UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

ESTEROLES
Profesor Alejandro Martnez Martnez Facultad de Qumica Farmacutica E-mail: amart@muiscas.udea.edu.co

Medelln, Abril de 2002

Alejandro Martnez M., 2002

ESTEROLES

DISTRIBUCION Y ESTADO NATURAL Los esteroles se encuentran ampliamente distribuidos en los reinos animal y vegetal; y se les encuentra en forma libre (Tambin llamados agliconas esteroides), como steres o como glicsidos. Todos contienen un ncleo ciclopentanoperhidrofenantreno y presentan un grupo hidroxilo en el carbono 3. La mayora de esteroles naturales poseen una cadena lateral de 8 a 10 tomos de carbono y un enlace doble en el C-5 (Figura 1).
21 20 18 12 11 19 1 2 10 3 9 14 8 7 6 15 13 17 16 27 23 25 22 24 26

HO

5 4

Figura 1. Enumeracin de los tomos de carbono en la molcula de colesterol

En los animales superiores (Incluido el hombre) se encuentra principalmente el colesterol, el cual es un constituyente importante de membranas y precursor de sustancias fisiolgicamente importantes (Hormonas, Acidos biliares, Vitamina D, etc.). En las plantas superiores se encuentran principalmente los denominados fitosteroles: b-Sitosterol, Campesterol y Estigmasterol (Figura 2). Un esterol menos comn es el Fucosterol, el cual es el esteroide principal de muchas algas pardas y tambin se le ha detectado en el coco (Cocus nucifera L.).
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En los hongos y levaduras se encuentra principalmente el Ergosterol. En cambio, los animales inferiores (Principalmente invertebrados marinos tales como esponjas, estrellas, corales, etc.) y ciertas plantas filogenticamente poco evolucionadas (P.ej. algunas Orchidaceae) contienen mezclas complejas de esteroles con modificaciones estructurales variadas tales como ncleos sin el carbono 4 (A-nor-esteroles), sin el carbono 19 (19-Nor-esteroles), con varias insaturaciones; cadenas laterales con ms de 10 carbonos, con anillos ciclopropano, con enlaces alnicos, etc. En la Figura 2 se presentan algunos ejemplos. Con base en la diversidad estructural observada para los esteroles terrestres y marinos identificados hasta 1978, y trabajando sobre consideraciones biosintticas, es interesante resaltar que a travs de un programa de computador denominado REACT Varkony y col. predijeron la existencia de 1778 esteroles naturales1.

1. Varkony T.H., Smith D.H., Djerassi C., TETRAHEDRON 34, 841 (1978).

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R
22 22

28 24

HO Colesterol (R=H) HO Campesterol (R=Me) Sitosterol (R=Et) Estigmasterol (R=Et, insat. C-22) Ergosterol (insat. C-22) Fucosterol (insat. 24-28)

HOCH2

HO C

HO

HO

Figura 2. Algunos ejemplos de esteroles naturales. Las cuatro estructuras mostradas abajo corresponden a esteroles de origen marino PROPIEDADES FISICAS La gran mayora de esteroles conocidos son slidos cristalinos incoloros, solubles en solventes orgnicos relativamente apolares (Cloroformo, Benceno, etc.), menos solubles en alcoholes de bajo peso molecular, y que funden sin descomponerse (En forma libre o esterificada). Presentan adems actividad ptica debido a los carbonos asimtricos que poseen. Los esteroles se pueden recristalizar en metanol caliente o en la mezcla metanol-tetrahidrofurano 10:1, formando cristales en forma de agujas brillantes incoloras. Los que presentan dobles enlaces conjugados son de color amarillento y tienden a descomponerse
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por accin de la luz como por ejemplo los esteroles con insaturaciones en C-5 y C-7, los cuales son susceptibles a la reaccin de oxidacin fotoqumica: R R

O2 HO hv HO O O

BIOGENESIS Los esteroles se derivan biogenticamente de la AcetilCoA (Ruta del Acetato) va mevalonato y escualeno. Los esteroles vegetales tienen como precursor inmediato al cicloartenol2, mientras que los animales tienen al lanosterol (Figura 3). De una forma anloga se originan los triterpenoides. En la biognesis de los esteroles tambin estn implicados procesos tales como hidrogenaciones y deshidrogenaciones C-C, metilaciones (va Sadenosilmetionina), hidroxilaciones, etc. Un hecho estructural notable es que la gran mayora de esteroles naturales tienen sustituyentes alqulicos sobre los carbonos 4 y 24 fundamentalmente, y este hecho es justificado por la misma biognesis. El conocimiento de la biosntesis de esteroides ha contribuido al desarrollo de la Quimotaxonoma vegetal, particularmente en el caso de las algas, y ha servido para correlacionar la estructura de estas sustancias con aspectos evolutivos. Para una revisin sobre el origen y la biosntesis de esteroles de esponjas marinas puede consultarse el artculo de Djerassi y Silva 3. Para procedimientos de sntesis qumica anlogos a la ciclizacin del escualeno consultar el trabajo de Zoretic y col.4 HECHOS ESTRUCTURALES Los esteroles naturales conocidos presentan las siguientes caractersticas estructurales: a. Los enlaces dobles en el ncleo se presentan principalmente en C-5, C-7, C-8 y C-9. b. Los enlaces dobles en la cadena lateral se presentan especialmente en C-22, y con menor frecuencia en C-24 y C-25.
2 Phytochemistry 40 (6) 1585 (1995) 3. Djerassi C., Silva C.J., ACC. CHEM. RES. 24, 371 (1991). 4Zoretic, P. A. y col.; TETRAHEDRON LETT. 37 (44) 7909 (1996).

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c. Adems de los grupos metilos 18, 19, 21, 26 y 27, es frecuente encontrar grupos metilo en C-24, menos frecuente en el C-4. d. La cadena lateral presenta grupos alquilo (metilo, etilo, isopropilo, propilo, etc.) principalmente en C-24. e. Algunos organismos poco evolucionados (invertebrados marinos, orqudeas, etc.) presentan esteroles con modificaciones en la cadena lateral (anillos ciclopropano, dobles enlaces alnicos, metilaciones en C-26 y C-27, ausencia del C-25, etc.), y con ncleos modificados (ver Figura 2)5.

5Duque, C.; Martnez, A.; Peuela, G.; REV. COL. QUIM. 12(1) 51 (1983).

