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INTRODUO
A complexidade na determinao de compostos potencialmente txicos encontrados no meio ambiente tem, cada vez mais, demandado o

desenvolvimento de tcnicas avanadas para identificao dos constituintes de uma amostra ambiental. Muitas vezes estes compostos encontram-se como misturas homogneas de diferentes substncias, o que dificulta a anlise da amostra e torna necessria a utilizao de uma tcnica de separao para a identificao dos constituintes presentes na amostra. A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao no qual os constituintes da amostra so particionados em duas fases, uma estacionria e a outra um fluido insolvel que percola atravs da primeira. A fase estacionria empregada pode ser um slido ou um lquido enquanto que a fase mvel pode ser um fluido lquido, um gs ou um gs supercrtico (acima da temperatura crtica e a altas presses) (Ciola, 1998). A grande variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao. A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos atravs da comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos separando as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura (Collins et al, 1993). A cromatografia existe h mais de cem anos e, a sensibilidade, velocidade, exatido e simplicidade para separao, identificao e determinao de substncias, resultaram em um grande desenvolvimento deste mtodo ao longo do tempo. Existem diferentes modalidades de cromatografia e elas so responsveis por mais de 70 % da Qumica Analtica realizada hoje em dia (Neto e Nunes, 2003). As tcnicas cromatogrficas podem ser classificadas de diferentes formas que variam de acordo com as fases mvel e estacionria utilizadas no mtodo. A tabela 1 apresenta as possveis classificaes quanto a natureza das fases para os processos cromatogrficos.

2 Tabela 1: Classificaes possveis para os processos cromatogrficos - natureza das fases (Neto e Nunes, 2003)
CROMATOGRAFIA FASE MVEL FASE ESTACIONRIA TIPO

gasosa (CG)

gs

lquido slido

gs-lquido gs-slido lquido-lquido lquido-slido ---

lquida (CL)

lquido

lquido slido

supercrtica

fluido supercrtico

lquido slido

As tcnicas cromatogrficas podem ainda ser classificados de acordo com o suporte da fase estacionria, fluxo da fase mvel, a natureza da fase mvel, tipo de interao (fenmeno responsvel pela separao), presso, objetivo da separao e resoluo ou eficincia, como mostra a tabela 2.

Tabela 2: Classificaes possveis para os processos cromatogrficos (Neto e Nunes, 2003)

CLASSIFICAO VARIAO

1. Suporte da fase estacionria

2. Fluxo da fase mvel

a) planar: - em camada delgada (CCD) - em papel (CP) b) coluna: - em coluna (CL ou CC) - em barra a) unidimensional b) bidimensional c) radial a) fase normal b) fase reversa a) partio b) excluso (filtrao e permeao gel) c) complexao (troca de ons) d) afinidade: - imunoafinidade (CIA) - bioafinidade a) normal b) mdia presso c) mdia presso (tipo flash) d) alta presso (CLAE)

3. Natureza da fase mvel (cromatografia lquida) 4. Tipo de interao

5. Presso (cromatografia em coluna)

3
CLASSIFICAO VARIAO

6. Objetivo da separao

7. Resoluo ou eficincia

a) analtica b) preparativa* c) extrativa ou para pr-tratamento da amostra (EFS)** a) CL versus CLAE b) CCD versus CCDAE c) CG versus CGAR

*Visando isolar uma poro da amostra ou um componente puro ** Extrao por fase slida A Figura 1 mostra de forma simplificada a classificao dos mtodos cromatogrficos:

CROMATOGRAFIA

PLANAR

COLUNA

centrfuga

CCD

CP

lquida

CSC

gasosa

clsssica

CLAE

CG

CGAR

Figura 1: Representao esquemtica cromatogrficos (Degani et al, 1998).

de

classificao

dos

mtodos

Para a escolha de um mtodo cromatogrfico deve-se levar em conta aspectos como: custo da anlise, necessidade de reprodutibilidade do mtodo, exatido requerida, tempo de anlise, natureza da amostra, etc.

4 2. OBJETIVO

Estudar a tcnica de Cromatografia a lquido de alto desempenho (HPLC) e suas possveis aplicaes em amostras ambientais, mais especificamente em matrizes de gua e solo.

