Atividades prticas em Microbiologia, Imunologia e Parasitologia Humana

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR CAMPUS SOBRAL CURSO DE GRADUAO EM ODONTOLOGIA SETOR DE ESTUDOS: MICROBIOLOGIA, IMUNOLOGIA E PATOLOGIA GERAL LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA E PARASITOLOGIA DE SOBRAL PROCESSO ENSINO-APRENDIZAGEM EM MICROBIOLOGIA, IMUNOLOGIA E PARASITOLOGIA HUMANA PROFESSOR ORIENTADOR: Dr. FRANCISCO CESAR BARROSO BARBOSA PROFESSORA: Ms. PAULA GOES PINHEIRO DUTRA TCNICO: FRANCISCO RULIOGLSIO ROCHA MONITORES: Ac. FRANCISCO ISAAC FERNANDES GOMES Ac. MARIA GERUSA BRITO ARAGO

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NDICE
BIOSSEGURANA, Pgina 04
ESTUDO DO MICROSCPIO, Pgina 06 COLORAO DE GRAM, Pgina 11 BACTRIAS, Pgina 16 FUNGOS, Pgina 20 MICOBACTRIAS, Pgina 22 AMEBASE, GIARDASE E TOXOPLASMOSE, Pgina 24 DENGUE E LEISHMANIOSE, Pgina 26 ESTRONGILOIDASE, ANCILOSTOMASE, ASCARIDASE, TRICURASE E ENTEROBASE, Pgina 29 MEIOS DE CULTURA, Pgina 33 INOCULAO DE BACTRIAS, Pgina 35 ISOLAMENTO DE MICRO-ORGANISMOS, Pgina 38 ANTIBIOGRAMA, Pgina 40 ANLISE DA AO DE ANTISSPTICOS, Pgina 42 TESTES DE HEMAGLUTINAO, Pgina 44 AGLUTINAO ERITROCITRIA POR LECTINA VEGETAL E AGLUTINAO DIRETA EM LTEX, Pgina 48 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS, Pgina 51

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BIOSSEGURANA

OBJETIVO
Ensinar ao acadmico de Odontologia os princpios gerais e mtodos utilizados no estudo de microbiologia e parasitologia. Nestas aulas, utilizaremos uma variedade de microrganismos,

3. No fumar e no comer no laboratrio;

4. Manter as mos, canetas, lpis e quaisquer outros objetos sem contato com a boca ou a face.

5. Antes de cada aula prtica sero dadas as instrues sobre a sendo alguns patognicos para o homem, portanto essencial que as normas sejam seguidas, a fim de se evitar contaminaes acidentais. NORMAS DE SEGURANA NO LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA E PARASITOLOGIA 1. O uso de jaleco branco, comprido e abotoado, obrigatrio no laboratrio de aulas prticas, a fim de proteger a roupa de contaminao; 6. Durante o curso sero utilizados microrganismos patognicos para o homem e animais. No haver perigo se as tcnicas de 2. As bolsas, pacotes, livros etc., no devem ser colocadas sobre as bancadas de trabalho; laboratrio forem executadas cuidadosamente; maneira de se executar os trabalhos. No iniciar um trabalho prtico sem haver lido, cuidadosamente as instrues e compreendido o modo de execuo da experincia e seu objetivo. Consultar o professor se encontrar dificuldades para entender ou para executar os trabalhos prticos. Verificar se o material est completo; no caso da falta de algum, dirija-se imediatamente ao professor;

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7. Em caso de qualquer acidente (derramamento de cultura, aspiraes de cultura, ferimentos, etc.), comunicar

11. O estudante responsvel pelo equipamento com que trabalha. Os microscpios devem ser manuseados

imediatamente ao professor ou ao pessoal tcnico do laboratrio, para que sejam tomadas as providncias necessrias;

cuidadosamente. Qualquer dano ou defeito deve ser imediatamente comunicado ao professor. Aps o uso do microscpio, limpar a objetiva de imerso, usando apenas leno de papel;

8. Todo o material contaminado (pipetas, bastes, lminas, etc.) dever ser colocado nos recipientes adequados para ser esterilizado; nunca deix-lo sobre a mesa de trabalho ou sobre a pia; 12. Aps terminar os trabalhos prticos, verificar se as torneiras de gua e gs esto fechadas. Guardar os microscpios em seus devidos lugares. Deixar o local de trabalho sempre limpo; 9. A ala ou ponta de platina que se usa para semeadura do material ou repique de culturas deve ser aquecida at o rubro, tanto antes como depois do uso. Antes de tocar o material ou meio de cultura, deve-se deixar que a ala ou ponta esfrie, mantendo-a prxima chama; 13. Desinfetar a bancada de trabalho com lcool 70 ou hipoclorito de sdio, ao incio e trmino de cada aula prtica. Isto remover microrganismos que possam contaminar a rea de trabalho;

10. Os instrumentais no devem ser colocados nos bolsos do jaleco;

14. Lavar

sempre

as

mos,

aps

trabalho

prtico.

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ESTUDO DO MICROSCPIO

OBJETIVO
Reconhecer as partes do microscpio e aprender a focalizar as lminas, inclusive utilizando a lente objetiva de imerso.

A parte mecnica representada pelo corpo do microscpio, que est apoiado, pela extremidade inferior, numa base metlica de tamanho e peso suficientes para assegurar o equilbrio do aparelho. A extremidade superior do brao articula-se com um tubo metlico conhecido como canho, que suporta as lentes. Um sistema de cremalheira permite o deslocamento do canho (ou da mesa, conforme o modelo) para baixo e para cima, atravs dos parafusos macro e micromtricos. O parafuso macromtrico responsvel pelo deslizamento rpido e de grande amplitude, ao passo que o parafuso micromtrico, por pequenos deslocamentos. Na parte inferior do tubo microscpio, ficam depositadas as objetivas, em nmero varivel e so rosqueadas num dispositivo mvel especial, denominado revlver permite o intercmbio das objetivas. Entre o canho e a base do microscpio existe uma plataforma metlica, a mesa ou platina do microscpio. Sobre a platina colocada a lmina com a preparao a ser examinada, a

INTRODUO
A microbiologia pode ser definida como o estudo de organismos muito pequenos, impossveis de serem vistos claramente e individualizados pelo olho humano sem ajuda nenhuma. Para a visualizao de microrganismos, necessita-se de aumentos que podem ser obtidos atravs do uso de microscpio ptico composto. O microscpio tico composto ou microscpio de luz um instrumento de preciso que possibilita a visualizao de microrganismos. Constitui-se de duas partes, uma mecnica e outra tica.

