Universidade Federal do ABC

Bacharelado Cincia e Tecnologia

Base Experimental das Cincias Naturais (BECN)

Nomes:

Ana Clara Costa Chaves RA: 11104011 Gabriela Brayner Costa RA: 11120511 Mauricio Fernandes di Faria RA: 11024211 Pedro Henrique Fonseca Turra RA: 11065711 Weslei Santana Damio RA: 11108911

Turma: B3 - Matutino Aula 02: Microbiologia e Sade Professora: Maria Beatriz Fagundes

Santo Andre 2011

Sumrio

1. Introduo 2.Objetivo 3.Materiais e Reagentes 3.1 Mtodos 3.2 Partes B Preparao das placas de Petri 3.3 Parte C 3.3.1 Testes: 4. Resultados 5. Discusso 6.Concluso 7.Referncias Bibliogrficas 8. Anexos --3.1 Parte A Preparao do meio de cultura de microorganismos.

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1. Introduo.

Os microorganismos so seres microscpicos que compe o Reino Monera (seres unicelulares como bactrias e algas azuis), Protista (seres unicelulares como protozorios e algas eucariontes) e Fungi (seres uni ou pluricelulares como fungos elementares e fungos superiores). Apesar de seu pequeno tamanho, exercem importante papel na vida do ser humano e no meio ambiente. Podem ser encontrado em todos os locais desde ar, solo, gua, interior de outros organismos at lugares com grandes variaes de temperatura. So capazes de realizar processos vitais de crescimento como gerao de energia e reproduo sem depender de outras clulas, sejam estas do mesmo tipo ou diferentes. A Microbiologia o estudo dos microorganismos e abrange a cincia biolgica (processos biolgicos) e a cincia biolgica aplicada (questes para a medicina, agricultura, veterinria e indstria). Por serem encontrados em todos os ambientes, o experimento foi realizado em ambiente estril (livre de microorganismos), que, portanto, exige a execuo de manobras asspticas, que nesta atividade se tratam do uso do bico de Bunsen e materiais utilizados devidamente esterilizados.

2. Objetivo.

O experimento teve como objetivo a verificao da presena de microorganismos em diversos objetos/ambientes em meios de cultura com a presena de antibitico e sem o antibitico, e a anlise e posterior discusso sobre os resultados obtidos. Sendo todo o procedimento realizado utilizando manobras asspticas em um ambiente estril.

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3. Materiais e Reagentes.

Balana semi-analtica; Esptulas de pesagem; Bquer de 50 ml; Proveta de 100 ml; 1 garrafa de vidro com tampa autoclavavl; Reagentes para preparao do meio de cultura (ver anexo1) Colnia de microorganismos Autoclave; Tubo Falcon de 50 ml; 2 Placas de Petri; Caneta de retroprojetor; Cotonetes steres; Fita crepe; Filme de PVC; Fita de Autoclave; gua estril; Ampicilina (antibitico) 50 mg/ml;

3. Mtodos 3.1 Parte A Preparao do meio de cultura de microorganismos.

Para primeira etapa do processo, clculos foram realizados a fim de verificar a quantidade de reagentes que seria preciso para totalizar 40 ml da soluo; aps a identificao do quanto necessrio de cada reagente, eles foram pesados individualmente na balana semi analtica para posteriormente serem inseridos na garrafa de vidro. Foram
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postos no bquer 0,8g de glicose, 1,6 de LB Brouth+ gar e completados 40 ml de gua destilada; feita a dissoluo dos reagentes na gua, a soluo foi transferida para a garrafa de vidro e fechada com a tampa de plstico envolvido em papel alumnio, identificada por meio de um pedao de fita crepe com o nome do grupo e posta para o processo de autoclave.

3.2 Partes B Preparao das placas de Petri.

Enquanto aguardamos o processo de autoclave, as duas placas de Petri foram preparadas da seguinte forma: Com o auxilio de uma caneta retroprojetora, identificamos na parte inferior das placas se o meio de cultura teria ou no a presena de antibiticos e o nome do grupo. A placa de Petri com antibitico foi identificada como COM AMP, j a placa de Petri sem o antibitico foi identificada como sendo SEM AMP. Logo aps as placas foram divididas em quatro partes iguais,conforme ( ver Anexo 2).