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AcetilCoA

OPP

Farnesil-PP

[O]

Escualeno

HO HO

Esteroles vegetales
HO Cicloartenol

Figura 3. Esquema biogentico para los esteroles vegetales

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METODOS DE ANALISIS a. EXTRACCION El mtodo ms utilizado para la extraccin de esteroles libres y esterificados es el de Bligh y Dyer. El tejido vegetal seco y molido se extrae a temperaturas menores de 40C, con un volumen suficiente de una mezcla Cloroformo:Metanol 2:1. Toda esta mezcla se filtra y al filtrado obtenido se le hace particin con un volumen adecuado de agua. La fase clorofrmica contiene entonces todos los compuestos liposolubles tales como esteroides, triglicridos, otros terpenoides, cidos grasos, etc. Cuando se sabe de antemano que la muestra contiene glicsidos esteroides, y se desea estudiar sus respectivas agliconas, entonces el material vegetal se extrae con alcohol o con una mezcla alcohol:agua, y el extracto obtenido se hidroliza con HCl 2M. Existe un procedimiento a escala industrial para la obtencin del colesterol de mdula de bovinos6. As mismo se ha descrito un proceso de obtencin de los fitosteroles a partir de la "cachaza" de la caa de azcar7. b. METODOS DE SEPARACION Y PURIFICACION Para la separacin y purificacin de esteroles a partir de extractos lipdicos, se emplean con buenos resultados la Cromatografa en Columna y la Cromatografa en Capa Fina (CCF), con slica gel y eluentes como mezclas de n-hexano-acetato de etilo, y mezclas de ellos. Una mezcla recomendable es n-Hexano-Acetato de etilo 4:1. Existen varias clases de reveladores incluido el de Liebermann-Burchard, uno con cloruro de berberina y carbazol-cido sulfrico. Sin embargo, no siempre estas tcnicas en forma aislada permiten la obtencin de esteroles puros, sobretodo en el caso de mezclas de esteroles, por lo cual deben complementarse con otras tcnicas de separacin y purificacin ms eficientes como son: La CCF Argntica (placas de slica gel impregnadas con una solucin de nitrato de plata al 10% en acetonitrilo), la Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia (CLAE o HPLC en ingls) y la Cromatografa de Gases (CG). En la CCF Argntica, se impregna la slica con soluciones concentradas de Nitrato de Plata en agua:alcohol; y como resultado los esteroles se separan sobre dicha slica por retencin diferencial de acuerdo al nmero de enlaces dobles C=C que contengan en su estructura (P.ej. el ergosterol con 3 enlaces dobles es ms retenido que el colesterol, el cual solo posee un enlace doble). Esta es una tcnica no solamente til para los esteroles sino tambin para los productos naturales en general8.

6Padilla, A. y col.; REV. CUB. FARM. 8, 3-19 (1974). 7Nava, D. A.; REV. CUB. FARM. 4, 27-35 (1970) 8 a) Williams, C. M., Mander, L. N., TETRAHEDRON 57, 425 (2001); b) Wilson, R., Sargent, J. R., J. CHROMATOG. A 905, 251-257 (2001).

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La CLAE permite las mejores separaciones de mezclas esterlicas y se obtienen ms rpidamente esteroles puros. Son muy utilizadas columnas de Octadecilsilano (Fase Reversa) y eluentes tales como: Metanol, mezclas Metanol:Agua, mezclas Acetonitrilo:Agua, etc. Adems, la integracin de la CLAE con la Espectrometra de masas es una excelente tcnica porque a la vez que separa mezclas de esteroles, permite obtener informacin estructural a partir de los espectros de masas, inclusive es posible hacer diferenciacin entre epmeros debido a su retencin diferencial 9. Adicionalmente, la combinacin de la CLAE con espectrmetros UV (de longitud de onda variable o arreglo de diodos) e infrarrojo con transformada de Fourier, permite la obtencin de los correspondientes espectros UV e IR. La Figura muestra el cromatograma CLAE de la fraccin de esteroles libres de la esponja marina Ircinia campana10.

La Cromatografa de Gases con fases estacionarias como OV-17 (1%, 3%, 5%), SE-54, etc., con temperaturas de 250-280C, permite una buena separacin y anlisis de mezclas esterlicas. Adems, si esta se acopla con un espectrmetro de masas de impacto electrnico, se obtienen los respectivos espectros de masas, los cuales facilitan la identificacin. Una revisin completa sobre los mtodos generales de obtencin, purificacin e identificacin de esteroles la hicieron Popov y colaboradores 11.

9. Ikekawa N., Fujimoto Y., Kadota S., Kikuchi T., J. CHROMATOG. 468, 91 (1989). 10 Martnez, A., Duque, C., Resultados sin publicar. 11Popov, S.; Carlson, R. M. K., Weggmann, A.; Djerassi, C.; STEROIDS 28, 699 (1976).

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c. METODOS DE IDENTIFICACION ENSAYO DE LIEBERMANN-BURCHARD Los esteroles se pueden reconocer fcilmente en los anlisis fitoqumicos preliminares de muestras vegetales y animales mediante el ensayo de Liebermann-Burchard. En este ensayo, a una solucin clorofrmica de la muestra que se analiza, se le agrega un volumen igual de anhdrido actico y una gota de cido sulfrico concentrado (98%). Si hay esteroles, se producen coloraciones verdes, violetas, rojas o azules. Aunque no se conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada. Algunos autores aseguran que la dan positiva solamente los esteroles que tengan en su estructura grupos dieno conjugados reales o potenciales (por ejemplo en los D5-3hidroxiesteroides la deshidratacin genera un D3,5 dieno). Existen otras pruebas de coloracin para el reconocimiento de esteroides, pero son menos utilizadas debido al gran desarrollo de las tcnicas instrumentales. Para estas pruebas puede consultarse el libro de Domnguez12. ESPECTROSCOPIA INFRARROJO Los espectros infrarrojo de la mayora de esteroles naturales son bastante simples y similares a los de alcoholes alifticos saturados o insaturados. Generalmente se observan: Una banda de tensin O-H alrededor de 3600 cm-1, bandas de tensin de enlaces C-H saturados alrededor de 2960-2780 cm-1, bandas de tensin de enlaces =C-H alrededor de 3125-3030 cm-1, bandas de flexin de enlaces saturados C-H alrededor de 1440 y 1380 cm-1 y bandas de tensin de enlaces C=C olefnicos alrededor de 1670 cm-1 (Generalmente es una banda dbil que a veces no se observa). Existe una coleccin de espectros infrarrojo de esteroles. Una aplicacin interesante de la espectroscopia infrarrojo es que permite diferenciar por ejemplo entre los steres de esteroles y otros tipos de sustancias como los triglicridos y los fosfolpidos13. ESPECTROMETRIA DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR PROTONICA Los espectros de resonancia magntica nuclear protnica de los esteroles deben ser preferiblemente de alta resolucin (220, 360 MHz, etc.), debido al nmero y clases de protones que contienen. En forma general se observan las seales de protones metlicos en la regin de 0-1 ppm con constantes de acoplamiento de 67 Hz cuando tienen carbonos saturados vecinos. El protn ligado al carbono 3 se observa a 360 MHz como un "heptete" alrededor de 3.53 ppm cuando el hidroxilo est en posicin 3b, mientras que se observa como un "quintete" cuando el hidroxilo est en posicin 3a.

12Domnguez, X. A.; "Mtodos de Investigacin Fitoqumica". Ed. Limusa, Mexico, 1979. 13. Kisner H.J., Brown C.W., Kavarnos G.J., ANAL CHEM. 54, 1479 (1982).