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qual ser fixada, por meio de presilhas, a fim de que permanea imvel. Para correr todo o campo do microscpio, h um dispositivo especial o charriot que por intermdio de 2 parafusos faz o deslocamento da preparao. J a parte ptica constituda pelas lentes e pelo sistema de iluminao. As lentes oculares so adaptadas na extremidade superior do tubo do microscpio e atravs dela que o observador olha. A ocular geralmente produz aumentos de 10x, entretanto, existem oculares de 5 e 15 aumentos. As lentes objetivas so constitudas por um conjunto de lentes e acham-se dispostas na extremidade inferior do tubo do microscpio. Geralmente, existem trs objetivas a seco (pequeno, mdio e grande aumento) e uma objetiva de imerso. A objetiva de imerso d maior aumento e nitidez ao objeto. A tcnica simples: basta colocar uma gota de leo de cedro sobre a preparao e baixar a objetiva sobre a lmina, de forma que esse lquido denso se interponha entre a objetiva e o objeto examinado. Nesse caso, os raios luminosos no sofrem desvio, pois o ndice de refrao do leo igual, ou muito prximo, ao do vidro. O sistema de iluminao representado pelo condensador, que dirige os raios de luz para o objeto, e uma fonte de luz que pode ser direta ou refletida por um espelho. O condensador possui um

diafragma com a finalidade de controlar a quantidade de luz desejada. O aumento do microscpio obtido pelo produto do aumento da objetiva pelo valor da ocular. Chama-se poder resolvente de uma objetiva a capacidade que permite ver nitidamente o menor espao entre dois pontos.

PERCURSO DA LUZ - DO MICROSCPIO AOS OLHOS DO OBSERVADOR

Uma vez j sabendo que microscpios so instrumentos teis na observao de objetos de tamanho bastante reduzido, importante que compreendamos como a imagem produzida e chega aos nossos olhos. De acordo com a figura, que mostra os principais componentes do microscpio, uma fonte de luz, que pode ser externa ao microscpio ou construda internamente em sua base, ilumina o espcime. As lentes de condensao renem os raios difusos da fonte de luz e iluminam o espcime com um cone de luz brilhante que permite a visualizao de pequenas partes do espcime, aps sua ampliao. Os raios de luz, focalizados no espcime pelas lentes de condensao, so ento coletados pelas lentes objetivas do 7

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microscpio. A partir desse ponto, dois conjuntos de raios de luz que entram nas lentes objetivas tm de ser considerados: aqueles que o espcime alterou e aqueles que ele no alterou. Estes ltimos consistem nos raios luminosos que passam direto para as lentes objetivas, formando o fundo luminoso do campo visual. O primeiro grupo de raios luminosos emana de vrias partes do espcime. Estes raios luminosos so focalizados pelas lentes objetivas para formar uma imagem real e ampliada do objeto dentro da coluna do microscpio. A imagem formada pelas lentes objetivas usada como um objeto pelo segundo sistema de lentes, as lentes oculares, para formar uma imagem ampliada e virtual. Um terceiro sistema de lentes, localizado na parte anterior dos olhos, utiliza a imagem virtual produzida pelas lentes oculares como um objeto para produzir uma imagem real na retina. Quando o boto de foco do microscpio ptico manipulado, a distncia relativa entre o espcime e as lentes objetivas alterada, permitindo que a imagem final fique focalizada exatamente no plano da retina. A ampliao total atingida pelo microscpio o produto da ampliao produzida pelas lentes objetivas e pelas lentes oculares. Coloque a ocular desejada; Acenda a fonte de luz acoplada; Posicione o condensador o mais prximo possvel da platina; Verifique se o diafragma est completamente aberto; Coloque em foco a objetiva de menor aumento; Fixe a preparao a ser examinada na platina, atravs das presilhas; Observe o campo microscpico; Na observao com a objetiva de imerso, coloque antes uma gota de leo de cedro sobre a lmina; Gire o revlver para deixar a objetiva de imerso em foco. Geralmente, a objetiva de imerso possui um fino anel de cor preta; Olhe pelo lado, no momento em que descer o canho com o auxlio do parafuso macromtrico. No se deve focalizar baixando a objetiva enquanto se olha pela ocular; Olhe pela ocular e mova, delicadamente, o parafuso macromtrico at conseguir focalizar grosseiramente a preparao; 8 COMO FOCALIZAR UM OBJETO

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Mova o parafuso micromtrico at obter uma boa focalizao; ESTRUTURAS DO MICROSCPIO PTICO

Para mudar o campo microscpico, mova o charriot num ou

outro sentido. 1 = ocular 2 = objetivas e revlver CUIDADOS APS O USO DO MICROSCPIO 3 = platina 4 = charriot Aps a anlise das lminas, alguns procedimentos so necessrios. Deve-se distanciar a objetiva da lmina, usando o parafuso macromtrico; retirar a lmina da platina; limpar todas as lentes com papel absorvente especial, inclusive remover o leo de cedro da objetiva de imerso; desligar o sistema de iluminao e recobrir o aparelho com sua respectiva capa. 5 = macromtrico 6 = micromtrico 7 = diafragma no condensador 8 = condensador 9 = boto do condensador 10 = dois parafusos centralizadores do condensador MATERIAL Microscpio Lmina corada leo de imerso Papel absorvente 11 = fonte de luz 12 = controle de iluminao 13 = diafragma de campo (alavanca no lado esquerdo do microscpio) 14 = dois parafusos de ajuste da lmpada (esquerdo e direito) 15 = focalizadora da lmpada (alavanca no lado direito do microscpio - no visvel na fotografia). 9

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Condensador:____________________________________________ FUNO DOS SEGUINTES COMPONENTES _______________________________________________________ ______________________ Lente ocular: _______________________________________________________ _______________________________________________________ ___________ Diafragma:______________________________________________ _______________________________________________________ Corpo: _______________________________________________________ _______________________________________________________ ________________ Iluminador:_____________________________________________ _______________________________________________________ _______________________ Lentes objetivas: ____________________________________________________ ______________________

Charriot: _______________________________________________________ _______________________________________________________ ______________