3. REVISO BIBLIOGRFICA

3.1 Cromatografia com fase lquida

O termo cromatografia com fase lquida tm sido usado para descrever vrios sistemas cromatogrficos, incluindo as cromatografias lquido-lquido, lquido-slido, por troca inica e de excluso por volume, que empregam todas uma fase lquida mvel. A cromatografia lquida em colunas, utiliza colunas de vidro de dimetros relativamente grandes que contm fases estacionrias finamente divididas atravs das quais percolam fases mveis atravs da ao da gravidade. Estes sistemas permitem a separao de misturas bastante complexas. A separao, entretanto demorada e o necessrio exame qumico das diversas fraes coletadas pode ser tedioso. Sistemas de alto desempenho fizeram com que a cromatografia com fase lquida superasse a cromatografia com fase gasosa em termos da preferncia dos analistas. Hoje a cromatografia lquida de alta eficincia tem as seguintes caractersticas: alto poder de resoluo; separaes rpidas; monitoramento contnuo do eluente; medidas quantitativas acuradas; anlises repetitivas e reprodutveis com a mesma coluna; automao do procedimento analtico e do manuseio dos dados

Sob alguns aspectos, a cromatografia lquida de alta eficincia mais verstil que a cromatografia com fase gasosa porque ela no est limitada a

5 amostras volteis e termicamente estveis e porque a escolha de fases estacionrias e mveis mais ampla (Mendham et al, 2002). A cromatografia a lquido permite, entre outras, a anlise das seguintes classes dos principais compostos: protenas, cidos nuclicos, aminocidos, corantes, polissacardeos, pigmentos de plantas, compostos inicos, ons metlicos, ctions, lipdeos polares, explosivos, polmeros sintticos, surfatantes, farmacuticos, metablicos de plantas, nions, complexos de metais pesados, etc. O emprego da cromatografia a lquido para solucionar problemas analticos ou preparativos necessita, alm da instrumentao adequada, da combinao correta das condies experimentais tais como: tipo de coluna (fase estacionria); fase mvel, sua composio e vazo; temperatura; quantidade de amostra injetada, etc.

A seleo correta dessas variveis necessita do conhecimento bsico dos fatores que controlam a separao na cromatografia a lquido (Ciola,1998).

3.1.1 Cromatografia lquida planar

3.1.1.1 Cromatografia em camada delgada (CCD)

A cromatografia em camada delgada uma ferramenta para anlises qualitativas rpidas e extremamente efetiva e conveniente para esse propsito. tambm conveniente para o isolamento de pequenas quantidades de fraes de misturas complexas ou na purificao de substncias. A fase estacionria constituda de um slido finamente dividido que reveste um material de suporte rgido e inerte de modo que o processo de separao ocorre numa superfcie plana, essencialmente bidimensional, ao conjunto denomina-se placa de cromatografia. Em resumo, uma gota de soluo contendo a amostra (soluto) colocada a cerca de 1 cm da base da placa. Aps a evaporao do solvente, a placa colocada em contato com a fase mvel que est contida em uma cuba

6 cromatogrfica. A cromatografia se desenvolve com a fase mvel migrando atravs da fase estacionria por ao da capilaridade; a esse processo chama-se corrida. Como a amostra interage com a fase mvel e a fase estacionria, a medida, que o solvente vai ascendendo na placa a amostra vai sendo arrastada pelo solvente numa velocidade que depende da atrao do soluto pela fase estacionria. Assim, diferentes solutos com diferentes interaes com a fase estacionria seriam arrastados a velocidades diferentes e, a partir de uma nica mancha seria obtido um cromatograma com vrias manchas, tantas quanto os componentes de mistura (Neto e Nunes, 2003).

3.1.1.2 Cromatografia em camada delgada de alta eficincia (CCDAE)

Os desenvolvimentos recentes na prtica da cromatografia em camada delgada levaram a um avano do desempenho que se caracteriza pela expresso Cromatografia em camada delgada de alta eficincia. Estes desenvolvimentos no foram o resultado de qualquer avano especfico na instrumentao , mas sim no aperfeioamento das vrias operaes envolvidas na CCD. A sua maior aplicao na rea de anlise clnica e na anlise ambiental. As caractersticas fundamentais da CCDAE so: qualidade da camada da fase estacionria; mtodo de aplicao da amostra; disponibilidade de densitmetros de varredura (Neto e Nunes, 2003).

3.1.1.3 Cromatografia em papel (CP)

um mtodo de separao em funo do deslocamento diferencial de solutos arrastados por uma fase mvel, sendo retirados seletivamente por uma fase estacionria lquida (gua), na cromatografia com fase normal. As tcnicas experimentais so semelhantes s da CCD. considerada, comumente uma tcnica de partio lquido-lquido e no slido-lquido. Uma mancha de amostra depositada perto da base de um pedao de papel filtro e este colocado em uma

7 cmara de desenvolvimento. O solvente migra por capilaridade e os componentes movem-se a diferentes velocidades (Neto e Nunes, 2003).