3.3 Parte C

Aps o meio de cultura ter sido esterilizado na autoclave, esperamos o meio esfriar at uma temperatura na qual pudssemos manusear a garrafa, logo aps o Bico de Bunsen foi aceso com o auxilio de um tcnico do laboratrio. A partir desse ponto toda manipulao foi realizada na zona de segurana do bico de Bunsen. Os 40 ml do meio de cultura provenientes da garrafa, foram vertidos em um tubo falcon. Em uma placa de Petri j identificada como sendo sem antibitico, foram vertidos os 20 ml do meio de cultura, a mesma foi colocada semi-aberta prximo ao bico de Bunsen. Nos 20 ml restantes do tubo falcon, foi adicionado o antibitico ampicilina e vertidos na placa de Petri identificada como sendo com antibitico, sendo esta tambm colocada semi-aberta prxima ao bico de Bunsen at solidificar.

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3.3.1 Testes:

Placa de Petri com antibitico:

Quadrante do Controle 1, no foi passado nada; Quadrante do Controle 2 esfregou-se um cotonete em uma placa onde havia a presena da bactria Escherichia coli e em seguida esses microorganismos foram depositados no quadrante do controle2.

Placa de Petri sem antibitico:

Quadrante do controle 3, no foi passado nada; Quadrante do controle 4 esfregou-se um cotonete em uma placa onde havia a presena da bactria Escherichia coli e em seguida esses microorganismos foram depositados no quadrante do controle 4. Quadrantes de Teste1 e Teste2 esfregou-se um cotonete na sola do sapato de um dos integrantes do experimento a fim de testarmos se existia a presena de microorganismos naquele local. Foram utilizados o mesmo tratamento para os teste1 e teste2,das duas placas de Petri utilizadas. Ao termino destes procedimentos, as placas de Petri foram fechadas e colocadas de cabea para baixo em uma estufa a 37 C durante duas noites. Aps a incubao das placas na estufa,verificou-se se houve ou no posterior crescimento dos

microorganismos.

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4. Resultados

Aps o ltimo passo dos mtodos ser concludo, a placa de Petri foi posta em uma estufa para futuro crescimento dos microorganismos. O grupo foi observar os resultados obtidos em duas situaes uma aps 2 noites e outra com 4 noites em meio de cultura. Os resultados observados foram os seguintes:

Figura 1: Observao Placa de Petri com antibitico no dia 08/06/2011.

Figura 2: Observao Placa de Petri sem antibitico no dia 08/06/2011.

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Tabela 1: Resultados da observao aps duas noites

Paca com antibitico

Controle 1 Controle 2 Teste 1 Teste 2

Observaes
Nenhuma alterao Nenhuma alterao Nenhuma alterao Nenhuma alterao

Placa sem antibitico

Controle 3 Controle 4 Teste 1 Teste 2

Observaes
Crescimento de microorganismos Crescimento de microorganismos Crescimento de microorganismos Crescimento de microorganismos

Pelas notas tomadas aps 2 noites, o grupo fez observaes superficiais como possibilidade de existir apenas bactrias nos meios de cultura, pois estas no apresentavam nenhum crescimento na placa onde havia antibitico.

Figura 3: Observao das placas de Petri com antibitico no dia 10/06/2011

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. Figura 4: Observao da placa de Petri sem antibitico no dia 10/06/2011.

Aps mais duas noites aps a primeira observao o grupo encontrou o crescimento de microorganismos em quadrantes que anteriormente no havia ocorrido.

Tabela 2: Resultados da observao aps quatro noites.