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COLORAO DE GRAM

Gram-positivas

OBJETIVO
Aprender a fazer a colorao de Gram e diagnosticar o micro-organismo quanto s suas caracterticas tintoriais. de A parede celular de gram-

positivas consiste de muitas camadas peptidoglicana, que uma

INTRODUO
A colorao de Gram foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista dinamarqus Hans Christian Gram. Tal colorao til, uma vez que classifica as bactrias em dois grandes grupos: gram-positivas e gram-negativas. O mecanismo baseia-se nas diferenas existentes entre as estruturas das paredes celulares desses dois grupos e como cada um reage frente aos compostos utilizados durante o procedimento de colorao. As paredes celulares de

macromolcula composta de um dissacardeo repetitivo unido por polipeptdeos para formar uma rede que envolve toda a clula procaritica, protegendo-a. H tambm, nessa estrutura macromolecular, cidos teicicos e lipoteicicos. O primeiro liga-se parede celular, enquanto o segundo, atravessa-a, ligando-se membrana plasmtica. Devido sua carga negativa, os cidos podem regular o fluxo de ctions para os meios intra e extracelular. Alm de tudo fornecem boa parte da especificidade antignica da parede celular, sendo, portanto, teis na identificao de bactrias em testes laboratoriais.

bactrias gram-positivas e gram-negativas apresentam as seguintes caractersticas:

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Gram-negativas A parede celular de

bactrias

gram-negativas

COLORAO DE GRAM

consiste de poucas camadas de peptidoglicana e uma membrana plasmtica peptidoglicana lipoprotenas na externa. liga-se A a A colorao de Gram consiste em tratar bactrias sucessivamente com cristal violeta, lugol, lcool-acetona e fucsina (ou safranina). O cristal violeta e o lugol formam um complexo denominado iodopararosanilina, o qual confere colorao roxa tanto

membrana

externa e, ao contrrio das gram-positivas, no contm cidos teicicos e lipoteicicos em sua estrutura. A membrana plasmtica da bactria gram-negativa consiste de lipopolissacardeos, lipoprotenas e fosfolipdeos. Sua carga negativa garante clula bacteriana a capacidade de evadir da fagocitose e de aes das protenas do complemento, alm de fornecer uma importante barreira a antibiticos. Duas importantes caractersticas so devidas membrana externa: a poro polissacardica til na diferenciao de espcies de gram-negativas e a poro lipdica referida como uma endotoxina, que txica ao hospedeiro, uma vez que esteja presente em sua corrente sangunea; o que causaria febre e choque. por bactrias Gram-positivas, quanto as Gram-negativas. Com a adio de lcool-acetona, as bactrias Gram-negativas liberam o complexo formado, pois a camada de peptidoglicano de pequena espessura, enquanto que as Gram-positivas retm o complexo, permanecendo roxas. A adio de fuccina (ou safranina) no altera a cor das Gram-positivas, mas confere a cor avermelhada as bactrias Gram-negativas, que foram descoloridas pelo lcool-acetona.

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TIPOS DE TCNICAS PARA COLORAO DE GRAM

IV. Leve a amostra at a gota de gua depositada sobre a lmina, e homogeinize com movimentos circulares, para obter um esfregao de forma oval, uniforme e fino; V. Fixe o esfregao, passando a lmina na chama do bico de Bunsen, como se cortando a chama, repetindo procedimento este 3

Esfregao da cultura bacteriana lquida: I. Flambe uma ala, deixe esfriar, mantendo-a prximo a chama; II. Retire uma amostra da cultura com a ala e deposite no centro da lmina; III. Espalhe o material com a ala em movimento circular, obtendo um esfregao de forma oval, uniforme e fino; IV. Fixe o esfregao, passando a lmina na chama do bico de Bunsen, como se cortando a chama, repetindo este procedimento 3 vezes, para que o material fique bem aderido.

vezes, para que o Esfregao de cultura bacteriana slida: I. Flambe uma ala, deixa esfriar, mantendo-a prxima chama; II. III. Retire uma gota da gua estril e deposite sobre a lmina; Flambe novamente a ala, espere esfriar, e retire uma amostra da cultura slida; material fique bem aderido.

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PRTICA DE COLORAO DE GRAM

ETAPAS PARA REALIZAR A COLORAO DE GRAM

I. II. III. IV. V.

Coloque a lmina com o esfregao sobre um suporte; Cubra a lmina com cristal violeta e deixe agir por 1 minuto; Lave a lmina em jato fraco de gua corrente, do lado contrrio ao esfregao; Cubra a lmina com lugol, deixe agir por 1 minuto e depois lave novamente a lmina; Cubra a lmina com a soluo de lcool-acetona, verifique a descolorao que deve ocorrer em cerca de 20 segundos;

VI. VII.

Cubra a lmina com fuccina, deixe agir por 30 segundos, e, novamente lave a lmina; Seque inicialmente o lado da lmina oposto ao esfregao com papel-toalha, e a seguir seque o restante da lmina na chama do bico de Bunsen (como se estivesse cortando a chama);

VIII.

Leve

lmina

ao

microscpio

observe

em

objetiva

de

imerso.

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ATIVIDADE PRTICA
O aluno dever descrever as caractersticas morfo-tintoriais da espcie bacteriana que foi corada com a colorao de Gram, depois desenhar no espao reservado o que observou na lmina.

Bactria Gram-positiva

Bactria Gram-negativa

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LAMINRIO DE BACTRIAS

OBJETIVO
Saber identificar os micro-organismos de acordo com suas caractersticas morfo-tintoriais.

Os bacilos so clulas bacterianas que apresentam uma morfologia mais alongada no eixo longitudinal, de modo que se assemelham a charutos. Tais clulas dividem-se ao longo de seu eixo curto, de forma que h um menor nmero de agrupamento desse tipo celular. Os diplobacilos so agrupamentos de duas clulas e os estreptobacilos so agrupamentos de bacilos em cadeia,

INTRODUO Morfologia e estrutura da clula bacteriana

Existem muitos tamanhos e formas para as bactrias, podendo apresentar a forma de coco, quando se apresentam esfricas; bacilos, em forma de basto e espiraladas. Os cocos normalmente so redondos, entretanto podem ter morfologia oval, alongada ou achatada. Quando no se dividem completamente, os cocos podem permanecer unidos aos

de modo sequencial. H tambm os cocos bacilos, que so ovais e parecidos com os cocos. As bactrias espiraladas podem ter uma ou mais voltas em torno de seu prprio eixo. As que parecem uma vrgula so chamadas de vibries; outras so denominadas espirilos, que possuem forma helicoidal. H tambm as espiroquetas, que possuem forma helicoidal e flexvel, ao contrrio dos espirilos, que so rgidos. Excetuando-se as trs formas bsicas apresentadas: cocos, bacilos e espirais, h tambm bactrias com morfologias estrelada, quadrada e plana. importante que o estudante compreenda que a

pares(diplococos), em cadeia(estreptococos), em ttrade, formando um cubo de oito clulas(sarcina) ou de forma semelhante a cachos de uva(estafilococos).

