2. Centrifugacin.

La centrifugacin es uno de los mtodos de separacin de mezclas que puede usarse cuando la sedimentacin es muy lenta; para acelerar esta operacin la mezcla se coloca en un recipiente que se hace girar a gran velocidad; por accin de la fuerza centrifuga (fuerza-g) los componentes ms pesados se sedimentan ms rpidamente y los livianos quedan como sobrenadante. Luego la operacin que se sigue es la decantacin. La centrifuga es el elemento central de la centrifugacin. 2.1 Antecedentes del equipo. La invencin de la mquina centrfuga que purga masa cocidas azucareras ha sido atribuida a Schotter en 1848 y a Dubrunfaut, pero las autoridades en esta materia estn de acuerdo en que fue David Weston quien obtuvo la patente de la centrfuga suspendida en 1852 y la introdujo al trabajo prctico azucarero en Hawai, en 1867. Hasta bien entrado el siglo XX, al tipo de mquina centrfuga que est en uso general en la actualidad se le llamaba centrfuga Weston. Fue para trabajo azucarero que se desarrollaron equipos de filtracin de varios tipos, entre ellos el filtro Taylor de bolsas, de hace ms de 100 aos; el filtro prensa, fue sugerido por Howard alrededor de 1820, pero fue introducido con xito por Needham en 1853; y los filtros modernos de lminas, tales como los Kelley, Sweetland y Vallez, fueron introducidos de 1910 a 1920. 2.2 Partes de la centrifuga. Sus componentes son:

Rotor: Dispositivo que gira y en el que se colocan los tubos. Existen varios tipos: o Rotor basculante: Los tubos se colocan en un dispositivo (cestilla) que, al girar el rotor, se coloca en disposicin perpendicular al eje de giro. As pues los tubos siempre giran situados perpendicularmente al eje de giro.

o Rotor de ngulo fijo: Los tubos se insertan en orificios en el interior de rotores macizos. El caso extremo es el de los rotores verticales en los que el tubo se sita paralelo al eje de giro. Este tipo de rotores es tpico de ultracentrfugas y se emplea en separaciones de molculas en gradientes de densidad autogenerados (por ej. de cloruro de cesio). Motor: Es elctrico y capaz de girar a docenas de miles de veces por minuto. Permite que la tcnica sea ejecutada. Cmara de Vaco: Es una pieza cncava que sirve para contener dentro de ella el rotor y su respectivo soporte que lo une o conecta con el motor. Control de Velocidad, Tiempo y Temperatura: Regula la velocidad del dispositivo al igual que el dispositivo regulador de

la temperatura necesaria para la centrifugacin de las muestras.

2.3 Principio de funcionamiento. El centrifugado es una sedimentacin acelerada, ya que la aceleracin de la gravedad se sustituye por la aceleracin centrfuga, velocidad angular de giro de la centrifugadora y , donde es la

es la distancia al eje de la

centrifugadora. Puesto que la velocidad angular de giro puede ser de miles de revoluciones por minuto, se alcanzan aceleraciones mucho mayores que la gravedad. El centrifugado, como la sedimentacin, est gobernado por la ley de Stokes, segn la cual las partculas sedimentan ms fcilmente cuanto mayor es su dimetro, su peso especfico comparado con el del fluido, y cuanto menor es la viscosidad del mismo. Es importante entender que el papel del fluido es esencial, pues sin su viscosidad todas las partculas caeran a la misma velocidad.

2.4 Tipos de centrifugadoras.

a) Segn el rango de velocidades de giro. Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas. De pequeo tamao y sin refrigeracin. Alcanzan una velocidad mxima de 5000 rpm. Son tiles para la separacin de partculas grandes como clulas o precipitados de sales insolubles. Las centrfugas micrfugas son una variante de las anteriores que permiten llegar a velocidades de ms de 10.000 rpm, Los volmenes de trabajo son muy pequeos. Son tiles en el campo de la biologa molecular. Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre 18.000 y 25.000 rpm. Son refrigeradas y algunas tienen sistema de vaco para evitar el calentamiento del rotor a causa del rozamiento con el aire. Son tiles en la separacin de fracciones celulares, pero insuficientes para la separacin de ribosomas, virus o macromolculas en general. Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen sistemas auxiliares de refrigeracin i de alto vaco. Hay ultracentrfugas analticas que permiten la obtencin de datos precisos de propiedades de sedimentacin (coeficientes de sedimentacin, pesos moleculares), y preparativas, tiles para aislar partculas de bajo coeficiente de sedimentacin (microsomas, virus, macromolculas).

