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TECNOLGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE HUIXQUILUCAN

LICENCIATURA EN BIOLOGA

BIOLOGA CELULAR
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

NOMBRE: DE LOS SANTOS BENITO JUAN JOS NO. DE CONTROL: 09090068 PROFESOR: MARTIN JAIME GARCA JUREZ

PRACTICA No. 1 OBSERVACIN DE PROTISTAS DE VIDA LIBRE OBJETIVO. El alumno reconozca diferentes protistas de vida libre que se desarrollan en nuestro medio ambiente los cuales varan de acuerdo a las estaciones del ao. Los estanques contienen muchos protistas e invertebrados. La composicin de estas comunidades varia a travs de los estanques y conforme avanza el ao. MATERIAL Mtodo 1. Toma una gota de agua estancada y colcala en un portaobjetos. Cbrela con un cubreobjetos. Observa al microscopio. Componentes celulares: flagelos, cilios y diferentes medios de locomocin. Gota de agua estancada Porta y cubreobjetos Pipeta Pasteur Microscopio

Esquema. 1. Algunos de los microorganismos que pueden estar presentes en la muestra. Ayuda visual

PRACTICA No. 2 OBSERVACIN MICROSCPICA DE HONGOS OBJETIVO. Que el alumno identifique los hongos microscpicos que se encuentran en el ambiente. Los principales mtodos aplicados para la observacin microscpica de los cultivos son: la observacin en fresco, con una solucin adecuada, y las preparaciones en cinta adhesiva. 1. Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de mohos. 2. Observar la morfologa de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras que las originan. MATERIAL Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con alcohol Cubetas de Tinciones Aguja enmangada o lanceta Cinta adhesiva transparente Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos Solucin de lactofenol al azul algodn Microscopio

PREPARACIONES EN FRESCO DE MOHOS 1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Realizar la misma operacin en otro portaobjetos que se usar para lavar la muestra. 2. Tomar el material a observar en una mnima cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa, los conidiforos. 3. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que ser ya el definitivo. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidiforos), se aplastarn stos ligeramente sobre la gota o se seccionarn con un bistur. 4. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado. 5. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas entre los dos vidrios. PREPARACIONES EN CINTA ADHESIVA 1. Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. 2. Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.

2. Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentracin de esporas. 3. Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.

4. Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.

Figura 1. Estructuras somticas

PRACTICA No.3 OBSERVACIN DEL CITOESQUELETO Y FAGOCITOSIS EN PROTISTAS ACELULARES: TETRAHYMENA

OBJETIVO. El alumno reconozca las estructuras externas en clulas eucariotas: los cilios, citoesqueleto y fagocitosis

En esta seccin, trabajars con organismos vivos del reino protista. Protistas contienen organismos eucariotas acelulares y otros grupos cercanos. El organismo con que trabajaras es un protozoario ciliado del genero Tetrahymena. Los cilios son proyecciones de la clula que contienen filamentos del citoesqueleto que se mueven en forma de ola para mantener al organismo en su ambiente lquido. En esta actividad colocars a Tetrahymena en una solucin con partculas de tinta. Esto te ayudar a observar la locomocin y hbitos alimenticios de este protozoario. A travs del microscopio, observaras la accin de los cilios. rganos en forma de pelo en la superficie de Tetrahymena. Los cilios tambin se encuentra en las superficie de las clulas epiteliales en tus vas respiratorias, desde la traquea en tu garganta hasta los bronquiolos de tus pulmones. Mientras investigas la funcin de los cilios en Tetrahymena trata de imaginar como estos mismos organelos pueden funcionar en tus vas respiratorias. Tambin podrs observar la fagocitosis, tipo de alimentacin utilizado por Tetrahymena, las clulas especializadas en nuestro sistema inmune utilizan este mismo proceso de fagocitosis para eliminar material infeccioso, adems de observar a Tetrahymena capturando las partculas de tinta, observaras a estas partculas moverse a travs de las fibras del citoesqueleto. Aunque no podrs ver el citoesqueleto, podrs ver el camino por el que se mueven las vesculas que contiene la tinta hacia las reas de digestin.