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forma bacteriana determinada pela herana gentica do microorganismo e que a maioria das bactrias mantm uma nica forma em seu ciclo de vida, sendo, portanto, monomrficas. No entanto, outras possuem muitas formas; como as bactrias do gnero Rhizobium e Corynebacterium, sendo denominadas pleomrficas. A clula procaritica simples, possui nucleide com

que se estendem para fora da clula, o glicoclice, que dependendo de sua fora de adeso bactria chamado de cpsula, quando fortemente aderido; ou camada viscosa quando aderido

frouxamente clula bacteriana. Os flagelos bacterianos so apndices filiformes compostos totalmente de protenas - flagelina, essenciais para a locomoo. As fmbrias so uma estrutura superficial, rgida, curta e fina presente em muitas bactrias Gram-negativas, que desempenham a aderncia das bactrias s s clulas hospedeiras. Outras estruturas conhecidas como pili sexuais so normalmente longos, maiores que as fmbrias. Existindo um ou dois por clula. Os pili sexuais fixam clulas doadoras e receptoras na conjugao bacteriana, sendo, portanto, teis na transferncia do material gentico.

ausncia de membrana nuclear e aparelho mittico. Os pigmentos fotossintticos das bactrias que efetuam a fotossntese localizamse em vesculas esfricas ou em camadas achatadas. As bactrias armazenam materiais sob a forma de grnulos insolveis. A estrutura e a organizao do envoltrio celular diferem nas bactrias Gram-positivas e Gram-negativas. Nas primeiras, o envoltrio relativamente simples, consistindo em uma membrana citoplasmtica, uma camada espessa de peptidoglicano e, em algumas bactrias, uma cpsula. Enquanto em gram-negativas, tal envoltrio possui uma complexa estrutura com mltiplas camadas. Existe uma nica camada plana de peptidoglicano ancorada a uma membrana externa com camadas complexas, h tambm a cpsula mais externamente e o espao entre as membranas interna e externa chamado de espao periplasmtico. Muitas bactrias sintetizam grandes quantidades de

ATIVIDADE PRTICA

O aluno dever desenhar as caractersticas do micro-organismo observado no microscpio e descrev-lo quanto organizao, colorao e citar possveis doenas causadas por ele.

polmeros extracelulares que formam uma rede frouxa de fibrilas

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Staphylococcus sp.

Bacillus sp.

Streptococcus sp .

Espiroqueta

Escherichia coli

Sarcina lutea

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Micro - organismos presentes na saliva

Endsporo

Cpsula bacteriana

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LAMINRIO DE FUNGOS
OBJETIVO
Saber identificar os fungos de acordo com o contedo terico estudado em sala de aula.

Candida. As leveduras do gnero Saccharomycces so uma exceo regra geral, pois podem se reproduzir sexuadamente. Cada tipo de reproduo traduz-se em aspectos morfolgicos importante na sua identificao.

INTRODUO
A identificao dos fungos baseada quase que exclusivamente em suas caractersticas morfolgicas. De forma bsica, os fungos incluem as leveduras, os bolores e os cogumelos, que so fungos macroscpicos. As leveduras so, em geral, unicelulares, com clula oval ou esferoidal. Os bolores so multicelulares, filamentosos com clulas tubulares. Essa estrutura tubular, por sua vez, chamada de hifa e o conjunto de hifas chamado miclio, que pode ser cenoctico ou septado. As leveduras podem reproduzir-se assexuadamente por cissiparidade ou gemulao. No entanto, pode ocorrer a diviso celular, mas as clulas permanecem unidas formando um pseudofilamento, fato que ocorre com as leveduras do gnero

O miclio, por sua vez, pode ser dividido em duas partes: miclio vegetativo e reprodutivo. O primeiro est relacionado com as funes de crescimento do fungo, sendo responsvel pela grande capacidade absortiva do organismo. O miclio reprodutivo, como o nome j indica, relaciona-se com as funes de reproduo do organismo, formando propgulos de forma assexuada ou sexuada. Os fungos so subdivididos em Zygomycotina (os ficomicetos), Ascomycotinas (os ascomicetos), Basidiomycotina (os

basidiomicetos) e Deuteromycotina (os fungos imperfeitos).

ATIVIDADE PRTICA
O aluno dever desenhar as caractersticas do organismo observado no microscpio e descrever a morfologia observados.

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MICOBACTRIAS

OBJETIVO
Aprender sobre a implicao das micobactrias na sade pblica, alm de aprender a realizao da colorao de ZiehlNielsen, especfica para o diagnstico desses micro-organismos.

fato que as distingue dos demais tipos bacterianos. Assim, esses micro-organismos so conhecidos como Bacilos lcool-cido Resistentes (BAAR). A colorao de Ziehl-Neelsen permite diferenciar bactrias BAAR positivas e negativas. Esse mtodo de identificao baseado na caracterstica tintorial bacteriana permite identificar

INTRODUO
Micobactrias so aerbias estritas, consideradas fracamente Gram positivas; so micro-organismos pequenos em forma de basto que no possuem flagelos, nem formam esporos, no produzem toxinas e nem produzem cpsula. Caractersticas distintas, como a quantidade e variedade de lipdios complexos presentes no envelope, destacam-se entre as propriedades exclusivas do gnero. As

micobactrias em um esfregao de linfa, escarro ou leses. Este mtodo utilizado no diagnstico de tuberculose e hansenase, nos quais se busca esses micro-organismos na amostra analisada.

COLORAO DE ZIEHL-NEELSEN
Realizar a fixao de amostra de linfa previamente colhida de stios especficos (lobos da orelhas ou articulaes); 22

micobactrias compartilham tambm a caracterstica de reter fucsina bsica em sua parede celular, mesmo na presena de lcool e cido,

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Esperar que o esfregao seque; Adicionar fucsina sobre o esfregao; Descorar com mistura lcool-cido; Lavar com gua; Adicionar azul de metileno; Observar em microscopia ptica.

ATIVIDADE PRTICA

Observar a lmina de micobactria previamente corada pelo mtodo de Ziehl-Neelsen sob microscopia ptica e desenhar aquilo que foi observado.

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AMEBASE, GIARDASE E TOXOPLASMOSE

OBJETIVO
Distinguir os micro-organismos de acordo com as caractersticas morfolgicas de cada espcie. pinocitose de bactrias e resduos alimentares. A transmisso ocorre por gua e alimento contaminado por cisto ou diretamente atravs de contaminao oro-fecal e DST.