b) Segn el propsito. Centrifugacin analtica. Tiene como objetivo medir las propiedades fsicas que sedimentan, tales como su coeficiente de sedimentacin o su masa molecular. Especialmente en la variante ultra centrifugacin analtica. Las molculas se observan mediante un sistema ptico durante la centrifugacin. Los tubos de centrifuga deben ser de cuarzo para dejar pasar la luz visible y ultravioleta. Rotor basculante, observacin en vertical.

Centrifugacin preparativa. Es de uso ms comn. Su objetivo es aislar partculas, celular o molculas para su anlisis o utilizacin posterior. En general, se emplea mayor cantidad de muestra que en la analtica.

c) Segn el medio en el que se centrifuga y la forma en que se aplica la muestra. Las partculas se pueden separar en funcin de la velocidad de sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la densidad (centrifugacin isopcnica). La centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica constituyen ejemplos de centrifugacin mediante un gradiente de densidades. Centrifugacin diferencial. Es el mtodo ms comn de separacin. En este mtodo el tubo de centrifuga se llena con una mezcla uniforme. Tras la centrifugacin se obtienen dos fracciones: un tubo que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material no sedimentado. El mtodo es bastante inespecfico y no se puede saber si la partcula buscada quedara en el sobrenadante, en el tubo o repartido entre ambos; sin embargo es una tcnica muy til para aislamiento de organeras subcelulares. Centrifugacin en Gradiente de Concentracin: este mtodo es algo ms complicado que la centrifugacin diferencial. La tcnica no solo permite la separacin de varios sino de todos los componentes de la muestra, tambin permite realizar medidas analticas. Este mtodo implica la utilizacin de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior. Existen 2 variaciones dentro de la centrifugacin en gradiente de densidad: o Centrifugacin de equilibrio en gradiente o isopicnica: esta tcnica se emplea para separar partculas similares en tamaos pero distintas en densidad. Puestos que las protenas poseen casi la

misma densidad, este mtodo no suele utilizar para su separacin, sin embargo, en situaciones donde intervienen diferentes

densidades, la centrifugacin isopicnica es el mtodo adecuado. o Centrifugacin zonal: la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de densidad preformado. Bajo fuerza centrifuga las partculas comenzaran a sedimentar a travs del gradiente, movindose cada partcula a diferentes velocidades dependiendo de su masa.

2.5 Aplicaciones de la centrifugacin. La centrifugacin es una de las tcnicas de investigacin ms importantes y de mayor aplicacin en bioqumica, biologa celular y molecular y en medicina. Son muchas las aplicaciones de la centrifugacin y pueden incluir la sedimentacin de clulas y virus, la separacin de orgnulos subcelulares y el aislamiento de macromolculas, tales como ADN, ARN, protenas o lpidos. Las investigaciones y aplicaciones clnicas de hoy en da dependen del aislamiento de clulas, orgnulos subcelulares y macromolculas, por lo general de alto rendimiento y por esta razn la centrifugacin es de muy buena ayuda para avances de estos tipos. Por ejemplo: Una aplicacin tpica consiste en acelerar el proceso de sedimentacin, dividiendo el plasma sanguneo y el suero sanguneo en un proceso de anlisis de sangre. Es muy usada en laboratorios de control de calidad, de fbricas que elaboran zumos a base de ctricos, para controlar el nivel de pulpa fina de estos, separando la pulpa fina del zumo exprimido. Otra aplicacin de las centrfugas es la elaboracin de aceite de oliva. En ella las aceitunas una vez molidas y batidas se introducen en una centrfuga horizontal en la que se separa el aceite que es la fraccin

menos pesada del resto de componentes de la aceituna; agua, hueso, pulpa etc. Una aplicacin importante es la separacin del uranio 235 del uranio 238.