3.1.2 Cromatografia lquida em coluna

A cromatografia em coluna a nica modalidade de cromatografia que no dispe de colunas comerciais. Embora nas demais modalidades a unidade de separao possa ser preparada pelo usurio para fins de pesquisa ou reduo de custos, no prtica aconselhvel para aqueles que desejam executar experincias reprodutveis. Nesse casos, produtos comerciais produzidos em srie apresentam maior homogeneidade, o que se traduz em maior confiabilidade nos resultados.

3.1.2.1 Cromatografia lquido-slido (de adsoro) (CLS)

Este processo est baseado nas interaes do soluto com os centros ativos fixos de um adsorvente slido finamente dividido, que a fase estacionria. O adsorvente que pode rechear uma coluna ou estar espalhado sobre uma placa em geral um slido ativo com rea especfica, como alumina, carvo ou slica gel, dentre os quais o ltimo o mais amplamente utilizado. Uma considerao prtica a de que os adsorventes muitos ativos podem provocar uma adsoro irreversvel do soluto; a slica gel que ligeiramente cida pode reter fortemente compostos bsicos, enquanto que a alumina bsica e no deve ser empregada em compostos sensveis a bases (Neto e Nunes, 2003).

3.1.2.2 Cromatografia lquido-lquido (de partio) (CLL)

Esse tipo de cromatografia semelhante, em princpio, extrao por solvente e baseia-se na distribuio das molculas dos analitos entre duas fases lquidas imiscveis, de acordo com as solubilidades relativas. O meio de separao constitudo por um suporte inerte, por exemplo, slica gel que retm uma fase

8 lquida (fase estacionria). A separao se faz pela passagem da fase mvel pela estacionria, esta pode estar na forma de coluna recheada, de uma camada delgada ou de uma tira de papel (Neto e Nunes op cit.).

3.1.3 Cromatografia por excluso por tamanho (CET)

A CET engloba duas modalidades distintas: a cromatografia por filtrao em gel (CFG) e a cromatografia por permeao em gel (CPG). A primeira, empregando fase estacionria aquosa, tem enorme aplicao na separao de biomacromolculas. A CPG com fase mvel orgnica tem sido intensamente usada na caracterizao de peso molecular e distribuio de peso molecular de polmeros sintticos. um mtodo que tem sido vastamente explorado na ltima dcada, entretanto, apesar da popularidade alcanada pela simplicidade e rapidez com que a distribuio de peso molecular pode ser obtida, o entendimento da teoria de separao por CET necessrio para que se possa conseguir o mximo de informao de um cromatograma (Neto e Nunes, 2003).

3.1.4 Cromatografia por troca inica

A extrao de ons metlicos de solues aquosas utilizando resinas de troca inica uma tcnica que vem sendo utilizada com sucesso desde meados do sculo XX. Em geral, entende-se por troca inica a troca de ons de mesmo sinal entre uma soluo e um corpo slido insolvel em contato com ela. O slido deve conter seus prprios ons para que a troca se processe com rapidez e na extenso suficiente para ter interesse tecnolgico. O slido deve apresentar ainda uma estrutura molecular aberta, permevel, de modo que os ons e molculas do solvente possam se mover para dentro e para fora de sua estrutura (Collins et al, 1993). De forma geral, uma resina trocadora de ons contendo grupos ativos colocada em presena da soluo aquosa contendo os ons metlicos a serem trocados. O processo de troca inica consiste das etapas:

9 condicionamento prvio: encharcar a resina com gua de forma a atingir o inchamento mximo, resultando na sua mxima capacidade de troca; carga: colocar a resina em contato com a soluo aquosa contendo os ons a serem trocados, podendo ser realizada em coluna ou em batelada; eluio: remover os ons previamente fixados na resina durante a operao de carga; lavagem: remover o excesso de reagente da superfcie da resina; regenerao: preparar a resina na forma inica para o prximo ciclo; retrolavagem: eliminar as partculas finas de resina produzidas durante os ciclos (Neto e Nunes, 2003).

3.1.5 Cromatografia por afinidade

Tambm chamada de cromatografia por bioafinidade pois a maioria de suas aplicaes envolvem interaes entre biomolculas. Sua fase estacionria constituda por um suporte slido ao qual um ligante combinado por uma ligao covalente. Quando o ligante tem caractersticas de afinidade do tipo biolgica ocorre o caso clssico da cromatografia por bioafinidade. Mas esse ligante tanto pode interagir com os analitos de interesse por simples complexao, como pela associao do tipo enzima-substrato ou formao de estruturas tercirias (Neto e Nunes, op cit)..

