Octubre del 2009 se certifica que los Procedimientos incluidos en el Manual de Tcnicas de Laboratorio Clnico se encuentran aprobados por la Unidad de Laboratorio Clnico desde el ao 2000 con ltima actualizacin en el ao 2009.
Fecha entra vigencia AO 2000 Fecha ltima actualizacin Octubre 2009 N de actualizaciones 3 Fecha Prxima revisin Octubre 2014
ACTUALIZADO POR: Dra. Loretto Vergara M. Jefe de Laboratorio y Banco de Sangre TM. Ximena Meza Coordinadora de Laboratorio
REVISADO POR: Gerencia de Calidad APROBADO POR:
_____________________ Dra. Loretto Vergara M. Jefa Laboratorio y Banco de Sangre
Hospital Padre Hurtado
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA-URGENCIA
NITROGENO UREICO DE
CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2
1.- Nitrgeno Ureico (BUN): Test enzimtico in vitro para la determinacin cuantitativa de urea en suero, plasma y orina humanos con analizadores analticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin: El rin tiene tres funciones principales: Eliminacin de las sustancias txicas producidas durante el metabolismo o ingeridas directamente Regulacin del medio lquido interno Produccin de hormonas Cuando los riones fallan aguda o crnicamente, los productos finales del metabolismo del nitrgeno se acumulan aumentando los niveles de nitrgeno no proteico. Esto se refleja en una elevacin del nitrgeno ureico en sangre (BUN) y de la creatinina. 1.1 Obtencin de la Muestra Suero, recogido en tubo sin anticoagulante Plasma obtenido de tubo con heparina de litio, sodio o EDTA potsico Orina sin aadir conservante.
1.2 Reactivos: Listos para el uso R1: Tampn/ NADH. R2: Tampn/enzimas/sustrato La estabilidad de los reactivos una vez abiertos es: R1: 28 das en refrigeracin. R2: 28 das en refrigeracin. 1.3 Principio del Test: Test UV cintico A la muestra se adiciona R1 (tampn /NADH). Luego de adiciona R2 (tampn/enzima/substrato) iniciando la reaccin: La urea es hidrolizada por la ureasa a CO2 y amoniaco. Urea + H2O --- ureasa ----2 NH4 + CO2
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA-URGENCIA
NITROGENO UREICO DE
A continuacin, el amoniaco formado reacciona con - oxoglutarato y NADH bajo la accin de la GLDH formndose glutamato y NAD+. A continuacin, la disminucin de la extincin debida al consumo del NADH se mide cinticamente a una longitud de onda de 340nm y 700 nm. 1.4 Rango de Referencia Urea Suero/Plasma: 10-50 mg/dL Orina matinal: 847-2967 mg/dL Orina de 24 hrs.: 10-35 g/ 24hrs. BUN Suero/Plasma: Orina de 24 hrs. 1.5
6-20 mg/dL (adultos) 4-19 mg/dL (nios) : 12-20 g/ 24hrs.
Interferentes
Iones amonio endgenos interfieren en la determinacin del BUN. No existe interferencia significativa con hemlisis, ictericia y lipemia (hasta 2000 mg/dL).
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA
DE
GLUCOSA (GLUCOSA HK)
2.- Glucosa: Test enzimtico in vitro para la determinacin cuantitativa de la glucosa en suero y plasma humanos con autoanalizadores de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin El diagnstico de los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono se apoya en parte en la medicin de la glucosa plasmtica, ya sea en ayunas o tras estimulacin o pruebas de supresin. Los resultados de la glucosa plasmtica pueden clasificarse como hiperglicmicos o hipoglicmicos. Existe una larga lista de enfermedades y sndromes que se asocian con un nivel elevado de glucosa plasmtica en ayunas. La hiperglicemia puede estar dada por una ausencia total de secrecin de insulina, lo que ocurre en ocasiones tras una prencreatectoma total o presentarse en forma intermitente durante periodos de estrs , como sucede por ejemplo tras una infeccin grave, deshidratacin o embarazo. La hiperglicemia puede ser secundaria a otras enfermedades endocrinolgicas o incluso a un anticuerpo contra el receptor insulnico. La hipoglucemia se define como un sndrome caracterizado por bajos niveles plasmticos de glucosa en asociacin con un grupo de sntomas que se alivian con la ingesta de alimentos o hidratos de carbono. El sndrome hipoglicmico puede presentarse sin existir una lesin anatmica y con un nivel normal de glucosa plasmtica en ayunas ( por ejemplo: hipoglucemia reactiva); o con bajos niveles plasmticos de glucosa en ayunas (hipoglucemia inducida por alcohol o por frmacos). Tambin se puede presentar un hipoglucemia cuando existe una lesin anatmica (Insulinoma, enfermedades hepticas graves, etc). 2.1 Obtencin de la Muestra: Suero, obtenido en tubos sin anticoagulante. Plasma con heparina o EDTA. Plasma con fluoruro o acetato de yodo.
2.2 Reactivos: Listo para el uso R1: Tampn MES: 5.0 mmol/L, pH 6.0; Mg2+: 24mmol/L; ATP:>4.5 mmol/L; NADP:>7.0 mmol/L; conservante. R2: Tampn HEPES: 200 mmol/L, pH 8.0; Mg2+: 4 mmol/L; HK(levadura): >300ukat/L; G-6-PDH(E. coli): >300ukat/L; conservante. Estabilidad del reactivo una vez abierto refrigerado en el analizador 8 semanas.
DE
GLUCOSA (GLUCOSA HK)
2.3 Principio del Test: Test por radiacin ultravioleta. Mtodo de referencia enzimtico empleando hexoquinasa La hexoquinasa cataliza la fosforilacin de la glucosa a glucosa -6-fosfato por ATP. Glucosa +NADP+ ----HK------> G-6-P + ADP La glucosa -6- fosfato deshidrogenada oxida el glucosa -6-fosfato en presencia de NADP a gluconato-6fosfato. No se oxidan otros hidratos de carbono. La velocidad de formacin de NADPH durante la reaccin es directamente proporcional a la concentracin de glucosa y puede medirse fotomtricamente, entre 340/700nm. G-6-P + NADP+ ----G-6-PDH----> gluconato 6-P + NADPH + H
2.4 Rango de Referencia suero/plasma Adulto : 70-105 mg/dL Nios : 60-110 mg/dL Neonatos: 40-60 mg/dL
2.5 Interferentes No presenta interferencias significativas por bilirrubinas conjugada hasta aprox 60 mg/dL y bilirrubina no conjugada hasta 60 mg/dL. No presenta interferencia significativa por lipemia ni hemlisis.
DE
BILIRRUBINA TOTAL BILIRRUBINA DPD
3.- Bilirrubina Total: Test in vitro para la determinacin cuantitativa de bilirrubina total en suero y plasma de adultos y neonatos en analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin La bilirrubina se forma en el sistema reticuloendotelial durante la degradacin de los eritrocitos maduros. El grupo hemo procedente de la hemoglobina y de otras hemoprotenas es separado y metabolizado a bilirrubina que se transporta al Hgado en forma de complejo con la albmina srica. En el hgado, la bilirrubina se conjuga al cido glucurnico para ser solubilizada y posteriormente transportada a travs del conducto biliar, siendo eliminada por el tacto digestivo. La produccin de bilirrubina en lo adultos sanos alcanza un promedio de 250-350 mg por da. La hiperbilirruninemia por bilirrubina no conjugada (BNC indirecta) aparece en la hiperproduccin de pigmentos en trastornos hemolticos y cuando hay una captacin o conjugacin heptica defectuosa. Durante la hemlisis, la elevacin de BNC va acompaada de una elevacin comparable de de bilirrubina conjugada en la bilis, reflejando un aumento en el ritmo de conjugacin por el hgado. La actividad de la enzima bilirrubin- UDP- glucoroniltransferasa heptica y la excrecin de glucornidos biliares estn reducidas en algunos casos del Sndrome de Gilbert y en la enfermedad de CriglerNajjar. La bilirrubina no conjugada est aumentada, con un a concentracin normal de bilirrubina conjugada. La bilirrubina saciada a la enfermedad heptica est producida por un deterioro de la excrecin de los pigmentos conjugados, lo que aumenta su reflujo hacia el suero. La bilirrubina conjugada representa del 7580% de la elevacin de la bilirrubina, pero la bilirrubina no conjugada constituye solamente una pequea fraccin del resto.
3.1 Obtencin de la Muestra: Suero obtenido con tubo estndar de muestra (tapa roja) Plasma con heparina o EDTA. Conservar la muestra alejada de la luz y procesar de inmediato.
3.2
Reactivos:
R1: Detergente/cido clorhdrico R2: Diazorreactivo (3,5-sal de diclorofenildiazonio).
DE
BILIRRUBINA TOTAL BILIRRUBINA DPD
Preparacin de los reactivos: R1y R2 El contenido est listo para el uso Estabilidad del reactivo: Abierto y refrigerado en el analizador: 12 semanas. 3.3 Principio del Test: Test colorimtrico.
En presencia de un disolvente apropiado, la bilirrubina total se acopla a un in diazonio en un medio fuertemente cido, con la sal de 3,5-diclorofenildiazonio (DPD) a la azobilirrubina correspondiente. Bilirrubina + in diazonio ----cido------
Azobilirrubina
La intensidad del rojo del pigmento azoico formado es directamente proporcional a la concentracin de la bilirrubina total y se mide fotomtricamente. 3.4 Rango de Referencia
Adultos: hasta 1.1 mg/dL. Nios : hasta 1.1 mg/dL. 3.5 Interferentes y Limitaciones En casos aislados, en los que la bilirrubina total de una muestra se comporta como bilirrubina directa, se miden valores de bilirrubina directa algo mayores que la bilirrubina total. La lipemia interfiere en el test
La hemlisis interfiere en muestras de adultos, pero no interfiere en muestras neonatales hasta aprox. 350 mg/dL de hemoglobina.
DE
BILIRRUBINA DIRECTA MTODO DIAZO
4.- Bilirrubina Directa Test in vitro para la determinacin cuantitativa de bilirrubina directa en suero y plasma de adultos y neonatos en analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin La bilirrubina se forma en el sistema reticuloendotelial durante la degradacin de los eritrocitos maduros. El grupo hemo procedente de la hemoglobina y de otras hemoprotenas es separado y metabolizado a bilirrubina que se transporta al Hgado en forma de complejo con la albmina srica. En el hgado, la bilirrubina se conjuga al cido glucurnico para ser solubilizada y posteriormente transportada a travs del conducto biliar, siendo eliminada por el tacto digestivo. La produccin de bilirrubina en lo adultos sanos alcanza un promedio de 250-350 mg por da. La hiperbilirruninemia por bilirrubina no conjugada (BNC indirecta) aparece en la hiperproduccin de pigmentos en trastornos hemolticos y cuando hay una captacin o conjugacin heptica defectuosa. Durante la hemlisis, la elevacin de BNC va acompaada de una elevacin comparable de de bilirrubina conjugada en la bilis, reflejando un aumento en el ritmo de conjugacin por el hgado. La actividad de la enzima bilirrubin- UDP- glucoroniltransferasa heptica y la excrecin de glucornidos biliares estn reducidas en algunos casos del Sndrome de Gilbert y en la enfermedad de CriglerNajjar. La bilirrubina no conjugada est aumentada, con un a concentracin normal de bilirrubina conjugada. La bilirrubina saciada a la enfermedad heptica est producida por un deterioro de la excrecin de los pigmentos conjugados, lo que aumenta su reflujo hacia el suero. La bilirrubina conjugada representa del 7580% de la elevacin de la bilirrubina, pero la bilirrubina no conjugada constituye solamente una pequea fraccin del resto. 4.1 Obtencin de la Muestra Suero, plasma heparinizado o EDTA. Efectuar determinacin inmediatamente. 4.2 Reactivos R1: cido sulfanlico: 35 mmol/L; HEDTA: 4,0 mmol/L; cido oxlico: 40 mmol/L, pH 1,2. R2: Nitrito de sodio: 3,9 mmol/L, pH 6,0. Preparacin de los reactivos: R1y R2 El contenido est listo para el uso
DE
BILIRRUBINA DIRECTA MTODO DIAZO
Estabilidad del reactivo: Abierto y refrigerado en el analizador: 12 semanas.
4.3 Principio del Test La bilirrubina conjugada y la bilirrubina (bilirrubina directa) reaccionan directamente con el cido sulfanlico diazotado en un tampn cido para (dar un azolorante) formar azobilirrubina de color rojo cido sulfanlico + NaNO2 ------cido sulfanlico diazotado azobilirrubina
Bilirrubina + cido sulfanlico diazotado -------
La intensidad cromtica es proporcional a la concentracin de la bilirrubina directa en la muestra y se determina midiendo el incremento de la absorbancia.
4.4 Valores de Referencia Adultos y Nios: hasta 0.3 mg/dL 4.5 Interferentes y Limitaciones Hemlisis Lipemia Proteger la muestra de la luz y el sol
DE
FOSFATASA ALCALINA ALP2 acc. to IFCC
5.- Fosfatasa Alcalina Test in vitro para la determinacin cuantitativa de la fosfatasa alcalina en suero y plasma humanos con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin La actividad de la fosfatasa alcalina est presente en varios tejidos, que incluyen hgado, hueso, rin, intestino y placenta. La fosfatasa alcalina en suero est presente n isoenzimas no fijadas o en complejos con lipoprotenas. Su papel exacto difiere de u lugar a otro, y en el hgado su papel no est claro. La mayor parte de la FA en suero, en los pacientes normales, est constituido por FA heptica y sea. La fosfatasa alcalina se eleva rpidamente y sus valores pueden exceder diez veces el lmite superior de normalidad, cuando el flujo de bilis est deteriorado o se desarrollan lesiones expansivas, aunque stas sean pequeas, pero numerosas, como granulomas, o grandes y nicas como metstasis tumoral. Cuando el flujo de bilis se detiene, ya sea por una colestasis intraheptica u obstructiva, la fosfatasa alcalina se eleva hasta el doble del lmite superior normal o ms, siguiendo de manera aproximadamente paralela la tasa de elevacin de bilirrubina en suero. La fosfatasa alcalina est elevada moderadamente tambin en los casos de ictericia producidas por lesiones hepticas. Cuando la colestasis se resuelve, la fosfatasa alcalina cae hasta niveles normales, pero ms lentamente que la bilirrubina. 5.1 Obtencin de la Muestra Suero recogido en tubos estndares de muestra (sin anticoagulante). Plasma con heparina de litio, sodio o amonio. 5.2 Reactivos R1: 2-amino-2 metil-1- propanol: 1,724 mol/L, pH 10,44, acetato de magnesio: 3,83 mmol/L, sulfato de zinc: 0,766 mmol/L; cido N-(2-hidroxietil) etilendiaminotriactico: 3,8 mmol/L. R2: p-nitrofenilfosfato: 132,8 mmol/L; pH 8,44. Preparacin de los reactivos: R1y R2 El contenido est listo para el uso Estabilidad del reactivo: Abierto y refrigerado en el analizador: 12 semanas.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 5.3 Principio del Test
DE
FOSFATASA ALCALINA ALP2/ acc. to IFCC Gen.2
Test colorimtrico segn un mtodo estandarizado. P-nitrofenilfosfato + H2O ----ALP----- fosfato + p - nitrofenol
Mg2+ + Zn+
En presencia de iones de magnesio y de cinc, las fosfatasas desdoblan, el p- nitrofenilfosfato en fosfato y pnitrofenol. El p-nitrofenol liberado es directamente proporcional a la actividad cataltica de la fosfatasa y se mide fotomtricamente, midiendo el aumento de la absorbancia. 5.4 Rango de Referencia Adultos: 37-117 U/L ( 37C) Nios (3-15 aos): 90-300 U/L (37C) 5.5 Interferentes y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada hasta aprox. 25 mg/dL. Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 1000 mg/dL. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 2000 mg/dL.
DE
ALANIN AMINO TRANSFERASA (ALTL/GPT) CON PIRIDOXAL FOSFATO
6.- Alanina-amino-transferasa (ALT/GPT) Test in vitro para la determinacin cuantitativa de alaninaamino-transferasa (ALT) en suero y plasma humanos con analizadores automticos de Qumica Clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Esta enzima cataliza la transferencia de un grupo amino de un aminocido a un hidrato de carbono para formar un aminocido diferente. La aspartato aminotransferasa (AST/GOT) y alann aminotransferasa (ALT/GPT) han sido utilizadas como indicadores de lesin hepatocelular. Las enzimas tienen vidas medias en sangre de 17 y 47 respectivamente. La ALT se encuentra primordialmente en el citoplasma del hepatocito. Tericamente, en una lesin hepatocelular leve, cuando la membrana plasmtica est daada, se liberan al suero AST y ALT provenientes del citoplasma de la clula. En una lesin hepatocelular ms grave, la lesin ya es a nivel de la mitocondria del hepatocito, lo que provoca la liberacin de la AST desde la mitocondria, elevando la proporcin AST: ALT. La ALT suele estar aumentada en mayor grado que la AST en los pacientes con hepatitis vrica aguda o crnica. La proporcin ASAT: ALAT es a menudo menor de 1 en pacientes con lesin hepatocelular aguda. La actividad de la ALT es ms especfica para detectar enfermedad heptica en los pacientes no alcohlicos y asintomticos 6.1 Obtencin de la Muestra Suero recogido en tubos estndares, sin anticoagulante. Plasma con heparina o EDTA. 6.2 Reactivos R1: Tampn TRIS/enzima L -alanina/albmina (bovina). R2: 2- oxoglutarato.
Preparacin de los reactivos: R1y R2 El contenido est listo para el uso Estabilidad del reactivo: Abierto y refrigerado en el analizador: 12 semanas.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 6.3 principio del Test
DE
ALANIN AMINO TRANSFERASA (ALTL/GPT) CON PIRIDOXAL FOSFATO
El presente ensayo sigue las recomendaciones formuladas por la IFCC pero ha sido mejorado en cuanto al rendimiento y la estabilidad. La ALT/GPT cataliza la reaccin entre la L-alanina y el 2-oxoglutarato. El piruvato formado se reduce por NADH en una reaccin catalizada por la lactato deshidrogenada (LDH) para formar L- lactato y NAD+. L-Alanina + --2-oxoglutarato ----ALT--Piruvato + NADH + H+ ----LDH-piruvato + L-glutamato L- lactato + NAD+
La velocidad de oxidacin de NADH, es directamente proporcional a la actividad cataltica de la ALT. Se determina midiendo la disminucin de la absorbancia. 6.4 Rango de Referencia Varones: hasta 41U/L (37 C) Mujeres: hasta 31 U/L (37C) 6.5 Interferentes y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox. 60 mg/dL Sin interferencias significativas por 100 mg/dL de hemoglobina. La contaminacin por eritrocitos puede provocar valores elevados. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 1000 mg/dL
DE
ASPARTATO AMINO TRANSFERASA (ASTL/GOT) CON PIRIDOXAL FOSFATO
7.- Aspartato-amino-transferasa (AST/GOT) Test enzimtico in vitro para la determinacin cuantitativa de la aspartato-amino-transferasa (AST) en suero y plasma humanos con analizadores automticos de Qumica Clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). . Introduccin Esta enzima cataliza la transferencia de un grupo amino de un aminocido a un hidrato de carbono para formar un aminocido diferente. La aspartato aminotransferasa (AST/GOT) y alann aminotransferasa (ALT/GPT) han sido utilizadas como indicadores de lesin hepatocelular. Las enzimas tienen vidas medias en sangre de 17 y 47 respectivamente. La ASAT est presente en muchos rganos; aparte del hgado, incluyendo el corazn y el msculo. El 80 % de la AST de los hepatocitos est en las mitocondrias. Los pacientes con abuso crnico de alcohol, independiente del grado de su hepatopata subyacente, tienen elevaciones ms constantes de la ASAT mitocondrial que otros pacientes. La proporcin entre ASAT mitocondrial y ASAT total parece discriminar la hepatitis alcohlica de otras enfermedades hepticas. La ASAT se utiliza para vigilar la teraputica con frmacos potencialmente hepatotxicos. 7.1 Obtencin de la Muestra Suero, Obtenido de tubos estndares (sin anticoagulante) Plasma con heparina o EDTA 7.2 Reactivos R1: Tampn TRIS/enzima L- Aspartato, MDH (Microorganismos) LDH (Microorganismos); Albmina bovina. R2: 2-oxoglutarato; NADH. Preparacin de los reactivos: R1y R2 El contenido est listo para el uso Estabilidad del reactivo: Abierto y refrigerado en el analizador: 12 semanas
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 7.3 Principio del Test
DE
ASPARTATO AMINO TRANSFERASA (ASTL/GOT) CON PIRIDOXAL FOSFATO
El presente ensayo sigue las recomendaciones formuladas por la IFCC pero ha sido mejorado en cuanto al rendimiento y la estabilidad. La AST de la muestra cataliza la transferencia de un grupo amino entre la Laspartato y 2-oxoglutarato para obtener oxaloacetato y L-glutamato. A continuacin y en presencia de la malato deshidrogenasa (MDH), el oxaloacetato reacciona con NADH para formar NAD+ L-aspartato + --2-oxoglutarato ----AST---
oxaloacetato + L-glutamato
La enzima AST cataliza esta reaccin de equilibrio. En la reaccin indicadora asociada catalizada por la malatodeshidrogenasa se determina el aumento de oxaloacetato. Oxaloacetato + NADH + H+ ---MDH--L-malato + NAD+
Durante esta reaccin se oxida NADH a NAD. La velocidad de la oxidacin de NADH es directamente proporcional a la actividad cataltica de la AST .la que se determina fotomtricamente, midiendo la disminucin de la absorbancia. 7.4 Rango de Referencia Varones: hasta 38 U/L (37C) Mujeres: hasta 32 U/L (37C) 7.5 Interferentes y Limitaciones La hemlisis interfiere en el test, ya que la actividad de la AST se libera de los eritrocitos. Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox. 60 mg/dL. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta 1000 mg/dL
PROTEINAS TOTALES DE
8.- Protenas Totales Test in vitro para la determinacin cuantitativa de protenas totales en suero y plasma humanos con autoanalizadores automticos de qumica clnica. (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501).
Introduccin Las protenas plasmticas se sintetizan principalmente en el hgado, las clulas plasmticas, los ganglios linfticos, el bazo y la mdula espinal. En caso de enfermedad, tanto la concentracin de las protenas totales como sus fracciones individuales pueden divergir considerablemente de sus valores normales. La hipoproteinemia puede deberse a enfermedades y alteraciones como la hemorragia, el esprue, el sndrome nefrtico, quemaduras graves ,el sndrome de retencin de sales y Kwashiorkor(carencia aguda de protenas). La hiperproteinemia puede observarse en casos de deshidratacin severa y en casos de enfermedades como el mieloma mltiple. El porcentaje relativo de las protenas plasmticas puede modificarse al cambiar una sola fraccin de estas protenas. En este caso, la cantidad total de protenas frecuentemente se mantiene inalterada. La relacin entre albmina y globulina se usa frecuentemente como ndice de la distribucin entre las fracciones de albmina y globulina. Esta relacin sufre grandes alteraciones frente a afecciones como la cirrosis heptica, la glomerulonefrtis, el sndrome nefrtico, la hepatitis aguda, el lupus eritemetoso, as como en algunas infecciones agudas y crnicas. La medicin de la protena total se utiliza en el diagnstico y tratamiento de una variedad de enfermedades hepticas, renales, de la mdula sea as como de otros trastornos metablicos o nutricionales. 8.1 Obtencin de la Muestra Suero, obtenido en tubos estndar de muestra (tubo sin anticoagulante) Plasma con heparina o EDTA 8.2 Reactivos R1: Reactivo para blanco R2: Reactivo biuret Preparacin de los reactivos R1: El contenido est listo para el uso. R2: El contenido est listo para el uso.
PROTEINAS TOTALES DE
Conservacin y estabilidad de los reactivos R1 y R2: abierto en el compartimiento de refrigeracin del analizador 12 semanas. . 8.3 Principio del Test (prueba calorimtrica) En solucin alcalina, el cobre bivalente reacciona con el enlace peptdico de las protenas formando el color prpura caracterstico del complejo biuret. El tartrato sdico-potsico impide la precipitacin de hidrxido de cobre, mientras que el yoduro potsico se inhibe la autoreduccin del cobre. Protena + Cu2 + --SOLUCIN
----
Complejo Cu-protena
ALCALNA
La intensidad cromtica es directamente proporcional a la concentracin de protenas que puede medirse fotomtricamente.
8.4 Rango de Referencia Adultos : 6.6 8.7 g/dL Nios > 3 aos: 6.0 8.0 g/dL 8.5 Interferentes y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox. 25 mg/dL. Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 650 mg/dL Sin Interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 2000 mg/dL
DE
ALBUMINA (VERDE DE BROMOCRESOL)
9.- Albmina Test in vitro para la determinacin cuantitativa de albmina en suero y plasma humanos con autoanalizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501).
Introduccin Adems de la informacin aportada por la cuantificacin de las protenas totales, la cuantificacin de la albmina proporciona informacin respecto al estado de nutricin, a la capacidad sintetizadora del hgado o a la nefropata por prdida de protenas. Permite tambin al mdico interpretar los niveles altos o bajos de calcio y magnesio, ya que la albmina fija alrededor de la mitad de cada uno de estos iones. Los clculos de la diferencia entre la protena total y ala albmina dan el valor de todas las globulinas, una mezcla de las otras fracciones que individualmente pueden elevarse hasta varias veces en los trastornos graves. 9.1 Obtencin de la Muestra Suero, recogido en tubos estndares de muestra, sin anticoagulante. Plasma con heparina o EDTA. Separar el suero o el plasma del coagulo sanguneo en el plazo de 1 hr. Y efectuar la determinacin inmediatamente. Las muestras que contienen precipitado deben centrifugarse antes de efectuar el test. 9.2 Reactivos R1: Tampn citrato, conservante R2: Tampn citrato, verde de bromocresol y conservante. Preparacin de los reactivos: R1: Reactivo listo para el uso R2: Reactivo listo para el uso
Conservacin y estabilidad de los reactivos: R1 y R2 Abierto en el compartimiento de refrigeracin del analizador 12semanas.
DE
ALBUMINA (VERDE DE BROMOCRESOL)
9.3 Principio del Test Test color con mtodo de punto final Con un pH de 4.1 la albmina tiene carcter catinico suficiente como para formar un compuesto con el colorante aninico verde de bromocresol (BCG) formando un complejo azul verdoso. Albmina +BCG ----pH 4,1----
complejo albmina-BCG
La intensidad cromtica del color azul verdoso es directamente proporcional a la concentracin de albmina y se mide fotomtricamente. 9.4 Rango de Referencia Adultos : 3.4 4.8 g/dL R. Nacidos 0 4 das: 2.8 4.4 g/dL 4das 14 aos : 3.8 5.4 g/dL 14 18 aos : 3.2 4.5 g/dL 9.5 Interferencias y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox. 60 mg/dL. Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 1000 mg/dL. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta 2000 mg/dL.
ACIDO URICO DE
10.- cido rico Test enzimtico in vitro para la determinacin cuantitativa de cido rico en suero, plasma y orina humanos con analizadores automticos de qumica clnica. Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin El cido rico es el principal producto del metabolismo de las purinas en el hombre , y se forma a partir de la xantina por accin de la xantinooxidasa. El adulto medio tiene un contenido total aproximado de 1.2 gr. de cido rico en el cuerpo, lo cual puede considerarse una reserva miscible con un recambio alto. El cido rico de esta reserva procede de tres orgenes: 1. 2. 3. catabolismo de nucleoprotenas ingeridas catabolismo de nucleoprotenas endgenas transformacin directa de los nucletidos endgenos de la purina.