INTRODUO
Amebase

Giardase

Espcie: Giardia lamblia. uma infeco do intestino grosso devido presena da Entamoeba histolytica no organismo de qualquer hospedeiro vertebrado, ocorre mais freqentemente em adultos. O complexo Entamoeba histolytica contm 2 formas: a minuta presente na luz intestinal e a magna encontrada nas leses patolgicas. O cisto apresenta de 1 a 4 ncleos, possui parede quitinosa e cariossoma central. J o trofozoto a forma ativa do parasita, possui ncleo com cariossoma central e vacolo digestivo. Tem locomoo amebide, reproduz por diviso binria e faz fagocitose e 24 Quando o protozorio flagelado (Giardia lamblia) parasita o intestino do homem ou de animais.Acomete mais crianas de at 12 anos. A Giardia lamblia pode estar na forma de cisto ou trofozoto.O habitat o intestino delgado (duodeno e jejuno).As formas de transmisso so por alimentos crus e gua no tratada, sexo anal, oral e contato com animas. Como profilaxia, recomendase higiene pessoal, proteo dos alimentos e tratamento da gua.

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Toxoplasmose

Espcie: Toxoplasma gondii. A toxoplasmose uma zoonose causada pelo protozorio intracelular obrigatrio Toxoplasma gondii. As formas infectantes so taquizotos, bradizotos e esporozotos. A transmisso desenvolve-se pela ingesto de carne crua ou mal cozida, por gua ou alimento contaminado por oocisto, por transplante de rgos e pela via transplacentria. Nos felinos ocorre a forma sexuada, assexuada e de resistncia.

ATIVIDADE PRTICA
O aluno dever desenhar no quadro abaixo as caractersticas microscpicas do parasita observadas na lmina e descrev-las . Entamoeba histolytica Forma trofozotica da Giardia lamblia Toxoplasma gondii taquizoto

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LEISHMANIOSE E DENGUE

OBJETIVO
LEISHMANIOSE O objetivo da aula consiste na apreenso do que foi ministrado nas aulas tericas, atravs da observao microscpica dos artrpodes causadores da Dengue e Leishmaniose e das formas do ciclo biolgico da Leishmania. interessante que se estabelea uma comparao entre as fmeas e machos de cada mosquito. Forma Amastigota: Ovide ou esfrica; Citoplasma com vacolo; Cinetoplasto; No existe flagelo livre; Macrfagos com vrias formas amastigotas. MATERIAL Lminas da forma amastigota e promastigota. Mosquito Lutzomyia sp. Larva do Aedes sp. Mosquito Aedes sp. Forma Promastigota Alongada; Citoplasma com granulaes pequenos vacolos; Cinetoplasto; Geralmente o flagelo maior que o corpo.

OBSERVAR NO MICROSCPIO
Agentes vetores e etiolgicos da Leishmaniose e Dengue:

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Inseto Lutzomyia - fmea Dptero; Cabea, trax e abdome; Ausncia de apndice caudal; Genitlia arredondada; Presena de hemcias; Asas lanceoladas. DENGUE Larva do Aedes sp. Presena de sifo respirao

Mosquito Aedes sp. fmea Antena pilosa; Antena longa como probscide.

Inseto Lutzomyia - macho Dptero; Cabea, trax e abdome; Genitlia bifurcada = gonapfise

Mosquito Aedes sp. macho Antena plumosa; Antena mais curta que a probscide.

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ATIVIDADE PRTICA
DESENHAR CADA LMINA OBSERVADA E AS ESTRUTURAS APONTADAS PELO ROTEIRO:

LEISHMANIOSE Forma Amastigota Forma Promastigota Inseto Lutzomyia fmea Inseto Lutzomyia - macho

DENGUE Larva do Aedes sp. Mosquito Aedes sp. fmea Mosquito Aedes sp. macho

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ESTRONGILOIDASE, ANCILOSTOMASE, ASCARIDASE, TRICURASE E ENTEROBASE

OBJETIVO
Estrongiloidase Melhor compreenso dessas parasitoses a partir da diferenciao morfolgica de cada nematdeo. Espcie: Strongyloides stercoralis. As larvas podem penetrar pela pele aps contato com terra infectada ou levando mos sujas boca e tambm atravs de gua e

INTRODUO
Os nematelmintos possuem simetria bilateral, corpo nosegmentado e cilndrico, alm de tubo digestivo completo. As parasitoses intestinais so infestaes do intestino causadas por parasitas os helmintos. So mais comuns nas regies tropicais e subtropicais e em populaes mais carentes, em funo das precrias condies de saneamento e de higiene. Alguns sinais comuns nas parasitoses so a falta de apetite, irritabilidade ou apatia, dores abdominais, nuseas, vmitos, azia, diarria e desnutrio. Atravs do exame parasitolgico de fezes possvel revelar o tipo de parasita, assim como fazer um correto diagnstico e tratamento.

alimentos contaminados. A larva filariide L3 (infectante) migra durante o ciclo pulmonar e permanece na mucosa intestinal intestino delgado (duodeno e jejuno). Muitas vezes

assintomtico, bastante comum em pacientes com deficincia imunitria, subnutrio e alcoolismo.

Ancilostomase

Espcies: Ancylostoma braziliense, Ancylostoma duodenalis, Ancylostoma caninum e Necator americanus.

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Parasitose comum em crianas. Ocorre a fixao do helminto mucosa intestinal, com aspirao ou dilacerao, atravs dos dentes e lancetas dos Ancylostoma ou das placas cortantes dos Necator. Habitat: intestino delgado (duodeno, jejuno e leo). Penetrao na pele ou ingesto oral de gua e alimentos com larva. Causa dermatite pruriginosa (coceira da terra), alm de ser caracterstico a vontade de comer terra geofafia. Espcie: Trichuris trichiura. O homem a nica fonte de infeco. Decorre da ingesto de gua e alimentos contaminados com ovos embrionados. Os ovos podem ser viveis por mais de 3 anos e contm a larva filaride (L2). Ascaridase Parasitam o intestino grosso do homem. No quadro clnico, ocorre prolapso de reto. Espcie: Ascaris lumbricoides. Acomete principalmente crianas e o homem a nica fonte de infeco. Contaminao atravs de ovos frteis embrionados na gua e nos alimentos ou por transmisso congnita. A larva que realiza migrao obrigatria pelo fgado e pulmo liberada no intestino e os vermes adultos vivem no lmen do intestino delgado. Apresentam papilas sensoriais. O macho do scaris possui espcula, menor e apresenta uma regio ventral recurvada. J o ovo tem uma parede externa mamilonada e L2 filariide. A sndrome de Leffler (pneumonia dos vermes) corresponde a uma das manifestaes clnicas. Espcie: Enterobius vermiculares. Os nematdeos so filiformes, possuem asas ceflicas, bulbo oxiuriforme e extremidade posterior encurvada. Contaminao pela ingesto ou inalao seguida de deglutio de ovos infectantes, contendo L2, no meio ambiente ou na regio anal e perianal. Ocorre prurido na regio perianal, principalmente, noite, tambm pode haver migrao ectpica para o aparelho genital feminino. Enterobase Tricurase