3.1.6 Cromatografia a lquido de alto desempenho (HPLC)

A cromatografia a lquido de alto desempenho um tipo de cromatografia que emprega uma fase mvel lquida e uma fase estacionria finamente dividida e que, para ter um fluxo razovel, opera a presses elevadas. Originalmente chamava-se cromatografia lquida de alta presso e esta terminologia foi abandonada quando se constatou que o diferencial de comportamento desta para as demais cromatografias lquidas no era a maior presso, mas sim o melhor

10 desempenho cromatogrfico. Dentre as principais caractersticas e vantagens do mtodo HPLC esto: coluna recheada com partculas de pequeno tamanho ( 3 - 10 mm); alta resoluo; anlise no destrutiva; velocidade de separao; monitorao contnua do efluente da coluna; medio quantitativa exata; anlises repetitivas e reprodutivas com a mesma coluna; automao do procedimento analtico e do tratamento dos dados.

Os componentes essenciais da HPLC so: bomba de alta presso: dispositivo importante pois est relacionado ao tempo de reteno, a reprodutibilidade e a sensibilidade do detector. Este sistema composto por bomba e controladores de presso e vazo. De uma maneira geral, a bomba deve ter a capacidade de impulsionar a fase mvel. Existem dois tipos de bomba, com presso constante e com volume constante. sistema de injeo da amostra: a introduo da amostra pode ser realizada por meio de uma vlvula de amostragem ou por meio de uma seringa de injeo. O efluente desses dispositivos preenche uma serpentina de volume conhecido e o acionamento da vlvula transfere, integralmente, esse volume para a corrente de fase mvel. coluna: so feitas de ao inoxidvel polido, com comprimentos de 10 a 30 cm, com calibre de preciso. Dimetros internos tpicos variam de menor ou igual a 1 mm para colunas capilares; 2, 3, 4, 5 e 6 mm para colunas analticas recheadas e maior ou igual a 10 mm para colunas preparativas. Os recheios usados so constitudos por partculas pequenas, rgidas comum a distribuio granulomtrica estreita. Os tipos de recheio podem ser divididos em trs categorias:

11 1- grnulos porosos, polimricos, baseados em copolmeros de estirenodivinilbenzeno e so utilizados na troca de ons e na cromatografia por permeao em gel; 2- grnulos de camada porosa , constitudos por uma camada delgada de slica modificada, estes recheios peculiares so usados em alguma aplicaes de troca de ons e muito usados em cromatografia de fase reversa para anlise de compostos orgnicos; 3- partculas de slica totalmente porosas que proporcionam considervel melhoria da eficincia da coluna, da capacidade de analisar as amostras e da velocidade de anlise. detector: monitora a fase mvel medida que elui da coluna. So duas principais classes em que podem ser divididos: detectores de propriedades macroscpicas e detectores de propriedades de soluto, que medem a diferena entre uma propriedade fsica do soluto na fase mvel e a mesma propriedade na fase mvel pura. Esse monitoramento efetuado pela deteco propriamente dita, associada a uma transduo para um sinal eltrico que pode ser registrado ou arquivado eletronicamente. Assim, os detectores so de fato transdutores, isto , dispositivos capazes de transformar as molculas que chegam ao seu interior em sinal eltrico (Neto e Nunes, 2003).

Figura 2: Instrumentao bsica do mtodo de HPLC

12

A anlise e a discusso sobre os componentes de um cromatgrafo podem ser extremamente extensas, pois cada fabricante tem seus prprios

desenvolvimentos, que apresentam s vezes caractersticas que influenciam o desempenho total. seguir veremos com mais detalhes cada componente do sistema (Ciola, 1998)

3.1.6.1 Bombas para HPLC

As bombas empregadas em HPLC apresentam caractersticas totalmente especiais, elas devem operar s presses de at 500 atm. com a mesma preciso e exatido de operaes a presso quase ambiente. As vazes normalmente empregadas em HPLC analtica vo de 0,005 at no mximo 4 ou 5 ml/min. As bombas no devem ser corrodas pela fase mvel. As vlvulas, suas sedes, os pistes devem ser extremamente resistentes a altas presses, atritos, dissoluo, corroso, etc. por isso so construdas com materiais sintticos, tais como safira e rubi. Os seus controles eletrnicos devem permitir programao de vazo, possibilidade de parar o processo por razes de segurana, se a presso no se mantiver entre os valores mximos ou mnimos preestabelecidos. Os lquidos, apesar de pouco, so compressveis e, portanto, a vazo real poder afastar da escolhida pelo operador se no forem introduzidos fatores de correo de compressibilidade para o lquido empregado. As bombas modernas possuem tais dispositivos no programa de bombeamento. As bombas comerciais, dependendo da tecnologia empregada, podero operar com um, dois ou trs pistes. Os resultados geralmente so bem prximos, pois, normalmente, a existncia de um pisto poder ser compensada por um software controlador da bomba conveniente (Ciola, 1998).