Aproximadamente, un 60% de esta reserva es repuesta diariamente por formacin y excrecin concomitante. La mayor parte del cido rico tiene lugar en el hgado, el cual presenta gran actividad xantinooxidasa. Es probable que la mayor parte o la totalidad de la excrecin restante tenga lugar a travs de las secreciones biliares, pancreticas y gastrointestinales con posterior degradacin por la flora intestinal. Entre las etiologas ms comunes de la hiperuricemia se cuentan el fallo renal, la cetoacidosis, el exceso de lactato y el uso de diurticos. La hiperuricemia tiene tambin una relacin positiva con la hiperlipidemia, obesidad, aterosclerosis, diabetes mellitus, hipertensin, clase social, ejercicio, etc. La gota es un trastorno del metabolismo de las purinas o de la excrecin renal del cido rico caracterizado por: 1. Hiperuricemia 2. Precipitacin de urato monosdico en forma de depsitos por todo el cuerpo, excepto por el sistema nervioso central, aunque muestra una especial predileccin por las articulaciones y el cartlago peri articular, el hueso, las bolsas sinoviales y el tejido subcutneo 3. Ataques clnicos recidivantes de artritis que responden tpicamente responde a la colchicina o a los antiinflamatoriosno esteroidales. 4. Nefropata y a menudo nefrolitiasis.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 10.1 Obtencin de la muestra:
ACIDO URICO DE
Suero obtenido en tubos estndar de muestra sin anticoagulante Plasma con heparina o EDTA. Estabilidad: 5 das a 2-8 C; 6 meses a - 20C 10.2 Reactivos R1: Tampn/ enzima/ TOOS* Tampn Fosfato: 0.05 mol/L, pH 7.8; TOOS: 7 mmol/L; ter poligliclico ascorbato-oxidasa >5U/mL.
de alcohol graso: 4.8 %;
R2: Tampn /enzima/ 4-aminofenazona Tampn fosfato: 0.1 mol/L, pH 7.8; hexacianoferrato de potasio (II): 0.3 mmol; 4-aminofenazona > 3 mmol/L, uricasa > 0.5 U/mL; peroxidasa (POD)> 1 U/mL. Preparacin de los reactivos R1 y R2: El contenido del frasco est listo para el uso Conservacin y estabilidad de los reactivos R1 y R2: abierto en el compartimento de refrigeracin del analizador 8 semanas. 10.3 Principio del Test Mtodo enzimtico-colorimtrico. A la muestra se le adiciona el reactivo 1 (tampn / enzima/ TOOS). Se le adiciona el reactivo 2 (tampn/ enzima/ 4-aminofenazona) y se inicia la reaccin. 2H2O + O2 ---Uricasa---alantona + CO2 + H2O2
El cido rico es desdoblado por la uricasa en alantona y peroxido de hidrgeno. 2 H2O2 + H+ + TOOSa + 4- aminofenazona ------Peroxidasa---- colorante de quinona-diimina + 4 H2O
ACIDO URICO DE
10.3 Principio del Test Mtodo enzimtico-colorimtrico. A la muestra se le adiciona el reactivo 1 (tampn / enzima/ TOOS). Se le adiciona el reactivo 2 (tampn/ enzima/ 4-aminofenazona) y se inicia la reaccin. 2H2O + O2 ---Uricasa---alantona + CO2 + H2O2
El cido rico es desdoblado por la uricasa en alantona y peroxido de hidrgeno. 2 H2O2 + H+ + TOOSa + 4- aminofenazona ------Peroxidasa---- colorante de quinona-diimina + 4 H2O TOOSa = N- etil- N-(2- hidroxi3sulfopropil)3-metilanilina La intensidad cromtica del colorante rojo formado es directamente proporcional a la concentracin del cido rico y se mide fotomtricamente. 10.4 Rango de Referencia Suero/ plasma: Hombres: 3.4 7.0 mg/dL Mujeres: 2.4 5.7 mg/dL Matinal: 37 92 mg/dL De 24 horas: 200-1000 mg/24 horas
Orina:
10.5 Interferencias y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox 40 mg/dL Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 1000 mg/dL Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 2000 mg/dL El cido ascrbico < 30 mg/dL no interfiere en el test. Se han ensayado in vitro medicamentos y se han encontrado interferencias (valores de cido rico demasiado bajos) en el intervalo teraputico por - metildopa, desferoxamina, y dobesilato de calcio. La uricasa reacciona especficamente con el cido rico. Otros derivados de purina pueden inhibir la reaccin del cido rico.
CREATININA JAFFE METODO COMPENSADO DE
11.- Creatinina Test cintico in vitro para la determinacin cuantitativa de creatinina con compensacin en suero, plasma y orina con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin La sustancia endgena ms utilizada en la valoracin clnica de la filtracin glomerular es la creatinina. La creatinina es un producto de degradacin de la creatina corporal, el cual se forma a un ritmo relativamente constante en el msculo y que corresponde al principal depsito del fosfato de creatina. As, la produccin de creatinina y su excrecin se relacionan directamente con la masa muscular. 11.1 Obtencin de la Muestra
Suero recogido en tubos estndar de muestra, sin anticoagulante. Plasma con heparina o EDTA Estabilidad: 7 das a 2-8 C Es posible congelar las muestras para almacenarla a largo plazo Orina: recoger la orina sin aadir conservante Estabilidad: 4 das a 2-8 C Es posible congelar la muestra para almacenarla a largo plazo 11.2 Reactivos
R1: Hidrxido de Potasio900 mol/L; fosfato 135mmol/L; pH> 13,5 R2: c. Pcrico 38 mmol/L Preparacin de los reactivos El contenido est listo para el uso Conservacin y estabilidad R1 y R2: abierto en el compartimiento de refrigeracin del analizador 12 semanas.
CREATININA JAFFE METODO COMPENSADO DE
9.3 Principio del Test: test color cintico Reaccin cintica Jaffe amortiguada sin desproteinizacin. Creatinina + cido pcrico ----SOLUCIN ALCALINA----complejo creatinina- cido pcrico
En solucin alcalina, la creatina forma con el picrato un complejo de color amarillo- rojizo. Su intensidad cromtica es directamente proporcional a la concentracin de creatinina y se mide fotomtricamente. 10.4 Rango de Referencia 1.-Suero/plasma Hombres: 0.70 1.20 mg/dL Mujeres : 0.50 - 0.90 mg/dL 2.-Primera orina matinal Hombres: 39 259 mg/dL Mujeres : 28 217 mg/dL 10.5 Interferencias y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada hasta aprox 10 mg/dL Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 750 mg/dL 750 mg/dL. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 2000 mg/dL Sin interferencia significativa por acetona hasta 50 mg/dL, acetoacetato hasta 20 mmol/L, y hidroxibutirato hasta 25 mmol/L. Los antibiticos con cefalosporina llevan a valores falsamente positivos.
CALCIO DE
11.- Calcio Test in vitro para la determinacin cuantitativa de calcio en suero, plasma y orina humanos con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin El calcio ocupa el quinto lugar entre los ms abundantes elementos minerales del cuerpo humano. Aproximadamente, el esqueleto contiene un 98% del calcio presente en el adulto en forma de hidroxiapatita, formada por una res cristalina compuesta de calcio, fsforo e hidrxido. Del calcio restante, alrededor de la mitad se halla presente en el lquido extracelular y el resto, en una diversidad de tejidos, particularmente en el msculo esqueltico. El hecho de que menos de un 1% de la reserva esqueltica total del calcio puede intercambiarse fcilmente con el lquido extracelular reviste una importancia crtica en relacin con la homeostasis del calcio. Adems de la importancia en la mineralizacin del esqueleto, el calcio desempea un papel vital en procesos como la coagulacin de la sangre, conduccin neuromuscular, el mantenimiento del tono normal y la excitabilidad del msculo esqueltico y cardiaco. El calcio est tambin implicado en la sntesis glandular y la regulacin de las glndulas exocrinas y endocrinas, la preservacin de la integridad de la membrana celular y su permeabilidad. El calcio existe en el suero en tres formas distintas: 1. Calcio libre o ionizado, que es la forma fisiolgicamente activa y representa el 50% del calcio total. 2. Alrededor del 5% del calcio total forma complejos con toda una variedad de aniones, particularmente fosfato y citrato. 3. El 45% restante de calcio est fijado a protenas del plasma, es parcialmente a la albmina, pero tambin a las globulinas en un grado bastante limitado. 11.1 Obtencin de la Muestra 1.-Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) 2.-Plasma con heparina. El plasma debe analizarse inmediatamente. No emplear plasma con oxalato, EDTA o citrato 3.- Orina de 24 horas: introducir 10 ml de cido clorhdrico (6mol/L) en un frasco de recogida o acidificar la orina (pH < 2.0) despus de recogerla para disolver las sales de calcio.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 11.2 Reactivos
CALCIO DE
R1: CAPS (Acido 3-[cicloexilamino] -1-propanosulfnico):525 mmol/L; NaOH: 400mmol/L; pH 11,3. R2: o- cresolftalena complexona: 0.5 mmol/L; 8-hidroxiquinolina: 30.0 mmol/L. Preparacin de los reactivos: El contenido est listo para el uso Conservacin y Estabilidad de los Reactivos Abierto, en el compartimiento de refrigeracin del analizador 12 semanas. 11.3 Principio del Test Mtodo segn Schwarzenbach con o-cresolftalena complexona. Los iones de calcio reaccionan con la o-cresolftalena complexona(o-CPC) en condiciones alcalinas para formar un complejo color violeta. Las interferencias por hierro y magnesio se minimizan por la adicin de 8hidroxiquinolina.
Ca2+ + o- CPC: ---pH alcalino-- complejo de calcio o- CPC La intensidad cromtica del complejo violeta formado es directamente proporcional a la concentracin de calcio y se mide fotomtricamente. 11.4 Rango de Referencia
Suero/plasma: 8.6 10.2 mg/dl Orina 24 hrs.: 100 320 mg/24 hrs. (con alimentacin normal) 11.5 Interferencias y Limitaciones
Suero/ plasma: Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox. 60 mg/dL Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 1000 mg/dL. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta 2000 mg/dL.
FOSFORO DE
12.- Fsforo test in vitro para la determinacin cuantitativa de fsforo en suero, plasma y orina humanos con analizadores automticos de qumica clnica. Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin El fsforo es un elemento muy abundante en el cuerpo humano. Alrededor del 85% del fsforo del adulto se hallan presentes en el hueso en forma de hidroxiapatita. El fsforo restante se halla en su mayor parte combinado con lpidos, protenas, hidratos de carbono y otras sustancias orgnicas, para desempear papeles vitales como fosfolpidos, cidos nucleicos, nucletidos, constituyentes de las membranas y del citoplasma celular y compuestos importantes en el almacenamiento e intercambio de energa. 12.1 Obtencin de la Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra, sin anticoagulante Plasma con heparina o EDTA Estabilidad: 8 horas a 20- 25 C 24 horas a 2 8 C 1 ao a 20C con una sola congelacin 11.2 Reactivos R1: Acido sulfrico: 0.36 mol/L; detergente R2: Molibdato amnico: 3.5 mmol/L: cido sulfrico: 0.36 mol/L, cloruro de sodio 150 mmol/L Preparacin de los Reactivos: El contenido est listo para el uso Estabilidad de los Reactivos Abierto en el compartimento de refrigeracin del analizador 12 semanas.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 11.3
FOSFORO DE
Principio del Test Molibdato UV.
El fosfato inorgnico forma, con el molibdato de amonio en presencia de cido sulfrico, un complejo de fosfomolibdato de amonio con la frmula (NH4)3[PO4 (MoO3)12]. Este complejo se mide fotomtricamente en la zona ultravioleta (340 nm)
Fosfato + molibdato amnico ----H2 SO4----11.4 Rango de Referencia
fosfomolibdato de amonio (NH4)3[PO4 (MoO3)12].
Suero/ plasma: 2.7 4.5 mg/dL Orina matinal: 40 136 mg/dL Orina 24 hrs: 400 1300 mg/24 horas 11.5 Interferencias y Limitaciones
Suero/ Plasma Sin interferencia significativa por ictericia hasta aprox. 56 mg/dL de bilirrubina conjugada Interferencia positiva significativa hasta aprox. 300 mg/dL de hemoglobina. Esta interferencia se debe al fosfato inorgnico que se forma por accin de las fosfatasas sobre el fosfato orgnico. Los fosfatos se liberan al hemolizarse los eritrocitos. Sin interferencia significativa hasta aprox. 2500 mg/dL de triglicridos. Se han analizado in vitro 35 frmacos de uso frecuente y no se han encontrado interferencias.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABOARATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA
MAGNESIO DE
12.- Magnesio test in vitro para la determinacin cuantitativa de magnesio en suero, plasma y orina humanos con analizadores automatizados de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501).
Introduccin El magnesio es uno de los cationes ms abundantes del cuerpo y resulta esencial para muchos procesos fisicoqumicos. Como catin intracelular, el magnesio ocupa el segundo lugar en abundancia despus del potasio, y su concentracin en el lquido intracelular es aproximadamente diez veces superior a la del lquido extracelular. El magnesio es un activador de diversas enzimas que incluyen fosfatasas, transfosforilasas, pirofosfatasas, carboxilasas y hexoquinasa. Asimismo tambin es esencial para la preservacin de la estructura macromolecular del DNA y RNA y ribosomas.
12.1 Obtencin de la Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante). Plasma con heparina de litio. Orina. No pueden utilizarse muestras hemolizadas.
12.2 Reactivos R1: TESa : 145mol/L; pH 7,5; clorofosfonazo III: 0,2 mmol/L; EGTA: 10 mmol/L R2: TES: 10 mmol/L; pH 7,5; EDTA: 16 mmol/L. TESa: a) cido N-tris-(hidroximetil)metil-2-aminoetanosulfnico. Preparacin de los reactivos: El contenido est listo para el uso Conservacin y estabilidad Abierto en el compartimiento de refrigeracin del analizador 12 semanas.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABOARATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA
MAGNESIO DE
12.3 Principio del Test Mtodo colorimtrico empleando clorofosfonazo-III. El clorofosfonazo III (CFZ III) se une al Magnesio y produce un incremento en la absorbancia. El EGTA [cido etilenbis (oxietilenonitrilo) tetraactico] Se emplea para impedir que el calcio se fije al CPZ III Mg2++ CPZ III ----pH7,5-----
Compuesto Mg-CPZ III
Las interferencias inespecficas en la absorbancia se reducen por la incorporacin de EDTA (cido etilendiamintetractico), que elimina el magnesio del complejo magnesio-CPZ III y permite la medicin exacta del blanco de la muestra. Compuesto Mg-CPZ III + EDTA ----pH7,5----Mg-EDTA + CPZ III
La diferencia de la absorbancia entre el complejo magnesio-CPZ III y el complejo tratado con EDTA corresponde a la absorbancia causado por el magnesio solo. 12.4 Rango de Referencia
Suero/ plasma: 1.58 2.55 mg/dL Orina 24 horas: 60 210 mg/24 horas 12.5 Interferentes y Limitaciones
Suero/ plasma: Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada hasta aprox. 65 mg/dl y bilirrubina no conjugada hasta aprox. 37 mg/dL La hemlisis interfiere en el test ya que en este caso el magnesio es liberado de los eritrocitos. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 800 mg/dL En 34 frmacos de uso frecuente ensayados in vitro no se encontr interferencia.
GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA DE
13.- Gamma-glutamiltransferasa (GGT) Test in vitro para la determinacin cuantitativa de gammaglutamiltranferasa (GGT) en suero y plasma humanos con los analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Esta enzima cataliza la transferencia de un grupo -glutamil, procedente de un pptido -glutamil, a otro pptido a un aminocido. Est presente en la membrana celular y en las fracciones microsomales y puede estar implicada en el transporte de aminocidos a travs de las membrana celulares. El rin y, en menor grado, el hgado y el pncreas son ricos en GT. La principal utilidad clnica de la medicin de la GGT reside en el estudio de la enfermedad hepatobiliar. Los valores encontrados son paralelos a los de la fosfatasa alcalina en la ictericia obstructiva (postheptica) y la enfermedad infiltrativa del hgado. Puesto que la GGT es una enzima microsmica, sus niveles hsticos aumentan en respuesta a la induccin de dichas enzimas. Este fenmeno podra explicar los elevados niveles sricos en alcohlicos crnicos y en pacientes que toman drogas hepatotxicas. 13.1 Obtencin de la Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra, sin anticoagulante Plasma con heparina de litio, amonio, sodio, o EDTA tripotsico. Estabilidad: 7 das a 20 25 C 6 das a 2 8 C 1 ao a 20C 13.2 Reactivos R1: Tampn TRIS: 492 mmol/L, pH 8.25 (25C); glicilglicina: 492 mmol/L, conservante. R2:L--glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida 22,5mmol/L, acetato: 10 mmol/L; pH 4.5 (25C),: Preparacin de los reactivos: El contenido est listo para el uso Conservacin y estabilidad de los reactivos Abierto en el compartimiento de refrigeracin del analizador 12 semanas.
GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA DE
13.3 Principio del Test color enzimtico La muestra se mezcla con el R1 (tampn glicina). Posteriormente se adiciona el R2 dando inicio a la reaccin.
GT
L--glutamil3carboxi-4nitroanilida + glicilglicina-----
L- -glutamil-glicina+5amino-2-nitrobenzoato
La gamma-glutamiltransferasa transfiere el grupo -glutamil de la L--glutamil-3-carboxi-4-nitroanilida a glicilglicina. La cantidad de 5- amino- 2- nitrobenzoato que es liberado es proporcional a la actividad de GGT y se determina midiendo fotomtricamente el aumento de la absorbancia.
13.4 Rango de Referencia Medido a 37 C Hombres: 8-61 U/L Mujeres: 5-36 U/L
13.5 Interferencias y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina no conjugada hasta aprox. 40 mg/dL y bilirrubina conjugada hasta 50 mg/dL Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta 200 mg/dL Sin interferencia significativa por triglicridos.
AMILASA DE
15.-Amilasa Test enzimtico in vitro para la determinacin cuantitativa de amilasa en suero, plasma y orina humanos con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Esta enzima, predominantemente originada en la glndula pancretica (forma P) y salival (forma S), hidroliza las unidades de glucosa con enlace -1,4 en el glucgeno y la amilopectina. Se encuentra elevada en la pancreatitis, lesiones de las glndulas salivales (como parotiditis), lceras ppticas perforadas, apendicitis, roturas de embarazo ectpico, aneurisma disecante de la aorta y enfermedad de las vas biliares. La amilasa es la nica protena capaz de ser aclarada por los riones 15.1 Obtencin de la Muestra Suero/ plasma Suero recogido en tubos estndar de muestra, sin anticoagulante Plasma con heparina o EDTA Orina: La - amilasa es inestable en orina cida. Realizar el test de inmediato o alcalinizar las muestras para su almacenamiento. 15.2 Reactivos R1: Tampn HEPES: 52.4 mmol/L, pH 7.0 cloruro sdico: 87 mmol/L cloruro de magnesio :12.6 mmol/L; cloruro clcico: 0.08 mmol/L; - glucosidasa > 4 U/mL; conservante. R2: Tampn HEPES: 52.4 mmol/L; pH 7.15; 4,6-etilideno-G7PNP: 22 mmol; conservante. Preparacin de los reactivos: El contenido est listo para el uso Conservacin y estabilidad de los reactivos Abierto en el compartimiento de refrigeracin del analizador 12 semanas
AMILASA DE
15.3 Principio del Test (simplificado) Test- color enzimtico segn IFCC 5-etilideno-G7PNP+5H2O ---amilasa -- 2etilidenoG5+2G2PNP+2etilideno-G4+2G3PNP+etilideno-G3+G4PNP Oligosacridos definidos como el 4,6 etilideno-(G7) p-nitrofenil (G1)-, D-maltoheptasido (etilidenoG7PNP) se desdoblan por accin de las amilasas. Los fragmentos G2PNP, G3PNP y G4PNP que se han formado, se hidrolizan completamente a p-nitrofenol y glucosa bajo la accin de la glucosidasa. 2G2PNP+2G3PNP +G4PNP + 14 H2O----glucosidasa --- 5 PNP + 14G PNP= p- nitrofenol G= Glucosa La intensidad cromtica del p-nitrofenol formado, que es directamente proporcional a la actividad de amilasa, se mide fotomtricamente. 15.4 Rango de Referencia Suero/plasma : 28-100 U/L Orina espontnea: <460 U/L 15.5 Interferencias y Limitaciones No pipetear con la boca, evitar el contacto del reactivo con la piel porque la saliva y el sudor contienen - amilasa. Sin interferencia significativa por bilirrubina no conjugada hasta aprox. 60 mg/dL Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 500 mg/dL Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 3000 mg/dL La glucosa no interfiere hasta 2000 mg/dL. El cido. Ascrbico no interfiere hasta 100 mg/dL. No se registraron interferencias con el test con 31 frmacos de uso frecuente probados in vitro.
ACIDO LACTICO DE
16 cido Lctico Test para la determinacin cuantitativa de L-lactato en sangre completa o lquido cefalorraqudeo con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Prcticamente la totalidad del cido lctico del plasma est presente en forma de L-lactato e in hidrgeno. El lactato es el producto final del metabolismo anaerobio y su nivel se relaciona con la disponibilidad del oxgeno. Cuando falla el suministro de oxgeno, el sistema del citocromo no puede funcionar como intermediario en el proceso de transferencia del hidrgeno al oxgeno molecular. En esta situacin, se acumula dinucletido de nicotinamida-adenina reducido (NADH), que es oxidado por la lactatodeshidrogenasa con formacin de lactato. En el hombre en reposo, el hgado y, en cierto grado, los riones son los principales rganos responsables del lactato a glucosa, o de su oxidacin a CO2 y H2O. En presencia de concentraciones elevadas, el msculo esqueltico y cardiaco tambin puede oxidar el lactato. El shock es quiz la causa mejor conocida de la acidosis lctica; sin embargo, en algunos casos , el shock puede ir precedido por una excesiva produccin de lactato. Las alteraciones tales como la insuficiencia cardiaca congestiva grave, el edema pulmonar y la prdida sangunea son causas comunes de acidosis lctica. 16.1 Obtencin de la muestra No emplear suero. Emplear plasma de sangre recogida por tcnica estndar de puncin venosa en tubos en tubos con heparina de sodio o litio y transportar sobre hielo. El lquido cefalorraqudeo puede usarse directamente. Notas: 1.El nivel de lactato aumenta rpidamente bajo esfuerzos fsicos. El tiempo requerido para volver a valores normales de lactato depende del buen estado fsico del paciente. Para ello suelen ser suficientes treinta minutos de reposo. 2. -Las muestras de sangre deben extraerse de una vena libre de estasis. Sin embargo, una hemostasis mnima (menos de 30 segundos) no afectar los niveles de lactato. Evite en lo posible el uso de torniquete.
ACIDO LACTICO DE
3.La gliclisis en muestras de sangre puede aumentar rpidamente niveles de lactato. Las clulas contribuyen a ala gliclisis y su retiro rpido es esencial para el anlisis exacto del lactato.. El plasma heparinizado es aceptable, pero las precauciones que se deben tener es retrasar la gliclisis guardando la sangre completa en el hielo y despus separando el plasma de las clulas en el plazo de 15 minutos de la coleccin. Estabilidad: Plasma separado: 2 horas a 20-25C 2 das a 2-8 C LCR: 3 horas a 20-25C 24 horas a 2-8 C 1 mes a 20C 16.2 Reactivos R1: Tampn, enzimas Dador de hidrgeno; oxidasa de ascorbato (pepino): > 30U/mL;
tampones; conservantes.
R2.
Tampn, enzimas 4-aminopirina: 1 mg/mL: LOD (microorganismos): >15 U/mL; peroxidasa: >24 U/mL; tampones; conservantes.
Preparacin de los reactivos: El contenido est listo para el uso Conservacin y estabilidad de los reactivos Abierto en el compartimiento de refrigeracin del analizador 12 semanas 16.3 Principio del Test El L- lactato es oxidado a piruvato por la enzima especfica lactato oxidasa (LOD) L-lactato + O2 = LOD=== piruvato + 2H2O2
ACIDO LACTICO DE
La peroxidasa (POD) se emplea para generar un colorante utilizando el peroxido de hidrgeno producido en la primera reaccin. H2O2 + dador de H + 4-aminoantipirina+ == POD= cromgeno + 2H2O
La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de L-lactato. 16.4 Rango de referencia Plasma: 0.5-2.2 mmol/L LCR: 1.1-6.7 mmol/L 1.1-4.4 mmol/L 1.1-2.8 mmol/L 1.1-2.4 mmol/L 16.5 Interferencias y limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina no conjugada y conjugada hasta 60 mg/dL y 28 mg/dL respectivamente. Sin interferencia significativa de la hemoglobina hasta 1000 mg/dL. Sin interferencia significativa de la lipemia hasta 2000 mg/dL. Se ensayaron in vitro treinta y cinco productos farmacuticos de uso frecuente. La dopamina (10 mg/L), levodopa (20 mg/L) y metildopa (20mg/L) redujeron perceptiblemente los resultados de lactato. venoso neonatos 3-10 das de edad > 10 das de edad adulto
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN:LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA
AMONIO DE
17.-Amonio test para la determinacin cuantitativa de amonio (NH3) en plasma con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). 17.1 Obtencin de la muestra Plasma con heparina de sodio, litio o EDTA bipotsico no hemolizada. Extraer la muestra de una vena sin estasis y centrifugarla lo antes posible en un tubo tapado. Estabilidad: poner la muestra sobre hielo y proceder inmediatamente al ensayo 17.2 Reactivos R1: Tampn BICINAa: 330mmol/L, pH 8.3; 2-oxoglutarato: 50mmol/L; GLDH (microbiana): >234ukat/L R3: NADPH: > 1.0 mmol/L; GLDH; conservantes. BICINAa =N,N bis(2-hidroxietil)-glicina Preparacin de los reactivos: Listo para el uso Conservacin y estabilidad: Abierto y refrigerado en el analizador12 semanas. 17.3 principio del test Ensayo enzimtico cintico colorimtrico La glutamato dehidrogenasa (GLDH) cataliza la aminacin reductiva del 2-oxoglutatrato con NH4 y NADPH para forma glutamato y NADP+. NH4 + 2-oxoglutarato + NADPH ----GLDH--L-glutamato + NADP+ + H2O
La cantidad de NAPH formado equivale a la cantidad de amoniaco presente en la muestra, pudiendo medrsela fotomtricamente mediante la disminucin resultante de la absorbancia. 17.4 Rango de referencia Varones: (16.0-60.0 mol/L) Mujeres: (11.0-51.0 mol/L) 17.5 Interferentes y Limitaciones Sin interferencia de bilirrubina conjugada y no conjugada de hasta aprox. 60 mg/dL. Sin interferencia significativa por hemlisis hasta una concentracin de aprox. 50 mg/dL de hemoglobina. Sin interferencia significativa por lipemia hasta una concentracin aprox. de 500 mg/dL de triglicridos.
COLESTEROL DE