MATERIAL Suspensiones de clulas de Tetrahymena Pipeta pasteur Porta y cubreobjetos Tinta al 1% Microscopio

Mtodo

1. Habr suspensiones de clulas de Tetrahymena en soluciones de proteoseptona al 2% en un matraz de 125ml. Sin mezclar el fluido, inserta la punta de una pipeta al fondo de la suspensin de clulas y toma 2mm en un tubo. 2. Pipetea 2mm de tinta al 1% en el mismo tubo y mezcla subvente las dos soluciones. Toma el tiempo. 3. Coloca dos gotas de la mezcla de Tetrahymena y la tinta en un portaobjetos, coloca un cubreobjetos y observa al menos 5 clulas.

4. Despus de 10min, repite el paso 3 y observa las clulas en microscopio. Repite el paso 3 de nuevo despus de 20 min. y despus de 30 min.

PRACTICA No.4 OBSERVACIN DE LOS CLOROPLASTOS Y PARED CELULAR EN HOJAS DE LA PLANTA ACUTICA ELODEA

OBJETIVO. El alumno reconozca la pared celular y los cloroplastos en las plantas.

Las hojas de la planta acutica Elodea sp. Son muy delgadas que pueden observarse sus clulas con un microscopio sin necesidad de cortarlas en secciones delgadas. La mayora de las estructuras en las clulas de las plantas no son visibles a travs de la luz del microscopio. Sin embargo, cuando ajustas propiamente el microscopio podrs ver la pared celular y los cloroplastos. El centro de la clula aparecer vaco ya que est ocupado por una gran vacuola que no es visible a travs de la luz del microscopio. Los organelos que son de inters particular en este ejercicio son los cloroplastos; son de color verde, estructura membranosa en el citoplasma entre la membrana plasmtica y la vacuola. Como estars observando clulas vivas, los cloroplastos se mostrarn en su color y comportamiento natural bajo el microscopio. MATERIAL Hoja de Elodea Bistur o escalpelo Porta y cubreobjetos Agua Microscopio

Mtodo 1. Utiliza pinzas para tomar una hoja joven de Elodea. Las hojas jvenes estn al extremo distal de la punta del tallo. 2. Coloca la hoja extendida en una laminilla. Adhiere una gota o dos de agua y coloca un cubreobjetos. 3. Observa al objetivo 10x y despus al de 40x. 4. Usa el micrmetro para moverte a travs de los planos de la clula. a) El centro de la clula est ocupado por una gran vacuola que no es visible. La vacuola empuja el citoplasma y los cloroplastos hacia abajo, arriba y a la pared de la clula. b) Si ests enfocando arriba de la clula vers cloroplastos esparcidos a travs de la clula. c) Mientras vayas enfocando hacia debajo de la clula, los cloroplastos ocuparn el permetro de la clula, hacia la pared. Hacia abajo de la clula, los cloroplastos estarn otra vez esparcidos en la clula.

5. Haz un bosquejo de una clula de Elodea. Anota la pared celular, y los cloroplastos. Aunque parezca que las clulas ests vacas, realmente estn llenas de estructuras no visibles con el microscopio de luz.

6. Si hay movimientos citoplasmticos, vers los cloroplastos circulando alrededor de la clula. Los movimientos del citoplasma son controlados por microfilamentos en el citoesqueleto de la clula. Estos filamentos de actina y miosina mueven el contenido celular a un proceso activo que usa la energa liberada por el rompimiento de ATP hacia ADP

PRACTICA No. 5 OBSERVACIN MICROSCPICA DE UN TEJIDO VEGETAL: TEJIDO EPIDRMICO DE CEBOLLA OBJETIVO. Que el alumno reconozca diferentes estructuras del tejido vegetal. MATERIAL Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubeta Agujas enmangadas Pinzas Escalpelo Verde de metilo actico o azul de metileno Cuentagotas Cebolla

Mtodo 1. Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana que est adherida por su cara inferior cncava. 2. Depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. Pon el porta sobre la cubeta de tincin para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. 3. Escurrir el agua, aadir una gotas de verde de metilo actico (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporacin del mismo! 4. Con el cuentagotas baar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. 5. Colocar sobre la preparacin un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarlas al microscopio. 6. Observa la preparacin a distintos aumentos empezando por el ms bajo 7. Observa la preparacin a distintos aumentos, empezando por el ms bajo. Identifica las distintas clulas del tejido epidrmico y las de las hojas del bulbo de cebolla.