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ATIVIDADE PRTICA
Trichuris trichiura (ovo ) Trichuris trichiura (macho) Trichuris trichiura (fmea)

Necator americanus- fmea (regio posterior)

Necator americanus - fmea (regio anterior)

Enterobius vermicularis

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Ascaris lumbricoides ovo

Ancylostoma duodenalis

Ancylostoma braziliensis

Ancylostoma caninum

Strongyloides stercoralis -larva rabditide

Strongyloides stercoralis -larva filariide

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MEIOS DE CULTURA
OBJETIVO
Preparar diferentes meios de cultura que podem ser utilizados para o cultivo de diversas espcies de microrganismos. gar;

MATERIAL UTILIZADO

INTRODUO
Para o cultivo e identificao de micro-organismos, usa-se solues e substncias nutritivas chamadas meios de cultura, que devem atender s exigncias nutricionais das espcies a serem cultivadas. Quanto composio qumica, podem ser: -Meios sintticos: os componentes so quimicamente definidos; -Meios complexos: quando se adicionam, ao meio,

Erlemeyer (vidrarias); gua Destilada; Balana; Placas de Petri;

MTODO DE PREPARO
Pesar cada substncia, seguindo o protocolo indicado, e adicionar separadamente gua destilada, tomando-se o cuidado de homogeneizar a cada componente adicionado. Os meios de cultura mais utilizados em laboratrios de microbiologia esto disponveis comercialmente, j na forma desidratada. Nestes casos, pesar a quantidade de mistura especificada na embalagem do produto e acrescentar gua destilada.

substncias complexas peptona, sangue, etc.

como, por exemplo, extrato de carne,

Em relao ao estado fsico, podem ser lquidos, tambm denominados de caldos ou slidos, que possuem cerca de 1,5% a 2% de gar, que d ao meio a consistncia gelatinosa tpica.

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ATIVIDADE PRTICA
Preparar o meio BHI gar (Preparo para 1 litro): Indicao: Para o cultivo de qualquer micro-organismo gar Materiais: Brain Heart agar ----------- 52g H2O destilada ------------- 1000ml

4. Desligar a luz U.V.; 5. Acender a luz convencional; 6. Quando finalizar o trabalho, desligar a luz convencional e o ventilador 7. Passar lcool a 70%.

CONTROLE MICROBIANO POR AGENTES FSICOS Calor Radiao Filtrao Baixas temperaturas Dessecao Presso osmtica

Mtodo: Dissolver o BHI na H2O destilada e agitar bem agitar bem ; Ferver em micro-ondas ou placa aquecida agitando sempre para dissolver a gua; Autoclavar em tubos ou garrafas a meia rosca por 15 minutos a 121 C; Distribuir em placas ainda quentes, antes de solidificar. SOBRE A UTILIZAO DO FLUXO LAMINAR

CONTROLE MICROBIANO POR AGENTES QUMICOS 1. Passar lcool a 70%; 2. Posicionar o material; 3. Ligar a luz Ultra Violeta (U.V.) por 15 min e ventilador;

Carbono Nitrognio, enxofre e fsforo Elementos traos Oxignio Fatores orgnicos de crescimento

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INOCULAO DE BACTRIAS
OBJETIVO
Aprender algumas tcnicas de cultivo de micro-organismos comumente utilizadas em um laboratrio de Microbiologia. Para garantir uma semeadura correta, deve-se evitar ao

mximo perfurar o gar, para que no haja alteraes nas condies de crescimento bacteriano.

TCNICAS DE INOCULAO INTRODUO

Tcnica I: Meio Lquido (BHI caldo) A escolha da tcnica para o cultivo de micro-organismos varia de acordo com o tipo de meio de cultura e a finalidade do cultivo, porm algumas regras devem ser seguidas nas inoculaes: A agulha e ala de nquel-cromo (tambm chamada de

1. Mergulhe a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada; 2. Mergulhe a ala carregada de bactrias no tubo com o meio de cultivo e agite a ala;

agulha e ala de platina) devem ser esterilizadas por flambagem antes e aps qualquer cultivo. Tome cuidado de esfri-las antes da coleta; Os recipientes devem sempre ser abertos prximos chama

Tcnica II: Meio semi-slido

do bico de Bunsen; Deve-se evitar ao mximo que as tampas dos tubos e placas

1.

Mergulhe a Agulha de nquel-cromo esterilizada na cultura

bacteriana que lhe fornecida. 2. Inocule a agulha carregada com bactrias no meio de

fiquem sob a bancada durante o cultivo;

cultivo semi-slido. 35

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Tcnica III: Meio slido 1- Mergulhe a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada. 2- Encoste levemente a ala na parte mais baixa do plano inclinado e suba fazendo estrias na superfcie do gar. Tcnica IV: Meio slido (Placa de Petri tcnica do esgotamento) 1. Mergulhe a ala de platina esterelizada na cultura bacteriana

ILUSTRANDO AS TCNICAS

Tcnica I: Meio Lquido (BHI caldo)

que lhe apresentada; 2. Faa estrias em cada diviso, respeitando as linhas e

utlizando da melhor forma possvel toda a superfcie da placa; 3. Divida a placa de Petri em trs partes, fazendo linhas com Tcnica II: Meio semi-slido

uma caneta pincel na parte de baixo da placa.

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Tcnica III: Meio slido ATIVIDADE PRTICA

1. Preparar uma suspenso bacteriana; 2. Incubar em estufa com atmosfera de CO2 a 10%; 3. Fazer inoculao pela tcnica do esgotamento; 4. Incubar para se obter crescimento; 5. Aps o tempo determinado observar o crescimento e proceder a contagem das colnias.