Placa com antibitico Controle1

Observao Nenhuma alterao

Placa sem antibitico Controle 3

Observao Crescimento de microorganismos

Controle 2

Nenhuma alterao

Controle 4

Crescimento de microorganismos

Teste1

Crescimento de microorganismos

Teste 1

Crescimento de microorganismos

Teste2

Crescimento de microorganismos

Teste 2

Crescimento de microorganismos

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5. Discusso

Aps feitas ambas visitas em intervalos de duas noites contados a partir do dia da realizao do experimento (6/6/2011), o grupo apresentou hipteses e concluses a partir do que se foi observado. Considerando que ambas placas foram expostas ao mesmo tipo de contaminao: nos controles 1 e 3 no foi adicionado nada, nos controles 2 e 4 foi contaminado com a Escherichia Coli, nos testes 1 e 2 foi contaminado por um cotonete exposto ao solado do tnis de um dos integrantes do grupo, as notas foram tomadas a partir de quais quadrantes foram diretamente contaminados e as alteraes nas placas. Na primeira visita ao laboratrio, a placa de petri que apresentou alterao fora aquela que no sofreu adio de antibitico; a hiptese do cultivo de bactrias e no de fungos foi levantada, porm no foi posta como verdade absoluta at futuras observaes. Aps mais duas noites, os integrantes do grupo voltaram ao laboratrio para novas observaes, desta vez alm do crescimento dos microorganismos na placa sem antibitico, ocorreu o aparecimento de microorganismos na placa com antibitico. A partir das notas tomadas sobre cada placa foram tomadas concluses. Na placa com antibitico, os controles 1 e 2 no sofreu nenhuma alterao, porm em ambos os testes ocorreu o crescimento de microorganismo, como no ambiente havia a presena de antibitico, foi concludo que o microorganismo que foi observado trata-se de um fungo filamentoso, pois o antibitico inibe o crescimento de bactrias no meio, mas no de fungos. Na placa sem antibitico, os controles 3 e 4 e ambos os testes apresentaram microorganismos desde a primeira visita ao laboratrio, e na segunda visita notou-se aumento da intensidade da presena. Por ser um ambiente que no houve adio de um meio de controle, como o antibitico, j era esperado o surgimento de microorganismos, porm a intensidade com que se deu, mostra que ocorreu falha no manuseio do bico de Bunsen, que levou a execuo dos procedimentos fora da zona oxidante ou a presena

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dos microorganismos e sua reproduo pode ocorrer mesmo com a execuo dos procedimentos no material estril e manipulado na zona oxidante.

6. Concluso

Nas duas placas de petri utilizadas no experimento ocorreu o crescimento de microorganismos, atingindo o objetivo do experimento, pois a presena dos seres foram verificadas na simulao de dois ambientes: um com o antibitico e outro ausente. Nos resultados encontrados, notou-se a presena tanto de bactria quanto de fungos. O ambiente simulado no experimento, a bactria Escherichia coli foi adicionada para se ter controle do comportamento da bactria; o resultado foi o esperado pelo grupo: ocorreu formao e crescimento de colnia da bactria na placa sem o antibitico e sua ausncia, mesmo sendo exposta, na placa com antibitico. Sobre os fungos, sua presena foi inesperada, pois foram tomadas medidas preventivas para sua formao como o manuseio do material em zona oxidante, porm ocorreu exposio da placa aos fungos, permitindo sua proliferao, e justificada pela sua presena em ambiente com antibitico, que tem funo de inibir apenas o crescimento de bactrias.

7. Referncias Bibliogrficas
MADIGAN, Michael T; MARTINKO, John M; PARKER, Jack. Microbiologia de Brock. So Paulo: Prentice Hall, 2004.

TORTORA, Gerard J; FUNKE, Berdell R; CASE, Christine L. Microbiologia. Porto Alegre: Artmed, 2008.

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8. Anexos

Anexo 01
Tabela da quantidade dos reagentes necessria para primeira etapa.

Reagentes LB Brouth gar Glicose gua

Para 40 ml do meio Para 1000 ml do meio 25 g 1g 15g 0,6g 20g 0,8g Para completar 1000ml Para completar 40ml (40g)

Anexo 02:

Figura do esquema da diviso das placas de Petri.

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