18.- Colesterol Test enzimtico para la determinacin cuantitativa del colesterol en suero y plasma humanos con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Los principales lpidos del plasma humano son el colesterol, los steres del colesterol, los triglicridos, los fosfolpidos y los cidos grasos no esterificados. Los lpidos se transportan en el plasma y otros compartimentos extracelulares del cuerpo en forma de lipoprotenas, que son complejos macromoleculares compuesto de un ncleo lipdico hidrfobo, un fosfolpido hidroflico y una superficie proteica. El colesterol es un importante componente estructural de las membranas celulares y un precursor para la biosntesis de los cidos biliares y las hormonas esteroidales. En los seres humanos, del 60 al 70% del colesterol es transportado por lipoprotenas de baja densidad (LDL), del 20 al 35%, por lipoprotenas de alta densidad (HDL) y del 5 al 12%, por lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL). La cardiopata coronaria (CHD) est relacionada con una serie de factores de riesgo como por ejemplo, el tabaco, la hipertensin arterial y la hiperlipidemia. De estos factores de riesgo, el colesterol es particularmente importante. La evidencia de diferentes fuentes (genticas, experimentales, resultados de ensayos clnicos), demuestra de manera consistente una relacin fuerte e independiente entre el colesterol plasmtico y la cardiopata coronaria. El descenso de los niveles de colesterol produce una reduccin estadsticamente significativa de la incidencia de infartos de miocardio. Normalmente, una reduccin del 1% en los niveles de colesterol produce una reduccin de 2-3% del riesgo de cardiopata coronaria.
18.1 Obtencin de la muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra, sin anticoagulante. Plasma con heparina o EDTA. No emplear plasma con citrato, oxalato o fluoruro. Es posible emplear muestras extradas en ayunas o no. Las muestras que contienen precipitado deben centrifugarse antes de efectuar el test. 18.2 Reactivos R1: Tampn Pipes 225 mmol/L, pH 6.8 Mg2+: 10mmol/L; colato sdico: 0.6 mmol/L; 4-aminofenazona >0.45 mmol/L; fenol > 12.6 mmol/L; ter poligliclico de alcohol graso: 3%; colesterol esterasa >1.5 U/ml; colesteroloxidasa >0.45 U/mL; peroxidasa > 0.75 U/mL; estabilizadores; conservantes. Pipes: Pipierazina-1,4 bis (2-cido etanosulfnico) Preparacin y Estabilidad del reactivo: Listo para usar. Abierto y refrigerado en analizador 12 semanas.
COLESTEROL DE
18.3 Principio del test color enzimtico A la muestra se le adiciona el reactivo 1 (reactivo de colesterol) y se inicia la reaccin. Con colesterol esterasa y colesteroloxidasa, el colesterol se determina enzimticamente. Ester de colesterol + H2O---- Colesterol-esterasa ---colesterol + RCOOH
Bajo la influencia del colesterol esterasa, los steres del colesterol se desdoblan a colesterol libre y cidos grasos. Colesterol + O2 -- Colesteroloxidasa --El colesterol se transforma a colesteroloxidasa. colest-4-ene-3-ona + H2O2 4-colestenona y peroxido de hidrgeno mediante la accin del oxigeno y
2 H2O2 + 4-aminofenazona + fenol----- Peroxidasa ----- colorante de quinonaimina + 4H2O Bajo la accin cataltica de la peroxidasa, el peroxido de hidrgeno formado reacciona con 4-aminofenazona y fenol para formar un colorante rojo cuya intensidad de color es directamente proporcional a la concentracin de colesterol. Este colorante puede medirse fotomtricamente. 18.4 Rango de referencia Intervalo ideal de colesterol < 200 mg/dL Intervalo Lmite para colesterol elevado: 200-239 mg/dL Colesterol alto: >240 mg/dL 18.5 Interferencias y limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada hasta aprox. 25 mg/dL y bilirrubina no conjugada hasta aprox 10 mg/dL Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox.700 mg/dL Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox 2500 mg/dL.
HDL COLESTEROL DE
19.- HDL- Colesterol Test enzimtico in vitro para la determinacin cuantitativa directa del colesterol HDL en suero y plasma humanos con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Las lipoprotenas plasmticas son partculas esfricas que contienes cantidades variables de colesterol, triglicridos, fosfolpidos y protenas. Los fosfolpidos, colesterol libre y las protenas constituyen la superficie de las partculas lipoprotecas, mientras que su cuerpo core contiene una mayor proporcin de colesterol eterificado y triglicridos. Las partculas solubilizan y transportan el colesterol en el torrente sanguneo. La proporcin relativa de protena y lpido determina la densidad de estas lipoprotenas y proveen las bases sobre las cuales establecen una clasificacin. Estas clases son: quilomicrones, protenas de muy baja densidad (VLDL), protenas de baja densidad (LDL) y protenas de baja densidad (HDL). Numerosos estudios clnicos han demostrado que las diferentes clases de lipoprotenas tienen distintos y variados efectos en el riesgo de enfermedad coronaria. La funcin principal de las HDL en el metabolismo lipdico es la captacin y transporte de colesterol desde los tejidos perifricos al hgado en un proceso conocido como trasporte reverso de colesterol o mecanismo cardioprotector. Bajos niveles de HDL colesterol est asociado a un alto riesgo de enfermedad cardiaca. Por este motivo la determinacin de HDL colesterol es una herramienta til en la identificacin de individuos de alto riesgo. 19.1 Obtencin de la muestra
Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante). Plasma con heparina de litio y heparina sdica. Para la determinacin pueden emplearse muestras extradas en ayunas o despus de la ingesta alimentaria. Con plasma EDTA se obtienen recuperaciones disminuidas. Las muestras que contienen precipitado deben centrifugarse antes de efectuar el test.
HDL COLESTEROL DE
R1: Tampn HEPES: 10.07 mmol/L; CHES 96.95 mmol/L; pH 7.4; sulfato de dextrano 1.5g/L ;nitrato de magnesio hexahidratado >11.7mmol/L; HSDA 0.96mmol/L; ascorbato oxidasa >50ukat/L; peroxidasa 16.7ukat/L R2: Tampn HEPES: 10.07 mmol/L; pH: 7.0; PEG colesterol estearasa:>3.33ukat/L; PEG colesterol oxidasa:>127 ukat/L; peroxidasa>333ukat/L; 4-amino-antipirina: 2.46 mmol/L Preparacin y Estabilidad del reactivo: Listo para usar. Abierto y refrigerado en analizador 12 semanas. 19.3 Principio del Test: Test homogneo, enzimtico, colorimtrico. colesterol RCOOH
Esteres del colesterol HDL + H2O --- PEG-colesterol- Esterasa-----
Bajo la influencia de colesterolesterasa, los steres de colesterol se desdoblan a colesterol libre y cidos grasos. Colesterol HDL+O2 ---- PEG-colesteroloxidasa--El colesterol se transforma a
4 4
- colestenona + H2O2
- colestenona y peroxido de hidrgeno mediante oxgeno y colesteroloxidasa. colorante violeta azul + 5H2O
2H2O2 + 4-aminofenazona + HSDA*+ H+ + H2O ---- Peroxidasa --HSDA*: N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3,5-dimetoxianilina
Bajo la accin cataltica de la peroxidasa, el peroxido de hidrgeno formado reacciona con 4-aminofenazona y HSDA para formar un colorante violeta azul cuya intensidad de color que es directamente proporcional a la concentracin de colesterol HDL se mide fotomtricamente. 19.4 Rango de Referencia Riesgo Varones mg/dL mmol/L Mujeres mg/dL mmol/L
No >55 >1.45 >65 >1.68
Moderado 35-55 0.9-1.45 45-65 1.15-1.68
Alto <35 <0.9 <45 <1.15
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 19.5 Interferencias y Limitaciones
HDL COLESTEROL DE
Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 1000 mg/dL. Sin interferencia significativa por lipemia hasta 1000 mg/dL. Hasta el momento no existe un modelo que permita imitar la interferencia por triglicridos ya que, en la muestra de pacientes, los triglicridos se comportan de manera impredecible dependiendo de las cualidades de los cidos grasos esterificados. Frecuentemente, las muestras de pacientes con altas concentraciones de triglicridos son lipmicas. El usuario no puede verificar la validez de las interferencias por triglicridos en las muestras. En casos aislados pueden presentarse valores falsamente elevados del colesterol HDL ante altas concentraciones de inmunoglobulinas. Ya que las hepatopatas influyen en el metabolismo lipdico, los valores de colesterol HDL y LDL son de importancia limitada en el diagnstico. En algunos pacientes con hepatopatas el valor medido de HDL- plus puede ser significativamente menor a un valor obtenido con el mtodo de referencia para colesterol HDL. No se ha encontrado interferencia con 20 frmacos de uso frecuente.
TRIGLICERIDOS DE
20.- Triglicridos GPO-PAP Test enzimtico in vitro para la determinacin cuantitativa de triglicridos en suero y plasma humanos con los analizadores automtica de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Los triglicridos son lpidos absorbidos en la dieta y tambin producidos en forma endgena a partir de carbohidratos. Su medicin es importante en el diagnstico y manejo de hiperlipidemias. Estas enfermedades pueden tener origen gentico o ser secundarias a otras tales como nefrosis, diabetes mellitus y disfunciones endocrinas. El aumento de triglicridos se ha identificado como u factor de riesgo en enfermedades aterosclerticas. 20.1 Obtencin de la Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) Plasma con heparina o EDTA. Las muestras que contienen precipitado deben centrifugarse antes de efectuar el test. 20.2 Reactivos R1: Tampn Pipies*: 50 mmol/L, pH 6.8; Mg2+: 40 mmol/L; colato sdico: 0.20 mmol/L; ATP > 1.4 mmol/L; 4- aminofenazona > 0.13 mmol/L; 4-clorofenol: 4.7 mmol/L; hexacianoferrato de potasio (II): 1mol/L; eterpoligliclico de alcohol graso: 0.65%; lipasa lipoproteica (Pseudomona spec.)>5.0 U/mL.; glicerocinasa >0.19 U/mL; glicerofosfato-oxidasa >2.5 U/mL; peroxidasa > 0.10 U/mL. Preparacin y Estabilidad del reactivo: Listo para usar. Abierto y refrigerado en analizador 12 semanas. 20.3 Principio del Test Test enzimtico A la muestra se le adiciona el reactivo el R1 (Tampn/4-clorofenol/enzimas), dando inicio a la reaccin: Triglicridos + 3 H2O -- LPL---Glicerol + ATP --- GK-Mg2+
glicerol + 3 RCOOH
glicerol-3-fosfato +ADP
Glicerol-3-fosfato + O2 --- GPO ---- dihidroxiacetonafosfato + H2O2 H2O2 +4-aminofenazona + 4-clorofenol --Peroxidasa- 4-(p-benzoquinona-monoimino)-fenazona + 2H2O + HCL
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 20.4 Rango de Referencia
TRIGLICERIDOS DE
Intervalo normal: < 200 mg/dL 20.5 Interferencias y Limitaciones Sin interferencias significativas por bilirrubina conjugada hasta aprox. 12 mg/dL y bilirrubina no conjugada hasta aprox. 27 mg/dL Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox.600 mg/dL Con muestras extremadamente lipmicas (valores de triglicridos mayores a 300) se pueden obtener resultados normales. Estas muestras deben diluirse 1+4 con una solucin de cloruro de sodio al 0.9%. multiplicar el resultado por 5 o bien, tratndose de los analizadores cobas 6000 o c311, repetir el ensayo con un menor volumen de muestra.
DESHIDROGENASA LACTICA DE
21.- LDH Test cuantitativo in vitro para la determinacin de deshidrogenasa lctica (LDH en suero y plasma humanos en equipos automatizados de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Las isoenzimas LDH se miden para saber el origen (ubicacin) de la lesin tisular. La enzima LDH se encuentra en muchos tejidos del cuerpo, especialmente en el corazn, en el hgado, en los riones, en el msculo esqueltico, en las clulas sanguneas cerebrales y en los pulmones. Su funcin es interconvertir el piruvato y el lactato. En el ejercicio muscular las clulas musculares transforman la glucosa en lactato, el lactato se libera a la sangre, y puede ser recogido por el hgado que lo vuelve a transformar en glucosa que se libera a la sangre para ser utilizada nuevamente como energa por los tejidos. La LDH se presenta en 5 formas, llamadas isoenzimas, que difieren ligeramente en su estructura. La LDH-1 se encuentra en mayores concentraciones en el msculo cardaco y en los glbulos rojos sanguneos, la LDH-2 es ms alta en los glbulos blancos sanguneos, la LDH-3 es ms alta en los pulmones, la LDH-4 es ms alta en los riones, en la placenta y en el pncreas y la LDH-5 es ms alta en el hgado y en el msculo esqueltico. 21.1 Obtencin de la Muestra Suero recolectado en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) Plasma con heparina o EDTA 21.2 Reactivos R1: N-metilglucamina: 400mmol/L; lactato de litio: 62mmol/L; pH 9.4. R2: NAD 62mmol/L. Preparacin y Estabilidad del reactivo: Listo para usar. Abierto y refrigerado en analizador 12 semanas. 21.3 Principio del Test Ultravioleta segn mtodo estandarizado. L-Lactato + NAD = LDH == Piruvato + NADH + H+ La enzima lactato deshidrogenasa cataliza la conversin de piruvato a lactato; oxidando NADH a NAD+ en este proceso. La velocidad de disminucin de NADH es directamente proporcional a la actividad de LDH. 21.4 Rango de Referencia Adultos (37C): 240-480 U/L 21.5 Interferencias y Limitaciones La hemlisis interfiere con el test debido a la liberacin de LDH desde los eritrocitos al plasma. Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox. 60 mg/dL. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 1800 mg/dL.
CREATINQUINASA DE
22.- CK (creatinquinasa) Test in vitro para la determinacin cuantitativa de la creatinquinasa (CK) en suero y plasma humanos con analizadores automticos de qumica clnica (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin
Las alteraciones enzimticas han demostrado su utilidad desde la dcada del 50, donde Karmen describi el ascenso de las transaminasas glutamicooxaloactica en 4 de 5 pacientes infartados. Debe tenerse clara la secuencia de ascenso de cada enzima, esto permite su uso en el momento correcto de la evolucin natural de la enfermedad y las mas tiles suelen ser la CK, CK-MB, LDH y actualmente la TROPONINA juega un papel fundamental. La CREATIN KINASA (CK) esta presente en el msculo cardaco y aumenta tempranamente en el infarto agudo del miocardio; sin embargo, se encuentra tambin en el msculo esqueltico, y en el cerebro, y se describen aumentos de ella en ciertas situaciones clnicas como el trauma muscular, el uso de la va intramuscular, la rabdomiolisis, la intoxicacin etlica, el embolismo pulmonar y la insuficiencia renal, de all la importancia del uso de las isoenzimas (MM, BB y MB) para mejorar la calidad diagnstica del infarto del miocardio (5) Restrepo, M. , Mejia, A.. Infarto agudo del miocardio en Fundamentos de Medicina crtica, capitulo 3, Editorial corporacin para ediciones en Colombia, 1990, 73 105. La CK-MB es denominada cardioespecfica, sin embargo se plantean algunas controversias en cuanto a su relacin con el IM y las ms importantes son: 1) puede ser liberada en procesos isqumicos, pero no est distribuida de forma similar en todo el miocardio y su metabolismo puede variar entre los individuos, por lo tanto la medicin de sus niveles tambin puede variar (7); 2) se encuentra en pequeas cantidades en la lengua, intestino delgado, diafragma, tero y prstata (5)( Restrepo, M. , Mejia, A.. Infarto agudo del miocardio en Fundamentos de Medicina crtica, capitulo 3, Editorial corporacin para ediciones en Colombia, 1990, 73 105... Sin embargo, a travs del tiempo la CK-MB ha demostrado su utilidad, sobre todo si se plantea que su aumento se inicia a las 4 6 horas, lo que da cierta rapidez a la conclusin diagnstica; su pico es a las 12 horas y sobre todo el retorno a la normalidad entre las 24 y 48 horas, lo que permitira evaluar nuevos episodios de lesin o extensiones del mismo por un nuevo ascenso o prolongacin del ascenso en el tiempo.
22.1 Obtencin de la muestra Suero recogido en tubos estndar de toma de muestra (sin anticoagulante). Plasma con heparina o EDTA
CREATINQUINASA DE
R1:Tampn Imidazol: 58mmol/L, pH 6.0; D-glucosa: 40mmol/L;; AMP 10 mmol/L; pentafosfato de diadenosn: 24 mol/L; NADP: 9.5 mmol/L (levadura); N-acetilcistena: 40 mmol/L; Mg2+ R2: EDTA: 3.0 mmol/L; pH 9.1; HK>600ukat/L; G6PDH >600ukat/L; ADP: 12,0mmol/L; fosfato de creatina180mmol/L; N- metildietanolamina: 69 mmol/L Preparacin y Estabilidad del reactivo: Listo para usar. Abierto y refrigerado en analizador 12 semanas. 22.3 Principio del Test UV A la muestra se le adiciona R1 (tampn/enzima/coenzima). comenzando de esta manera la reaccin: Creatinfosfato + ADP = CK == D-Glucosa + ATP = HK== creatina + ATP Luego se adiciona R2 (tampn/substrato)
glucosa-6-P + ADP D-6-fosfogluconato + NADPH + H+
Glucosa-6-P + NADP+ == G6PDH ====
En cuanto a cantidades equimolares, NADPH y ATP se forman a igual velocidad. La velocidad de la formacin de NADPH medida fotomtricamente es proporcional a la actividad de la CK. 22.4 Rango de Referencia Mtodo estndar 94 (37C) Varones: <170 U/L Mujeres: < 145 U/L 22.5 Interferencias y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox. 60 mg/dL. Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 200 mg/dL. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox.2000 mg/dL.
ISOENZIMA MB DE LA CREATINQUINASA DE
23.- CK MB (isoenzima MB de la creatinquinasa) Test inmunoinhibitorio in vitro para la determinacin cuantitativa de la isoenzima MB de la creatinquinasa en suero y plasma humanos con analizadores automticos (Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin
Las alteraciones enzimticas han demostrado su utilidad desde la dcada del 50, donde Karmen describi el ascenso de las transaminasas glutamicooxaloactica en 4 de 5 pacientes infartados. Debe tenerse clara la secuencia de ascenso de cada enzima, esto permite su uso en el momento correcto de la evolucin natural de la enfermedad y las mas tiles suelen ser la CK, CK-MB, LDH y actualmente la TROPONINA juega un papel fundamental. La CREATIN KINASA (CK) esta presente en el msculo cardaco y aumenta tempranamente en el infarto agudo del miocardio; sin embargo, se encuentra tambin en el msculo esqueltico, y en el cerebro, y se describen aumentos de ella en ciertas situaciones clnicas como el trauma muscular, el uso de la va intramuscular, la rabdomiolisis, la intoxicacin etlica, el embolismo pulmonar y la insuficiencia renal, de all la importancia del uso de las isoenzimas (MM, BB y MB) para mejorar la calidad diagnstica del infarto del miocardio (5) Restrepo, M. , Mejia, A.. Infarto agudo del miocardio en Fundamentos de Medicina crtica, capitulo 3, Editorial corporacin para ediciones en Colombia, 1990, 73 105. La CK-MB es denominada cardioespecfica, sin embargo se plantean algunas controversias en cuanto a su relacin con el IM y las ms importantes son: 1) puede ser liberada en procesos isqumicos, pero no est distribuida de forma similar en todo el miocardio y su metabolismo puede variar entre los individuos, por lo tanto la medicin de sus niveles tambin puede variar (7); 2) se encuentra en pequeas cantidades en la lengua, intestino delgado, diafragma, tero y prstata (5)( Restrepo, M. , Mejia, A.. Infarto agudo del miocardio en Fundamentos de Medicina crtica, capitulo 3, Editorial corporacin para ediciones en Colombia, 1990, 73 105... Sin embargo, a travs del tiempo la CK-MB ha demostrado su utilidad, sobre todo si se plantea que su aumento se inicia a las 4 6 horas, lo que da cierta rapidez a la conclusin diagnstica; su pico es a las 12 horas y sobre todo el retorno a la normalidad entre las 24 y 48 horas, lo que permitira evaluar nuevos episodios de lesin o extensiones del mismo por un nuevo ascenso o prolongacin del ascenso en el tiempo.
23.1 Obtencin de la Muestra Suero, recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) Plasma con heparina o EDTA.
ISOENZIMA MB DE LA CREATINQUINASA DE
R1: Tampn imidazol: 58 mmol/L, pH 6.0; N-acetilcistena: 40 mmol/L; EDTA: 3 mmol/L; AMP: 10mmol/L; diadenosnpentafosfato: 24mol/L; NADP: 29.5mmol/L; Mg2+: 20 mmol/L; D-glucosa: 40 mmol/L R2: EDTA: 3 mmol/L; pH 9.1; HK>600ukat/L; G6PDH>600ukat/L; ADP: 12 mmol/L; fosfato de creatina 180mmol/L; N-metildietanolamina: 69mmol/L. Preparacin y Estabilidad del reactivo: Listo para usar. Abierto y refrigerado en analizador 12 semanas. 23.3 Principio del Test UV inmunolgico A la muestra se le adiciona R1 (tampn/coenzima/anticuerpo). Posteriormente se le agrega R2 (tampn/substrato) dando inicio a la reaccin. La CK MB humana consiste en dos subunidades, CK M y CK B, ambas con un sitio activo. Un anticuerpo policlonal dirigido contra la CK M inhibe casi completamente (el 99.6%) la actividad cataltica de estas subunidades sin influir en las subunidades CK B. La actividad resultante de la CK B, que equivale a la mitad de la actividad de la CK MB, se determina, al igual que la actividad total de la CK, segn el mtodo CK NAC. La actividad cataltica de la isoenzima CK MB puede calcularse a partir de la actividad de la Ck B medida, multiplicndola por 2, ya que la isoenzima CK BB aparece muy raramente en suero y la actividad cataltica de las subunidades CK M y CK B apenas se distinguen. 23.4 Rango de Referencia Infarto al miocardio : La probabilidad de una lesin del miocardio es elevada si se cumplen las siguientes condiciones: CK hombres (37C): > 190 U/L CK mujeres (37C): > 167 U/L CK MB: > 24 U/L 23.5 Interferencias y Limitaciones La hemlisis interfiere en el test Sin interferencias significativas por bilirrubina conjugada hasta aprox. 60 mg/dL y bilirrubina no conjugada hasta aprox. 20 mg/dL Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 800 mg/dL En pacientes con predisposicin a la formacin de macro CK pueden medirse valores altos de CK MB. Como estos pacientes generalmente no sufren infartos de miocardio, en estos casos se requieren medidas diagnsticas posteriores.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 24.- PCR
PROTEINA C REACTIVA DE
(Protena C Reactiva) Test inmunoturbidimtrico para la determinacin cuantitativa in vitro de PCR en suero y plasma humanos con analizadores de qumica clnica Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Introduccin Es un reactante de fase aguda. Despus de un estmulo adecuado, infeccin traumatismo por ejemplo, y a travs de mediadores polipptidos llamados citoquinas se producen numerosos cambios o respuestas. Uno de ellos y que se detecta al cabo de unas horas es el incremento de las protenas llamadas reactantes de la fase aguda. Se trata de protenas que ya existen en pequea cantidad normalmente, se producen de novo. El hgado las sintetiza y en gran cantidad, aumentando su nivel en sangre de una manera notable. La protena primeramente descubierta y caracterizada fue la Protena C Reactiva (PCR). Se la llam as por su capacidad de reaccionar con el polisacrido C del Streptococcus pneumoniae. Tambin es el reactante de fase aguda mejor estudiado y de mayor aplicacin clnica, en el presente. Ms recientemente la puesta a punto de tcnicas de PCR de alta sensibilidad o ultrasensibles est en evolucin y probablemente se generalizar su uso en la clnica. La importancia y aplicacin de la tcnica aumentar ya que de momento se muestra til y aporta informacin sobre la evolucin de coronariopatas en personas aparentemente sanas. A menudo el aumento de la PCR va paralelo al aumento de la VSG, pero el incremento de la PCR suele preceder al de la VSG y desciende antes que esta ltima al desaparecer la causa. La PCR no est influida al revs que la VSG por factores dependientes de los hemates (anemia, policitemia, esferocitosis, microcitosis, macrocitosis) tampoco por la hipergammaglobulinemia ni por la insuficiencia cardiaca. ( Mdica de Tarragona 10/06/03) 24.1.- Obtencin de la Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante). Plasma con heparina de litio o EDTA 24.2 Reactivos R1: Tampn Tampn Tris/HCl*: 100 mmol/L, pH 7.5; cloruro sdico: 300 mmol/L; polietilenglicol: 2.0 %; conservante. R2: Anticuerpos anti- PCR/ tampn Anticuerpos anti PCR humana (cabra): dependiente del ttulo; tampn Tris/HCl*: 100 mmol/L, pH 8.0; cloruro sdico: 300 mmol/L; polietilenglicol: 2.0 %; conservante.
PROTEINA C REACTIVA DE
Preparacin y Estabilidad del reactivo: Listo para usar. Abierto y refrigerado en analizador 12 semanas. 24.3 Principio del Test Inmunoturbidimtrico A la muestra se le adiciona el R1 (tampn). Luego con la adicin del R2 se da inicio a la reaccin. Anticuerpos anti-PCR reaccionan con el antgeno de la muestra formando un complejo antgeno-anticuerpo que se mide turbidimtricamente despus de la aglutinacin. La adicin de PEG posibilita un rpido punto final, aumenta la sensibilidad y reduce el riesgo de medir valores falsos negativos en muestras con exceso de antgeno. 24.4 Valores de Referencia Valores IFCC: < 0.5 mg/dL (< 5.0 mg/L). Concentraciones < 1 mg/dL excluyen muchas enfermedades inflamatorias agudas, pero no generalmente un proceso inflamatorio. Valores > 50 mg/dL en enfermedades agudas son indicio de una alta y extensiva actividad inflamatoria. 24.5 Interferencias y Limitaciones Sin interferencia significativa por bilirrubina conjugada y no conjugada hasta aprox. 60 mg/dL. Sin interferencia significativa por hemoglobina hasta aprox. 700 mg/dL. Sin interferencia significativa por triglicridos hasta aprox. 200 mg/dL. Factores reumatoides < 1200 UI/mL no interfieren En caso de concentraciones de PCR superiores a 50 mg/dL puede producirse el efecto pro-zona.
FACTOR REUMATOIDEO DE
25.-Factor Reumatodeo: Test ltex para la determinacin semicuantitativa in vitro del factor reumatodeo en suero humano. 25.1 Obtencin de la Muestra: Suero fresco obtenido por la centrifugacin de sangre total 25.2 Reactivos Reactivo Ltex para 100 determinaciones Control positivo: Suero humano positivo para el factor reumatodeo Control negativo: Suero humano negativo para el factor reumatodeo. Buffer diluyente de glicina concentrado Pipetas estriles / placas de aglutinacin Preparacin de los reactivos: Listos para ser usados. Buffer diluyente Adicionar 1 parte de buffer con 9 partes de agua destilada. La dilucin posee un pH 8.0 8.2. Estabilidad del Reactivo: Hasta fecha de caducidad. 25.3 Principio del Test Singer y Plotz describieron un mtodo de deteccin de factor reumatodeo usando una fina suspensin de grnulos plsticos unida a gamma globulina humana las que sern aglutinadas en presencia de factor reumatodeo. 25.4 Rango de Referencia Negativo (sin aglutinacin): <8 UI/mL Positivo (presencia de aglutinacin): > 8 UI/mL
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA Determinacin semicuantitativa
FACTOR REUMATOIDEO DE
El test semicuantitativo puede llevarse a cabo de la misma forma que el test un test cuantitativo usando diluciones del suero en tampn fosfato, suero fisiolgico o tampn glicina como se describe a continuacin:
Dilucin Muestra de suero suero fisiolgico 1/2 100 ul 100 ul 1/4 100 ul 100 ul 1/8 100 ul 100 ul 100 ul Volumen de muestra 8 x n de dilucion UI/ml 50 ul 8x2 16 50 ul 8x4 32 50 ul 8x8 64 50 ul 8x16 128 1/16 100 ul
25.5 Interferentes y Limitaciones Sueros lipmicos, hemticos y contaminados deben ser eliminados debido a que interfieren en la reaccin.
ANTIESTREPTOLISINA O DE
26 - ASO (anti estreptolisina O). Test ltex para la determinacin semicuantitativa in vitro ASO en suero humano. 26.1 Obtencin de la Muestra Suero fresco obtenido por la centrifugacin de sangre total 26.2 Reactivos Reactivo Ltex para 100 determinaciones Control positivo: Suero humano positivo para ASO Control negativo: Suero humano negativo para ASO. Buffer diluyente de glicina concentrado Pipetas estriles / placas de aglutinacin