PRACTICA No.6 PREPARACIN DE FROTIS BACTERIANO INTRODUCCIN Se denomina frotis a la extensin que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo ms posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparacin es muy difcil obtener una imagen clara y ntida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los mtodos habituales de tincin que permiten la observacin al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijacin de una extensin bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfologa y bacteriana y las posibles agrupaciones de clulas que pudiera haber. OBJETIVO. Que el alumno se familiarice con la tcnica de tincin directa de bacterias y aprenda a fijar por mtodos qumicos y fsicos. Material: Portaobjetos y cubreobjetos Pipeta Pasteur o gotero 50 mL de agua Asa bacteriolgica Mechero bunsen Pinzas para tubo de ensayo Piseta de 100 mL. Papel filtro Aceite de inmersin 6 vasos de precipitado de 100 mL.

Reactivo: Metanol Azul algodn o verde de malaquita 100 mL de agua destilada Alcohol de 70 Alcohol de 95 Acetona pura Acetona-xilol (1:1) Xilol Blsamo de Canad, euparal o algn medio de montaje sinttico

Material biolgico: Cultivo bacteriano de cualquier tipo

REALIZACIN DEL FROTIS 1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente.

2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. 3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su evaporacin acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse. FIJACIN DE LAS BACTERIAS AL PORTAOBJETOS 4. Por calor: Pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejar enfriar el porta en una base 5. Con metanol (para bacterias procedentes de medio lquido). Aadir unas gotas de metanol sobre la extensin completamente seca. Golpear el portaobjetos por su canto con cuidado contra la mesa de trabajo para retirar de inmediato el exceso de metanol. Esperar a que el metanol se evapore completamente. Una vez realizado el frotis y fijadas las bacterias, las preparaciones pueden ser observadas al microscopio, aunque carecen de contraste. Lo normal es continuar con el proceso de tincin. TINCIN DEL FROTIS BACTERIANO 6. Cubrir el frotis con abundante colorante y dejarlos actuar durante 1 o 5 minutos. En ocasiones el colorante tie slo en caliente, por lo que el tiempo que dure su actuacin se deber sostener el portaobjetos con unas pinzas sobre la llama del mechero para que humee el colorante, pero teniendo mucho cuidado de que no llegue a hervir ya que se producira la destruccin de las clulas. 7. Lavar la preparacin con agua para eliminar el colorante. Esta operacin se realiza inclinando el portaobjetos y aplicando el chorro de agua en su parte superior de manera que resbale sobre el frotis, pero sin que vaya dirigido directamente sobre l, pues podra arrastrar parte del frotis consigo. Eliminar la mxima cantidad de agua de los portaobjetos golpendolos por su canto con cuidado contra la superficie de la mesa de trabajo. 8. Secar el portaobjeto presionando entre dos papeles de filtro, pero en ningn caso se debe frotar el porta. 9. Observar la preparacin al microscopio llegando hasta el mximo aumento. Si se quiere montar de forma definitiva no se debe usar ahora el aceite de inmersin. MONTAJE DEFINITIVO DE LA PREPARACIN La tcnica siguiente es de aplicacin para cualquier preparacin microscpica que se desee montar de forma definitiva. Se anotar en un extremo del portaobjetos el contenido de la preparacin y la fecha. 10. Pasar sucesivamente los portaobjetos por las siguientes soluciones mantenindolos un mnimo de 5 minutos en cada bao. La serie de alcoholes puede modificarse en funcin de la disponibilidad de los reactivos, pero el objetivo es que la preparacin quede totalmente deshidratada. Escurrir bien el reactivo antes de introducirlo en el siguiente bao. a) b) c) d) e) Alcohol de 70 Alcohol de 95 Acetona pura Acetona-xilol (1:1) Xilol

11. Montar la preparacin. Emplear blsamo de Canad, euparal o algn medio de montaje sinttico. Utilizar preferiblemente cubreobjetos de 22x22 mm.

