INTRODUO Em Microbiologia importante a esterilizao de meios, solues e material de vidro ou metal que se utiliza.

. Uma das formas de esterilizao obtm-se atravs do uso do Autoclave, para grandes quantidades de meios, ou de uma panela de presso, para pequenas quantidades de meios. Um produto microbiolgicamente estril quando no contem nenhuma forma de microrganismo vivo. A assepsia extremamente importante na microbiologia. Entende-se por assepsia todas as condies, gestos e atitudes tendentes a manterem o estado de ausncia de microrganismos contaminantes no meio em que atua. Alguns instrumentos de disseco como tesouras, pinas podem ser esterilizadas mergulhando em 70% de lcool (70 ml de etanol absoluto e 30 ml de gua destilada). O material contaminado, por exemplo as alas que tocaram em cultura de bactrias, devem ser descontaminadas atravs da chama de um bico de Bunsen, aparelho extremamente necessrio num laboratrio de microbiologia. As bocas de tubos contendo cultura de bactrias, as bocas de frascos de vidro contendo os meios de cultura, devem sempre que destapados ser chamuscados a chama do Bunsen. 1.1.TCNICA E PROCESSO DE ASSEPSIA importante ter claro os procedimentos que se deve adotar na manipulao segura dos meios, culturas bacterianas, de modo a evitar qualquer tipo de contaminao. Tais procedimentos incluem fazer a desinfeco da rea de trabalho e a antissepsia das mos sempre antes e depois de trabalhar. Trabalhar sempre na rea de segurana (aproximadamente 10cm) em volta da chama do bico de Bunsen); esterilizar adequadamente alas e agulhas de inoculao antes e depois do seu uso, evitando a criao de aerossis, para isso aquecendo sempre da base para a ponta e flambar a boca dos frascos e tubos antes e depois das inoculaes
1.2.Classificao dos meios de cultura Quanto composio: Naturais so aqueles de origem vegetal (um pedao de batata, po, frutas) ou animal (gema de ovo). Artificiais so aqueles constitudos de substncias qumicas podendo ser definidos ou indefinidos (complexos). Definidos: sabido toda a sua composio qumica. Indefinidos ou Complexos: desconhecido por si. Sabe-se apenas aproximadamente sua composio. Os meios utilizados na rotina so complexos.

Quanto ao seu estado fsico: Lquido so os caldos, desprovidos de Agar. Utilizados para transporte e para bactrias que j sofreram a ao de antimicrobianos. Semi-slido so aqueles que apresentam em sua composio at 1% de Agar. Geralmente utilizados para bactrias microaerfilas. Slido so aqueles que apresentam em sua composio 1,5 a 2,5% de Agar.

OBS: O Agar um polissacardeo extrado de algas, utilizado para solidificar os meios e que escolhido por no reagir com nenhuma bactria e por ser altamente resistente a variaes.

2.1.1.Semeadura por Isolamento Identificar um dado organismo como espcie baseia-se no preenchimento das caractersticas atribudas quela espcie. O reconhecimento da fonte ou origem do espcime (ambiente, espcie animal, tipo de patologia e localizao) do organismo s vezes fundamental para identificao e a correta caracterizao cultural do organismo em meios de isolamento primrio, assim como a execuo e interpretao da colorao e reao ao Gram so vitais para o sistema de identificao. Para isolar o microrganismo efetua-se a inoculao ou semeadura, utilizando a tcnica do esgotamento do inculo por estrias, tendo-se o cuidado de usar inteiramente toda a rea do meio para garantir a separao das bactrias, de modo que aps a incubao cada clula separada origine uma colnia. 2.1.2.Cultivo em tubos contendo meios de cultura lquidos Tal procedimento bastante til, pois possibilita a rpida e elevada multiplicao de microrganismos. Se o objetivo for o isolamento, os microrganismos podem ser crescidos nos meios de cultura lquidos adequados, seguido por semeadura em placas. A inoculao de microrganismos em meios de cultura lquidos pode ser feita com o auxlio de uma ala de platina previamente flambada ou ala descartvel esterilizada, caso os microrganismos sejam provenientes de meios slidos ou semi-slidos, ou atravs de uma pipeta, normalmente quando se est fazendo o repique de uma cultura que est armazenada em meio lquido.

2.1.3.Semeadura em placas Na maioria dos casos, o microorganismo a ser isolado faz parte de uma populao mista, sendo indispensvel o seu isolamento no sentido de obteno de cultura pura. Uma das maneiras de se obter uma cultura pura consiste no emprego da tcnica de semeadura, em que so obtidas colnias isoladas de microrganismos. As colnias so caracterizadas por suas caractersticas morfolgicas e, dependendo do objetivo, so cultivadas separadamente em meios slidos ou lquidos para a posterior identificao. A tcnica de semeadura tambm pode ser aplicada em determinados estudos com o objetivo apenas de cultivo ou para quantificar a populao microbiana. 2.1.4. Inoculao por estrias ou esgotamento em placas de gar A tcnica de semeadura por estrias mltiplas consiste em espalhar o material com o auxlio de uma ala bacteriolgica, fazendo estrias sucessivas at o esgotamento do material, de modo a obter-se um perfeito isolamento das bactrias existentes na amostra, que aps a incubao, formaro as colnias isoladas sobre a superfcie do gar. A execuo simples e devem ser tomados alguns cuidados para que realmente consiga o isolamento das bactrias. Primeiramente, deve-se flambar a ala de platina (ou ento pode-se utilizar alas de plstico descartveis previamente esterilizadas) e introduzi-la no meio contendo as bactrias. Fazer ento o estriamento na superfcie do gar da placa de Petri Aps a primeira estria, flambar novamente a ala, girar a placa cerca de 30 e puxar nova estria. Repetir esse passo pelo menos mais 2 vezes. Lembre-se de que a quantidade de material a ser inoculada deve ser mnima, sendo que em muitos casos, necessrio diluir o meio do qual os microrganismos so provenientes; caso contrrio, pode haver a justaposio das colnias e por isso no se pode isol-las. 2.1.5. - Mtodo de "espalhamento" em placa Consiste em espalhar o material (suspenso bacteriana na maioria das vezes) com o auxlio de um swab (para obteno de tapete uniforme) ou ala de Drigalski (para obteno de colnias isoladas aps diluio), fazendo a semeadura por toda a superfcie

