ELECTOFORESIS La mayora de los polmeros biolgicos poseen carga elctrica y, por lo tanto, son capaces de migrar bajo la influencia

de un campo elctrico. El transporte de partculas a travs de un disolvente mediante un campo elctrico recibe el nombre de electroforesis Una forma usual de caracterizar un a macromolcula es la determinacin de la velocidad con que se mueva al someterse a un campo elctrico. Esta propiedad puede ser utilizada para calcular el peso molecular de una protena, para distinguir molculas por su carga neta o su forma, para detectar cambios de aminocidos, de restos polares o no polares y para separar cuantitativamente distintas especies moleculares. FUNDAMENTO Cuando una mezcla de molculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo elctrico, estas experimentan una fuerza de atraccin hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las molculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el ctodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el nodo (el polo positivo). El desplazamiento de un in en un campo elctrico es la resultante de dos fuerzas, la de atraccin y la de resistencia. La fuerza de atraccin depende del nmero de cargas por partcula, del signo delas cargas y del grado de disociacin segn el pH. Tambin depende de la magnitud del campo elctrico, del tiempo de exposicin a dicho campo y de los cambios de temperatura durante la separacin. Los factores que se oponen al desplazamiento electrofortico exigen numerosos clculos matemticos; entre los que se encuentran el tamao y forma del in, la viscosidad del medio, la concentracin y la solubilidad inica y las propiedades de absorcin del medio de soporte.

La carga elctrica de una molcula puede ser resultado de la ionizacin de grupos disociables, o de la unin de una partcula neutra con un electrolito. La ionizacin depende del pH de la solucin y del pk de los grupos disociables, y del desplazamiento es proporcional al grado de disociacin. El grado de disociacin puede calcularse mediante la ecuacin de Henderson-Hasselbalch a un pH dado.

La fuerza F que acta sobre una molcula con carga, es producto de la intensidad S del campo elctrico y la carga neta Q de las partculas mviles. F= SQ = (V/d) Q Donde V es el voltaje y d la distancia entre los electrodos. La intensidad del campo es el potencial elctrico en voltios, dividido entre d centmetros. Por consiguiente se puede modificar la velocidad de desplazamiento de un in cambiando tanto la distancia entre los electrodos como el potencial elctrico. La fuerza resistente F es funcin del tamao y forma de la partcula y de la viscosidad del medio, segn la ley de Stokes: F= 6 r Donde r es el radio inico de una partcula esfrica; es la viscosidad; y la velocidad el in, o sea su desplazamiento por unidad de tiempo. Puesto que , movilidad elctrica, representa el desplazamiento de un in en un campo de intensidad unitaria, S es una constante igual a uno, y la velocidad equivale a la movilidad, por lo cual: = Q/6 r De esta forma la movilidad electrofortica es directamente proporcional a la carga neta e inversamente proporcional al tamao de la partcula y a la viscosidad de la solucin. Sin embargo cuando vara la temperatura, la movilidad tambin vara: Log = a/T + b Puesto que es imposible llevar a cabo la electroforesis en ausencia de otros electrlitos, en particular los de los amortiguadores empleados para mantener un pH constante, la movilidad puede expresarse de la siguiente forma: =(4 Ce/o.327x10^8D) T La suma de todas estas fuerzas provoca que las molculas no migren de una manera homognea, de tal manera que, si las molculas son colocadas en un cierto lugar de solucin, los iones comenzaran a moverse formando un frente cuya anchura aumentara con el tiempo. Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el movimiento de las molculas empleando un medio que oponga ms resistencia a dicho movimiento. Tcnicas Electroforticas La tcnica clsica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depsitos independientes que contienen ambos al electrolito y estn unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de un pequeo trazo transversal en la tira. La distancia

de migracin se mide en relacin un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular. ELCTROFORESIS DE FRENTE MOVIL (LIBRE): las macromolculas estn presentes en toda la disolucin y su posicin se determina en funcin del tiempo por ptica de Schlieren. Este mtodo es mtodo es una tcnica analtica que ha sido utilizada principalmente para la determinacin de las movilidades y puntos isoelctricos de las protenas. Sin embargo dada su poca utilidad de la determinacin cuantitativa de la movilidad, es muy poco usada. ELECTROFORESIS ZONAL: La disolucin a tratar se aplica como una mancha, o una banda, y las partculas migran a travs de un disolvente utilizado adems en un medio soporte inerte y homogneo, tal como el papel o ciertos tipos de geles. Esta tcnica se utiliza para analizar mezclas, para determinar la pureza se una muestra, para detectar cambios de movilidades o de conformacin y para la purificacin de sustancias. ELECTROFORESIS CONTINUA: la muestra se aplica tambin en una zona pero se aade continuamente a lo largo de todo el proceso.

REFERENCIAS 1.-FREIFELDER, D. TECNICAS DE BIOQUMICA Y BIOLOGA MOLECULAR. ESPAA: ED. REVERT. 1981, PP 234-240 2.-RENDINA G. TECNICAS DE BIOQUIMICA APLICADA. MXICO: INTERAMERICANA; 1974, pp 64-66 3.-http://javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/electroforesis.html 4.-http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/Exposicion_electroforesis_5087.pdf 5.- http://depa.fquim.unam.mx/proteinas/estructura/EPpage.html