Preparacin de los reactivos: Reactivo Ltex: listo para el uso Control positivo: listo para el uso Control negativo: listo para el uso Buffer diluyente Adicionar una parte de buffer con nueve partes de agua destilada. La dilucin posee un pH 8.0 - 8.2. Estabilidad del Reactivo. El reactivo debe estar bien tapado y guardarse refrigerado a 2-8 C. 26.3 Principio del Test
En la infeccin aguda producida por estreptococo, se producen anticuerpos anti-estreptolisina O, antgeno liberado por la bacteria. Informacin sobre la extensin y el grado de infeccin de infeccin puede ser proporcionada por la medicin de este anticuerpo en suero humano.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 26.4 Rango de Referencia
ANTIESTREPTOLISINA O DE
Negativo (sin aglutinacin): <200 UI/mL Positivo (presencia de aglutinacin): > 200 UI/mL
Determinacin semicuantitativa El test semicuantitativo puede llevarse a cabo de la misma forma que el test un test cuantitativo usando diluciones de el suero en tampn fosfato, suero fisiolgico o tampn glicina como se describe a continuacin:
Dilucin Muestra de suero suero fisiolgico 1/2 100 ul 100 ul 1/4 100 ul 100 ul 1/8 100 ul 100 ul Volumen de muestra 200x n de dilucion UI/ml 50 ul 200x2 400 50 ul 200x4 800 50 ul 200x8 1600
26.5 Interferentes y Limitaciones Sueros lipmicos, hemticos y contaminados deben ser eliminados debido a que interfieren en la reaccin.
ELECTROLITOS PLASMTICOS DE
27.- Electrolitos Plasmticos. Test Basado en el mtodo de in selectivo para la determinacin cuantitativa de iones sodio, potasio y cloruro en equipo COBAS 6000 y COBAS c501. y equipo b-221 de gases y electrolitos. Introduccin Los electrolitos son iones que existen en los lquidos corporales. En el lquido extracelular (LEC) el catin principal es el Na+ y el anin principal el Cl- . El metabolismo resulta afectado en cierto grado por las concentraciones relativas y absolutas de estos electrolitos, que constituyen importantes factores determinantes de la osmolaridad, del estado de hidratacin, y del pH del lquido tanto intracelular como extracelular. El K+ es el principal catin intracelular, solo el 2% del total de K+ total del cuerpo es extracelular. 27.1 Obtencin de la Muestra: Suero recogido en tubo estndar de muestra ( sin anticoagulante ) Plasma recogido en tubo con heparina de litio Sangre total. 27.2 Preparacin del Paciente Ayuno 27.3 Principio del Test El mtodo de anlisis est basado en el uso de electrodos in selectivo. El analizador posee 4 electrodos: sodio, potasio, cloro y referencia. Cada electrodo posee una membrana in selectiva llevando a cabo una reaccin especifica con el in correspondiente contenido en la muestra a analizar. La membrana es un intercambiador de iones que reacciona a la carga elctrica del in causando un cambio en el potencial elctrico en la membrana que guarda relacin con la concentracin inica de la muestra segn la ecuacin de Nernst.
27.4 Rangos de Referencia Valor Normal en Suero Sodio: 135-145 mEq/L Potasio: 3.5-4.5 mEq/L Cloro: 98-110 mEq/L
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA Valor Normal en Neonatos Sodio: 135-145 mEq/L Potasio: 3.6-6.7 mEq/L Cloro: .101-111 mEq/L
ELECTROLITOS PLASMTICOS DE
27.5 Interferentes y Limitaciones del Test Hemlisis: Aumenta el Potasio Lipemias: Puede dar pseudo hipernatremias 27.6 Valores de Pnico Resultados con los siguientes valores deben ser avisados inmediatamente al servicio respectivo. Sodio: < de 125 mEq/L Potasio: < de 2.5 mEq/L > de 155 mEq/L > de 6.0 mEq/L
ORINA COMPLETA DE
28.- Orina Completa / Sedimento Urinario Introduccin El estudio de las muestras de orina sirve tanto para el diagnstico como para el monitoreo del tratamiento de enfermedades renales o del tracto urinario, y la deteccin de enfermedades metablicas o sistmicas no directamente relacionadas con el sistema urinario, mediante la utilizacin de tiras reactivas y la observacin al microscopio de la orina. Actualmente se realiza en equipo automatizado Urisys 2400. 28.1 Obtencin de la Muestra Luego de realizar un buen aseo genital, depositar 20 ml de orina del segundo chorro (la primera de la maana) en un envase limpio proporcionado por el laboratorio. Cerrar cuidadosamente y rotular con el nombre y los dos apellidos. 28.2 Reactivos Tira Reactiva Urisys 2400 (caset para 400 determinaciones) de 10 parmetros: Leucocitos: 0.4 % p/p de ster aminocido-derivado pirrlico; 0.2% p/p de sal de diazonio; 40.9% p/p de solucin reguladora; 58.5% p/p de ingredientes no reactivos. Nitritos: 1.4% p/p de cido p-arsanlico; 1.3% p/p de 1-2-3-4-tetrahidrobenzo (h)-quinolin-3-ol; 10.8% p/p de solucin reguladora; 86.5% p/p de ingredientes no reactivos. Urobilingeno: 0.2% p/p de p-dietilaminobenzaldehido; 99.8% p/p de ingredientes no reactivos. Protenas: 0.3% p/p de azul de tetrabromofenol; 97.3% de solucin reguladora; 2.4% p/p de ingredientes no reactivos. PH: 0.2% de rojo de metilo; 2.8% p/p de azul de bromo timol; 97% p/p de ingredientes no reactivos. Sangre: 6.8% p/p dihidroperxido de diisopropilbenceno; 4% p/p de 3.3,5.5 tetrametilbencidina; 48% p/p de solucin reguladora; 41.25 % p/p de ingredientes no reactivos. Densidad: 2.8% p/p de azul de bromotimol; 68.8% p/p de poli(ter metil vinlico, sal sdica del cido maleico); 28.4% p/p de hidrxido de sodio. Cetonas: 7.1% p/p de nitroprusiato de sodio; 92.9% p/p de solucin reguladora. Bilirrubina: 0.4% p/p de sal de diazonio 2,4 dicloroanilina; 37.3% p/p de solucin reguladora; 62.3% p/p de ingredientes no reactivos. Glucosa: 16.3% p/p de glucosa oxidasa (1,3 U.I.); 0.6% p/p de peroxidasa (3.300 U.I.); 7,0% p/p de yoduro de potasio; 60.7% p/p de solucin reguladora; 15.4% p/p de ingredientes no reactivos.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 28.3 Procedimiento del Test. 1. Orina Completa:
ORINA COMPLETA DE
Homogeneizar la muestra de orina Llenar un tubo del sistema Kova hasta 10 ml. Introducir una cinta reactiva Secar el excedente de orina sobre un papel absorbente Colocar la cinta reactiva en el equipo lector de cintas reactivas Centrifugar el tubo de orina a 1500 rpm por 5 min Introducir una pipeta plstica Kova Eliminar el sobrenadante invirtiendo el tubo En la parte inferior del tubo debe quedar 1 ml de orina concentrada. Resuspender el sedimento con la pipeta plstica Colocar una gota en un portaobjeto y encima un cubreobjeto Observar bajo un aumento (40 X) Realizar recuento de los elementos observando por lo menos 10 campos (sedimento urinario) 28.4 Rango de referencia Aspecto: Glucosuria Albuminuria: Sangre: pH: 28.5 Interferentes Debe realizarse un buen aseo genital, previo a la toma de muestra Transparente Negativo Negativo Sangre cido Densidad: C. Cetnico: Bilirrubina: Urobiligneno: Nitritos: 1.010-1.025 Negativo Negativo Negativo Negativos
LIQUIDO CEFALORAQUIDEO DE
29.- Citoqumico de Lquido Cefalorraqudeo 29.1.- Introduccin: El papel principal de la puncin lumbar es el diagnstico de la meningitis bacteriana, mictica y amebiana. El LCR normal es cristalino, con un aspecto y una viscosidad comparables a los del agua. Los recuentos celulares del LCR deben ser levados a cabo de inmediato: un estudio sugiere que el 40% de leucocitos pueden estar lisados tras 2 horas a temperatura ambiente. 29.2.- Tipo de Muestra: Liquido cefalorraqudeo 29.3.- Volumen de Muestra: Mnimo 1 ml. 29.4.- Procedimiento 1. Homogeneizar la muestra por inversin ( 10 veces). 2. Observar el aspecto del lquido: claro, levemente turbio, turbio, etc.. 3. Sacar la cantidad necesaria con un capilar para cargar la cmara y hacer recuento total de clulas; contar 4 mm2, sumar los 4 grupos de las esquinas de 16 cuadraditos cada uno y multiplicar por 2.5. El resultado es la cantidad de leucocitos/ mm3. 4. Si es purulento o hemorrgico diluir con suero fisiolgico y multiplicar el resultado por la dilucin. 5. Sacar en una copa HITACHI aproximadamente 400 l y centrifugar a 1500 rpm por 10 minutos. 6. Observar el color: Incoloro, levemente xantocrmico, xantocrmico, rojizo u otro. 7. Determinar del sobrenadante glucosa y protena (UCSF) en COBAS 6000 y COBAS c501). 8. Con el sedimento homogeneizado del LCR, realizar frotis para tincin GRAM y para recuento diferencial, tincin rpida e informar el porcentaje de mononucleares y porcentaje de polimorfo nucleares. 29.5.- Valores Normales Leucocitos: 0-5 x mm3 el rango normal para RN es un poco ms alto 0-30 mononucleares. Protenas: 15-45 mg/dL Glucosa: 60-70 % de la glucosa plasmtica. 29.6.- Factores de Error 1. Muestras hemorrgicas por puncin traumtica y coagulada. 2. Demora en el traslado de la muestra al laboratorio.
CITOQUIMICO DE LIQUIDO PLEURAL DE
30.- Citoqumico de Lquido Pleural y Otros 30.1 Introduccin Las 2 capas de la pleura suelen estar separadas por una pequea cantidad de lquido que facilita el movimiento de una contra la otra. Se ha estimado que la cantidad de lquido es de 1 a 15 ml. Las acumulaciones de lquido en el espacio pleural se denominan derrame. Los trasudados son acumulaciones de lquido debidas a un aumento de la presin hidrosttica de los capilares pleurales o a una disminucin de la presin onctica plasmtica. Las causas incluyen la insuficiencia cardiaca congestiva, la cirrosis heptica y el sndrome nefrtico. Los exudados suelen ser causados por un por un aumento de la permeabilidad capilar o una disminucin de la reabsorcin linftica. Las causas que influyen en la aparicin de los exudados incluyen las infecciones plurales, las neoplasias y los procesos inflamatorios no spticos como la enfermedad reumtica. 30.2.- Muestra Cinco ml lquido pleural con (ANTICOAGULANTE) en un tubo (COLOR) 30.3.- Procedimiento 1. 2. 3. Homogeneizar la muestra por inversin (10 veces) Observar aspecto del lquido: claro, levemente turbio, hemorrgico, purulento, coagulado u otro. Sacar la cantidad necesaria con un capilar para cargar la cmara y hacer recuento total de clulas; contar 4 mm2 , sumar los 4 grupos de la esquinas de 16 cuadraditos cada uno y multiplicar por 2.5. El resultado corresponde al nmero de leucocitos por mm3. Si es purulento o muy hemorrgico diluir el lquido con suero fisiolgico y multiplicar el resultado por la dilucin. Sacar en una copa HITACHI aproximadamente 400 l y centrifugar a 1500 rpm por 10 minutos. Observar el color: incoloro, levemente, rojizo u otro. Determinar del sobrenadante glucosa y protena total, albmina y LDH y si se lo piden pH, colesterol total en COBAS 6000 y COBAS c501). Con el sedimento homogeneizado del lquido realizar frotis para tincin de GRAM y para recuento diferencial, tincin rpida e informar el % de mononucleares y de polimorfonucleares.
4. 5. 6. 7. 8.
GASES EN SANGRE DE
31.- Determinacin de Gases en Sangre 33.1.-Introduccin La indicacin para la toma de gases sanguneos ser realizada en todo aquel paciente que se requiera hacer una valoracin de la funcin pulmonar en trminos de la oxigenacin, ventilacin y del estado cido base, o sea establecer el diagnstico de las alteraciones de su equilibrio, en trminos de acidosis o alcalosis y de su etiologa ya sea respiratoria o metablica. 31.2.- Tipo de muestra Sangre arterial o venosa en capilar o jeringa heparinizada. transportada inmediatamente sobre hielo. La muestra debe ser tomada y
31.3.- Reactivos Buffer 1 (pH 7.383) Buffer 2 (pH 6.841) pH reference Solucin de lavado Solucin de limpieza Gas calibrador 1 (oxgeno y CO2) Gas calibrador 2 (CO2) 31.4.- Valores medidos pH pCO2 pO2 31.5.-Valores calculados Bicarbonato actual Exceso de base CO2 Total Saturacin oxigeno HCO3BE CO2 Sat O2 1 a 100 -40 a 40 0 a 100 0 a 100% 6.0 a 8.0 0 a 200 -10 a 742
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 31.6.- Valores normales pH 7.40 + 0.03 7.35 + 0.03
GASES EN SANGRE DE
Arterial Venoso
pCO2 40 + 4 46 + 4
HCO324 + 2 25 + 2
BE +4 +4
31.7.- Factores de error Muestras coaguladas Muestras con burbujas Muestras transportadas sin hielo Demasiado tiempo transcurrido entre la toma de muestra y procesamiento de la misma.
DETERMINACION DE SUB UNIDAD BETA CUALITATIVA DE
32.- Determinacin de BHCG cualitativa 32.1.- Introduccin La gonadotrofina corinica es una sialoglicopprotena con un PM de aproximadamente 46.000 daltons. HCG es inicialmente secretada por las clulas del trofoblsticas de la placenta, poco despus de la fertilizacin. 32.2.- Tipo de muestra Suero (3 ml) obtenida por centrifugacin de sangre total sin anticoagulante. 32.3.- Procedimientos 1. 2. 3. 4. 5. Sacar del refrigerador el reactivo y dejarlo que alcance la temperatura ambiente. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos. Sacar la placa del envase. Adicionar 3 gotas de suero en el posillo con la marca S. Leer el resultado a los 5 minutos.
C T
POSITIVA
NEGATIVA
INVALIDA
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN:LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 33.- Liquido Amnitico
LIQUIDO AMNIOTICO DE
33.1.1- Introduccin La amniocentesis cumple objetivos teraputicos y diagnsticos, de su estudio se pueden establecer parmetros: a) Bienestar fetal: a partir de las 20 semanas de gestacin. b) Madurez fetal: a partir de las 34 semanas de gestacin. c) Edad gestacional: a partir de la 34 semanas de gestacin. 33.1.2.- Muestra: cinco ml (mnimo) de lquido amnitico 33.1.3.- Procedimiento Test de Clement El estudio indica madurez pulmonar por medio de sustancias tensioactivas presentes en el lquido amnitico, se analiza la estabilidad de la espuma con diluciones crecientes de lquido amnitico. 1.- Utilizar 4 tubos 2.- Agitar suavemente la muestra por inversin 3.- Agregar reactivos y muestras segn el siguiente cuadro Tubo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Lquido amnitico 1ml 0.75 ml 0.5 ml 0.25 ml Suero fisiolgico --0.25 ml 0.5 ml 0.75 ml Etanol 95 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 4.- Tapar los tubos y agitar vigorosamente los tubos por 20 segundos y dejar 15 minutos en posicin vertical. 5.- Analizar la formacin en la parte superior del lquido como anillo continuo de espuma. 33.1.4.- Informe: Informar nmero de tubos positivos del total. (Ej.: 1 tubo positivo de 4) 33.1.5 Valor Normal: Al menos 3 tubos positivos de 4 33.1.6.- Limitaciones Interfieren muestras con sangre y meconio. 33.2.1.- Procedimiento de Clulas Naranjas Indica la madurez epidmica fetal 1.-Colocar una gota de lquido amnitico previamente homogenizado en un portaobjeto. 2.- Colocar una gota de azul de Nilo 0.9% y mezclar con el lquido amnitico. 3.- Contar 100 clulas e informar el porcentaje de clulas naranjas.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 33.2.2.-Valor normal Porcentaje de clulas anaranjadas < 20% 20 60 % > 60% 33.3.1.-Recuento de Leucocitos
LIQUIDO AMNIOTICO DE
Edad Gestacional < 37 semanas de gestacin 37 40 semanas de gestacin > 40 semanas de gestacin
Agitar la muestra por inversin y realizar recuento en cmara. 1.- Cargar la cmara de recuento. 2.- Dejar reposar unos minutos. 3.- Contar las 4 esquinas de la cmara y multiplicar por 2.5. Valor normal: < de 50 clulas por mm3 para descartar infeccin intramnitica, junto a glucosa y posteriormente el cultivo.
33.4.1.- Glucosa Centrifugar la muestra y realizar la determinacin en Cobas 6000 c501. Valor normal: < 45 mg/dL 33.5.1.- Creatinina Centrifugar la muestra y realizar la determinacin Actualmente en uso COBAS 6000 y COBAS c501). Valor normal: Inicio de gestacin Trmino 0.8 1.1 mg/dL 1.8 4.0 mg/dL
BILIRRUBINA MICROMETODO DE
34.- Bilirrubina Total por Micro mtodo (Bilita) (Bilirrubinmetro BIL 100) 34.1 Introduccin Alrededor de un 40 a 60% de los recin nacidos de trmino (RNT) presentan ictericia en los primeros das de vida. En el recin nacido aparece ictericia cuando la bilirrubina srica sobrepasa los 6 a 7 mg/dL. En el periodo neonatal precoz, la mayor parte de las veces, es un hecho fisiolgico, pero en cualquier otra edad es siempre un signo patolgico. En el recin nacido, el problema ha sido motivo de preocupacin dado las cifras altas de bilirrubinemia se han asociado a dao grave del sistema nervioso central. En la gran mayora de estos casos hay una causa patolgica de hiperbilirrubinemia. La principal causa es la hemlisis y la primera conocida fue la Enfermedad Hemoltica de isoinmunizacin Rh. (escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/ManualPed/RNIctericia.html) 34.2 Muestra Dos capilares heparinizados con sangre capilar sellado en un extremo con plasticina. 34.3 Procedimiento 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Centrifugar capilares en micro centrfuga por 5 minutos a 12.000 rpm. Retirar el porta capilar hasta tope (aparece en pantalla 0). Debe haber capilar con agua destilada en posicin A. Poner el capilar con la muestra, evitando tocar con los dedos la parte central del capilar, donde se encuentra el plasma, en posicin B, debiendo quedar el plasma dentro de las dos lneas paralelas. Introducir el porta capilar hasta la lnea blanca y esperar 0. Cerrar hasta el fondo y esperar el resultado. Se leen los dos capilares y se saca el promedio. Si el equipo da una alarma sonora y aparece EEE, retirar el porta capilar y volver a empezar desde el punto 2. Informar el resultado.
34.4 Valor Normal: En recin nacidos: 1.0 12.0 mg/dL. 34.5 Valor de Pnico Deben ser avisados de inmediato al servicio respectivo: > 18.0 mg/dL.
ESPECTROFOTOMETRIA DEL LIQUIDO AMNIOTICO DE
35.- Espectrofotometra del lquido amnitico 35.1 Introduccin El lquido amnitico de algunas embarazadas con incompatibilidad Rh, tienen coloracin amarillenta, debido a la presencia de bilirrubina y otros productos intermedios del metabolismo del Hem. Cuando se comparan las absorbancias de lquidos amniticos de fetos normales y de fetos eritroblastticos, se observa una distorsin de estos ltimos. El grado de distorsin a 450 nm ha sido usado para predecir la gravedad de la condicin hemoltica. Normalmente, en el curso del ltimo trimestre del embarazo existen trazas de bilirrubina en el lquido amnitico, que en el transcurso del mismo disminuyen paulatinamente y progresivamente, hasta prcticamente desaparecer en la fase final. Los fetos afectados de eritroblastocis, se acompaan de cifras elevadas a lo largo del embarazo cuya medida espectrofotomtrica resulta esencial para conocer el grado de hemlisis del feto y poder seguir su evolucin. La tasa de bilirrubina y su evolucin en el tiempo, permite al obstetra adoptar la conducta ms propicia para conservar el producto de la concepcin. 35.2 Muestra Lquido amnitico en tubo sin anticoagulante y cubierto con papel calco para protegerlo de la luz. 35.3 Procedimiento La determinacin se realiza en el lquido amnitico protegido de la luz, efectuando lecturas a diferentes longitudes de onda las que van generalmente entre los 350 y 700 nm, contra blanco de agua destilada.. Las lecturas pueden realizarse con intervalos de 10 nm. Los valores as obtenidos se llevan a papel semilogaritmico.
Centrifugar la muestra a 3000 rpm por 10 a 20 min. Si el sobrenadante no es lmpido, filtrar. Examinar el filtrado en un espectrofotmetro en el rango de 300 a 600 nm, con preferencia a intervalos de 10 nm en el rango crtico entre 350 a 525 nm. Usar agua destilada como blanco. Construir una curva en papel semilogaritmico con los valores obtenidos, donde las coordenadas logartmicas, corresponden a valores de absorbancia y las abscisas aritmticas a las distintas longitudes de onda. Con la unin de los puntos se obtiene una curva. Trazar una lnea que una los dos puntos de mayor depresin que por lo general estn entre los 350 y 550 nm..Obtener el delta A 450 (D.O neta), que es la diferencia entre el valor ledo a 450 nm y el valor terico a 450 nm, dado por la lnea trazada entre 350 y 550 nm.
TRIYODOTIRONINA T3 DE
36.- Triyodotironina (Cobas 6000 Mdulo e601) 6.1 Introduccin La triyodotironina (T3) es la principal hormona responsable de los efectos de las hormonas tiroideas sobre los distintos rganos diana. La mayor parte de la T3 se forma de manera extra tiroidea en el hgado por 5 desyodacin enzimtica de la T4. Por esto la concentracin de T3 en suero refleja ms bien el estado funcional del tejido perifrico que la tasa de secrecin de la tiroides. La conversin disminuida de T4 a T3 provoca la reduccin de la concentracin de T3. Este fenmeno ocurre bajo la influencia de frmacos tales como el propanolol, los glucocorticoides o la amiodarona, as como en enfermedades extra tiroideas graves y se lo denomina sndrome de la T3 baja. Si bien la T3, al igual que la T4, se encuentra en ms de un 99% unida a protenas de transporte, su afinidad respecto de las protenas es alrededor de 10 veces menor a la de la T4. 36.2 Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestras o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con Heparina de sodio, litio o amonio Plasma con EDTA tripotsico Plasma con citrato sdico Plasma con fluoruro sdico 36.3 Reactivos M: Micropartculas recubiertas de estreptavidina R1: Anticuerpo anti T3 policlonal (oveja) marcado con quelato de rutenio. ANS R2: T3 biotinilada 36.4 Principio del Test Principio de competicin con una duracin total de 18 min. 1 incubacin: 30 l de muestra y un anticuerpo especfico anti T3 marcado con quelato de rutenio reacciona con el ANS (cido 8- anilino-1-naftalensulfnico) para liberar la T3 ligada de la muestra. 2 incubacin: tras la incorporacin de T3 marcada con biotina y de micropartculas recubiertas de estreptavidina, los puntos de fijacin an libres del anticuerpo marcado se ocupan formndose un complejo
TRIYODOTIRONINA T3 DE
Anticuerpo- hapteno. El complejo total se fija por interaccin entre la biotina y la estreptavidina a la fase slida. La mezcla de reaccin es trasladada a la clula de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente por el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con un fotomultiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin realizada en el sistema a partir de una calibracin de dos puntos y una curva principal incluida en el cdigo de barras del reactivo. 36.5 Valores de Referencia 1.3-3.1 nmol/l o bien 0.8-2.0 ng/ml 36.6 Interferencias y Limitaciones El test no se ve afectado por ictericia (bilirrubina < 599mol/l o <35 mg/dl), hemlisis (Hb <1.2 mmol/l 2.0g/dl), lipemia (<1800 mg/dl) ni biotina <82 nmol/l 20ng/ml. En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (> 5 mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la ltima administracin. La fenitona, la fenilbutazona y los salicilatos provocan la liberacin de la T3 de las protenas de fijacin, si bien reduce el nivel hormonal total de T3 con una concentracin normal de FT3. Si la concentracin de las protenas de fijacin (TBG, albmina) es patolgica, los niveles de T3 total pueden situarse fuera del intervalo normal, por ms que el estado metablico del paciente sea eutiroideo, como sucede por ejemplo en enfermedades extratiroideas, a embarazadas o bajo suministro de anticonceptivos. En ese caso se recomienda de determinar las concentraciones de FT3 o FT4
TETRAYODOTIRONINA TIROXINA T4 DE
37.- Tiroxina T4 (Cobas 6000 Mdulo e601) 37.1.- Introduccin La hormona Tiroxina (T4) es el principal producto de secrecin del tiroides y forma parte integrante del mecanismo de regulacin entre hipotlamo, hipfisis anterior y tiroides. La T4 influye de manera anablica sobre el metabolismo, formndose en el tiroides en una reaccin que acopla dos molculas de DIT (3,5-diyodotirosina). Ligada a la tiroglobulina, la T4 se almacena en el lumen de los folculos tiroideos y se secreta segn se necesite por la accin de la HET. La mayor parte de la tiroxina total (T4) en suero (>99%) est ligada a protenas. La concentracin de las protenas transportadoras sricas est sujeta a influencias exgenas y endgenas. Por lo tanto, al evaluar la concentracin de las hormonas tiroideas, tambin debe tomarse en cuenta el estado de las protenas ligantes. De lo contrario, las alteraciones en dichas protenas (como p. Ej. Durante el embarazo, por la administracin de frmacos conteniendo estrgenos o ante un sndrome nefrtico) podran llevar a interpretaciones errneas del estado metablico tiroideo. La determinacin de T4 se indica en los siguientes casos. En la deteccin de hipertiroidismo, del hipertiroidismo primario y segundario y para controlar la terapia de supresin de HET. 37.2.- Obtencin de la muestra Suero recogido en tubos estndar de de muestras o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con heparina de sodio o de litio, EDTA tripotsico. 37.3.- Reactivos M: Micropartculas recubiertas de estreptavidina R!: Anticuerpo policlonal anti T4 de oveja marcado con quelato de rutenio 100 ng/ml. R2: T4 biotinilada 20 ng/ml. 37.4.- Principio del Test Principio de competicin con una duracin de 18 minutos. 1 Incubacin: la muestra (15 l) y un anticuerpo especfico anti T4 marcado con quelato de rutenio reacciona con el ANS (cido 8-anilino-1-naftalensulfnico) para liberar la T4 ligada de la muestra. 2 Incubacin: tras la incorporacin de T4 marcada con biotina y de micropartculas recubiertas con estreptavidina, los puntos de fijacin an libres del anticuerpo marcado se ocupan formndose un complejo anticuerpo-hapteno. El complejo total se fija por interaccin entre la biotina y la estreptavidina a la fase slida.
TETRAYODOTIRONINA TIROXINA T4 DE
La mezcla de reaccin es trasladada a la clula de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con un foto multiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin realizada en el sistema a partir de una calibracin de dos puntos y una curva principal incluida en el cdigo de barras del reactivo. 37.5.- Valores de Referencia 5.1-14.1 g/dl o bien 66-181 nmol/l 37.6.- Interferencias y Limitaciones El test no se afectado por ictericia (bilirrubina >37 mg/dl), hemlisis (Hb >2.3g/dl), lipemia (triglicridos >2.500 mg/dl) ni biotina >100ng/ml. En pacientes con tratamiento con altas dosis de biotina (> 5mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la administracin. El presente test no debe aplicarse en pacientes bajo tratamiento con hipolipemiantes que contienen D-T4. Si se desea evaluar la funcin tiroidea de estos pacientes se debe suspender el tratamiento durante 4 a 6 semanas a fin de establecer su estado fisiolgico.
TIROXINA LIBRE FT4 DE