da placa de Petri. Deve-se ter o cuidado de garantir que toda a superfcie da placa seja semeada, evitando regies sem semeadura. Recomenda-se que o procedimento de semeadura com o swab seja feito em trs direes distintas, com diferena de 30 graus, e com a ala em toda a superfcie, girando a placa. Objetivo Este relatrio teve como objetivo, executar tcnicas de preparo de material e montagem para esterilizao, treinar tcnicas de distribuio assptica, explanao sobre o microscpio, identificao das tcnicas de semeadura mais utilizadas na rotina bacteriolgica e cultivo de bactrias com finalidade de obteno de cultura pura, ou seja, uma populao onde todas as bactrias se originam de uma nica clula bacteriana. Materiais -Tubos de ensaio com Agar simples -Placas de Petri com Agar simples -Culturas bacterianas em Agar simples(em placa de Petri) -Ala e agulha de platina -Bico de Bunsen -Luvas descartveis Mtodos -Tcnicas de semeadura A finalidade bsica das tcnicas de semeadura permitir a transferncia (inoculao) de bactrias ou de uma cultura bacteriana de um material (secreo, alimento, etc) ou de um meio de cultura para outro (s) garantindo que apenas os microrganismos em questo sejam semeados.

De acordo com o tipo de meio de origem e destino bem como da finalidade especfica da inoculao, diferentes tcnicas so executadas, a saber: Semeadura em meios slidos. A. Meio Inclinado em tubos (utilizar ala ou agulhas).

Em estria sinuosa: semear com ala de platina, em ziguezague, partindo da base para a extremidade da superfcie inclinada do meio. Este tipo de semeadura permite a obteno de intensa massa de micro-organismos.

Em estria reta: semear com agulha de platina,em estria reta, partindo da base para a extremidade da superfcie inclinada do meio, ou em profundidade e superfcie. Este tipo de semeadura utilizado quando se necessita um inoculo pequeno de bactrias, como em provas bioqumicas para identificao bacteriana.

B .Procedimento para inocular um meio Agar inclinado a partir de uma Placa de Petri

C. Procedimento para repique de um meio inclinado para outro

Meios em p (camada alta)

Em picada em profundidade: com agulha de platina perfurar o centro do meio, sem movimentos de lateralidade e fazer o inoculo penetrar de 0,5 a 1,0 cm no centro do meio de cultura. Este tipo de semeadura bastante utilizado para conservao de bactrias no meio de cultura e quando o meio utilizado semislido, esta semeadura utilizada para a verificao da motilidade (As bactrias que cresceram somente ao redor do pico de semeadura no so mveis). D. Em placa de Petri Em superfcie Estrias mltiplas ou esgotamento: faz-se o inculo num ponto da superfcie do meio espalhando-se o mesmo por estrias em toda a placa, de modo a gradativamente esgotar o material contido no inculo. Preferencialmente usa-se um esquema de diviso da placa em 4 quadrantes sendo que a estria de cada quadrante toca no final da estria do quadrante anterior arrastando bactrias deste ltimo. Nesse caso, deve-se flambar a ala aps a inoculao de cada quadrante. Pode-se tambm optar por no tocar no final da estria do quadrante anterior, no sendo assim necessrio flambar a ala aps cada quadrante. A estria do ltimo quadrante ocupa a maior parte da placa. Alternativamente pode-se fazer 3 estrias, a primeira ocupando metade da placa e as outras duas um quarto de placa cada. Neste modo as estrias no se tocam. Este tipo de semeadura empregado para o isolamento de colnias bacterianas e obteno de culturas puras.

Resultados Na aula prtica seguinte, observamos em microscpio o material colhido(escarro de um dos alunos) da prtica anterior. A colnia apresentou-se na forma de bacilo, incolor, sem odor e muco.

Concluso Um isolamento bem feito fundamental no processo de identificao das bactrias, visto que a rea de isolamento fundamental para o desenvolvimento dos passos seguintes de identificao. Os gares Nutritivo so exemplos de meio de cultura que podem ser usados num primeiro passo de identificao das mesmas, visto que o Agar Nutritivo permite o crescimento de toda bactria, desde que no seja fastidiosa, tendo o bsico para o crescimento destes micro-organismos.

Referncias bibliogrficas: http://www.ufsm.br/microgeral/Praticas/Roteito%20pratica%20semeadura s.pdf http://www3.uma.pt/gcosta/docs/microbiology/prat1.pdf http://www.ebah.com.br/content/ABAAABNZMAF/relatorio-aula-praticamicrobiologia

Universidade Federal do Rio de Janeiro

Relatrio de Microbiologia
Tcnica de assepsia e semeadura bacteriana

Alunas: Ana Carolina Nobre Ana Caroline Pimentel Jssica Lays Letcia da Costa Raquel Riberio Yorhana de Azevedo Silva.

Maca, 2013.