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En el caso de los esteroles con enlace doble entre los carbonos 5 y 6, el protn del carbono 6 se observa como un "doblete" ancho alrededor de 5.35 ppm. En el caso de esteroles con enlaces dobles en C-5 y C-7 (esteroles con ncleo tipo ergosterol) los protones H-6 y H-7 se observan como multipletes en 5.4 y 5.5 ppm. En general, los espectros RMN permiten asignaciones estereoqumicas a partir de su anlisis detallado y por comparacin con los espectros de esteroles de estructura completamente conocida. En el caso de los derivados acetilados de esteroles, la presencia del grupo acetato sobre el carbono 3, desplaza la seal del protn ligado al mismo carbono hasta valores de 4.5 ppm, adems en el espectro aparece la seal del grupo metilo del acetato alrededor de 1.8 ppm. La regin de protones metlicos (0-1.2 ppm) es conocida para varios esteroles naturales, y permite asignaciones estereoqumicas precisas de la cadena lateral. ESPECTROMETRIA DE MASAS DE IMPACTO ELECTRONICO14 Los espectros de masas de impacto electrnico (70 eV) de los esteroles libres proporcionan buena informacin estructural y existen mecanismos de fragmentacin verificados experimentalmente con esteroles marcados con istopos tales como deuterio. Teniendo en cuenta que la mayora de esteroles naturales poseen 4 clases de ncleos tetracclicos: D5-3-Hidroxiandrosteno, D0-3-Hidroxiandrostano, D7-3Hidroxiandrosteno, D5,7-3-Hidroxiandrostadieno y D5,7,9(11)-3Hidroxiandrostatrieno (Figura 5), y que muchos de ellos tienen cadenas laterales hidrocarbonadas saturadas o monoinsaturadas en los carbonos 22, 24 o 25; pueden establecerse las siguientes caractersticas estructurales a partir de su espectro de masas I.E.: a) Los esteroles libres con ncleo D5-3-Hidroxiandrosteno y la cadena lateral saturada presentan en sus espectros de masas normalmente los fragmentos: M (Ion molecular), M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, M-85, M-111, 273, 255, 231, 213 y 145. Adems, si contienen un grupo isopropilo terminal se observan tambin los fragmentos M-Isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados acetilados muestran los fragmentos M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, 255 (M-AcOHR), 213 y 145. Los derivados Trimetilsililteres (TMS) muestran los fragmentos M, M-TMSOH, M-TMSOH-15, 255 (M-TMSOH-R) y 145. b) Los esteroles libres con ncleo D5-3-Hidroxiandrosteno y la cadena lateral hidrocarbonada (No oxigenada) insaturada presentan adems de los fragmentos
14a) Budzikiewicz et al., "Mass Spectrometry of Natural Products", Vol. II: Steroids; Holden-Day, San Francisco, 1964. b) J. ORG. CHEM. 42 (4) 725 (1977). c) J. ORG. CHEM. 46 954 (1981). d) J. AMER. CHEM. SOC. 102 (2) 807 (1980). e) REV. LATIN. QUIM. 15 (3) 107 (1984). f) PURE APPL. CHEM. 50, 171 (1978). g) J. AMER. CHEM. SOC. 100, 7677 (1978). h) BULL. SOC. CHIM. BELG. 87 (7) 539 (1978). i) TETRAHEDRON 44 (5) 1359 (1982).

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citados en (a), los fragmentos m/z=300, 271 (muy intenso), 253, 229 y 211, si son monoinsaturados en el carbono 22. Si la insaturacin es en el carbono 24, se observa adems el fragmento intenso m/z=314. Finalmente, si la insaturacin es en el carbono 25, se observa adems el fragmento m/z: 328 intenso. Estos fragmentos intensos de masa par se originan por rupturas tipo McLafferty. c) Los esteroles libres con ncleo D0-3-Hidroxiandrostano y la cadena lateral hidrocarbonada (No oxigenada) saturada presentan los fragmentos: M, M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, m/z: 233, 215 y 147, generalmente. Adems, como en el caso de los anteriores, si poseen un grupo isopropilo terminal presentan los fragmentos: M-Isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados acetilados presentan los fragmentos: M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, 257 (M-AcOH-R), 215 y 147. Los derivados TMS-teres muestran los iones M, M-TMSOH, M-TMSOH-15, 257, 215 y 147. d) Los esteroles con ncleo D0-3-Hidroxiandrostano y la cadena lateral hidrocarbonada (No oxigenada) monoinsaturada, presentan adems de los fragmentos citados en (c), a los fragmentos: m/z: 302, 231, 211; si la insaturacin es en el carbono 22. Si la insaturacin es sobre el carbono 24, se aprecia adems el fragmento intenso m/z: 316. Y finalmente, si la insaturacin es sobre el carbono 25, se observa el fragmento intenso m/z: 330. e) Los esteroles libres con ncleo D7-3-Hidroxiandrosteno y la cadena lateral hidrocarbonada (No oxigenada) saturada, presentan en sus espectros de masas los fragmentos: M, M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, 273, 255, 246, 231 y 213. Adems, si tienen un grupo isopropilo terminal, a veces se observan los fragmentos: M-Isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados acetilados muestran los fragmentos: M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, M-AcOH-R y 213, por lo cual no es posible diferenciarlos de los derivados acetilados de esteroles con ncleo D5-3Hidroxiandrosteno. Los derivados TMS muestran fragmentos de m/z iguales a los descritos para los derivados TMS de esteroles D5. h) Los esteroles con ncleo D7-3-Hidroxiandrosteno y la cadena lateral Hidrocarbonada (No oxigenada) monoinsaturada, presentan en sus espectros de masas, adems de los fragmentos citados en (e), los siguientes fragmentos: m/z: 300, 271, 253, 229 y 211, si la insaturacin es sobre el carbono 22. Si la insaturacin es sobre el carbono 24, se observa adems el fragmento intenso m/z: 314. Y finalmente, si la insaturacin es sobre el carbono 25, se observa adems el fragmento intenso de masa m/z: 328. i) Los esteroles con ncleo D5,7-3-Hidroxiandrostadieno y la cadena lateral hidrocarbonada (No oxigenada) saturada, presentan en sus espectros de masas los fragmentos: M, M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, 271, 253, 229, 211, 158,