38.- Tiroxina Libre FT4 (Cobas 6000 Mdulo e601) 38.1 Introduccin La hormona tiroidea (T4) forma parte del sistema regulador del tiroides e influye en todo el metabolismo. La mayor parte de la tiroxina total est ligada a protenas transportadoras (TBG, protena, albmina). La tiroxina libre (FT4) constituye el componente fisiolgicamente activa de la tiroxina. La determinacin de la tiroxina libre se ha convertido en un mtodo esencial de diagnstico clnico de rutina. La T4 libre se mide conjuntamente con la HET frente a la sospecha de una disfuncin tiroidea. La determinacin de la T4 libre tambin se indica en la supervisin de la terapia tiro supresora. La determinacin de la T4 libre tiene la ventaja de no depender de las variaciones en la concentracin ni la capacidad de fijacin de las protenas ligantes y por ello no requerir la determinacin adicional de un parmetro de fijacin ( captacin de tiroxina, globulina fijadora de tiroxina). Son numerosos los mtodos disponibles para evaluar las concentraciones de las hormonas tiroideas libres. La medicin directa de la T4 libre y la T3 libre mediante dilisis de equilibrio o ultra filtracin sirve principalmente de mtodo de referencia para la estandarizacin de procedimientos inmunolgicos empleados en el diagnstico de rutina. 38.2.- Obtencin de la muestra Suero sin diluir recogido en con tubos estndar de muestras o con gel de separacin Plasma con heparina de litio, sodio o amonio Plama con EDTA tripotsico Plasma con citrato sdico Plasma con fluoruro sdico 38.3.- Reactivos M: Micropartculas recubiertas de estreptavidina R!: Anticuerpo policlonal anti T4 de oveja marcado con quelato de rutenio 50 ng/ml. R2: T4 biotinilada 2.5 ng/ml. 38.4.- Principio del Test Principio de competicin con una duracin de 18 minutos. 1 Incubacin: la muestra (15 l) y un anticuerpo especfico anti T4 marcado con quelato de rutenio reacciona con el ANS (cido 8-anilino-1-naftalensulfnico) para liberar la T4 ligada de la muestra.
TIROXINA LIBRE FT4 DE
2 Incubacin: tras la incorporacin de T4 marcada con biotina y de micropartculas recubiertas con estreptavidina, los puntos de fijacin an libres del anticuerpo marcado se ocupan formndose un complejo anticuerpo-hapteno. El complejo total se fija por interaccin entre la biotina y la estreptavidina a la fase slida. La mezcla de reaccin es trasladada a la clula de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con un fotomultiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin realizada en el sistema a partir de una calibracin de dos puntos y una curva principal incluida en el cdigo de barras del reactivo 38.5.- Valores tericos: 0.93-1.7 ng/dl o bien 12-22 pmol/l 38.6 Limitaciones e Interferencias El test no se afectado por ictericia (bilirrubina >41 mg/dl), hemlisis (Hb >2g/dl), lipemia (triglicridos >2.000 mg/dl) ni biotina >100ng/ml. En pacientes con tratamiento con altas dosis de biotina (> 5mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la administracin. El presente test no debe aplicarse en pacientes bajo tratamiento con hipolipemiantes que contienen D-T4. Si se desea evaluar la funcin tiroidea de estos pacientes se debe suspender el tratamiento durante 4 a 6 semanas a fin de establecer su estado fisiolgico.
DE
HORMONA ESTIMULADORA DE LA TIROIDES (HET) TSH
39.- Tirotropina TSH (Cobas 6000 Mdulo e601) 39.1.- Introduccin La hormona estimulante de la glndula tiroides (HET, tirotropina) es una glucoprotena con un peso molecular aproximado de 30.000 dalton que est compuesta de dos subunidades. La subunidad es portadora de la informacin inmunolgica especfica de la HET, mientras que la cadena contiene informacin especfica de la especie con una secuencia de aminocidos idntica a la cadena de la HL HEF y GCH. La TSH se produce en las clulas basfilas especficas de la hipfisis anterior y est sujeta a un ritmo circadiano de secrecin. La liberacin hipofisiaria de TSH constituye el principal mecanismo regulador de la accin biolgica de las hormonas tiroideas. El efecto de la TSH sobre las fases de formacin y secrecin las hormonas tiroideas es tanto estimulante como proliferante. La determinacin de la TSH sirve como test inicial en el diagnstico tiroideo. Pequeas variaciones en la concentracin de la fraccin libre de las hormonas tiroideas implican importantes alteraciones del nivel de TSH. Esto se hace de la TSH un parmetro altamente sensible y especfico para la interpretacin de la funcin tiroidea, idneo para la deteccin y/o exclusin de alteraciones en el mecanismo de regulacin central del hipotlamo, hipfisis, y la tiroides. 39.2.- Obtencin de la muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra o tubos conteniendo gel de separacin Plasma con heparina de litio, sodio o amonio Plasma con EDTA tripotsico Plasma con citrato sdico Plasma con fluoruro sdico 39.3.- Reactivos M: Micropartculas recubiertas de estreptavidina R!: Anticuerpo monoclonales biotinilados anti TSH. R2: Anticuerpos anti TSH 39.4.- Principio del Test Principio de competicin con una duracin de 18 minutos. 1 Incubacin: la muestra (50 l) y un anticuerpo monoclonal biotinilado anti TSH marcado con quelato de rutenio forma un complejo sndwich
DE
HORMONA ESTIMULADORA DE LA TIROIDES (HET) TSH
2 Incubacin: tras la incorporacin de micro partculas recubiertas con estreptavidina, el complejo se fija a la fase slida por la interaccin de entre biotina y estreptavidina. La mezcla de reaccin es trasladada a la clula de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con un fotomultiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin realizada en el sistema a partir de una calibracin de dos puntos y una curva principal incluida en el cdigo de barras del reactivo. 39.5.- Valores de Referencia: 0.27-4.2 UI/ml 39.6.- Interferencias y Limitaciones El test no se ve afectado por ictericia (bilirrubina <701mol/l o <41 mg/dl), hemlisis (Hb <0.621 mmol o <1 g/dl), lipemia (Colesterol <1500 mg/dl) ni biotina < 60 ng/ml. En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (>5 mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la ltima administracin. No se ha encontrado interferencias con Factores reumatoides (hasta 3250 U/ml) ni en muestras de pacientes en dilisis.
HORMONA ESTIMULANTE DE LOS FOLICULOS (FSH) DE
40.- Hormona Folculo Estimulante (FSH) (Cobas 6000 Mdulo e601) 40.1- Introduccin La hormona folculo estimulante, FSH, junto a la HL pertenece a la familia de las gonadotrofinas. Ambas hormonas regulan y estimulan de manera sinrgica el crecimiento y la funcin de las gnadas (ovarios y testculos). La FSH es una glucoprotena que consta de dos subunidades (las cadenas y ). Su peso molecular aproximado es de 32.000 dalton. Las gonadotrofinas regulan el ciclo de la menstruacin femenina. Las clulas gonadotropas de la hipfisis anterior liberan de forma pulstil la FSH y la LH. Las concentraciones de las hormonas en circulacin estn controladas por hormonas esteroides a travs de su retroaccin negativa en el hipotlamo. En los ovarios, la FSH y la LH estimulan el crecimiento y la maduracin del folculo y, con ello, la biosntesis de estrgenos en los folculos. Hacia la mitad del ciclo, la concentracin de FSH alcanza un pico, aunque en menos grado que la LH. Los valores de FSH estn elevados durante la menopausia debido a modificaciones de la funcin ovrica as como por la disminucin de la secrecin de estrgenos. La determinacin de la concentracin de FSH sirve para el reconocimiento de trastornos funcionales en el eje hipotlamo, hipfisis, gnadas. La determinacin combinada de HL y FSH est indicada en los siguientes casos: enfermedades congnitas con aberraciones cromosmicas, en caso de ovarios poliqusticos y del sndrome climatrico, as como para detectar las causas de amenorrea. 40.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o en tubos con gel de separacin Plasma con heparina (litio, sodio, amonio) y EDTA tripotsico 40.3.- Reactivos M: Micropartculas recubiertas con estreptavidina R1: Anticuerpo anti Hormona Folculo Estimulante unido a biotina R2: Anticuerpo anti Hormona Folculo Estimulante, marcados con rutenio. 40.4.- Principio del Test Tcnica sndwich con una duracin total de 18 minutos. 1 Incubacin: 40 l de muestra, un anticuerpo biotinilado monoclonal especfico anti Hormona Folculo Estimulante y un anticuerpo especfico monoclonal anti Hormona Folculo Estimulante marcado con quelato de rutenio forman un complejo sndwich.
HORMONA ESTIMULANTE DE LOS FOLICULOS (FSH) DE
2 Incubacin: Despus de la incorporacin de micropartculas recubiertas de estreptavidina, el complejo formado se fija a la fase slida por la interaccin entre biotina y estreptavidina. La mezcla de reaccin es trasladada a la celda de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con un fotomultiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin de dos puntos y una curva master incluida en el cdigo de barras del reactivo.
40.5.- Valores de Referencia Mujeres Fase folicular: Fase ovular: Fase ltea: Post menopausia: Hombres:
3.5 - 12.5 mIU/ml 4.7 - 21.5 mIU/ml 1.7 - 7.7 mIU/ml 26 - 135 mIU/ml 1.5 - 12.4 mIU/ml
40.6.- Interferencias y Limitaciones El test no se ve afectado por ictericia (bilirrubina <1094mol/l o <64 mg/dl), hemlisis (Hb <0.621 mmol o <1 g/dl), lipemia (Colesterol <1900 mg/dl) ni biotina < 60 ng/ml. En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (>5 mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la ltima administracin. No se ha encontrado interferencias con Factores reumatoides (hasta 2250 U/ml).
HORMONA LUTEINIZANTE LH DE
41.- Hormona Luteinizante (LH) (Cobas 6000 Mdulo e601) 41.1.- Introduccin La hormona Luteinizante pertenece, junto a la hormona FSH a la familia de las gonadotrofinas. Ambas hormonas regulan y estimulan de manera sinrgica el crecimiento y la funcin de las gnadas (ovario y testculos). La LH, al igual que la FSH y HCG, es una glucoprotena que consta de dos subunidades y. Esta proteohormona, compuesta de 121 aminocidos y tres cadenas de azcar, tiene un peso molecular de 29.500 Dalton. La gonadotrofinas regula el ciclo de la menstruacin femenina. Las clulas gonadotrofas de la hipfisis anterior liberan de forma pulstil la FSH y la LH, que son transportadas a los ovarios por la circulacin sangunea. En los ovarios, las gonadotrofinas estimulan el desarrollo y maduracin de los folculos y, con ello, las biosntesis de estrgenos y de la progesterona. Las mayores concentraciones de LH se encuentran durante el denominado pico de la mitad del ciclo e induce la ovulacin y formacin del cuerpo lteo cuyo principal producto de secrecin es la progesterona. En las clulas de Leydig de los testculos, la LH estimula la produccin de testosterona. La determinacin de la concentracin de LH sirve para el reconocimiento de trastornos funcionales en el hipotlamo, hipfisis, y gnadas. La determinacin combinada de LH Y FSH est indicada en los siguientes casos: enfermedad congnita con aberraciones cromosmicas (como P7E el sndrome de Turner) en caso de ovarios poliqusticos y del sndrome climatrico, frente a una sospecha de insuficiencia de las clulas de Leydig, as como para detectar las causas de amenorrea. 41.2.- Muestras Suero recogido en tubos estndar de toma de muestra (sin anticoagulante) o tubos con gel de separacin Plasma con: heparina (Litio, sodio, amonio). EDTA tripotsico Fluoruro sdico. 41.3.-Reactivos M: Micropartculas recubiertas de estreptavidina R1: anticuerpos anti LH unidos a biotina R2: anticuerpos anti LH marcados con quelato de rutenio
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 41.4.- Principio del Test
HORMONA LUTEINIZANTE LH DE
1 Incubacin: 20 l de muestra, un anticuerpo monoclonal biotinilado especfico anti LH y un anticuerpo monoclonal especfico anti LH marcado con un quelato de rutenio reaccionan para formar un complejo sndwich. 2 incubacin: Despus de la incorporacin de micropartculas recubiertas de estreptavidina, el complejo formado se fija a la fase slida por la interaccin de la biotina y estreptavidina. La mezcla de reaccin es trasladada a la celda de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con el fotomultiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin realizada en el sistema a partir de una calibracin de dos puntos y una curva master incluida en el cdigo de barras del reactivo. 41.5.- Valores de Referencia Mujeres Fase folicular: Fase ovular: Fase ltea: Post menopausia: Hombres:
2.4-12.6 mIU/ml 14 - 96 mIU/ml 1.0-11.4 mIU/ml 7.7 - 59 mIU/ml 1.7 - 8.6 mIU/ml
41.6.- Interferencias y Limitaciones El test no se ve afectado por ictericia (bilirrubina <1129 mol/l o <66 mg/dl), hemlisis (Hb <0.621 mmol o <1 g/dl), lipemia ( Colesterol <1900 mg/dl) ni biotina < 50 ng/ml.. En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (>5 mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la ltima administracin. No se ha encontrado interferencias con Factores reumatoides (hasta 1500 U/ml).
PROLACTINA DE
42.- Prolactina (Cobas 6000 Mdulo e601) 42.1 Introduccin La prolactina se sintetiza en la hipfisis anterior y es secretada de forma pulstil. Se trata de una hormona compuesta por 198 aminocidos con un peso molecular de aprox. 22-23 Kilodalton. La prolactina se encuentra en el suero en 3 formas diferentes. Su forma monmera es inmunobiolgicamente activa little representa aprox. 80%, lo forma dmera big-biolgicamente inactiva, representa el 5-20%, mientras que la forma tetramricabig-big con baja actividad biolgica, el 0.5-5%. El rgano diana de la prolactina es la glndula mamaria, cuyo desarrollo y diferenciacin estimula. Altas concentraciones de prolactina inhiben la gnesis esteroide de los ovarios, as como la produccin y secrecin de las gonadotrofinas hipofisiarias. Durante el embarazo, la concentracin de prolactina aumenta debido a la produccin elevada de los estrgenos y de la progesterona. Tras el parto, el efecto estimulante de la prolactina en la glndula mamaria permite la lactancia. La hiperprolactinemia es la causa primordial de alteraciones en la fertilidad en ambos sexos. La determinacin de prolactina est indicada para el diagnstico de ciclos anovulatorios, amenorrea hiperprolactinmica y galactorrea, ginecomastia y azoospermia. Adems, la determinacin de prolactina es til ante la sospecha de carcinoma de mama y de tumor hipofisiario. 42.2.-Muestras Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) y tubos que contengan gel de separacin. Plasma: Con heparina de litio, EDTA tripotsico 42.3.- Reactivos M: micropartculas recubiertas de estreptavidina R1: Anticuerpos anti-prolactina unido a biotina R2: Anticuerpos anti-prolactina marcados con quelato de rutenio 42.4.- Principio del Test Tcnica sndwich con una duracin de 18 minutos. 1 Incubacin: 10 l de muestra y un anticuerpo biotinilado especfico anti- prolactina forman un primer complejo.
PROLACTINA DE
2 Incubacin: Tras aadir un anticuerpo especfico monoclonal anti-prolactina marcado con quelato de rutenio se forma un complejo sndwich que, con la ayuda de micropartculas cubiertas de estreptavidina, se fija a la fase slida por la interaccin de la biotina y la estreptavidina. La mezcla de reaccin es trasladada a la celda de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con un fotomultiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin realizada en el sistema a partir de una calibracin de dos reactivo. 42.5.- Valores de Referencia Hombres: Mujeres no embarazadas: 86-324 UI/ml 102-496 UI/ml
42.6 Interferencias y Limitaciones El test no se ve afectado por ictericia (bilirrubina <513 mol/l o <30mg/dl), hemlisis (Hb <0.932 mmol o <1.5 g/dl), lipemia (Colesterol <1500 mg/dl) ni biotina < 40 ng/ml. En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (>5 mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la ltima administracin. No se ha encontrado interferencias con Factores reumatoides (hasta 1100 U/ml).
DE
GONADOTROFINA CORIONICA HUMANA + SUBUNIDAD BHCG
43.- Gonadotrofina Corinica Humana (Cobas 6000 Mdulo e601) 43.1.- Introduccin Test inmunolgico in vitro destinado a la determinacin cuantitativa de la suma de la gonadotrofina corinica humana ya la subunidad de la HCG en suero y plasma humanos. El test HCG es una ayuda en: La deteccin precoz y el seguimiento del embarazo. El presente anlisis se combina asimismo con otros parmetros para evaluar el riesgo de trisoma 21 (Sndrome de Down). En este caso, se requiere investigaciones posteriores para diagnosticar las aberraciones cromosmicas. En oncologa contribuye al tratamiento de pacientes con enfermedades trofoblsticas. El test HCG contribuye a detectar y controlar las clulas tumorales productoras de HCG tanto de origen ovrico, placentario como testicular. La gonadotrofina corinica humana HCG pertenece, al igual que la LH, FSH Y TSH a la familia de las glucoprotenas y consiste en dos subunidades (cadenas y ), asociadas a la hormona intacta. Las cadenas son casi idnticas en las 4 hormonas glucoproteicas, mientras que las cadenas , responsables de las diferentes funciones hormonales especficas, estn compuestas de manera heterognea. Durante el embarazo la placenta produce HCG mientras que, fuera del embarazo, es generado por los tumores del trofoblasto, de clulas germinales con tejido trofoblstico y por ciertos tumores no trofoblsticos. En el suero de las mujeres embarazadas la HCG se encuentra mayoritariamente en forma intacta. Valores elevados son indicio de coriocarcinomas, molas hidatidiformes o embarazos mltiples. Valores disminuidos indican amenaza de aborto, aborto incompleto, embarazo ectpico, gestosis o muerte embrionaria intra uterina. 43.2 Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio o amonio EDTA bisdico y tripotsico Citrato sdico Fluoruro sdico 43.3.- Reactivos M: Micropartculas recubiertas con estreptavidina R1: Anticuerpos anti HCG unido a biotina R2: anticuerpos anti HCG marcados con quelato de rutenio.
DE
GONADOTROFINA CORIONICA HUMANA + SUBUNIDAD BHCG
Tcnica sndwich con una duracin de 18 minutos. 1 Incubacin: 10 l de muestra, un anticuerpo biotinilado monoclonal especfico anti HCG y un anticuerpo especfico monoclonal HCG marcado con quelato de rutenio forman un complejo sndwich. 2 Incubacin: Despus de la incorporacin de las micropartculas recubiertas de estreptavidina, el complejo formado se fija a la fase slida por la interaccin entre biotina y estreptavidina. La mezcla de reaccin es trasladada a la celda de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con un fotomultiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin realizada en el sistema a partir de una calibracin de dos reactivo. 43.5.- Valores de referencia Mujer Pre menopausica: < 1 mU/ml. Post menopausica: < 7 mU/ml. Hombre: <2 mU/ml.. 43.6.- Limitaciones e interferencias El test no se ve afectado por ictericia (bilirrubina <410 mol/l o <24 mg/dl), hemlisis (Hb <0.0621 mmol o <1.0 g/dl), lipemia (Colesterol <1400 mg/dl) ni biotina < 80 ng/ml. En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (>5 mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la ltima administracin. No se ha encontrado interferencias con Factores reumatoides (hasta 3400 U/ml).
TROPONINA T DE
44.- Troponina T (Cobas 6000 Mdulo e601) 44.1.- Introduccin Troponina T /TnT) constituye uno de los componentes del aparato contrctil de la musculatura estriada. Si bien la TnT cumple la misma funcin en todos los msculos estriados, la TNT propia de la musculatura cardiaca (TnT cardiaca, peso molecular 39.7 KD) se diferencia claramente de la TnT de la musculatura esqueltica. Debido a su alta especificidad tisular, la TnT cardiaca (cTnT) es un marcador cardiaco especfico muy sensible al dao miocrdico. Frente a un infarto agudo de miocardio (IM), la concentracin srica de TnT aumenta ya a las 3 a 4 horas tras la aparicin de los primeros sntomas y puede permanecer elevada durante un mximo de 14 das. La troponina T es un marcador independiente que permite pronosticar el desenlace clnico a corto, mediano o largo plazo del sndrome coronario agudo (SCA). Adems, cuatro estudios clnicos multicntricos efectuados con ms de 7000 pacientes han demostrado que la troponina T ayuda a identificar a aquellos pacientes que responden positivamente al tratamiento antitrombtico. Debido al hecho comprobado de que la troponina cardiaca constituye el mejor marcador para predecir la resolucin clnica de pacientes con SCA y, ya que adems representa una herramienta til para modelar el tratamiento antitrombtico, la sociedad europea de cardiologa y el colegio Americano de Cardiologa han resuelto revisar la definicin tradicional del infarto de miocardio (IM). Segn la nueva definicin, se diagnostica un IM cuando al aparecer los sntomas clnicos de isquemia aguda, las concentraciones de troponina cardiaca en sangre superan el percentil 99 del lmite de referencia (poblacin sana). La imprecisin del coeficiente de variacin) respecto del percentil 99 de los test de troponina se ha definido como inferior o igual al 10%. 44.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma: 44.3.- Reactivos M: micropartculas recubiertas con estreptavidina R1: Anticuerpos anti-troponina T biotinilada R2: anticuerpo anti-troponinaT, marcados con quelato de rutenio Con EDTA bi-tripotsico de sodio
TROPONINA T DE
Tcnica sndwich con una duracin de 18 minutos. 1 Incubacin: 15 l de muestra, un anticuerpo biotinilado monoclonal especfico anti-troponina T y un anticuerpo especfico monoclonal anti- troponina T marcado con quelato de rutenio forman un complejo sndwich. 2 Incubacin: Despus de la incorporacin de micropartculas recubiertas de estreptavidina, el complejo formado se fija a la fase slida por la interaccin entre biotina y estreptavidina. La mezcla de reaccin es trasladada a la clula de lectura donde, por magnetismo, las micropartculas se fijan temporalmente a la superficie del electrodo. Los elementos no fijados se eliminan posteriormente con el reactivo ProCell. Al aplicar una corriente elctrica definida se produce una reaccin quimioluminiscente cuya emisin de luz se mide directamente con un fotomultiplicador. Los resultados se obtienen mediante una curva de calibracin realizada en el sistema a partir de una calibracin a dos puntos y una curva principal (calibracin de 5 puntos) incluida en el cdigo de barras del reactivo. 44.5.- Valores de referencia: Troponina T: < 0.01 g/l o bien < 0.01 ng/ml 44.6.- Limitaciones e interferencias El test no se ve afectado por ictericia (bilirrubina <462 mol/l o <27 mg/dl), hemlisis (Hb <0.062 mmol o <1.0 g/dl), lipemia ( Colesterol <1500 mg/dl) ni biotina < 50 ng/ml.. En pacientes en tratamiento con altas dosis de biotina (>5 mg/da), la extraccin de la muestra no debera efectuarse antes de 8 horas tras la ltima administracin. No se ha encontrado interferencias con Factores reumatoides (hasta 2000 U/ml).
DE
INMUNOGLOBULINA M IGM/IgM
45.- Inmunoglobulina M (Cobas 6000 y c501) 45.1.-Introduccin La Inmunoglobulina M, constituye el 6% de las inmunoglobulinas plasmticas, la IgM es el primer anticuerpo especfico que aparece en suero despus de una infeccin. Es capaz de activar el complemento y con ello ayuda a eliminar las bacterias. Tras la infeccin y comparando con la IgG, el nivel de IgM vuelve a disminuir rpidamente. Este hecho permite el diagnstico diferencial entre infecciones agudas y crnicas al comparar los ttulos de Ig M e Ig G. si se encuentra elevada la IgM se trata de una infeccin aguda, mientras que si predomina la IgG se trata de una infeccin crnica (por ej. En la rubola y hepatitis vrica). Niveles elevados de IgM policlonal se hallan en infecciones vricas, bacterianas en hepatopatas, el escleroderma, la artritis reumatoide, la fibrosis qusticas y en la adiccin a la herona. Las concentraciones de IgM monoclonal aumentan en Macroglobulinemia de Waldenstrom. Estn disminuidos en inmunodeficiencias congnitas y adquiridas, tambin en enteropatas con prdida de protenas y por quemaduras extensas. Una sntesis reducida de IgM se observa en los sndromes de inmunodeficiencia congnita y adquirida. Debido a que la sntesis de IgM comienza tardamente, la concentracin srica de IgM en nios es inferior a la de los adultos. 45.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio EDTA bisdico y tripotsico 45.3.-Reactivos R1: Tampn TRIS: 20mmol/L, pH 8.0; NaCl: 200mmol/L; polietilenglicol: 3.6%. R2: Anticuerpos anti-IgM humana; Tampn TRIS: 20mmol/L, pH 8.0; NaCl: 150 mmol/L. 45.4.- Principio del Test Prueba Inmunoturbidimtrica. Los anticuerpos anti-IgM reaccionan con el antgeno de la muestra formando un complejo antgenoanticuerpo que se mide turbidimtricamente despus de la aglutinacin. Al aadir PEG, la reaccin avanza rpidamente hacia el punto final, incrementndose as la sensibilidad de la prueba y reduciendo simultneamente el riesgo de obtener resultados falsos negativos por muestra con exceso de antgeno.
DE
INMUNOGLOBULINA M IGM/IgM
45.5.- Valores de referencia. (Valores de referencia conforme a estandarizacin de protenas) Adultos Nios y Jvenes 0-1 ao 1-3 aos 4-6 aos 7-9 aos 10-11 aos 12-13 aos 14-15 aos 16-19 aos 40-230 mg/dL 0-145 19-146 24-210 31-208 31-179 35-239 15-188 23-259 mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL
45.6.-Limitaciones e interferencias No presenta interferencia significativa con bilirrubina, hemlisis o lipemia. Al igual que otros test turbidimtricos o nefelomtricoas, el presente test puede no proporcionar resultados exactos para muestras de pacientes con una gammapata monoclonal, pues debido a sus caractersticas individuales, este tipo de muestra solo puede determinarse por electroforesis.
DE
INMUNOGLOBULINA G IGG/IgG
46.- Inmunoglobulina G (Cobas 6000 y c501) 46.1.-Introduccin Aproximadamente el 80% de las inmunoglobulinas sricas son inmunoglobulina G. la defensa contra organismos, la neutralizacin directa de toxinas y la induccin de la fijacin del complemento constituyen sus funciones principales. La IgG es la nica inmunoglobulina que puede atravesar la barrera placentaria proporcionando una inmunidad pasiva al feto y al recin nacido. Esta inmunidad disminuye gradualmente, hasta que al cabo de unos 6 meses el inmunosistema del nio comienza a funcionar, para alcanzar a sintetizar con 18 meses concentraciones aproximadas a las de los adultos. Niveles elevados de IgG policlonal se observan en Lupus eritematoso diseminado, hepatopatas crnicas (hepatitis infecciosa y cirrosis de Laennec), enfermedades infecciosas y la fibrsis qustica. La sntesis de IgG esta disminuida en los sndromes de inmunodeficiencia congnita y adquirida y en agammaglobulinemia (enfermedad de Bruton). Concentraciones disminuidas de IgG se encuentran en enteropatas con perdida proteica, el sndrome nefrtico y por quemaduras con perdida de piel. 46.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio EDTA bisdico y tripotsico 46.3.- Reactivos R1: Tampn TRIS: 20mmol/L, pH 8.0; NaCl: 200mmol/L; polietilenglicol: 3.6%. R2: Anticuerpos anti-IgG humana; Tampn TRIS: 20mmol/L, pH 8.0; NaCl: 150 mmol/L. 46.4.- Principio del Test Prueba Inmunoturbidimtrica. Los anticuerpos anti-IgG reaccionan con el antgeno de la muestra formando un complejo antgeno-anticuerpo que se mide turbidimtricamente despus de la aglutinacin. Al aadir PEG, la reaccin avanza rpidamente hacia el punto final, incrementndose as la sensibilidad de la prueba y reduciendo simultneamente el riesgo de obtener resultados falsos negativos por muestra con exceso de antgeno.