13 3.1.6.2 Colunas cromatogrficas

A separao na HPLC efetuada dentro das colunas cromatogrficas. elas so geralmente constitudas em metais e projetadas para trabalhar a presses de at 500 atm. Suas dimenses dependem do processo escolhido e elas em primeira aproximao, podem ser separadas em colunas analticas e colunas preparativas. As colunas analticas so destinadas a separao de pequenas quantidades de material, no existindo, na maioria dos casos, objetivo de isolar, para fins de identificao os materiais separados, mas somente a necessidade de detect-los para fins qualitativos ou quantitativos. Os tubos da coluna so cheios com a fase estacionria conveniente, geralmente slica e, como o material de enchimento extremamente compactado dentro da coluna, a queda de presso dentro desses tubos enorme, fato que obriga as colunas a serem relativamente curtas e os tubos com paredes espessas, a fim de se evitar deformaes internas da fase estacionria que destruiria a sua eficincia. No caso das colunas preparativas, destinada a produo em escala industrial, empregam-se tambm fases estacionrias granulometria extremamente baixa, porm as colunas so projetadas com dimetros e vazes de operao muito maiores. Elas so empacotadas pela tcnica de compresso radial (Ciola,1998).

3.1.6.3 Detectores

O detector o olho do sistema cromatogrfico, ele mede as mudanas de concentrao ou a massa dos compostos da amostra que est deixando a coluna. Os detectores fotomtricos medem, por exemplo, as mudanas na absoro de luz monocromtica ou a fluorescncia; detectores de ndice de refrao medem as mudanas do ndice de refrao do efluente na coluna. Detectores eletroqumicos e por condutividade medem as mudanas das caractersticas eltricas da soluo.

14 A no ser que o detector seja especificado corretamente, as informaes do cromatograma e a qualidade dos dados obtidos so completamente sem valor. Um detector um transdutor que converte uma mudana de concentrao na fase mvel eluinte num sinal, que poder ser registrado por um processador de dados ou por um registrador conveniente. A interpretao desse registro produz dados qualitativos e quantitativos sobre a amostra e seus constituintes. Os detectores mais empregados na HPLC so os fotmetros no UV e os espectrofotmetros UV/VIS. As caractersticas de maior importncia dos

detectores so a sensibilidade, a seletividade, a exatido e a preciso (Ciola,1998).

4. ESTUDOS DE CASO

4.1 Descolorao de efluentes aquosos sintticos e txtil contendo corantes ndigo e azo via processos fenton e foto-assistidos (UV e UV/H2O2) (Salgado et al, 2009) A indstria txtil, em particular, utiliza elevada demanda de gua em seus processos, gerando grande quantidade de guas residurias, as quais, geralmente, contm altas cargas de sais dissolvidos, surfactantes, slidos suspensos e matria orgnica, principalmente na forma de molculas corantes complexas. As substncias corantes contribuem significativamente para a poluio de recursos hdricos, por dificultarem a penetrao dos raios solares, prejudicando o metabolismo fotossinttico de algumas espcies; alm disso, apresentam-se como recalcitrantes e potencialmente cancergenas, cerca de 4% da produo de corantes orgnicos decorrente dos processos de sntese e aplicao se perde para o meio ambiente, produzindo guas residurias fortemente coloridas. Como fonte alternativa de tratamento com menor preo e boa qualidade, optou-se por processos oxidativos avanados (POAs) se apresentam como tecnologias capazes de reduzir os problemas ambientais gerados por estes