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143 y 12815. Adems, si tienen un grupo isopropilo terminal, a veces se observan los fragmentos: M-Isopropilo y M-Isopropilo-Agua. Cuando la cadena lateral es insaturada en lugar de m/z: 158 se observa m/z: 157. Los derivados acetilados muestran los fragmentos: M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, M-AcOH-R, 211, 158 (Si R saturada), 157 (Si R insaturada), 143 y 128. Los derivados TMS-teres muestran los iones M, M-TMSOH, M-TMSOH-15, 253, 211 y 143 j) Los esteroles con ncleo D5,7,9(11)-3-Hidroxiandrostatrieno y la cadena lateral hidrocarbonada (No oxigenada) saturada, presentan en sus espectros de masas los fragmentos: M, M-Metilo, M-Agua, M-Metilo-Agua, 251, 209 y 141. Adems, si tienen un grupo isopropilo terminal, a veces se observan los fragmentos: MIsopropilo y M-Isopropilo-Agua. Los derivados acetilados muestran los fragmentos: M, M-AcOH, M-AcOH-Metilo, M-AcOH-R, 209 y 141. Las Figuras 6. a, b, c y d, esquematizan las posibles fragmentaciones de esteroles con ncleos D0-3-Hidroxiandrosteno, D5-3-Hidroxiandrosteno, D7-3Hidroxiandrostano y D5,7-3-Hidroxiandrostadieno, tanto en su forma libre como en forma de derivados acetilados, metilados y teres TMS. Existe adems un programa de computador para identificar varias clases de esteroides naturales, el programa EMIE. Este programa sirve para el anlisis de los datos de espectros de masas de impacto electrnico de esteroles con ncleos . D5-3-Hidroxiandrosteno, D0-3-Hidroxiandrostano, D7-3-Hidroxiandrosteno, D5,7-3Hidroxiandrostadieno, con cadenas laterales hidrocarbonadas saturadas o monoinsaturadas en C-22, C-24 y C-25, adems otros tipos de esteroides como sapogeninas, espirosolanos, cardenlidos, steres metlicos de cidos grasos, etc16. Con este programa es posible no solo identificar esteroles ya conocidos, sino que adems puede ser til en la caracterizacin de esteroles como los predichos con el programa REACT, que en 1978 calcul la existencia de hasta 1778 esteroles naturales, de los cuales hasta 1990 se haban aislado menos de 50017.

15Galli G., Maroni S., STEROIDS 10(3) 189 (1967). 16 Http//:huitoto.udea.edu.co/~farmacogfit 17 Varkony, T. H., y col., TETRAHEDRON 34, 841 (1978).

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R CH2 [M-CH3]+ -CH3 X=H XO M+. HO m/z 233 -XOH R X=Ac -R -H2O
+

[M-AcOH-41]+

-CH3 M-XOH R

m/z 257

[M-XOH-15]+

m/z 302 si insat. en C-22 X=H -CH3

m/z 316 si insat. en C-24 X=H m/z 215 m/z 147 m/z 330 si insat. en C-25 X=H

Figura 6.a. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de esteroles con el ncleo D0-androstano (X = H, Ac, Me, TMS)

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R [M-CH3]+ [M-85]+ [M-111]+ -CH3 X=H -R XO M+. HO m/z 273 -XOH R X=Ac -R -H2O

X=H

[M-AcOH-41]+

-CH3 M-XOH R m/z 255

[M-XOH-15]+

m/z 300 si insat. en C-22 X=H -CH3

m/z 314 si insat. en C-24 X=H m/z 213 m/z 145 m/z 328 si insat. en C-25 X=H

Figura 6.b. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de esteroles con el ncleo D5-androsteno (X = H, Ac, Me, TMS)

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[M-CH3]+

-CH3 XO

X=H M+. HO m/z 246 -XOH R

[M-AcOH-41]+

X=Ac

-R

-CH3 M-XOH R

m/z 255

[M-XOH-15]+

m/z 300 si insat. en C-22 X=H -CH3

m/z 314 si insat. en C-24 X=H m/z 213 m/z 145 m/z 328 si insat. en C-25 X=H

Figura 6.c. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de esteroles con el ncleo D7-androsteno (X = H, Ac, Me, TMS)

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[M-CH3]+

-CH3 XO

X=H -R M+. HO m/z 271 -XOH R -H2O

[M-AcOH-41]+

X=Ac

-R

-CH3 M-XOH R

m/z 253

[M-XOH-15]+ m/z 158 -CH3

-CH3

m/z 211 m/z 143 m/z 128

Figura 6.d. Algunos fragmentos caractersticos del espectro de masas IE de esteroles con el ncleo D5,7-androstadieno (X = H, Ac, Me, TMS)

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En el caso de esteroles dihidroxilados, sus espectros de masas muestran fragmentos que incluyen las prdidas de dos molculas de agua, en general se observan M (generalmente muy dbil), M-agua, M-Me-H2O, M-2H2O, M-2H2OMe, M-R-H2O, M-R-2H2O, M-R-D-H2O, M-R-D-2H2O, etc18. ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA Debido a que la mayora de esteroles naturales contienen grupos funcionales tales como enlaces dobles C=C y el grupo hidroxilo, sus espectros ultravioleta en metanol (200-360 nm) nicamente muestran un mximo de absorcin alrededor de 205 nm, debido a transiciones p-p* del enlace doble aislado. Sin embargo, para esteroles con grupos dienos conjugados como por ejemplo el ergosterol, estos s absorben intensamente en la regin citada y la posicin de los mximos de absorcin se puede predecir con las reglas de Woodward-Fieser para dienos conjugados. Por ejemplo, los esteroles con ncleo D5,7-3-hidroxiandrostadieno presentan mximos de absorcin alrededor de 240, 270, 280 y 290 nm (Figura 7), mientras que los esteroles con ncleo D5,7,9(11)-3-hidroxiandrostatrieno presentan mximos de absorcin alrededor de 310, 325 y 340 nm19. Los esteroides con el cromforo D4-3-oxa muestran un mximo caracterstico alrededor de 240 nm.

Absorbancia

0 200 240 280 320 360

Longitud de onda (nm)

Figura 7. Espectro UV del ergosterol en metanol

18Notaro, G. y col.; J. NAT. PROD. 55 (11) 1588-1594 (1992). 19. Djerassi C, Romo J., Rosenkranz G., J. ORG. CHEM. 16, 754 (1951).

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ESPECTROMETRIA DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR DE CARBONO13 El gran desarrollo de la Espectrometra de Resonancia Magntica Nuclear de carbono-13 en los ltimos aos, ha hecho que esta tcnica desplace a otras en la elucidacin estructural de esteroides. Es muy fcil reconocer en estos espectros las seales caractersticas de esteroles como por ejemplo, la seal del carbono 3 aparece alrededor de 72 ppm en esteroles con ncleos D5- y D7-3hidroxiandrosteno20. Adems, los esteroles con ncleo D5-3-hidroxiandrosteno presentan las seales de los carbonos 5 y 6 en 141 y 122 ppm aproximadamente, la seal del metilo 18 a 12 ppm, y la del metilo 19 a 20 ppm. Los esteroles con ncleo D7-3- hidroxiandrosteno muestran las seales de los carbonos 7 y 8 a 130 y 140 ppm, y las seales de los metilos 18 y 19 alrededor de 12 ppm aproximadamente. La tabla 4 21 resume los desplazamientos qumicos aproximados para varios tipos de carbonos caractersticos de los esteroides naturales: Tabla 4. Rangos de desplazamiento qumico en RMN-13C para varios tipos de carbonos caractersticos de esteroides naturales Tipo de carbono Desplazamiento qumico (ppm) CH3 sat. 12-24 CH2 sat. 20-41 CH sat. 35-57 C sat. 27-43 C-OH sat. 65-91 C=C olefnico 119-172 C=O 177-220 C-F 88-102

Adicionalmente, es posible hacer la diferenciacin entre epmeros gracias a diferencias en sus desplazamientos qumicos 22. Recientemente, Hanke y Kubo aclararon las asignaciones de los d en RMN-13C del colesterol, utilizando secuencias de pulsos DEPT e INEPT.