DE
INMUNOGLOBULINA G IGG/IgG
46.5.- Valores de referencia. (Valores de referencia conforme a estandarizacin de protenas) Adultos Nios y Jvenes 0-1 ao 1-3 aos 4-6 aos 7-9 aos 10-11 aos 12-13 aos 14-15 aos 16-19 aos 700-1600 mg/dL 232-1411 453- 916 504-1464 572-1474 698-1560 759-1549 716-1711 549-1584 mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL
DE
INMUNOGLOBULINA A IGA/IgA
47.- Inmunoglobulina A (Cobas 6000 y c501) 47.1.-Introduccin La inmunoglobulina A, constituye el 13% de las inmunoglobulinas plasmticas, y acta protegiendo la piel y las mucosas frente a microorganismos. Por su capacidad para fijar toxinas y en combinacin con la lisozima, desarrolla propiedades antibacterianas y antivricas. Es la inmunoglobulina que predomina en secreciones corporales tales como el calostro, la saliva y el sudor. La IgA secretada sirve de defensa en infecciones locales y juega un papel importante en la fijacin de antgenos provenientes de alimentos en el intestino. En el suero la IgA se encuentra en forma de monmero, dmero o trmero, mientras que en las secreciones del organismo est presente exclusivamente como dmero con una cadena adicional (componente de la secrecin). La determinacin de Ig A, se encuentra elevada en hepatopatas crnicas, infecciones crnicas, enfermedades autoinmunes (artritis reumatoide, lupus eritematoso), en la sarcoidosis y el sndrome de Wiscott-Aldrich, as como tambin en algunos mielomas IgA. Sus niveles se encuentran disminuidos en inmunodeficiencias congnitas y adquiridas, tambin en gastroenteropatas con prdida de protenas y por quemaduras extensas. 47.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio EDTA bisdico y tripotsico
47.3.- Reactivos R1: Tampn TRIS: 20mmol/L, pH 8.0; NaCl: 200mmol/L; polietilenglicol: 3.6%. R2: Anticuerpos anti-IgA humana; Tampn TRIS: 20mmol/L, pH 8.0; NaCl: 150 mmol/L. 47.4.- Principio del Test Prueba Inmunoturbidimtrica. Los anticuerpos anti-IgA reaccionan con el antgeno de la muestra formando un complejo antgeno-anticuerpo que se mide turbidimtricamente despus de la aglutinacin. Al aadir PEG, la reaccin avanza rpidamente hacia el punto final, incrementndose as la sensibilidad de la prueba y reduciendo simultneamente el riesgo de obtener resultados falsos negativos por muestra con exceso de antgeno.
DE
INMUNOGLOBULINA A IGA/IgA
47.5.- Valores de referencia. (Valores de referencia conforme a estandarizacin de protenas) Adultos Nios y Jvenes 0-1 ao 1-3 aos 4-6 aos 7-9 aos 10-11 aos 12-13 aos 14-15 aos 16-19 aos 70-400 mg/dL 0.00-83 20-100 27-195 34-305 53-204 58-358 47-249 61-348 mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL
COMPLEMENTO C3 DE
48.- Complemento C3 (Cobas 6000 y c501) 48.1.- Introduccin El sistema del complemento se activa por una va clsica y por una va alternativa. Ambas desembocan en un segmento Terminal comn. Dado que el factor C3 del complemento es el factor comn de las dos vas, su concentracin y la de sus productos de degradacin (incluyendo C3c) sirven para indicar el grado de activacin del complemento. Cuando los valores disminuyen, significa que se produjo una activacin. Una diferenciacin mas precisa se consigue determinando C4, si en estos casos la concentracin de C4 es normal, significa que la activacin tenga lugar por la ruta alternativa. Valores disminuidos acompaan numerosas enfermedades inflamatorias e infecciosas. Las causas principales son el lupus eritematoso sistmico (LES), la artritis reumtica, la endocarditis bacterial subaguda, viremia, infecciones de origen parasitario o sepsis bacterial. 48.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio 48.3.- Reactivos R1: Tampn TRISa: 100mmol/L, pH 8.0; polietilenglicol: 3.0%. R2: Anticuerpos anti-C3/C3b/C3c humana; Tampn TRIS: 33mmol/L. Tampn TRISa = Tris(hidroximetil)-aminometano 48.4.- Principio del Test: Test inmunoturbidimtrico Muestra y adicin de R1 (tampn) Adicin de R2 (anticuerpo anti C3) e inicio de la reaccin: Los anticuerpos en el reactivo reaccionan con los antgenos de la muestra formando un complejo antgenoanticuerpo que se mide turbidimtricamente despus de la aglutinacin. 48.5.- Valores de referencia: 90-180 mg/dL 48.6.-Limitaciones e interferencias No presenta interferencia significativa con bilirrubina, hemlisis o lipemia. Al igual que otros test turbidimtricos o nefelomtricoas, el presente test puede no proporcionar resultados exactos para muestras de pacientes con una gammapata, particularmente del tipo IgM.
COMPLEMENTO C4 DE
49.- Complemento C4 (Cobas 6000 y c501) 49.1.- Introduccin El sistema del complemento se activa por una va clsica y por una va alternativa. El factor C4 participa en la activacin por la va clsica. Si bien la disminucin de C4 es normal, raras veces falta totalmente. El C4 esta disminuido o falta por completo en enfermedades del inmunocomplejo, el lupus eritematoso sistmico (LES), la tiroiditis autoinmune y la dermatomiositis juvenil. Niveles reducidos de C4 se encuentran en infecciones tales como la meningitis bacteriana y la vrica, la sepsis por estreptococos y estafilococos, as como en la neumona. La determinacin adicional de C4 en pacientes con valores disminuidos del factor C3 del complemento permite una mayor diferenciacin. Si la concentracin proteica de C4 es normal es probable que la activacin se efectu por la va alternativa. La formacin de C4, por ser una protena de fase aguda, se acelera durante los procesos inflamatorios. 49.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio 49.3.- Reactivos R1: Tampn TRISa: 100mmol/L, pH 8.0; polietilenglicol: 3.0%. R2: Anticuerpos anti-C4 humana; Tampn TRIS: 33mmol/L. Tampn TRISa = Tris (hidroximetil)-aminometano 49.4.- Principio del Test: Test inmunoturbidimtrico Los anticuerpos en el reactivo (anticuerpo anti C4) reaccionan con los antgenos de la muestra formando un complejo antgeno-anticuerpo que se mide turbidimtricamente despus de la aglutinacin. 49.5.- Valores de referencia: 10-40 mg/dL 49.6.-Limitaciones e interferencias No presenta interferencia significativa con bilirrubina, hemlisis o lipemia. Al igual que otros test turbidimtricos o nefelomtricoas, el presente test puede no proporcionar resultados exactos para muestras de pacientes con una gammapata, particularmente del tipo IgM.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 50.- Carbamazepina CBZ
CDIGO: CARBAMAZEPINA (CBZ) REV. N: (3) DROGAS DE USO TERAPUTICO PGINA: 1 DE 1 DE
50.1.- Introduccin La carbamazepina es un anticonvulsivante, que se emplea particularmente para el tratamiento de la neuralgia trigeminal, de todas las formas de epilepsia parcial, las crisis generalizadas con convulsiones toniclnicas y crisis parciales simples y complejas. El mecanismo especfico de la Carbamazepina consiste en deprimir la transmisin en el ncleo anterior ventral del tlamo. El control de los niveles de Carbamazepina, evaluado junto a otra informacin clnica, proporciona a los mdicos un instrumento efectivo para ajustar la dosis y obtener un efecto teraputico ptimo evitando al mismo tiempo concentraciones fuera del rango esperado para la droga. 50.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio 50.3.- Reactivos R1: Hapteno biotinilado de carbamazepina; tampn de cido 2-(N-morfolino) etanosulfnico (MES),pH 6.4. R2: Anticuerpo monoclonal anti-carbamazepina; micropartculas de ltex recubiertas de estreptavidina: 0.08% 50.4.- Principio del Test: El test de carbamazepina es un inmuno anlisis homogneo de aglutinacin de micropartculas. Consiste en un sistema de dos reactivos empleado para la deteccin de la carbamazepina en suero. En esta tcnica, el hapteno del frmaco biotinilado sirve de unin para 1) el anticuerpo anti- carbamazepina y 2) las bolas de ltex recubiertas de estreptavidina. El hapteno y la carbamazepina libre reaccionan competitivamente en la muestra de suero con una cantidad limitada de anticuerpo especfico anti-carbamazepina. La seal disminuye proporcionalmente a la cantidad de droga presente en la muestra. 50.5.- Valores de referencia: 8-12 g/ml
50.6.-Limitaciones e interferencias No presenta interferencia significativa con bilirrubina, hemlisis o lipemia.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 51.- cido Valproico
CDIGO: ACIDO VALPROICO (AVP) REV. N: (3) DROGAS DE USO TERAPUTICO PGINA: 1 DE 1 DE
51.1 Introduccin El cido valproico (AVP; cido 2-propilpentanoico; depakene) es un anticonvulsivo relativamente nuevo que se usa normalmente en el tratamiento de los ataques tnicos-clnicos generalizados, siendo tambin efectivo para tratar convulsiones de ausencia. Acta con particular eficacia en los ataques mioclnicos y los ataques atnicos. Y constituye el frmaco por excelencia en el tratamiento de la epilepsia fotosensible. Si bien el APV se emplea conjuntamente con otros frmacos antiepilpticos, estudios recientes han demostrado las ventajas de una monoterpia con AVP. Adems, la utilidad del APV en el tratamiento de trastornos afectivos, especialmente en trastornos bipolares sin respuesta al Litio, se encuentra cada vez mas documentada. En concentraciones teraputicas, ms del 90% del APV en el torrente sanguneo se encuentra ligado a protenas plasmticas. 51.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio 51.3.- Reactivos R1: Anticuerpo monoclonal anti-cido Valproico, G6P, NAD y albmina de suero bovino. R2: cido valproico marcado con G6pdh de origen bacteriano y albmina de suero bovino en un tampn. 51.4.- Principio del Test: El test aplica una tcnica inmuno enzimtica homognea utilizada en los anlisis cuantitativos de cido valproico (libre y ligado a protenas) en suero y plasma humanos. Se basa en la competencia entre el frmaco de la muestra y el frmaco marcado con la enzima 6-fosfato de glucosa deshidrogenasa (G6PDH) por los sitios de fijacin del anticuerpo. La actividad de la enzima disminuye en la medida que se une al anticuerpo, lo cual permite medir la concentracin del frmaco en funcin de la actividad de la enzima. La enzima activa convierte el nicotinamida-adenina-di nucletido (NAD) oxidado a NADH, produciendo modificaciones en la absorbancia que se miden espectrofotomtricamente. La G6PDH endgena no interfiere porque la coenzima es activada nicamente con la enzima bacteriana, empleada en el test. 51.5.- Valores de referencia: 40-100 g/ml
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 52.- Fenitona (difenilhidantona) 52.1.- Introduccin
CDIGO: FENITOINA REV. N: (3) DROGAS DE USO TERAPUTICO PGINA: 1 DE 1 DE
El uso de la Fenitona (difenilhidantona) se encuentra ampliamente difundido en el control de las convulsiones de los pacientes que sufren de epilepsia con crisis tanto tnicoclnicas generalizadas (especialmente motoras), descargas corticales focales y epilepsia del lbulo temporal. El seguimiento de las concentraciones sricas del frmaco resulta esencial para obtener un control mximo de las convulsiones con concentraciones mnimas del frmaco en sangre. El nivel ptimo vara dependiendo de las condiciones individuales de absorcin y metabolismo del frmaco. 52.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio 52.3.- Reactivos R1: Conjugado de fenitona; tampn PIPES (piperazina-N, N-bis cido etanosulfnico), pH 7.3 R2: Anticuerpo monoclonal anti-fenitona (ratn); micropartculas de ltex; tampn MOPS (cido 3-(Nmorfolino) propanosulfnico), pH 7.4. 52.4.- Principio del Test: La prueba se basa en la interaccin cintica de las micropartculas en solucin (KIMS). El anticuerpo antifenitona se fija de forma covalente a micropartculas, mientras que el derivado del frmaco se une a una macromolcula. La interaccin cintica de las micropartculas en solucin se induce al unirse el conjugado del frmaco al anticuerpo que recubre las micropartculas y se inhibe por la presencia de fenitona en la muestra. El conjugado de la droga y la fenitona de la muestra en juego compiten por fijarse al anticuerpo anti-fenitona que recubre las micropartculas. La interaccin cintica de micropartculas resultante es indirectamente proporcional a la cantidad de droga presente en la muestra. 52.5.- Valores de referencia: Por aceptacin general, entre: 10-20 g/mL
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: LABORATORIO BIOQUIMICA Y URGENCIA 53.- Fenobarbital (FNB)
CDIGO: FENOBARBITAL REV. N: (3) DROGAS DE USO TERAPUTICO PGINA: 1 DE 1 DE
53.1.- Introduccin: El fenobarbital, se ha empleado para el tratamiento de epilepsia, especialmente para el control de crisis motoras focales, sensoriales o tnico clnica generalizadas. El fenobarbital disminuye principalmente la excitabilidad de las neuronas, reduciendo con ello el potencial de excitacin postsinptica. La monitorizacin de la concentracin del FNB, es importante para ajustar la dosis, debido al estrecho ndice teraputico, y a la gran variabilidad individual en la absorcin, metabolismo y aclaramiento del frmaco. 53.2.- Muestra Suero recogido en tubos estndar de muestra (sin anticoagulante) o tubos conteniendo gel de separacin. Plasma con: Heparina de Litio, sodio 53.3.- Reactivos R1: Solucin de trabajo del donante enzimtico (DE) donante enzimtico (microbiano)-fenobarbital: 38g/L; -D-Galactopiransido de rojo de clorofenol: 1.64 g/L; anticuerpo anti-Fenobarbital (monoclonal de ratn):16.1 mg/L; tampn de cido 3-(N-morfolino) propanosulfnico (MOPS); sales de tampn. R2: Solucin de trabajo del aceptor enzimtico (AE) aceptor enzimtico (microbiano): 0.171g/L; tampn de cido 3-(N-morfolino) propanosulfnico (MOPS); sales de tampn; anticuerpos de cabra anti-ratn: 18 mg. 53.4.- Principio del Test: El test esta basado en la enzima bacteriana galactosidasa, presente gracias a un mtodo de ingeniera gentica en dos fragmentos inactivos del aceptor enzimtico (AE) y el donante enzimtico (DE). Estos fragmentos se reasocian para formar una enzima plenamente activa que en el ensayo desdobla el substrato, generando una coloracin que puede ser medido espectrofotomtricamente. El formato de desplazamiento del test se emplea para aumentar la sensibilidad y precisin reduciendo al mismo tiempo el ruido de fondo y aumentando paralelamente el cuociente seal-ruido. En el presente test, el fenobarbital de la muestra desplaza una fraccin del complejo anticuerpo del donante enzimtico-conjugado de fenobarbital. Posteriormente, se aade el reactivo del aceptor enzimtico y los reactantes se incuban para permitir que se complementen con el DE libre y el conjugado del fenobarbital. La cantidad de enzima activa formada y el cambio de absorbancia resultante son directamente proporcionales a la cantidad de fenobarbital presente en la muestra. 53.5.- Valores de referencia: Por aceptacin general, entre: 15-40 g/ml
CAPITULO 2 TCNICAS HEMATOLGICAS
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA Frotis Sanguneo:
FROTIS SANGUINEO
Objetivo: La prctica de de una extensin sangunea es muy importante en hematologa, ta que muchas hemopatas se diagnostican con solo observar las caractersticas morfolgicas de las clulas circulantes. Por eso la calidad de la extensin debe ser impecable, y dado que siempre constituye un medio para controlar la presencia de eventuales alteraciones sanguneas detectada mediante los sistemas automticos de anlisis. El frotis sanguneo se realiza para tener una buena visualizacin de los elementos figurados con microscopa ptica, lo que permite observar la presencia de elementos maduros e inmaduros con las caractersticas propias de forma, tamao y nmero, correspondiente a las distintas lneas celulares en estudio. Es importante resaltar que en cualquier caso la calidad de la extensin es decisiva para poder apreciar la morfologa eritrocitaria, y muy importante para poder llevar a cabo el recuento diferencial de leucocitos. Ejecutor: Tcnico Paramdico, Tecnlogo Mdico. Muestra: Sangre venosa o arterial con anticoagulante (EDTA) Volumen mnimo 1 ml de sangre total con (EDTA K2) Materiales: 1. Porta objetos 75/25 mm. 2. Agitador mecnico 3. Guantes de ltex o similar 4. Capilares sin heparina 5. Lpiz dermatogrfico o lpiz grafito N 2 6. Cubre objetos 18x18 24x24 mm. Procedimiento: 1. Homogenizar la muestra en el agitador por tres minutos. 2. Colocar una gota de sangre con el capilar sin heparina, a 1 cm del borde esmerilado del porta objetos. 3. Mientras se sujeta firmemente con los dedos ndice y pulgar el porta objetos, con la otra mano se toma el cubreobjeto. 4. Colocar el cubre objetos justo delante de la gota situada en la superficie del porta objetos, formando un ngulo de aproximadamente 45, desplazarlo hacia atrs hasta alcanzar la gota de sangre. 5. Esperar que por capilaridad se distribuya la gota uniformemente. 6. Deslizar suavemente y a velocidad moderada el cubre objetos sobre la gota de sangre hasta que quede bien extendida sobre la superficie del porta, para obtener una pelcula fina y homognea. 7. Luego se deja secar en forma horizontal a temperatura ambiente un mnimo de 30 minutos. 8. Anotar el N correspondiente a la muestra, en la parte posterior de la zona gruesa del frotis (o zona esmerilada) con lpiz dermatogrfico o grafito.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA
FROTIS SANGUINEO
Manejo de resultados de la extensin: 1. Grosor de la extensin, este depender de la cantidad de sangre en la gota, de la concentracin de hemoglobina, del ngulo empleado para realizar la extensin y la velocidad con que esta se haya realizado. 2. As, si se emplea un ngulo superior a 45, la extensin ser gruesa y corta, mientras que si se emplea un ngulo inferior, ser larga y fina. 3. Igualmente, a mayor velocidad mayor grosor y viceversa. 4. Teniendo en cuenta estas variables, el grosor de una extensin puede ser modificado de acuerdo con la concentracin de hemoglobina (hematocrito), de forma que en pacientes con anemia es recomendable aumentar el ngulo, en pacientes con hematocrito elevado es recomendable disminuirlo. Frotis de referencia: 1. Una buena extensin realizada mediante esta tcnica debe tener entre 3-4 cm. de longitud, con un mnimo aceptable de 2.5cm. el frotis presenta tres reas: Zona gruesa, en la regin inmediata al punto de partida de la extensin (cabeza), en ella se aprecia un aumento del nmero de linfocitos. Zona fina corresponde al final de la extensin y termina con un rea donde las clulas adoptan una disposicin acordonada (barbas) en esta regin se observa un exceso de granulocitos y monocitos. Zona ideal, est situada entre las dos anteriores (zona intermedia) y en ella existe un reparto equilibrado de las clulas. Fuentes de error: 1. Recin nacidos: Efecto; las clulas se observan mal distribuidas y teidas (no existe correccin) 2. Cri aglutininas: Efecto; los eritrocitos se unen entre si y forman agregados, se corrige calentando la muestra de sangre por 5 minutos a 37 y realizar nuevamente el extendido. 3. Lipemia: Efecto; aparicin de espacios claros sin teir (no existe correccin) 4. Gammapata Monoclonal: Efecto; disposicin de los eritrocitos en pilas de monedas (no existe correccin) 5. Exposicin Prolongada de las clulas sanguneas al anticoagulante (mas de 3 horas) antes de realizar el frotis: Plaquetas hidratadas (aumento de tamao) Citoplasma de leucocitos vacuolados, refuerzo de granulacin azurfila, desestructuracin de la cromatina en todas las clulas. Crenacin de eritrocitos
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA May-Grnwald-Giemsa:
TINCIN DE MAY-GRNWALDGIEMSA
Objetivo: Se usa para teir las clulas sanguneas u otras, con el fin de realizar el recuento diferencial. El empleo combinado de los colorantes May-Grnwald-Giemsa se conoce con el nombre de Tincin Panptica de May-Grnwald-Giemsa. Esta tincin resalta de manera especial las granulaciones leucocitarias y mejora la coloracin de los eritrocitos. Esta tincin, es de uso recomendado para los programas de evaluacin externa de la calidad. El May-Grnwald, es el reactivo que diferencia y tie las sustancias acidfilas (color rojo), las basfilas (color azul). El Giemsa tie la cromatina y grnulos azurfilos. Ejecutor: Tcnico Paramdico, Tecnlogo Mdico. Muestra: Frotis sanguneo Frotis de Mdula sea Frotis de Lquidos (Pleural y Asctico) Materiales: 1. May-Grnwald 2. Giemsa 3. Agua desmineralizada (pH 6.8-7.0) 4. Cubetas de tincin(40mL) 3 unidades 5. Canastillo para porta objetos 6. Cronmetros 7. Maderas con ranuras de 2 mm. Procedimiento: 1. Preparar 200 ml de solucin May-Grnwald, en la cubeta de tincin 2. Agitar el reactivo antes de medir el volumen 3. Medir el agua desmineralizada (pH 6.8-7.0) tambin 200 ml 4. Preparar solucin Giemsa diluida, primero medir 200mL de agua desmineralizada (pH 6.8-7.0), y agregar 20 ml de Giemsa, previamente agitada por inversin. 5. Dejar reposar 15 minutos 6. Colocar los frotis en canastillos de tincin 7. Introducir los frotis en el canastillo que tiene la solucin May-Grnwald por 5 minutos 8. Luego lavar los frotis con agua desmineralizada (pH 6.8-7.0) por 1 minuto 9. cubrir los frotis con Giemsa 10. Lavar con agua corriente suavemente por 1 minuto 11. Dejar secar al aire espontneamente, inclinando la lmina para que escurra el agua.
Tincin de calidad: 1. Una buena extensin de sangre, bien teida debe poseer una coloracin rosada en su parte mas delgada y azul prpura en su parte mas gruesa, y cuando se observa al microscopio debe permitir una fcil apreciacin de las estructuras celulares en los leucocitos, del tamao color y forma de los eritrocitos, as como del contenido granular de las plaquetas. 2. Adems, la intensidad de la coloracin debe ser uniforme a lo largo de toda la extensin y no debe observarse precipitados ni vacuolizacin de las clulas. 3. El ncleo de leucocitos debe ser ms prpura que azul y los eritrocitos deben poseer una tonalidad rosada. Fuentes de error: 1. Coloracin excesivamente azul: a) Causas debidas al espcimen: Presencia de una paraprotena (gammapata monoclonal) Empleo de heparina como anticoagulante Intensa leucocitosis con elevado nmero de clulas blsticas Hematocrito excesivamente bajo b) Causas metodolgicas: Extensin excesivamente gruesa Extensin envejecida (el plasma al secarse colorea de azul el fondo) Tampn excesivamente alcalino Tiempo de tincin demasiado prolongado Lavado insuficiente Tiempo de secado insuficiente Correccin comprobar el pH del tampn empleado, aumentar el tiempo de lavado y/o disminuir el tiempo de tincin. 2. Coloracin excesivamente rosada: Extensin muy delgada Tampn demasiado cido Tiempo de tincin insuficiente Lavado excesivo Empleo de colorantes envejecidos(>4 semanas) Correccin: comprobar el pH del tampn empleado, y si es necesario ,preparar nueva solucin de colorante con metanol no aireado (abrir un frasco nuevo)
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA 3.
Presencia de precipitados: Uso de porta objetos sucio o con polvo adherido a su superficie Uso de soluciones de colorante sin filtrar cuando no se emplean reactivos comerciales Evaporacin del metanol de la solucin colorante Lavado insuficiente o realizado en condiciones defectuosas Presencia de artefactos: Accin del anticoagulante (sangre con EDTA > a 3 hrs.): vacuolizacin monocitos, segmentacin nuclear, satelitismo plaquetario, crenacin. Suciedad, deterioro o presencia de grasa en el porta objetos: micro burbujas, falsa imgenes de grmenes, partculas de polvo y ralladuras del porta objetos. Fijacin inadecuada por empleo de metanol no absoluto o hidratado, imagen de eritrocitos hidratados.
4.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA Recuento de Reticulocitos:
CDIGO: RECUENTO DE RETICULOCITOS REV. N: (3) (MANUAL) PGINA: 1 DE 2
Objetivo: Consiste en contar los Reticulocitos mediante el microscopio ptico convencional, despus de incubar la sangre en presencia de un colorante vital, que se fija al ARN y que da lugar a un precipitado violeta oscuro que tienden a formar estructuras de aspecto filamentoso o reticulado. Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros o jvenes, en condiciones normales los reticulocitos permanecen en la mdula sea durante unos 2-3 das y terminan su maduracin en la sangre perifrica despus de unas 24 hrs. de abandonarla. Pese a ello los reticulocitos circulantes presentan un grado variable de madurez, de modo que mientras los ms jvenes poseen abundantes filamentos, los ms maduros. Suelen presentar escasos precipitados granulares que pueden pasar inadvertidos, el recuento de reticulocitos es la prueba ms simple actualmente disponible para valorar la actividad eritropoytica de la mdula sea. Ejecutor: Tcnico Paramdico, Tecnlogo Mdico. Muestra: 1) Sangre venosa o arterial con anticoagulante (EDTA) 2) Volumen mnimo 1 ml de sangre total con (EDTA K2) Materiales: Microscopio ptico Agitador mecnico Guantes de ltex o similar Porta objetos 25 x 75 mm Capilares sin heparina Tubos Khan Bao termorregulado a 37 Solucin colorante: Azul Cresil Brillante 1% Azul Cresil Brillante 1 gr. Citrato trisdico (Na3C6H5O7-2H2O) 0.4 gr. Solucin Cloruro Sdico al 0.9% 100 ml Mezclar, se disuelve el azul Cresil brillante en la solucin de cloruro de sodio y se agrega al citrato de sodio, luego filtrar Procedimiento: Homogenizar la muestra en el agitador por 5 minutos Agitar por inversin suavemente 10 veces Preparar 2 tubos por muestra Tomar 2 capilares de la tincin y depositarlos en el tubo de Khan
CDIGO: UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO RECUENTO DE RETICULOCITOS REV. N: (3) (MANUAL) PGINA: 2 DE 2 LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA De la muestra previamente agitada tomar 2 capilares completos y mezclarlos con la tincin En caso de hematocrito < 20% agregar el doble de sangre total Incubar a 37 por 10 minutos Mezclar suavemente y extender los frotis, luego de esto dejar secar a T ambiente Calculo de Resultados: 1. Observar al microscopio, agregando una gota de aceite de inmersin, utilizando el objetivo de 100x, contar los glbulos rojos y reticulocitos por campo. 2. La zona de lectura es aquella donde los glbulos rojos se encuentran bien distribuidos e individualizados. 3. Contar por lo menos 1000 eritrocitos y calcular el porcentaje como sigue: Reticulocitos (%) = N Reticulocitos contados x 100 N Eritrocitos contados 4. Informar el valor promedio de las dos lecturas.