15 efluentes .Os POAs se destacam por poderem efetivamente ser usados na eliminao (mineralizao) de componentes txicos e danosos, uma vez que destroem as molculas orgnicas poluentes, ao invs de simplesmente removlas para outra fase. O termo POA usado para descrever os processos oxidativos em que radicais hidroxilos (OH) altamente reativos atuam como oxidantes principais. A fonte mais comum de radicais OH o perxido de hidrognio (H 2O2) seja por sua decomposio cataltica na presena de ons metlicos ou de xidos semicondutores, ou por irradiao com luz ultravioleta (UV). Os radicais OH so extremamente reativos e fortes agentes oxidantes capazes de mineralizar contaminantes orgnicos por reaes sucessivas de oxidao, podendo, inclusive, em alguns casos, originarem intermedirios ou subprodutos mais txicos do que os compostos originais. A gerao de radicais hidroxilos na presena de um

substrato orgnico pode ocorrer por trs vias distintas: (1) abstrao de hidrognio; (2) adio eletroflica e (3) transferncia de eltron. Entre os diversos mecanismos de oxidao avanada, destacam-se os processos: Fenton (Fe2+/H2O2), de ozonizao (O3), com radiao UV, com H2O2 e a fotocatlise heterognea usando TiO2 anatase e ZnO como xidos ativos. Particularmente, este trabalho visa estudar a descolorao de corantes industriais em soluo aquosa sinttica ou proveniente de um efluente de lavanderia (efluente txtil). Os corantes ndigo carmim (classe indigide) e vermelho congo (classe azo) so molculas modelos que podem facilmente representar efluentes industriais mais complexos. Os processos oxidativos aplicados envolvem as tecnologias Fenton, fotoltica e com UV/H2O2, as quais, em geral, so de menores custos, de mais fcil aplicao e com boa eficincia em condies mais brandas de reao.

4.1.1 Material e mtodos

Os corantes comerciais ndigo carmim (sal dissdico do cido 5,5 ndigo dissulfnico, classe indigide sulfonato, CI: 73015) e vermelho congo (sal

16 dissdico do cido benzidinodiazo-bis-1-naftilamina- 4-sulfnico, classe diazo sulfonato, CI: 22120) possuem grau analtico; eles foram fornecidos pelo fabricante Vetec e usados sem qualquer processo de purificao prvia. Experimentalmente, foram preparadas solues aquosas (efluentes sintticos) dos corantes para uma concentrao inicial de 20 mg/L respectivamente 43 e 29 mol/L de ndigo carmim e vermelho congo. gua ultrapura (condutividade 0,055 mS/cm), foi usada na dissoluo dos corantes. O efluente industrial foi obtido da unidade de tratamento de uma lavanderia industrial localizada na zona metropolitana de Fortaleza, Cear. O efluente txtil foi acidificado aps sua coleta (pH = 3) e filtrado para fins de conservao. Perxido de hidrognio ( 30%) foi utilizado como espcie qumica oxidante e fonte de radicais hidroxilos, enquanto que o sulfato ferroso heptahidratado (FeSO4.7H2O) foi utilizado como nica fonte de ons ferrosos na reao tipo Fenton. No ajuste de pH das solues e do efluente foram empregadas solues 0,5 M de cido clordrico ou hidrxido de sdio, conforme o caso.

4.1.2 Experimentos de oxidao Fenton, fotoltica e com UV/H2O2 Todos os experimentos de descolorao (degradao) dos efluentes aquosos sintticos e txtil foram executados em regime de batelada e realizados em temperatura ambiente (27 C). No processo oxidativo do tipo Fenton, foram utilizados Erlenmeyers de 125 mL recobertos com papel laminado para evitar exposio luz solar. O volume reacional adotado foi de 100 mL. O pH para as solues aquosas foi de aproximadamente 6,2 (pH natural) para ambos os corantes, enquanto que, para o efluente, o pH foi ajustado a 3,0. Toda a reao foi executada sob moderada agitao (200 rpm). Na degradao dos corantes, foram utilizadas quantidades de 15 mg de FeSO4.7H2O (0,54 mM) e 70 L de H2O2 30% (7,05 mM), enquanto que, para o efluente real, foram empregados 60 mg do sal de ferro (2,16 mM) e 750 L do perxido de hidrognio concentrado (75,5 mM). As massas de sal e o volume de perxido dehidrognio foram definidos em ensaios preliminares de otimizao das