20 Nota: Rehman y col. reportan que si el desplazamiento qumico del C-3 es alrededor de 77 ppm, este es un indicio de un esterol con un carbohidrato ligado a travs del C-3. (Rehnan, A-U. y col., PHYTOCHEMISTRY 45 (8) 1721 (1997). 21Kalinowski, H-O.; Berger, S.; Braun, S.; "Carbon-13 NMR Spectroscopy", John Wiley & sons, Chichester-New York-Brisbane, 1984, pp. 434. 22. Wright J.L.C., McInnes A.G., Shimizu S., Smith D.G., Walter J.A., Idler D., Khalil W., CAN. J. CHEM. 56, 1898-1903 (1978)

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Por otro lado, el desarrollo de la RMN Bidimensional permite hacer una asignacin ms fcil de las seales y por ende de la estructura. Para un ejemplo de la utilizacin de las tcnicas RMN-Bidimensionales en la elucidacin estructural de esteroles puede consultarse el artculo de Prakash y col., en el cual inclusive se hace la asignacin estereoqumica trans de los anillos A/B de un esteroide de un alga roja, utilizando el espectro COSY H-H Rango Largo(i.e. Acoplamientos a larga distancia: acoplamientos "W")23. Otro ejemplo interesante es la aplicacin de la tcnica bidimensional NOE (comnmente llamada NOESY) en el anlisis conformacional de esteroides 4-en3-ona24. Existen colecciones de espectros RMN-13C de esteroles25, e inclusive hay programas de computador para la simulacin de dichos espectros, por ejemplo el programa Chemwind versin 3.1., el cual trabaja bajo ambiente Windows . Tambin existen reportes sobre el espectro RMN de 17O para el colesterol y otros esteroides26. DIFRACTOMETRIA DE RAYOS-X Aunque el notable desarrollo de las tcnicas de RMN ha ayudado mucho en la asignacin estereoqumica de los esteroles, ms recientemente, y gracias a la ayuda del computador, actualmente es posible la asignacin espacial completa de los esteroles por difractometra de Rayos-X. Un ejemplo de esto es la asignacin estereoqumica y espacial hecha para el numersterol-A aislado del coral Sinularia numerosa27. CORRELACIONES ENTRE ROTACION OPTICA Y ESTRUCTURA28 Se han hecho estudios donde se correlaciona la rotacin especfica de soluciones de esteroles con sus caractersticas estructurales. La Tabla 5 muestra estas correlaciones.

23. Prakash O., et al. J. NAT. PROD. 52(4) 686 (1989). 24. Desai U.R., Trivedi G.K., J. ORG. CHEM. 56, 4625 (1991). 25. Akihisa T., Matsumoto T., ABURA KAGAKU 36, 301-320 (1987). 26Smith, L. L., y col.; STEROIDS 58 (6) 260-267 (1993). 27. J. NAT. PROD. 55(2) (1992). 28Robinson, T.; "The Organic Constituents of Higher Plants", Cordus Press, North Amherst MASS, 1983.

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Tabla 5. Correlaciones entre la rotacin especfica y las caractersticas estructurales del esteroide ROTACION TIPO ESTRUCTURAL EJEMPLO ESPECIFICA [a]D20 Menor de -90 Enlaces dobles conjugados Ergosterol (-135) en el anillo B -70 a -50 Enlaces dobles C5-C6 y Estigmasterol (-55.6) C22-C23 -45 a -30 Enlace doble C5-C6 Colesterol (-39.5) -25 a +10 Enlace doble C7-C8 y Asterosterol posiblemente C22-C23 +10 a +30 Ncleo saturado Colestanol (+20) +40 a +50 Enlace doble C8-C9 y Zimosterol posiblemente en la cadena lateral

NOMENCLATURA IUPAC DE 3-HIDROXIESTEROIDES Aunque a la mayora de esteroles conocidos se les conoce por sus nombres vulgares (P.ej. colesterol, estigmasterol, - sitosterol, brassicasterol, coprosterol, etc.) la IUPAC tiene una forma ms sistemtica para llamar a todas estas clases de sustancias. Para ello, considera a la mayora de esteroles relacionados con la estructura del colestano (Figura 5). El nombre IUPAC consta de cuatro partes: -el esqueleto bsico -la posicin de las insaturaciones -la posicin del grupo hidroxilo -la estereoqumica Por ejemplo veamos el nombre IUPAC del colesterol: El esqueleto bsico es el del colestano entonces: COLESTTiene un enlace doble sobre el carbono 5, entonces: 5-nTiene un grupo hidroxilo sobre el carbono 3, entonces: 3-OL Y por lo tanto el nombre correcto es: Colest-5-n-3-ol Cuando el esterol posee ms de un enlace doble se escribe COLESTA en vez de COLEST. Cuando posee 2, 3, 4, etc. enlaces dobles se dice: DIEN, TRIEN, TETRAEN, etc. Cuando posee 2, 3, 4, etc. grupos hidroxilos se dice: DIOL, TRIOL, TETRAOL, etc.

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Cuando posee sustituyentes29, estos se nombran como prefijo del esqueleto bsico, p.ej. 24-METILCOLEST, 24- ETILCOLEST, etc. Veamos ahora cul es el nombre IUPAC para el ergosterol: 24-METILCOLESTA-5,7,22-TRIEN-3-OL Los sufijos dependen del grupo ms oxidado, p. ej. el carbonilo es un sufijo preferible frente a un grupo hidroxilo. Los esteroles que posean un anillo contrado, por ejemplo algunos esteroles marinos en los cuales el anillo A es de 5 carbonos, se les denomina noresteroles, por ejemplo: A-Norcolesterol. Los que poseen un anillo expandido se les denomina homo-esteroles. Los esteroles con un enlace roto o ausente en alguno de los anillos se los denomina seco-esteroles. Sin embargo, hasta ahora no se ha incluido en el nombre IUPAC algo tan importante como es la estereoqumica. Para lograr esto, basta con aadir luego del nmero correspondiente las letras R, S, E, Z, a , segn se trate de epmeros R o S, ismeros E o Z o configuraciones a , respectivamente. Generalmente, los esteroles naturales poseen la configuracin 3-hidroxi, siendo pocas las excepciones. Cuando no se conoce la estereoqumica del C-24 se utiliza la letra griega x. Veamos por ejemplo, cul ser el nombre IUPAC para el estigmasterol tal como aparece su estructura en la Figura 2: (24S)-24-ETILCOLEST-7,22E-DIEN-3b-OL Y si no se conociera la estereoqumica en C-24 se llamara: 24x-ETILCOLEST-7,22E-DIEN-3b-OL

ACTIVIDAD FISIOLOGICA, SINTESIS Y DEGRADACION MICROBIOLOGICA DE ESTEROLES Aunque a los esteroles naturales no se les conocen actividades biolgicas especficas fuera de las funciones biolgicas citadas al principio, se ha reportado la accin antipirtica en conejos del 24-Etilcolesta-7,22-dien-3-ol (asterosterol) presente en el ajenjo Artemisia absinthium, Compositae; y se han reportado
29En orden de prioridad: alquilos>haluros>nitro, pero los dos ltimos no se encuentran presentes en esteroles de origen natural. En el caso de los esteroles sintticos que poseen heterotomos conformando alguno de los anillos, se los nombra con los prefijos aza, tia u oxa, segn si el heterotomo involucrado es N, S u O, respectivamente.