Valores de referencia (segn OMS) Hombres: (20 a 50 aos): 0.5-2.8 % Mujeres: (20 a 50 aos): 0.5-2.5% Nios y Adultos jvenes (4 a 19 aos): 0.2-2.2% RN (Sangre de cordn): 3.2-6.0% Fuentes de error: 1. Relacin sangre colorante insuficiente (anemias intensas) 2. Realizar el recuento sobre un mnimo reducido de eritrocitos 3. Realizar el recuento en reas en donde los eritrocitos se encuentran mal distribuidos. 4. Confundir los precipitados de ARN con cuerpos de Heinz, de Howell Jolly o precipitados del colorante. 5. En caso de esplenectoma, confundir las inclusiones intraeritrocitarias con reticulocitos.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA Hematocrito (Micromtodo):
HEMATOCRITO (MICROMTODO)
Objetivo: El hematocrito es el volumen que ocupan los eritrocitos expresados como un porcentaje del volumen de sangre total existente en una muestra determinada, mediante su separacin por centrifugacin. Ejecutor: Tcnico Paramdico, Tecnlogo Mdico. Muestra: 3) Sangre venosa o arterial con anticoagulante (EDTA), o sangre capilar recogida con tubos capilares de Heparina. 4) Volumen mnimo 1 mL de sangre total con (EDTA K2), o bien 2 capilares heparinizados. Materiales: 1) Microcentrfuga 2) Lector de hematocrito 3) Capilares de 75 mm (dimetro de 1.1-1.2mm) a) Capilares sin anticoagulante, que se usan para realizar micromtodo de muestra con EDTA. b) Capilares que contienen 2 IU de heparina y son usados en la obtencin de sangre capilar. 4) Plasticina 5) Guantes de Ltex o similar. Procedimiento: Homogenizar la muestra por inversin (suavemente) Llenar 2 capilares sin heparina, hasta las partes de el con sangre total. Limpiar con algodn seco los bordes de los capilares. Sellar uno de los extremos con plasticina Poner los capilares en centrfuga, con la plasticina hacia fuera, uno frente al otro. Registrar el N de la muestra y la posicin dentro de la centrfuga, en orden de trabajo. Centrifugar por 5 minutos a 12000rpm. Si el hematocrito es > 50%, se debe centrifugar 5 minutos ms, para disminuir el plasma atrapado. Clculo de resultados: 1) Leer inmediatamente los capilares, ajustando a cero en el lector donde termina la plasticina, y a 100 donde termina el plasma. 2) Informar el porcentaje obtenido, que es el nivel donde terminan los glbulos rojos y comienza la capa de blancos.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA Valores de Referencia: Hombre (18 a 50 aos): 45 +/- 5% Mujeres (18 a 50 aos): 42 +/- 5 % Mujeres (Embarazada): 39 +/- 5 % Recin Nacidos : 54 +/- 10% Nios (hasta 10 aos): 38 +/- 5%
HEMATOCRITO (MICROMTODO)
Fuentes de Error: 1) Manejo defectuoso de la muestra. a) Empleo de una relacin sangre anticoagulante incorrecta, el exceso de EDTA diminuye falsamente el hematocrito. b) La faltade suficiente anticoagulante, puede producir una coagulacin parcial c) Extraccin de sangre en condiciones defectuosas (hemoconcentracin, hemodilucin,hemolisis) d) Oxigenacin excesiva de la sangre (genera un falso descenso del hematocrito) e) Retraso en la determinacin del hematocrito > 6 hrs.(falso aumento de hematocrito) f) Muestra tomada directamente de catter o va por donde pasa suero (hemodilucin) g) Cuando la T amb. es alta y se usa heparina como anticoagulante , conservar a 4C hasta la determinacin h) Homogenizacin defectuosa de la sangre antes de llenar el capilar. 2) Fallo en la realizacin de la tcnica a) Errores en la identificacin de los tubos. b) Empleo de tubos no muy limpios o hmedos c) Variaciones en el calibre del tubo empleado o uso de capilares con medidas incorrectas. d) Llenado insuficiente de los tubos con la sangre total. e) Empleo de una fuerza centrfuga insuficiente. f) Recalentamiento de la centrfuga por uso excesivo 40C (causa de hemlisis) g) Fallo del sellado y perdida del contenido del tubo capilar.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA Hematocrito (Electrnico):
HEMATOCRITO (ELECTRNICO)
Objetivo: El hematocrito es el volumen que ocupan los eritrocitos expresados como un porcentaje del volumen de sangre total existente en una muestra determinada, mediante su separacin por centrifugacin. En la actualidad, todos los analizadores hematolgicos automatizados, suministran dentro del contexto del Hemograma, un valor de hematocrito electrnico calculado por el propio sistema a partir del valor del VCM (obtenido por conductividad) y la concentracin de eritrocitos. Ejecutor: Tcnico Paramdico, Tecnlogo Mdico. Muestra: 1) Sangre venosa o arterial con anticoagulante (EDTA) 2) Volumen mnimo 1 mL de sangre total con (EDTA K2) Materiales: 1) Contador hematolgico 2) Agitador mecnico 3) Guantes de ltex o similar. Procedimiento: 1) Homogenizar la muestra en el agitador por 5 minutos 2) Agitar por inversin suavemente 10 veces 3) Procesar muestra segn instructivo del autoanalizador empleado. Clculo de Resultados: El equipo automticamente entrega el valor del hematocrito. Valores de Referencia: Hombre (18 a 50 aos): 45 +/- 5% Mujeres (18 a 50 aos): 42 +/- 5 % Mujeres (Embarazada): 39 +/- 5 % Recin Nacidos : 54 +/- 10% Nios (hasta 10 aos): 38 +/- 5%
HEMATOCRITO (ELECTRNICO)
Fuentes de Error: 1) Falsos aumentos del valor del hematocrito a) Falsos aumentos del Volumen Corpuscular Medio (VCM) Empleo de sangre envejecida Leucocitosis intensa Estados de hiperosmolaridad. b) Aumento ficticio de la concentracin de eritrocitos. Panaglutinacin celular por efecto del EDTA 2) Falsos descensos del valor del hematocrito. a) Falsa disminucin del VCM Empleo excesivo del anticoagulante lquido EDTA Temperatura ambiente muy elevada Estados de hiposmolaridad. b) Disminucin ficticia de la concentracin de eritrocitos Hemlisis in vitro Microcitosis extrema (<50fl) c) Presencia de crioaglutininas
3) Alteraciones del hematocrito por defecto del autoanalizador Sistema electrnico defectuoso Equipo mal calibrado Aspiracin defectuosa de la muestra Depsitos de protenas en el orificio de apertura Alteraciones del lquido de lavado.
ERITROSEDIMENTACIN O VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN(VSG)
Velocidad de Eritrosedimentacin Globular (VSG): Objetivo: Si se deja reposar verticalmente la sangre con anticoagulante en un tubo o en una pipeta especial, se observa como los eritrocitos sedimentan espontneamente de manera que por encima de ellos se forma una columna de plasma- este proceso se denomina eritrosedimentacin. La eritrosedimentacin es un fenmeno emprico que se altera en muchas situaciones de manera inespecfica, pero que alerta sobre la posible existencia de enfermedad o lesin orgnica. La eritrosedimentacin constituye un indicador de reactantes de fase aguda y su aumento se correlaciona con otros reactantes tales como ciertas citocinas como las interleucinas 1-6 y la protena C reactiva, aunque el momento de aparicin de estos aumentos no suele guardar una relacin muy exacta con la del aumento de la eritrosedimentacin. Esta obedece a varios factores, entre los que destacan las interacciones electrostticas que existen entre los eritrocitos debido a su carga de superficie. En esta ltima intervienen de forma determinante las protenas del plasma, de manera que mientras algunas favorecen (fibringeno y globulina), otras las disminuyen (albmina), el mecanismo que rige este fenmeno depende de cuatro factores relacionados entre si: 1. tamao y rigidez de los eritrocitos (volumen corpuscular medio, VCM) 2. diferencia de densidad entre los eritrocitos y el plasma 3. viscosidad del plasma 4. temperatura Ejecutor: Tcnico Paramdico, Tecnlogo Mdico. Muestra: Sangre venosa o arterial con anticoagulante (EDTA K2), 2olumen mnimo 1 mL . Materiales: 1. Tubo Tapval con citrato sdico 3.2 % 2. Agitador Mecnico 3. Equipo Eriline AR 4. Lpiz dermatogrfico o plumn permanente. 5. Guantes de ltex o vinlicos 6. Gradillas Procedimiento: 1. Homogenizar la muestra en el agitador por 5 minutos 2. Agitar por inversin suavemente 10 veces 3. Mezclar la muestra con EDTA con el citrato que se encuentra en el tubo Tapval utilizado. 4. Colocar en el agitador mecnico en posicin invertida por 5 minutos. 5. Procesar muestra segn instructivo del lector de VHS.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA Valores de Referencia:
Nios y Adolescentes: (0 - 15 aos) 5-15 mm/hr Hombres (17- 50 aos) 1-10 mm/hr. (51- 60 aos) 3-12 mm/hr. (61- 70 aos) 2-14 mm/hr. Mujeres (17- 50 aos) 3-12 mm/hr. (51- 60 aos) 4-19 mm/hr. (61- 70 aos) 5-20 mm/hr.
Fuentes de Error: 1. Causa de aumento: Causas fisiolgicas: Embarazo a partir del tercer mes Envejecimiento (ocasional) Crecimiento (ocasional) Causas patolgicas Aumento moderado (incrementos propios de la reaccin de fase aguda): Anemia intensa Fiebre reumtica Artritis reumtica Lupus eritematoso sistmico Enfermedad renal Enfermedad tiroidea. Infarto del miocardio Neoplasias Tuberculosis Sfilis Aumento intenso: Arteritis de la temporal Polimialgia reumtica Vascultis necrosante Hiperfibrinoginmia Macroglobulinemia de Waldestrm Mieloma mltiple Crioaglutininas
Causas metodolgicas Elevacin de la temperatura ambiente Dilucin de la sangre Error de homogenizacin de la sangre y anticoagulante 2. Causas de disminucin Debido al espcimen: Policitemia vera Insuficiencia cardaca congestiva Sndrome de hiperviscosidad Hipofibrinogenemia Hipoproteinemia Anemia de clulas falciformes Causas metodolgicas: Utilizacin tarda de la sangre Cambi del anticoagulante Error de homogenizacin de la sangre con el anticoagulante Disminucin de la temperatura ambiente.
CDIGO: PRUEBAS DE COAGULACIN: REV. N: (3) CURVA DE CALIBRACIN DEL PGINA: 1 DE 2 TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)
Curva de Calibracin del Tiempo de Protrombina (TP) Objetivo: Con el fin de favorecer la reproducibilidad de los resultados obtenidos y su estandarizacin se aconseja realizar una curva de calibracin cada vez que ocurra una modificacin en: 1. El nmero de lote de la tromboplastina. 2. La instrumentalizacin utilizada (coagulmetro, micropipeta, etc.) 3. La tcnica empleada 4. La carta control 5. La aleatoriedad de los resultados Ejecutor: Tecnlogo Mdico Muestra: 1. Calibrador comercial DG-REF, Grifols Materiales: 1. Coagulmetro automatizado (AMAX 200) 2. Tampn owren (DG-OWREN) 3. Guantes de ltex o similar 4. Gradillas 5. Micropipetas 6. Cronmetro 7. Reactivos: a. Tromboplastina liofilizada: DG-PT (GRIFOLS): Contiene extracto de cerebro de conejo, deshidratado con acetona (40-50%), tampn, iones calcio y conservantes. Estabilidad: todos los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, conservados a 2-8oC b. Agua desmineralizada calidad inyectable.(Ampollas 5 mL) c. DG-REF Grifols (Calibrador comercial) 8. Reconstitucin de DG-PT: Reconstituir 1 vial con 5 mL de agua desmineralizada calidad de inyectable. Dejar en reposo 10 minutos para una completa reconstitucin y mezclar suavemente para homogenizar el contenido antes de su uso. Siempre que la deje en reposo debe mezclarla suavemente antes de usar. Estabilidad: 8 hrs. a 37 oC; 1 da a18-25 oC; 3 das 2-8 oC. siempre que se manipule y conserve adecuadamente, evitando contaminar el contenido y exposiciones prolongadas a temperaturas que no son propias de conservacin. No congelar.
CDIGO: PRUEBAS DE COAGULACIN: REV. N: (3) CURVA DE CALIBRACIN DEL PGINA: 2 DE 2 TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)
Procedimiento: 1. Preparar los calibradores de PT de la Siguiente manera:
TUBO DG-OWREN CALIBRADOR % ACTIVIDAD
1 __ 1 ml 100%
2 0.5 ml 0.5 ml (100%) 50%
3 0.5 ml 0.5 ml (50%) 25%
4 0.5 ml 0.5 ml (25%) 12.5%
2.
Efectuar la prueba por duplicado, antes de 30 minutos de haber preparado las diluciones
Clculo de Resultados: 1. Representar los valores de segundos obtenidos para cada dilucin del calibrador de PT frente al porcentaje de actividad (%) en un papel milimetrado. Trazar una curva de regresin recproca lineal. El porcentaje de actividad de las muestras y controles se obtiene interpolando los segundos en la curva de calibracin correspondiente. El equipo automticamente entrega segundos, % e INR de la muestra analizada, segn la curva de calibracin ingresada de acuerdo al instructivo del equipo. Registrar tiempos, fechas de realizacin, nmero de lote, ISI, fecha de vencimiento, Equipo empleado y profesional responsable.
2. 3.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA Tiempo de Protrombina (TP)
CDIGO: PRUEBAS DE COAGULACIN: REV. N: (3) TIEMPO DE PROTROMBINA (TP) PGINA: 1 DE 2
Objetivo: La exploracin de la coagulacin se basa en la realizacin de dos pruebas globales, el tiempo de protrombina (TP) y el tiempo de Tromboplastina parcial activada (TTPA), que se complementan con una valoracin de la fibrinoformacin mediante la determinacin funcional del fibringeno o la realizacin del tiempo de trombina. Sobre la base de los resultados de estas pruebas podemos realizar una aproximacin diagnstica cuya confirmacin puede requerir la determinacin especfica de factores de la coagulacin. La prueba del tiempo de protrombina consiste en aadir a una muestra de plasma, Tromboplastina y calcio ligeramente en exceso. El tiempo de coagulacin depende de la actividad de los factores de la coagulacin implicados (II; V; VII y X) y tambin esta influenciado por defectos cualitativos o cuantitativos del fibringeno. Ejecutor: Tecnlogo Mdico Muestra: Sangre venosa o arterial con anticoagulante citrato de sodio 3.2 % 0.109 mmol/L Volumen mnimo: 1 mL de sangre total con citrato de sodio 3.2 % Materiales: 1. Coagulmetro automatizado (AMAX 200) 2. Tampn owren (DG-OWREN) 3. Guantes de ltex o similar 4. Gradillas 5. Centrifuga Megafuge. 6. Micropipetas 7. Cronmetro 8. Reactivos: a. Tromboplastina liofilizada: DG-PT (GRIFOLS): Contiene extracto de cerebro de conejo, deshidratado con acetona (40-50%), tampn, iones calcio y conservantes. Estabilidad: todos los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, conservados a 2-8oC b. Agua desmineralizada calidad inyectable.(Ampollas 5 mL) 9. Reconstitucin de DG-PT: Reconstituir 1 vial con 5 mL de agua desmineralizada calidad de inyectable. Dejar en reposo 10 minutos para una completa reconstitucin y mezclar suavemente para homogenizar el contenido antes de su uso. Siempre que la deje en reposo debe mezclarla suavemente antes de usar. Estabilidad: 8 hrs. a 37 oC; 1 da a18-25 oC; 3 das 2-8 oC. siempre que se manipule y conserve adecuadamente, evitando contaminar el contenido y exposiciones prolongadas a temperaturas que no son propias de conservacin. No congelar.
CDIGO: PRUEBAS DE COAGULACIN: REV. N: (3) TIEMPO DE PROTROMBINA (TP) PGINA: 2 DE 2
Procedimiento: 1. Centrifugar los tubos tapados a temperatura ambiente por 10 minutos a 3000 rpm.(plasma pobre en plaquetas < 10000 plaquetas x ul. 2. Procesar en equipo AMAX 200, antes de 4 horas de extrada la muestra (muestra conservada a temperatura ambiente), segn su instructivo. Clculo de Resultados: 1. El equipo automticamente entrega segundos, % e INR de la muestra analizada. 2. El % de actividad de las muestras, se obtiene interpolando el TP en segundos en la curva de calibracin correspondiente. 3. INR (Ratio Normalizado Internacional): INR = R elevado al ISI. Donde R (Ratio) = TP en segundos/TP normal en segundos. ISI (ndice de Sensibilidad Internacional). Valores de Referencia (Segn OMS): Valor de Referencia: Mayor a 70 % de ActividadFuentes de Error: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Procesamiento de las muestras despus de 2 horas. Muestras coaguladas Prdida de la relacin sangre anticoagulante Muestras contaminadas con heparina Muestras con hemlisis Incorrecta manipulacin de las muestras Implementacin incorrecta de la tcnica Contaminacin del reactivo Rellenar viales con restos de reactivos que superen el tiempo de conservacin recomendado.
PRUEBAS DE COAGULACIN: TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIALMENTE ACTIVADA (TTPA)
Tiempo de Tromboplastina Parcialmente Activada (TTPA) Objetivo: La exploracin de la coagulacin se basa en la realizacin de dos pruebas globales, el tiempo de protrombina (TP) y el tiempo de Tromboplastina parcial activada (TTPA), que se complementan con una valoracin de la fibrinoformacin mediante la determinacin funcional del fibringeno o la realizacin del tiempo de trombina. Sobre la base de los resultados de estas pruebas podemos realizar una aproximacin diagnstica cuya confirmacin puede requerir la determinacin especfica de factores de la coagulacin. El proceso coagulativo abarca las vas extrnseca e intrnseca, ambas necesarias para una hemostasia normal. El TTPA es un test de screening en el que estn implicados los siguientes factores plasmticos de la coagulacin: II, V, VIII, IX, X, XI y XII, y el Fibringeno, as como la fase de contacto (Calicreina, Kiningeno de alto peso molecular), el Factor Plaquetario 3 e iones Calcio. El TTPA se basa en la activacin del plasma por parte de un activador de contacto en presencia de fosfolpidos como substituto del factor plaquetario 3, posteriormente se agregan iones calcio en exceso. El tiempo de coagulacin obtenido ser proporcional a los factores implicados, la presencia en la muestra de inhibidores especficos y no especficos del sistema intrnseco, as como el tratamiento con frmacos que afectan la sntesis de algunos de esos factores (TACO) o que potencian su inhibicin (Heparina), producirn un alargamiento de los tiempos de coagulacin. Ejecutor: Tecnlogo Mdico Muestra: Sangre venosa o arterial con anticoagulante citrato de sodio 3.2 % 0.109 mmol/L Volumen mnimo: 1 ml de sangre total con citrato de sodio 3.2 % Materiales: 1. Coagulmetro automatizado (AMAX 200) 2. Guantes de ltex o similar 3. Gradillas 4. Centrifuga Megafuge. 5. Micropipetas 6. Cronmetro 7. Reactivos: a. Cefalina Lquida: DG-APTT (Grifols): Contiene cido Elgico (0.10 mmol/L) como activador de contacto, extracto clorofrmico de cerebro de conejo (0.006% Fosfolpidos), tampn y estabilizante lquido transparente de color amarillento. b. Cloruro de Calcio (0.025 mmol/L (DG-CaCl2 0.025 M)
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA 8.
CDIGO: PRUEBAS DE COAGULACIN: REV. N: (3) TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PGINA: 2 DE 2 PARCIALMENTE ACTIVADA (TTPA) Reconstitucin de DG-APTT: Listo para usar. Atemperar y mezclar por inversin antes de usar. Estabilidad una vez abierto: 30 das a 2-8 oC, siempre y cuando se mantenga el vial debidamente cerrado con el obturador y la tapa cuando no se use, y se manipule adecuadamente evitando contaminar el contenido y exposiciones prolongadas a temperaturas que no son propias de conservacin. En caso de que no se cerrara correctamente, puede producirse una disminucin de la estabilidad del reactivo. Puede aparecer un sedimento verdoso de cido Elgico/Lpidos cuando est en reposo, que desaparece al mezclar el contenido del vial. Si se observan cambios de color en el reactivo y/o aparicin de precipitados insolubles, desechar el vial. No congelar. Estabilidad entre 2-8 oC: Es estable hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta.
Procedimiento: 1. Centrifugar los tubos tapados a temperatura ambiente por 10 minutos a 3000 rpm.(plasma pobre en plaquetas < 10000 plaquetas x ul). 2. Procesar en equipo AMAX 200, antes de 4 horas de extrada la muestra (muestra conservada a temperatura ambiente), segn su instructivo. Clculo de Resultados: 1. El equipo automticamente entrega segundos de la muestra en estudio. Valores de Referencia: 1. Los valores del APTT pueden reportarse en segundos. En este caso, los resultados deben reverenciarse frente a un intervalo de normalidad del test de APTT, calculado a partir de 20 muestras de donantes sanos, el promedio +/- 2 DS. Fuentes de Error: 1. Procesamiento de las muestras despus de 2 horas. 2. Muestras coaguladas 3. Prdida de la relacin sangre anticoagulante 4. Muestras contaminadas con heparina 5. Muestras con hemlisis 6. Incorrecta manipulacin de las muestras 7. Implementacin incorrecta de la tcnica 8. Contaminacin del reactivo 9. Rellenar viales con restos de reactivos que superen el tiempo de conservacin recomendado. 10. La conservacin de la muestra de plasma a bajas temperaturas, as como la extraccin de la sangre poco cuidadosa pueden favorecer la liberacin del Factor Plaquetario 4, que neutraliza la heparina, por ello deben extremarse los cuidados en la extraccin de la muestra y conservarla a temperatura ambiente. 11. Para la correcta monitorizacin de la Heparina: (la heparina tiene una vida media de 1.5 hrs.), por lo que el momento de la extraccin es muy importante.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA Tiempo de Sangra (TS): Objetivo:
TIEMPO DE SANGRA (TS)
La lesin de cualquier vaso sanguneo produce la adhesin de las plaquetas tanto al subendotelio del vaso expuesto como al colgeno expuesto, en esta primera fase de adhesin ocurre la fase de agregacin plaquetaria que se produce en el lugar de la herida , formndose el tapn plaquetario primario, por lo tanto, para que ocurra este proceso se realiza una pequea incisin normada frente a largo y profundidad, lo que permite proporcionar una medida de la funcionalidad de las plaquetas en la hemostasia de vasos de pequeo calibre. Ejecutor: Tcnico Paramdico, Tecnlogo Mdico. Muestra: El paciente no debe ingerir cido Acetil Saliclico al menos siete das antes del examen . Materiales: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Banda de papel filtro. Algodn Alcohol al 70 % Cinta adhesiva Esfingomanmetro Cronmetro Dispositivo Estandarizado (Simplate o Surgicutt)
Procedimiento: 1. 2. 3. Coloque el brazo del paciente sobre un soporte estable, de forma que la superficie anterior del antebrazo, quede expuesta. Coloque el manguito del Esfingomanmetro en la parte superior del brazo y aplique una presin de 40 mm/Hg. El tiempo que puede transcurrir desde que se aplica la presin deseada con el Esfingomanmetro hasta que se realiza la incisin debe oscilar entre los 50-60 segundos. Mantngase la presin seleccionada de forma exacta y constante durante toda la prueba. Limpie con alcohol la superficie de la piel donde se va a realizar la incisin. Saque el dispositivo del paquete estril teniendo cuidado de no contaminarlo, evitando tocar la ranura de salida de la cuchilla, o dejarlo en superficies no estriles. quite la grapa de cierre de seguridad del dispositivo, no apriete el gatillo o toque la ranura de la cuchilla.
4. 5. 6.
UNIDAD DE APOYO CLNICO HOSPITAL PADRE HURTADO LABORATORIO CLNICO SECCIN: HEMATOLOGA 7. 8.
TIEMPO DE SANGRA (TS)
9. 10. 11. 12. 13. 14.
Sostenga firmemente el dispositivo entre el dedo pulgar y el dedo medio. coloque el dispositivo sobre el antebrazo del paciente presionando suavemente, de manera que los bordes de ste toquen ligeramente la piel. La zona de eleccin para la realizacin del test es la cara anterior del brazo, a unos 5 cms debajo del pliegue cubital y verticalmente a este. Presione levemente el gatillo de salida de la cuchilla con el dedo ndice poniendo, simultneamente el cronometro en marcha, la cuchilla producir una incisin de 5 mm de largo y de 1 mm de profundidad. Retire el dispositivo del antebrazo del paciente inmediatamente despus de haber apretado el gatillo. Cada 30 segundos limpiar la sangre con el papel absorbente. Coloque el papel absorbente cerca de la incisin. No toque directamente la incisin con el papel de manera de no alterar la formacin del tapn plaquetario. Limpie la sangre cada 30 segundos hasta que deje de manchar el papel filtro, pare el cronmetro cuando la sangre deje salir, y determine el tiempo de sangrado. Quite el manguito del Esfingomanmetro y limpie la zona donde se ha practicado la incisin con un algodn y suero fisiolgico. La posible aparicin de cicatrices puede disminuirse aproximando los bordes de la piel con una cinta adhesiva antialrgica (afrontamiento) que deber mantenerse por 24 hrs.
Clculo de Resultados: 1. El tiempo de sangra, es el tiempo que transcurre, desde el momento en que se hizo el corte, hasta la ltima mancha en el papel filtro.
Valores de Referencia: Hasta 9 minutos. Fuentes de Error: 1. Ejercer una presin menor o ms alta de lo indicado. 2. No respetar los intervalos para poder manchar el papel filtro. 3. Pasar a llevar el tapn formado con el papel filtro utilizado. 4. Si se pasa a llevar un vaso de mediano calibre. 5. Hematocrito menor a 25 % y plaquetas menores a 100.000.
INDICE GENERAL MANUAL DE TCNICAS
Pgina
Nitrgeno Ureico Glucosa (Glucosa HK) Bilirrubina Total Bilirrubina DPD Bilirrubina Directa Mtodo Diazo Fosfatasa Alcalina Alp2 acc. to IFCC Alanin Amino Transferasa (ALTL/GPT) con Piridoxal Fosfato Aspartato Amino Transferasa (ASTL/GOT) con Piridoxal Fosfato Protenas Totales Albmina (Verde de Bromocresol) Acido rico Creatinina Jaffe Mtodo Compensado Calcio Fsforo Magnesio Gamma Glutamil Transferasa Amilasa Acido Lctico Amonio Colesterol HDL Colesterol Triglicridos Deshidrogenasa Lctica Creatinquinasa Isoenzima MB de la Creatinquinasa Protena C Reactiva Factor Reumatoideo Antiestreptolisina O Electrolitos Plasmticos Orina Completa Lquido Cefalorraqudeo Citoqumico de Lquido Pleural Gases en Sangre Determinacin de Sub Unidad Beta Cualitativa Lquido Amnitico Bilirrubina Micromtodo Espectrofotometra del Lquido Amnitico Triyodotironina T3 Tetrayodotironina Tiroxina T4 Tiroxina Libre FT4 Hormona Estimuladora de la Tiroides (HET) TSH Hormona Estimulante de los Folculos (FSH) Hormona Luteinizante LH Prolactina Gonadotrofina Corinica Humana + Sub Unidad BHCG Troponina T Inmunoglobulina M IGM/IgM Inmunoglobulina G IGG/IgG Inmunoglobulina A IGA/IgA 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 26 28 30 32 34 36 39 40 42 45 47 48 50 52 54 56 58 60 62 63 64 66 67 69 70 71 73 75 77 79 81 83 85 87 89 91 93
Complemento C3 Complemento C4 Carbamazepina (CBZ) Drogas de uso Teraputico cido Valproico (AVP) Drogas de uso Teraputico Fenitona Drogas de uso Teraputico Fenobarbital Drogas de uso Teraputico CAPTULO 2 Tcnicas Hematolgicas Frotis Sanguneo Tincin de May-Grnwald-Giemsa Recuento de Reticulocitos (Manual) Hematocrito (Micromtodo) Hematocrito (Electrnico) Eritrosedimentacin o Velocidad de Sedimentacin (VSG) Pruebas de Coagulacin: Curva de Calibracin del Tiempo de Protrombina (TP) Pruebas de Coagulacin: Tiempo de Protrombina (TP) Pruebas de Coagulacin: tiempo de Tromboplastina Parcialmente Activada (TTPA) Tiempo de Sangra (TS) ndice
95 96 97 98 99 100 101 102 104 107 109 111 113 116 118 120 122 124