17 quantidades dos reagentes Fenton. Nos estudos de descolorao fotooxidativa, foi montado um reator horizontal cilndrico em PVC com volume reacional til de 70 mL, possuindo uma lmpada de vapor de mercrio (8W, de 200 a280 nm) acoplada de uma extremidade a outra ao longo do seu corpo,gerando uma intensidade luminosa de aproximadamente 0,064 W/ cm2. Dentre os processos fotoassistidos por luz UV, o tratamento combinado com UV/H2O2 fez uso de 35 L H2O2 30% (5,03 mM) para os corantes txteis sintticos e 250 L (36 mM) para o efluente industrial, enquanto que, na via fotoltica, utilizou-se somente a fonte de radiao UV para oxidao dos compostos poluentes. Para os processos reacionais, os ensaios de oxidao foram realizados em triplicata, e foram estimados os desvios mdios relativos () para cada parmetro analisado. Os valores mximos de desvio relativo (mx) adotados so da ordem de 3%. Em todos os experimentos, foram retiradas alquotas em tempos prdeterminados de 5, 10, 15, 20, 25 e 30 minutos, as quais foram alcalinizadas com NaOH 0,5 M (para paralisar a reao Fenton) e mantidas em repouso por 30 minutos para precipitao de todo o material em suspenso. A fase sobrenadante foi posteriormente filtrada em membrana de acetato de celulose (0,45 m) e a anlise foi realizada. Os estudos cinticos e de eficincia de descolorao foram realizados a partir das anlises espectrofotomtricas das alquotas filtradas, utilizando-se as absorbncias a 500 nm (cor real) das amostras centrifugadas (alquotas) medidas em espectrofotmetro UV-Vis Shimadzu 1601 PC. O comprimento de onda de 500 nm foi adotado a partir dos espectros moleculares dos corantes sintticos que apresentam uma banda larga de absoro entre 480 e 600 nm e maior absorbncia neste valor. O comprimento de onda de referncia tambm coincidente com aquele estabelecido pelo Standard methods for the examination of water and wastewater (Apha/awwa/wef, 1998) para caracterizao de cor em efluentes azul-prpura (400-530 nm). A caracterizao mais detalhada dos efluentes foi realizada para as anlises de pH, cor real a 500 nm, DQO, turbidez e nitrato, conforme as metodologias estabelecidas pela American Public Health Association Para fins

18 comparativos, a formao de produtos secundrios decorrente de cada processo oxidativo foi acompanhada por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (do ingls High Performance Liquid Chromatography, HPLC) e por espectroscopia de massa (GC/MS).

4.1.3 Anlise HPLC

As condies analticas usadas envolveram vazo de 1mL/min, fase mvel metanol/gua (70:30), coluna ODS Metasil 15 cm x 4,6 mm e comprimento de onda () de 210 nm. Neste comprimento de onda, esperada a absoro da maioria dos subprodutos formados na degradao dos compostos contendo grupos cromforos tipo azo e ndigo, por exemplo, os cidos orgnicos tipo mlico, pirvico, malnico, tartrico, actico, oxlico e os derivados nitrados como o 2nitrobenzaldedo, o cido 2-amino benzoico, o nitrobenzeno, o cido 2nitrobenzoico, o cido amino-fumrico, a 2,3-dihidrxi indolina. Intermedirios sulfonados so de difcil identificao pela facilidade de converso (mineralizao) do grupo sulfonato a sulfato (Vautier et al, 2001),. Os processos Fenton e com UV/H2O2 foram aqueles que determinaram a maior concentrao de nitrato ao final da reao (maior descolorao e mineralizao) para ambos realizada. No caso do efluente txtil, os resultados cromatogrficos so tambm muitos semelhantes e, para todos os processos aplicados, os subprodutos principais identificados referem-se aos cidos actico. Os efluentes (aquoso sinttico e efluente txtil). Em especial, a concentrao do on nitrato est diretamente relacionada aos processos redox sobre as ligaes N=N- e, considerando as concentraes iniciais, pode-se esperar que no tenha ocorrido a converso total dos intermedirios nitrados produzidos ao longo dos diferentes mecanismos oxidativos empregados e, ainda, uma eventual

decomposio do nitrato nas condies reacionais dos meios em estudo. A anlise por HPLC/GC-MS das misturas finais de reao revela composies bastante semelhantes e com indicativo de formao de um pequeno nmero de subprodutos. Em geral, para as solues aquosas de ndigo carmim e vermelho

19 congo, segundo os processos Fenton e com UV/H2O2, foram identificados compostos em tempos de reteno. mais curtos: tR1 = 1,56; tR2 = 1,63 e tR3 = 1,68, relacionados ao cido actico, ao cido 3-nitropropinico e ao cido oxlico, respectivamente (Vautier et al, 2001). Para a rota fotoltica, nenhum coproduto foi identificado nas condies da anlise. realizada. No caso do efluente txtil, os resultados cromatogrficos so tambm muitos semelhantes e, para todos os processos aplicados, os subprodutos principais identificados referem-se aos cidos actico (tR1 = 1,29), 3-nitropropinico (tR2 = 1,49), oxlico (tR3 = 1,58), 4nitro-3-oxobutrico (tR4 = 1,79) e ftlico, (tR5 = 1,90).