PRCTICA No. 7 MITOSIS EN CELULAS VEGETALES Introduccin: La mitosis es el proceso celular por el cual las clulas somticas se dividen para originar nuevas clulas hijas, son las encargadas de provocar el crecimiento y desarrollo de un organismo, esto es, las clulas aumentan en nmero por divisin, como resultado de la mitosis. Los ncleos resultantes mantienen el mismo nmero e identidad de los cromosomas de la clula de la cual derivan. La mitosis es un proceso bajo control gentico, el cual ha sido dividido en cuatro fases: PROFASE, METAFASE, ANAFASE y TELOFASE. Teniendo cada una de estas sus etapas intermedias correspondiente. Adems de la etapa terminal de la divisin celular llamada CITOCINESIS Este proceso celular ocurre en todas las regiones meristemticas puntos de crecimiento de una planta. Objetivo: Observar las diferentes etapas de la mitosis en clulas vegetales. Material: Microscopio compuesto Bistur Papel absorbente Aguja de diseccin (recta) Portaobjetos y cubreobjetos Vidrios de Reloj Reactivos: Acetocarmin u otro colorante de carga positiva HCl 1N Aceite de inmersin Material biolgico: 20 Semillas de haba germinadas de 8 das de edad. Procedimiento: 1.- Realice cortes transversales lo ms delgado posible en los pices radicales de las habas. 2.- Coloque los tejidos en un vidrio de reloj o en un portaobjetos limpio y cbralos con unas gotas de HCl 1 N durante 15 minutos. 3.- Transcurrido el tiempo anterior, quite el exceso de cido y adicione Acetocarmin tambin por espacio de 15 minutos. 4.- Posteriormente proceda a observar las diferentes etapas de mitosis al Microscopio. Presentacin de resultados: I).- Esquematice cada fase de mitosis observada colocando el aumento, la etapa mittica y su correspondiente explicacin. II).- identificar como 9 fases celulares, estas son: Profase temprana, Profase media, Profase tarda, Prometafase, Anafase temprana, Anafase tarda, Telofase temprana, y Telofase tarda.

III).-Para realizar lo anterior, auxliese de las fotografas que se anexan en la prctica.

PRACTICA No. 8 REPRODUCCIN ASEXUAL POR GEMACIN EN LEVADURAS OBJETIVO. El alumno reconozca la reproduccin asexual en clulas eucariontes. MATERIAL Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Levadura Agua azucarada Aguja enmangada Lactofenol-safranina

TCNICA 1. Disolver con ayuda de una aguja enmangada un poco de levadura sobre un porta que contenga 2 o 3 gotas de agua ligeramente azucarada. 2. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio. 3. Repetir los pasos anteriores mezclando sobre el portaobjetos la suspensin acuosa de la levadura con una gota de lactofenol-safranina. Con este procedimiento se consigue una doble finalidad: a. Ver mejor las clulas de las levaduras, teidas por la safranina. b. Retrasar un poco el desprendimiento de las clulas hijas gracias a la accin desfavorable del fenol para la vida normal de las levaduras. c.

PRACTICA No. 9 OBSERVACIN DE BACTERIAS OBJETIVOS 1. Realizar una tincin simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales 2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qu casos se recomienda una u otra. 3. Observar la morfologa bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen. 4. Practicar con el microscopio al mximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersin. MATERIAL Mechero Bunsen o de alcohol Asa de siembra o aguja enmangada Pinzas Portaobjetos Microscopio ptico

Reactivos:

Aceite de inmersin

Colorantes para tincin: a. Solucin de cristal violeta al 1% b. Solucin de safranina al 0,5% c. Azul de metileno al 1% Material biolgico Muestras bacterianas de origen natural: yogur, vinagre, sarro dental, suelo, etc.