MTL

Caricato da

Informazioni sul documento

Titolo originale

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

MTL

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

Hospital Padre Alberto Hurtado Laboratorio de Qumica Clnica - Urgencia

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

REVISADO POR: Gerencia de Calidad APROBADO POR:

_____________________ Dra. Loretto Vergara M. Jefa Laboratorio y Banco de Sangre

Hospital Padre Hurtado

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

6-20 mg/dL (adultos) 4-19 mg/dL (nios) : 12-20 g/ 24hrs.

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

GLUCOSA (GLUCOSA HK)

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

GLUCOSA (GLUCOSA HK)

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

BILIRRUBINA TOTAL BILIRRUBINA DPD

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

R1: Detergente/cido clorhdrico R2: Diazorreactivo (3,5-sal de diclorofenildiazonio).

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

BILIRRUBINA TOTAL BILIRRUBINA DPD

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

BILIRRUBINA DIRECTA MTODO DIAZO

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

BILIRRUBINA DIRECTA MTODO DIAZO

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

Estabilidad del reactivo: Abierto y refrigerado en el analizador: 12 semanas.

Bilirrubina + cido sulfanlico diazotado -------

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

FOSFATASA ALCALINA ALP2 acc. to IFCC

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

FOSFATASA ALCALINA ALP2/ acc. to IFCC Gen.2

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

ALANIN AMINO TRANSFERASA (ALTL/GPT) CON PIRIDOXAL FOSFATO

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

ALANIN AMINO TRANSFERASA (ALTL/GPT) CON PIRIDOXAL FOSFATO

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

ASPARTATO AMINO TRANSFERASA (ASTL/GOT) CON PIRIDOXAL FOSFATO

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

ASPARTATO AMINO TRANSFERASA (ASTL/GOT) CON PIRIDOXAL FOSFATO

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

ALBUMINA (VERDE DE BROMOCRESOL)

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

ALBUMINA (VERDE DE BROMOCRESOL)

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 2

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 1 DE 3

Hospital Padre Hurtado Laboratorio Central

CDIGO: REV. N: (3) PGINA: 2 DE 3

2H2O2 + 4-aminofenazona + HSDA+ H+ + H2O ---- Peroxidasa --HSDA: N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-3,5-dimetoxianilina