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esteroles citotxicos, especialmente esteroles oxigenados en la cadena lateral como los siguientes aislados de un alga roja 30, otros polihidroxiesteroides de corales blandos presentan accin citotxica 31. Menos estudiados son los esteroides dimricos y oligomricos, pero algunos son interesantes como las cefalostatinas, ya que son altamente citotxicas y por lo tanto son agentes antitumorales potenciales32.
OOH OH

HO

HO OH OOH

HO

HO

Figura 8. Algunos ejemplos de esteroles oxigenados en la cadena lateral identificados en algas rojas En el caso de esteroles con el ncleo D5,7-3-hidroxiandrostadieno como el ergosterol, estos son convertidos en vitamina D la cual desempea un papel importante en el metabolismo de minerales como el calcio y fsforo, y esta puede ser convertida en otros anlogos hidroxilados que son activos contra la psoriasis y cncer de tipo epitelial33. Algunos esteroles con grupos funcionales perxido y epxido, como loas aislados del micelio del hongo Cordyceps sinensis, presentan actividad antitumoral34. Pero hasta ahora la mayor importancia de los esteroles naturales es para la industria farmacutica, en especial la dedicada a la produccin de medicamentos esteroides. La Figura 9 esquematiza el proceso de conversin mediante reacciones de sntesis qumica y procesos de fermentacin, del estigmasterol en medicamentos fluorocorticoides, la figura 10 muestra el proceso de conversin de

30Sheu, J-H. et al.; J. NAT. PROD. 59, 23-26 (1996). 31 Koljak, R. y col., TETRAHEDRON 54, 179 (1998). 32Li, Y., Dias, J.R., CHEM. REV. 97, 283 (1997). 33Zhu, G-D.; Okamura, W.H.; CHEM. REV. 95 (6) 1877 (1995). 34 Bok, J. W., y col., PHYTOCHEMISTRY 51, 891-898 (1999).

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sitosterol y colesterol en esteroides acetilnicos y la figura 11 esquematiza el proceso de hormonas esteroides a partir de los esteroles de la caa de azcar35.
CHO N

2 etapas
HO O O

Estigmasterol

O HO F O O R HO

OAc O OH

9 etapas
O

9-fluorocorticoides

Figura 9. Esquema del proceso de conversin qumica y microbiolgica de estigmasterol en fluorocorticoides

R O

2 etapas
HO

R=H, colesterol R=Et, sitosterol

Androstenodiona

2 etapas
OH COOH OH

etc.
O O

Etisterona Figura 10. Esquema del proceso qumico y microbiolgico para la conversin de colesterol y sitosterol en medicamentos esteroides

35Nava, D. A.; REV. CUB. FARM. 4, 27-35 (1970).

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O HO
Bagazo de la caa de azcar Arthrobacter sp. Aspergillus ochraeus

Figura 11. Esquema del proceso de obtencin de 11-oxiesteroides a partir de los esteroles de la caa de azcar Es interesante tambin anotar que el lanosterol presente en la lana de ovejas puede ser convertido en 14 a-metilprogesterona36. La conversin de la funcionalidad 5-en-3-ol tan caracterstica de esteroles con el ncleo tipo colesterol, en la funcionalidad 5-en-3-ona puede hacerse mediante la denominada reaccin de Oxidacin de Oppenauer 37, o en algunos casos por oxidacin con KMnO4 y CuSO4 , obtenindose adems esteroides bioactivos 6hidroxilados38. Otra conversin sinttica importante es la siguiente 39 : O O

36Pettit, G. R.; J. NAT. PROD. 59 (8) 812-821 (1996). 37. Sica D., Zollo F., TETRAHEDRON LETT. (9) 837 (1978). 38 Parish, E. J., J. ORG. CHEM. 61, 5665-6 (1996). 39 Kobayashi, M. y col., STEROIDS 40(6) 673 (1982).

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PROBLEMAS 1) REV. LATINOAMER. QUIM. 10(4) 171 (1979) La balsamina (Momordica charantia, Fam. Cucurbitaceae) es una planta utilizada en decoccin para el tratamiento de la diabetes, del extracto clorofrmico de sus hojas se aisl una sustancia cuyo espectro de masas de impacto electrnico mostr entre otros los siguientes fragmentos m/z: 414, 399, 300, 271, 255, 246, 212(100%). Determine la estructura ms probable para esta sustancia y describa su biognesis a partir de la AcetilCoA. 2) REV. LATINOAMER.QUIM. 13(1) 27 (1982) Del extracto ter de petrleo de las hojas de Haplopapus ciliatus (Fam. Compositae) se aisl una sustancia blanca cristalina que da positivo el ensayo de Liebermann-Burchard, tiene P.F. 160-162C y tiene las siguientes caractersticas espectrales: Espectro UV en etanol: Mx.=207 nm Espectro infrarrojo en KBr: 3400, 2970, 2870, 1450, 1380, 1370, 1140, 970, 850, 830 cm-1, etc. Espectro de masas I.E.: 412 (22%), 397(7), 369(7), 300(14), 299(8), 285(5), 273(24), 272(27), 271(100), 257(8), 256(7), 255(32), 253(8), 247(5), 246(14), 231(11), 229(14), 215(7), 213(15), etc. Espectro de Resonancia Magntica Nuclear Protnica, en CDCl 3, 100 MHz: 5.10 ppm, m, 2H, etc. A esta sustancia se le denomin a-spinasterol. Cul es su estructura ?. Cul ser su nombre IUPAC ? Describa su biognesis a partir del cido mevalnico. 3. REV.LATINOAMER. QUIM. 16(1) 16 (1985) Del extracto ter de petrleo de las partes areas de Ruta montana (Fam. Rutaceae) se aisl por mtodos cromatogrficos una sustancia blanca cristalina P.F. 141-143C con las siguientes caractersticas espectrales: Espectro infrarrojo: 3500, 2900, 1480, 1400, 1070, 970 cm-1, etc. Espectro RMN-1H (CDCl3, 100MHz): 5.32 ppm (m, 1H), 3.52 (m, 1H), 1.00 (s, 3H), 0.68 (s, 3H), 0.919 (d, 3H), 0.885 (t, 3H), 0.835 (d, 3H), 0.813 (d, 3H). Espectro RMN-13C (CDCl3): 140.84, 121.66, 71.81 ppm, etc. Espectro de masas I.E.:

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414 (25%), 399(32.5), 383(14.7), 329(15.6), 315(23.3), 289(23.3), 273(25.4), 255(27.6), 231(21.5), 213(40.6), 173(21.9), 43(100), etc. Determine la estructura de esta sustancia, asgnele el respectivo nombre IUPAC y describa su biognesis a partir del cido mevalnico. Esta sustancia dar positivo o negativo el ensayo de Liebermann-Burchard ? Explique. 4) PHYTOCHEMISTRY 22(2) 475 (1983) El Epibrassicasterol presenta los siguientes datos espectrales: Espectro de masas I.E.: 398(50%), 380(71), 355(5), 337(10), 300(28), 271(29), 255(50), 213(15), 69(100), etc. Espectro RMN-1H de su derivado acetato (CDCl3, 220 MHz): 0.690 ppm, s, 3H 0.815 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz 0.833 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz 0.906 ppm, d, 3H, J=6.8 Hz 1.003 ppm, d, 3H, J=6.5 Hz 1.016 ppm, s, 3H 2.031 ppm, s, 3H 4.5-4.7 ppm, m, 1H 5.16-5.19 ppm, m, 2H 5.38 ppm, m, 1H Determine la estructura ms probable para el epibrassicasterol. Cul ser el correspondiente nombre IUPAC ? Asigne todas las seales del espectro RMN-1H. 5) PHYTOCHEMISTRY 20(10) 2397 (1981) Determine la estructura ms probable para una sustancia con las siguientes caractersticas: Espectro RMN-1H (CDCl3, 360 MHz): 0.646 ppm, s, 3H 0.823 ppm, s, 3H 0.907 ppm, d, 3H, J=6.5 Hz 0.808 ppm, d, 3H, J=6.5 Hz 0.828 ppm, d, 3H, J=7 Hz 0.851 ppm, t, 3H, J=7.4 Hz 0.947 ppm, d, 3H, J=6.4 Hz Espectro de masas I.E. de alta resolucin:

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430.4123 (100%), 415(23), 412(7), 397(11), 290(15), 249(9), 248(50), 247(49), 231(13), 230(20), 229(44), etc. 6) Determine la estructura ms probable para una sustancia animal cuyo espectro de masas de impacto electrnico muestra entre otros los siguientes fragmentos: m/z (%IR): 386(81), 371(43), 368(56), 355(54), 301(51), 275(93), 273(22), 255(26), 247(20), 231(33), 213(60), 81(100), etc. 7) De la esponja marina Agelas conifera (Fam. Agelasidae) se aisl el asterosterol el cual es una sustancia blanca cristalina soluble en cloroformo, que cristaliza en agujas blancas desde metanol y cuyo espectro de masas de impacto electrnico muestra entre otros los siguientes fragmentos: m/z (%IR): 398(35), 383(12), 300(11), 285(4), 273(34), 271(100), 255(53), 246(30), 231(10), 229(16), 213(15), 211(2), etc. Determine la estructura del asterosterol, describa su biognesis a partir del cido mevalnico y determnele el respectivo nombre IUPAC. 8) Determine la estructura ms probable para una sustancia detectada en un invertebrado marino cuyo espectro de masas de impacto electrnico muestra entre otros los siguientes fragmentos: m/z (%IR): 416(42), 401(11), 233(52), 215(45), 43(100), etc. Cul ser su nombre de acuerdo con la nomenclatura IUPAC ? 9) BULL.SOC.CHIM.BELG. 87(7) 539-43 (1978) Strongylosterol De la esponja marina Strongylophora durissima, clase Demospongiae: P.F. 112-112.5C [a]D = -43 (c= 0.39, Diclorometano) Espectro Infrarrojo (KBr): 3480, 1650, 890 cm-1 Espectro RMN-1H, 100 Mhz, CDCl3: 0.66 d, s, 3H 0.78 d, t, 3H, j= 7 Hz 0.90 d, d, 3H, j= 6 Hz 1.00 d, s, 3H 1.02 d, t, 3H, j= 7 Hz 3.45 d, m, 1H 4.71 d, m, 2H

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5.33 d, m, 1H Espectro RMN-13C: d: 153.9, 140.9, 121.7, 107.9, 71.8, 56.9, 56.1, 50.3, 49.1, 42.4, 39.9, 37.4, 36.6, 36.1, 33.9, 32.0, 31.7, 30.3, 28.1, 26.6, 25.5, 24.3, 21.2, 19.4, 18.9, 12.3, 11.9 ppm Espectro de masas IE: m/z (%IR): 426(100), 412(8), 411(13), 409(4), 408(11), 394(7), 393(18), 341(4), 329(7), 328(24), 315(14), 314(40), 313(9), 310(7), 300(17), 299(44), 296(6), 295(7), 281(13), 273(13), 272(24), 271(48), 258(20), 255(19), 253(11), 231(20), 213(34). 10) A. Martnez, Tesis de Doctor en Ciencias, Departamento de Qumica, Universidad Nacional, Santaf de Bogot, 1996. De la esponja Ircinia campana se aisl una mezcla de esteroles con las siguientes caractersticas espectrales: EMIE m/z (% I.R.): 396 (73%), 363 (100), 337 (38), 271 (10), 253 (28), 211 (23), 157 (25), 143 (35), 69 (45). RMN-1H (400 MHz, CDCl3): 0.630 (s, 3H), 0.840 (d, 6H, J=7.81 Hz), 0.935 (d, 3H, J=7.81 Hz), 0.945 (s, 3H), 1.030 (d, 3H, J=6.84 Hz), 3.647 (m, 1H), 5.171 (m, 1H), 5.182 (m, 1H), 5.394 (m, 1H). EMIE (derivado acetilado) m/z: 438 (9%), 378 (100), 363 (37), 337 (7), 253 (33), 211 (12), 157 (35), 143 (26), 109 (16), 43 (35). UV mx (metanol): 260h, 270, 282, 294 nm. EMIE m/z (% I.R.): 396 (63%), 363 (100), 337 (38), 271 (12), 251 (13), 211 (22), 157 (20), 143 (45), 69 (33), 55 (42). RMN-1H (400 MHz, CDCl3): 0.625 (s, 3H), 0.975 (d, 3H, J=6.35 Hz), 0.947 (s, 3H), 1.027 (d, 3H, J=6.83 Hz), 1.032 (d, 3H, J=6.84 Hz), 3.65 (m, 1H), 4.662 (m, 1H), 4.664 (m, 1H), 5.4 (m, 1H). UV mx (metanol): 260h, 269, 280, 292 nm. EMIE m/z (% I.R.): 400 (100%), 385 (38), 382 (48), 367 (30), 315 (45), 289 (55), 273 (32), 255 (28), 231 (10), 213 (18), 145 (38), 107 (35), 55 (42), 43 (50). EMIE (derivado acetilado) m/z: 442 (21%), 382 (100), 367 (26), 281 (16), 255 (21), 207 (28), 147 (42), 145 (33), 133 (28), 43 (88). EMIE m/z (% I.R.): 410 (63%), 377 (100), 351 (30), 271 (8), 253 (28), 211 (23), 143 (25), 83 (38), 55 (39). RMN-1H (500 MHz, CDCl3): 0.638 (s, 3H), 0.811 (t, 3H, J=7.34 Hz), 0.849 (d, 3H, J=6.42 Hz), 0.855 (d, 3H, J=6.42 Hz), 0.950 (s, 3H), 1.051 (d, 3H, J=6.42 Hz), 3.6 (m, 1H), 5.041 (dd, 1H, J=14.66 y 8.71 Hz), 5.163 (dd, 1H, J=15.12 y 6.41 Hz), 5.389 (m, 1H), 5.576 (m, 1H). EMIE (derivado acetilado) m/z: 452 (7%), 392 (100), 377 (31), 349 (5), 253 (31), 211 (12), 157 (36), 143 (24), 43 (31). UVmx (metanol): 260h, 270, 282, 294 nm.