BACTERIAS DEL YOGUR El yogur es un producto lcteo producido por la fermentacin natural de la leche. A escala industrial se realiza la fermentacin aadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociacin de dos cepas bacterianas: el Streptococcus termophilus, poco productor de cido, pero muy aromtico, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta preparacin se podrn, por tanto, observar dos morfologas bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupacin (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Adems, el tamao del lactobacilo (unos 30m de longitud) facilita la observacin aunque no se tenga mucha prctica con el enfoque del microscopio. Mtodo 1. 2. 3. 4. Realizar el frotis disolviendo una mnima porcin de yogur en una pequea gota de agua. Fijar con metanol para eliminar parte de la grasa. Teir con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 1-2 minutos. Observar al mximo aumento del microscopio.

Bacterias del vinagre El vinagre es una solucin acuosa rica en cido actico resultante de la fermentacin espontnea del vino o de bebidas alcohlicas de baja graduacin. La acetificacin del vino es producida por bacterias aerbicas del cido actico, principalmente Acetobacter aceti, aunque tambin Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares. 1. Tomar con una aguja enmangada una pequea porcin de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la superficie de los vinos agriado. 2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis. 3. Dejar secar y fijar con calor. 4. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar. Bacterias del sarro dental El sarro dental es un depsito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Est constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metablicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer la preparacin, pero suelen abundar bacterias saprfitas, pudindose observar gran variedad de morfologas: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos. 1. Con una aguja enmangada tomar una pequea porcin de sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos. 2. Dejar secar y fijar con calor. 3. Teir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar. Bacterias del suelo La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de suelo es prcticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los microbilogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardn. Despus de varios das, las bacterias se habrn adherido al vidrio y slo habr que fijarlas por calor y teirlas con un colorante cualquiera. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos, as como la parte que no se va a teir.

*PRCTICA NO. 10 PRODUCCIN DE O2 Y CONSUMO DE CO2 DURANTE LA FOTOSNTESIS INTRODUCCIN El proceso de fotosntesis se lleva a cabo en la capa media de la hoja o mesfilo, en donde se hallan los rganos especializadas en este proceso llamados cloroplastos. La reaccin se produce en las membranas de los tilacoides donde se encuentran los pigmentos que son capaces de absorber las diferentes longitudes de onda de la luz. Esta absorcin de la luz produce una reaccin qumica cuando la energa de los fotones descompone el agua y libera oxgeno, protones y electrones. Los electrones se utilizan para sintetizar dos molculas encargadas de almacenar y transportar energa: el ATP ( Adenosin Trifosfato o Trifosfato de adenosina) y NADP (Nicotiamida-Adenina Dinucleotido fosfato) . Estas dos molculas se utilizarn en la siguiente fase de la fotosntesis para trasformar el dixido de carbono (C02) y el agua (H20) para la produccin de materia orgnica ( hidratos de carbono), La fase de fijacin del dixido de carbono o Ciclo de Calvin no se lleva a cabo en los tilacoides sino en el estroma. Durante este ciclo el dixido de carbono y el ATP consiguen formar el primer compuesto orgnico en forma de molculas de gliceraldehido-3-fosfato una molcula que contiene tres tomos de carbn, a partir de las cuales se forman los hidratos de carbono. En la mayora de las plantas el Ciclo de Calvin est ligado a la fase fotoqumica de manera que las plantas se regulan a travs de encimas para que ambos procesos se produzcan a la vez. Las plantas que siguen este proceso se denominan plantas C3 OBJETIVO Demostrar en forma muy simple el intercambio de gases en la fotosntesis. MATERIAL Recipiente de vidrio o plstico transparente de aproximadamente 3 lt. de capacidad Tubo de ensaye Embudo de vidrio de tallo corto Solucin de fenolftalena (1% en etanol al 60 %) Bicarbonato de sodio Cerillos Lmpara adaptada con un foco de 100 o 150 watts Planta Elodea o Hidrylla.