Tcnica IV: Meio slido (Placa de Petri tcnica do esgotamento)

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ISOLAMENTO DOS MICRO-ORGANISMOS

OBJETIVO
Fazer diluies seriadas, a fim de encontrar uma concentrao onde as unidades formadoras de colnias (UFC) obtenham uma boa visibilidade. Observao: Em Microbiologia, tudo deve ser feito em triplicata, logo, a tcnica do espalhamento, embora seja mais fcil de contar, a mais dispendiosa.

ETAPAS
Diluio; Plaqueamento; Regresso; Esgotamento em placa.

REGRESSO
D-se a partir do produto da mdia de contagem pela diluio e pela taxa de regresso do volume. UFC/ mL= mdia da contagem X diluio X regresso do volume

TCNICAS DE SEMEADURA
Tcnica da gota: goteja e espera secar. Tcnica do espalhamento: aps gotejar, espalha a gota. 38

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TCNICA DE ESGOTAMENTO EM PLACA

Com um swab, descarrega o contedo at que a bactria possa formar Unidades Formadoras de Colnias (UFC) visveis. Na placa s so visveis as bactrias viveis (capazes de formar UFC), enquanto no lquido (tubo de ensaio) h tanto bactrias viveis como inviveis.

Fonte: www.infoescola.com

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ANTIBIOGRAMA
INTRODUO
Agentes qumicos utilizados no tratamento de seriada (MIC - Minimal Inhibitory Concentration e MBC Minimal Bactericidal Concentration) e o mtodo dos discos de papel de filtro. Este ltimo mtodo tambm denominado Mtodo de Kirby Bauer. Neste, a cultura pura de uma cepa problema semeado por toda a superfcie de uma placa de gar (Mueller Hinton, TSA, BHI ou outro) com o auxlio de um swab. A seguir, discos de papel de filtro impregnados com antibiticos so aplicados sobre a superfcie do gar. Aps o perodo de incubao, so realizadas as leituras, onde verificamos a sensibilidade da cepa pela presena ou ausncia de halos de inibio. doenas so chamados de quimioterpicos. Os antibiticos so definidos como substncias produzidas por

microrganismos especficos capazes de inibir o crescimento ou matar outros. A maioria dos antibiticos produzida por um pequeno gnero de fungos (Penicillium e Cephalosporium) e bactrias (Bacillus e Streptomyces). Ao longo do tempo, tem ocorrido um aumento significativo de cepas resistentes a um ou vrios antibiticos (cepas multirresistentes). Antes de administrarmos um antibtico, essencial checarmos a susceptibilidade do microrganismo ao agente prescrito. Assim, poderemos minimizar a seleo e a disperso de cepas resistentes. Muitos mtodos tm sido empregados para esta finalidade: E-Test, Sistema Vitek (Bio-Meriuex), Diluio

MATERIAL
Culturas bacterianas (Staphylococcus aureus e Serratia marcescens); Placa de gar Mueller Hinton; Discos de antibiticos (AMO, AMC, TET e CIP); Swabs; 40

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Pina esterilizada; Soluo salina fosfatada tamponada;

Escala Mac Farland.

TABELA PADRO PARA INTERPRETAO DOS HALOS

METODOLOGIA
1. Diluir a cultura em soluo salina fosfatada tamponada at
AMO ANTIBITICOS

DE INIBIO

Resistente 13 28 13 19 14 15

Intermedirio 14 16 14 17 15 18 16 20

Sensvel 17 29 18 20 19 21

que a turbidez se aproxime da escala 0,5 de Mac Farland; 2. Umedecer o swab na cultura, pressionar sobre as paredes

Gram-negativos entricos Staphylococcus

para retirar o excesso; 3. 4. Semear sobre toda a placa uniformemente; Colocar os discos de antibiticos com o auxlio da pina em

AMC

Enterobactrias Demais bactrias

TET CIP

pontos eqidistantes (colocar esquema); 5. Incubar por 24 a 48 h a 37C em aerobiose e fazer as

leituras. 6. Verificar a presena ou ausncia dos halos de inibio ao

redor dos discos, medir o dimetro em mm e anotar os resultados.

Legenda AMO= amoxicilina AMC= amoxicilina + cido clavulnico 20/10 g TET= tetraciclina - 30g CIP= ciprofloxacino - 5g

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ANLISE DA AO DE ANTI-SPTICOS
OBJETIVO
Verificar a ao de anti-spticos sobre a microbiota das mos. 2. Identificar cada quadrante com os respectivos ttulos: Controle (C), Mo Suja (MS), Detergente (Det), lcool 70% (A). Observe o esquema na pgina seguinte. 3. No quadrante identificado como Mo Suja o aluno deve encostar o dedo (sem lavar) no gar por 1 minuto.

MATERIAL
BHI Agar; lcool a 70%; Detergente neutro.

4. A seguir o outro aluno deve lavar as mos com detergente, seclas levemente e encostar o mesmo dedo no quadrante do gar identificado como Detergente por 1 minuto.

ATIVIDADE PRTICA
Para o experimento devem ser seguidas as seguintes etapas:

5. O outro aluno deve ento lavar as mos com lcool sec-las e encostar o mesmo dedo no quadrante do gar identificado como lcool por 1 minuto.

1. Pegar uma placa de Petri, contendo gar, e dividi-la em 4 partes iguais. Utilizar para isso a caneta de retroprojetor, fazendo a diviso na parte de baixo da placa.

6. A placa deve ser levada para incubao em estufa de aerobiose a 37C/ 24 h.

OBS: Nada deve encostar-se ao quadrante identificado comoControle.

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LEGENDA C: CONTROLE MS: MO SUJA AL: LCOOL DET: DETERGENTE

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TESTES DE HEMAGLUTINAO

INTRODUO
A maioria dos ensaios sorolgicos quantitativos usa a medio direta da ligao do anticorpo ao antgeno. Entretanto, alguns ensaios importantes so baseados na capacidade da ligao do anticorpo de alterar o estado fsico do antgeno ao qual ele se liga. Essas interaes secundrias podem ser detectadas de diversas formas. Por exemplo, quando um antgeno exposto na superfcie de uma grande partcula, como uma bactria, os anticorpos podem fazer a bactria aglutinar. O mesmo princpio se aplica s reaes usadas na tipagem sangnea, mas aqui os antgenos usados so aqueles da superfcie das hemcias. A reao de aglutinao causada pelos anticorpos contra esses antgenos chamada de hemaglutinao (do grego haima, sangue). A hemaglutinao usada para determinar o grupo ABO entre doadores e receptores de sangue. A aglutinao Lminas de Microscopia ptica; Anticorpos monoclonais (Anti-A, Anti-B e Anti-D); Palitos de dente; Lancetas; Algodo; lcool 70%; Caderno ou caderneta de anotaes; Lpis ou caneta; Microscpio (lupa); Luvas de procedimento induzida por anticorpos ou aglutininas chamadas anti-A ou anti-B, que se ligam ao grupo A ou B respectivamente.