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11) (Desmosterol) J. NAT. PROD. 59 (1) 23-26 (1996). 12) Rohmer, M. y col; STEROIDS 35 (2) 219 (1980). 13) (4-Metilestanol) Alam, M. y col.; STEROIDS 38 (4) 375 (1981). 14) (Glaucasterol, Figuras espectros), Kobayashi, M. y col.; STEROIDS 40 (6) 665 (1982).

15) (D5,7,23-24-etilesterol) Zielinski, J. y col.; STEROIDS 40 (4) 403 (1982).

(Esterol glicsido) Rehnan, A-U. y col., PHYTOCHEMISTRY 45 (8) 1721 (1997).

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16) Proponer la estructura ms probable para los esteroles cuyos espectros se presentan a continuacin: a) Espectro RMN-1H (400 MHz, CDCl3):

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Espectro de RMN-13C (100 MHz, CDCl3):

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Espectro de masas (70 eV):

b) Espectro de masas (70 eV):

Espectro de RMN-1H (400 MHz, CDCl3):

Alejandro Martnez M., 2002

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SOLUCIONES A LOS PROBLEMAS 16a Y 16b Problema 16a El espectro de masas muestra el ion molecular en m/z 384 consistente con la frmula molecular C27H44O. Tambin pueden observarse los iones m/z 369 (prdida de un grupo metilo), 366 (prdida de una molcula de agua) y 351 (prdida de un grupo metilo y una molcula de agua), caractersticos de esteroles. Los iones m/z 271 (prdida de la cadena lateral), 253 (prdida de la cadena lateral y una molcula de agua), 253 (prdida de la cadena lateral y una molcula de agua) y 211 (fisin del anillo D menos agua), indican claramente la presencia de dos insaturaciones en el ncleo, y los iones m/z 158 (fisin entre anillos B y C), 143 (158 menos un grupo metilo) y 128 (158 menos dos grupos metilo) hacen evidente que las insaturaciones estn en el C-5 y en el C-7 (ver Figura 6.d). La diferencia entre el ion molecular y el ion m/z 271 (prdida de la cadena lateral) indica que la cadena lateral de este esterol es saturada con la frmula C 8H17. Todo este anlisis lleva a la conclusin de que este compuesto es un esterol con ncleo D5,7-3-hidroxiandrostadieno con una cadena lateral saturada de ocho tomos de carbono. El espectro de RMN-1H confirma el ncleo D5,7-3b-hidroxiandrostadieno por las seales multiplete en 5.4 y 5.6 ppm integrando cada una para un protn, correspondientes a los protones olefnicos H-6 y H-7, un multiplete (7 seales) en 3.65 ppm correspondiente al protn H-3a y dos singletes en 0.62 y 0.95 ppm, correspondientes a los metilos H-18 y H-19. Las seales de los CH 3-26 y CH3-27 se observan como dobletes en 0.85 y 0.86 ppm, y los protones del CH3-21 se observan como un doblete en 0.9 ppm. Estos datos corresponden a un esterol con el ncleo D5,7-3b-hidroxiandrostadieno con una cadena lateral con un grupo isopropilo terminal. La configuracin 3-hidroxi la confirma la multiplicidad de la seal del H3, la cual corresponde a un multiplete extendido 42 Hz originado por acoplamientos de los protones axiales de H-3a con H-2 y H-4, y a los acoplamientos entre H-3a y los protones ecuatoriales H-2 y H-4, mientras que la configuracin 3a-hidroxi genera un 'quintete' extendido 28 Hz, originado por acoplamientos protnicos axial-ecuatorial y ecuatorial-ecuatorial de H-3b con H-2 y H-4. El espectro de RMN-13C muestra 27 seales entre las cuales cuatro corresponden a los carbonos olefnicos C-5 (139.73 ppm), C-6 (119.57 ppm), C-7 (116.21 ppm), C-8 (141.47 ppm) y una al carbono hidroxilado C-3 (70.44 ppm), confirmando la existencia de un esterol con ncleo D5,7-3b-hidroxiandrostadieno, las dems seales corresponden a d 38.34 (C-1), 31.96 (C-2), 40.74 (C-4), 46.20 (C-9), 36.97 (C-10), 21.08 (C-11), 39.14 (C-12), 42.90 (C-13), 54.47 (C-14), 23.00 (C-15), 28.08 (C-16), 55.84 (C-17), 11.80 (C-18), 16.27 (C-19), 36.10 (C-20), 18.83 (C-21), 36.11 (C-22), 23.84 (C-23), 39.47 (C-24), 27.99 (C-25), 22.54 (C-26) y 22.85 (C-27).

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Con este anlisis se llega a la conclusin de que este esterol es el colesta-5,7din-3b-ol (comnmente llamado 7-dehidrocolesterol).

HO Problema 16b El espectro de masas muestra el ion molecular m/z: 410 consistente con la frmula C29H46O. Tambin se observa el fragmento m/z 377 (M-metilo-agua) caracterstico de esteroles. Los iones m/z 271 (M-cadena lateral), 253 (271-agua) y 211 (fisin del anillo D y prdida de una molcula de agua) indican claramente la presencia de dos insaturaciones en el ncleo y los iones m/z 128, 143 y 158 hacen evidente que estas insaturaciones estn en el C-5 y el C-7. La diferencia entre el ion molecular y el ion m/z 271 (M-cadena lateral) indica que la cadena lateral de este componente es monoinsaturada con una frmula C10H19. Todo este anlisis lleva a la conclusin de que este es un esterol con un ncleo D5,7-3bhidroxiandrostadieno con una cadena lateral monoinsaturada. El espectro de RMN-1H muestra las seales d 0.638 (s, CH3-18), 0.950 (s, CH319), 3.6 (m, H-3), 5.389 (m, H-6), 5.576 (m, H-7). Las seales d5.046 (dd, J=15.6 y 8.7 Hz) y 5.181 (dd, J=15.1 y 6.4 Hz) corresponden a los protones H-22 y H-23 con geometra E. La seal 0.811 (t, J=7.3 Hz) es la del grupo CH 3-29 que est ligado a un grupo metileno. Este anlisis permiti asignar la estructura del (22E,24 x)-24-Etilcolesta-5,7,22E-trin-3-ol para esta sustancia.

HO

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17) (3-epi-chondrillasterol, 24-metil-24-etilcolesta-7,22-din-3-ol, RMN, IR, Mimusops elengi, Sapotceas) Jahan, N., y col., FITOTERAPIA LXVII (1) 91 (1996)

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