4.1.4 Concluses

Os processos de oxidao avanada mostraram-se bastantes eficientes na descolorao/degradao das solues corantes e do efluente txtil industrial, permitindo eliminar por completo (branqueamento) a cor dos meios aquosos sintticos pelo processo Fenton em apenas trs minutos e em at cinco minutos por meio de oxidao com luz UV e perxido (UV/H2O2). No efluente, o melhor resultado de descolorao ( 99%) foi obtido segundo a reao Fenton em apenas trs minutos, enquanto o processo fotoqumicoremoveu o mesmo percentual de cor em cinco minutos de reao. Com relao ao grau de mineralizao do efluente, pode-se constatar uma maior reduo do teor de matria orgnica, via remoo de DQO, por meio dos processos Fenton e UV/H2O2 (aproximadamente 50 e 33%, respectivamente), enquanto que, no mecanismo fotoltico, o grau de mineralizao do efluente foi de apenas 17%. Estes resultados confirmam a maior resistncia oxidao deste material, principalmente em funo de sua complexidade composicional. No que diz respeito formao de nitrato a partir das solues aquosas sintticas de corantes, os processos aplicados determinam o aumento de concentrao deste subproduto inorgnico, embora os valores obtidos sejam relativamente inferiores aos esperados estequiometricamente.

20 4.2 Determinao multirresduos de herbicidas em gua potvel e de superfcie por HPLC

O objetivo do trabalho foi desenvolver um mtodo rpido e adequado para a determinao simultnea de resduos dos herbicidas bensulfuron, bentazone, bispiribac sdico, cyhalofop, metsulfuron metlico e pirasosulfuron etlico em amostras de gua potvel e de superfcie. Estes herbicidas so bastante usados, principalmente em lavouras de arroz irrigado do Sul do Brasil e no Uruguai. O mtodo envolve uma etapa de pr-concentrao por extrao em fase slida (SPE) e a determinao por cromatografia lquida de alta eficincia com deteco por arranjo de diodos (HPLC-DAD). Empregou-se um sistema HPLC-DAD HP srie 1050, equipado com amostrador automtico e bomba gradiente. Avaliou-se os cartuchos SPE com os seguintes materiais: C18 (Bakerbond spe, 40 mm, 500 mg) e fase polimrica Oasis-HLB (30 mm, 200 mg). Os cartuchos foram condicionados com 2,0 mL de acetonitrila (2 x 1 mL) e 2,0 mL de gua acidificada em pH 3 com cido fosfrico. Volumes de 250 mL de amostra foram passados pelos cartuchos, seguindo-se a passagem de nitrognio para a secagem e a eluio com acetonitrila. Aps evaporou-se o solvente e redissolveu-se em 0,2 mL de acetonitrila para obter-se um fator de pr-concentrao de 1250 vezes. Para a separao dos herbicidas empregou-se uma coluna Metachem e a fase mvel composta por acetonitrila (A) e gua pH 3 (B), com o seguinte gradiente de eluio: tempo: 0 min, 48% A, vazo: 1 mL min-1; tempo: 12-13 min, 80% A, vazo: 1,2 mL min-1; tempo: 20 min, 80% A, vazo: 1,2 mL min-1.

A deteco por DAD foi efetuada em 220, 235, 240 e 247 nm. Uma relao linear foi obtida entre a rea dos picos e a concentrao dos compostos na faixa de 0,1 a 10 mg L-1, com valores de r2 > 0,9989. Os valores de LOD do instrumento so satisfatrios e ficaram entre 0,02 e 0,04 mg L-1, j os valores de LOQ ficaram entre 0,06 e 0,12 mg L-1. A etapa de pr-concentrao foi avaliada nos nveis de concentrao 0,1, 0,3 e 0,5 g L-1 apresentando valores de recuperao aceitveis

21 para ambas as fase C18 e polimrica, com valores de preciso adequados para a anlise de resduos. Considerando que a etapa de pr-concentrao adotada, os valores de LOD do mtodo ficaram entre 0,016 e 0,032 g L-1, e os LOQ entre 0,048 e 0,096 g L-1. Os resultados obtidos permitem concluir que omtodo proposto para a anlise multirresduos de herbicidas, envolvendo a etapa de pr-concentrao por SPE e quantificao por HPLC-DAD, eficiente e rpido, permitindo a quantificao destes em nveis de concentrao adequados para o controle destes poluentes em gua potvel e de superfcie.

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