MATERIAL DE ESTUDO

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PROCEDIMENTO
1. Com lcool etlico embebido em algodo realize a anti-sepsia do local a ser perfurado; 2. Com o auxlio de uma lanceta, colha duas gotas individuais de sangue na superfcie de uma lmina de microscopia. As gotas devem ficar bem individualizadas; 3. Colha mais uma gota de sangue no centro de outra lmina de microscopia; 4. Na lmina que contm duas gotas de sangue, pingue uma gota do reagente anti-A sobre uma delas e uma de Anti-B sobre a outra; 5. Na lmina que contm apenas uma gota de sangue, pingue uma gota de Anti-D; 6. OBS.: No toque com a ponta do conta gotas nas gotas de sangue. Esses anticorpos so caros! 7. IMEDIATAMENTE com palitos de madeira, misture bem o sangue ao anticorpo. Enquanto a mistura realizada, observe a formao de grumos entre os antgenos eritrocitrios e os anticorpos adicionados, o que vai caracterizar uma reao de hemaglutinao; 8. Em seguida, anote todos os resultados

RESULTADOS

Na lmina com duas gotas: 1. Se aglutinou somente na gota de sangue em que foi pingado anti-A, o individuo do tipo A 2. Se aglutinou somente na gota de sangue em que foi pingado anti-B, o individuo do tipo B

3. 4.

Se aglutinou nas duas gotas de sangue, o individuo AB Se no aglutinou em nenhuma delas, o individuo do grupo O.

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Ateno: Jamais diga que o individuo do tipo O no aglutinou porque ele no possui antgeno. Antgeno ele tem, s que no

anticorpo-especfico

Na lmina com uma gota:

1- Se aglutinou ele Rh + 2- Se no aglutinou ele Rh Se necessrio observem a aglutinao na lupa, caso ela no seja macroscopicamente observvel, principalmente no antgeno D. Amostra 1
Concluso: Tipo: _______ Rh: ______

Amostra 2
Concluso: Tipo: _______ Rh: ______

Amostra 3
Concluso: Tipo: _______ Rh: ______

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aiba Mais +

Os carboidratos dos glicolipdeos das membranas plasmticas dos eritrcitos determinam quando uma pessoa possui o sangue do tipo A, B, AB ou O. Uma pessoa com o tipo sanguneo A possui uma enzima que adiciona uma Nacetilgalactosamina extremidade da cadeia, enquanto uma pessoa com o sangue tipo B possui uma enzima que adiciona galactose ao final da cadeia. Pessoas com sangue tipo AB possuem ambas as enzimas, ao passo que pessoas com sangue tipo O so deficientes de enzimas capazes de ligar qualquer um dos acares terminais. Gerald Karp,2005.

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AGLUTINAO ERITROCITRIA POR LECTINA VEGETAL E AGLUTINAO DIRETA EM LTEX

INTRODUO MATERIAL
Hemaglutinao a aglutinao dos eritrcitos do sangue sob a ao de aglutininas especficas ou aglutinao de uma suspenso de bactrias pelo sangue de um indivduo que elaborou anticorpos relativos a elas. Recorre-se por vezes a este fenmeno para especificar o diagnstico de uma infeco hemodiagnstico. O termo Lectina se refere a uma classe de protenas de origem noimunolgica, que podem aglutinar hemceas graas sua propriedade de se ligar reversivelmente a carboidratos. Aglutinao direta em ltex um emprego de um anticorpo especfico anti-HCG (Gonadotrofina Corinica Humana) para a frao do HCG presente na amostra (urina). Se a amostra contiver HCG, este vai se unir de modo especfico e sensvel, produzindo uma aglutinao visvel macroscopicamente. Eritrcitos de coelhos (2%); Tampo Tris-HCL 0,05M NaCl 0,15M pH 7,6; Soluo de lectina diluda [1mg/mL]; Pipetadores automticos e ponteiras; Tubos de ensaio; Tubos de 1,5 mL ; Estantes.

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PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 1
Distribui-se dois tubos de ensaio sendo:1 para CONTROLE e outro para TESTE; Adiciona-se 200 mL de tampo TRIS no tubo CTRL mais 200mL de sangue. Para o tubo teste adiciona-se 100mL do tampo TRIS mais 100mL da soluo de lectina diluda mais 200mL da suspenso de eritrcitos; Submeter a agitao leve durante 5minutos e em seguida visualizar a aglutinao dos eritrcitos contra a luz.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 2
Colocar em cada crculo da placa teste:

Crculo n 1
Controle negativo Controle positivo Urina Ltex antiHCG 1 gota __ __ 1gota

Crculo n2
__ 1gota __ 1gota

Crculo n3
__ __ 50L 1gota

Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando toda a extenso de cada crculo da lmina. Logo aps, agitar a lmina com movimentos circulares por 2 min e efetuar a leitura.

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DISCUSSO DOS RESULTADOS

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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ABBAS, Abul K; LICHTMAN, Andrew H; PILLAI, Shiv. Imunologia celular e molecular. So Paulo: Elsevier Editora LTDA. 6ed.Pg.476 a 482, 2008. Apostila de aulas prticas. Disciplina de bacteriologia, Universidade Federal Fluminense, 2008. DE LORENZO, Jos Luiz. Microbiologia para o estudante de Odontologia, So Paulo: Editora Atheneu, 2004. JAWETZ; MELNICK; ADELBERG. Microbiologia Mdica. 21 ed. Rio de Janeiro: Editora Guanabara Koogan S.A, 2000. KARP, Gerald. Biologia Celular e Molecular: conceitos e experimentos. Traduo de Maria Dalva Cesario et al. Ed. Manole Barueri, SP: 2005. NEVES, David Pereira. Parasitologia Humana. 10 ed. So Paulo: Editora Atheneu,2000. REY L. Bases da Parasitologia Mdica, 2 Ed.,Editora Guanabara Koogan, RJ, 2002. TORTORA, Gerard; FUNKE, Berdell R; CASE, Christine L. Microbiologia. Traduo de Roberta Marchiori Martins. 8 Ed. Porto Alegre: Artmed, 2005. TRABULSI, Luiz Rachid. Microbiologia, 4 Ed. So Paulo: Editora Atheneu, 2005.

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