PROCEDIMIENTO En el recipiente de vidrio, ponga, por partes iguales, agua y una solucin de bicarbonato de sodio al 2%. Agregue un poco de solucin de fenolftalena hasta que de un color rosado. Coloque unos tallos de la planta, de modo que queden en su mayor parte dentro del embudo de vidrio, pero sirviendo a este de asiento para que haya libre paso del lquido de fuera a dentro del embudo. Sobre el tallo del embudo coloque un tubo de ensaye lleno de agua. Ponga todo bajo iluminacin fuerte. Observe por 2 horas que ocurre en el interior del tubo y que cambios ocurren en la solucin. Al trmino de este tiempo, levante el tubo de ensaye, cbralo rpidamente con un dedo, procurando evitar al mximo que escape el gas en su interior. Acerque un cerillo encendido al mismo tiempo que destapa el tubo. Registre lo observado. Repita con poca iluminacin. *Esta prctica es obtenida del manual de PRCTICAS DE FISIOLOGA VEGETAL compilada por la Ing. Vernica Cruz Lara del periodo de marzo 2012.

*PRCTICA NO. 11 SEPARACIN DE LOS PIGMENTOS DE LA HOJA POR LA CROMATOGRAFA EN PAPEL

INTRODUCCIN Un pigmento es cualquier sustancia que absorbe la luz. El color del pigmento esta dado por la longitud de onda no absorbida (y por lo tanto reflejada). Los pigmentos negros absorben todas las longitudes de onda que les llega. Los pigmentos blancos reflejan prcticamente toda la energa que les llega. Los pigmentos tienen un espectro de absorcin caracterstico de cada uno de ellos. La clorofila, el pigmento verde comn a todas las clulas fotosintticas, absorbe todas las longitudes de onda del espectro visible, excepto las de la percepcin global del verde, detectado por nuestros ojos. Los pigmentos accesorios que incluyen a la clorofila b (tambin c, d, y e en algas y protistas) y los carotenoides, como el beta caroteno y las xantofilas (carotenoide de color amarillo), absorben la energa no absorbida por la clorofila. OBJETIVOS Manejar las tcnicas de separacin de pigmentos foliares. Realizar una cromatografa en papel. Identificar los diferentes pigmentos foliares.

MATERIAL Alcohol etlico 96 10 mL. ter de petrleo 10 mL. Benceno 10 mL. Papel filtro Whatman nmero 1 Tubo de ensaye grande con tapn de hule Gradilla Mortero con mano Embudo Tubo capilar o asa de platino Tijeras Tachuela o chinche metlica Hornilla elctrica 5 gr de espinaca o acelga secas.

PROCEDIMIENTO Machaque los 5 gramos de hojas secas en el mortero hasta obtener un polvo fino. Aada este polvo a 50 mL de alcohol etlico, y caliente a ebullicin en la hornilla (no utilice fuego directo). Deje enfriar y filtre. Recorte una tira de papel filtro, de un ancho y largo un poco menor al del tubo de ensaye. Coloque con el capilar una gota del extracto alcohlico y deje secar. Repita esta operacin dos veces ms. Prepare una solucin de 9 partes de ter de petrleo y una parte de benceno, y llene el fondo del tubo con ella (aprox. 2-3 mL.) Introduzca la tira de papel filtro ya preparada, teniendo cuidado de evitar que el solvente alcance el extracto. Sostenga la tira con la tachuela y el tapn, tape el tubo, observe y registre. *Esta prctica es obtenida del manual de PRCTICAS DE FISIOLOGA VEGETAL compilada por la Ing. Vernica Cruz Lara del periodo de marzo 2012.

Bibliografa Biologa. Solomon, Berg, Martin. 8. ED. Mc. Graw Hill. 2008 Introduccin a la Biologa Celular. Alberts, Bray, Hopkin, 2. Panamericana. 2006. Biologa Molecular de LA CELULA, Bruce Alberts, Bray, Lewis 3. Omega. Microbiologa. Cuarta Edicin.; Lansing Prescott; John P. Harley; Donald A. Klein.; Ed. Mcgraw-HillInteramericana.; 2003 Introduccin a la Microbiologa. , 9 Edicin. Tortora, Funke, Case. Ed. Panmericana. 2007 Biologa De Los Microorganismos. Octava Edicin.; Michael T. Madigan; John M. Martinko; Jack Parker Printice Hall.; 2000. Manual de prcticas de Fisiologa Vegetal. Ing. Cruz Lara Vernica. Tecnolgico de Estudios Superiores de Huixquilucan. Marzo 2012