TESIS de Stevia Rebaudiana

RESUMEN
RESUMEN
Stevia rebaudiana Bert. (yerba dulce), es una planta arbustiva semiperenne, originaria del noreste del Paraguay, perteneciente a la familia de las compuestas. Su importancia econmica radica en que, en sus hojas, posee una sustancia, denominada estevisido, constituida por una mezcla de por lo menos seis glucsidos
diterpnicos, que es 100 a 400 veces ms dulce que la sacarosa y que por sus caractersticas fsico-qumicas y toxicolgicas permite su inclusin en la dieta humana para ser utilizada como un edulcorante diettico
natural, sin efectos colaterales.
Su inclusin en el cdigo alimentario nacional (Resolucin 101 del 22-2-1993) y la posibilidad de
exportacin ha incrementado el inters en esta especie por parte de los productores.
Naturalmente se propaga por aquenios, pero el bajo valor cultural de las semillas (10 al 15 %) y la
heterogeneidad de las poblaciones resultantes indican la necesidad de desarrollar y/o ajustar tcnicas
alternativas, sencillas y econmicas, que permitan la propagacin masiva de genotipos selectos.
El objetivo del presente trabajo de intensificacin es estudiar algunos factores que afectan la propagacin vegetativa de esta especie, para lo cual se utilizaron estacas apicales y subapicales, provenientes de plantas clonadas, de origen japons, que se encuentran en el campo experimental con una de nuestra facultad, rizognica las de que se
trataron
solucin
cido
indolbutrico (25 mg/l durante 24 horas), plantndose posteriormente en bandejas de plstico, sobre un
sustrato de turba y humus de lombriz (1:1) turba y arena (1:1). A las cuatro semanas, se evalu, porcentaje de enraizamiento, longitud y peso de races y peso de la parte area.
Esta experiencia se repiti a lo largo del perodo de crecimiento anual (desde primavera a fin de otoo), siempre que en el stand de plantas madres, los vstagos alcancen un tamao que permita extraer estacas apicales y subapicales.
Se
realiz
un
ensayo
factorial
con
medidas
repetidas en el tiempo, con un diseo de bloques al azar y los resultados se evaluaron a travs de un anlisis de varianza.
INTRODUCCION
INTRODUCCIN:
De los cuatro sabores bsicos: dulce, salado, amargo y agrio, el primero es el que produce mayor placer este fisiolgico, sabor y estaba an hoy, al ser humano. Tradicionalmente, con la se e
ntimamente el de sabor
relacionado de este de
sacarosa utiliza
compuesto la calidad
como
patrn
comparacin
intensidad del sabor dulce de un producto. Adems de su sabor, la sacarosa presenta una serie de propiedades fsicas, qumicas y biolgicas que la convierten en un ingrediente ideal para la industria de la alimentacin y la cocina familiar.
Lamentablemente, existen motivos por los cuales su uso debe ser limitado y/o eliminado de la dieta de sin
muchas personas (ejemplo: diabetes, obesidad), y
embargo, el hombre no parece dispuesto a renunciar al placer que le produce el sabor dulce, por lo que ha buscado sustancias naturales o artificiales capaces de sustituir al azcar.
A pesar de la gran cantidad de sustancias que poseen sabor dulce, muy pocas de ellas se utilizan en forma limitan extensiva su uso como son edulcorantes. de diversa
5
Las
razones
que
ndole:
legales,
econmicas, toxicolgicas, etc.; y es por ello que en la actualidad existen pocos edulcorantes que se utilizan en forma extensiva y cuya comercializacin alcance un
volumen apreciable. Los ms importantes son: sacarina, ciclamato, aspartamo, acesulfame-K y estevisido
(Cardozo y Rodrguez, 1986).
El poder edulcorante de estas sustancias vara entre si y para la cuantificacin del sabor dulce de las mismas se recurre a mtodos de carcter subjetivo,
basados en la degustacin. Los resultados obtenidos con estas sustancias puras y estos mtodos no pueden ser extrapolados para predecir su comportamiento en la
formulacin de un alimento
Al producirse la mezcla de un edulcorante con las dems sustancias componentes de la formulacin de un alimento, normalmente se producen interacciones y
cambios ms o menos profundos en el sabor. Algunos de estos cambios pueden ser favorables y aprovecharse para mejorar la calidad o el poder de los edulcorantes, ya que en los mismos, al mezclarse, se produce una
expansin del sabor dulce, es decir, se consigue una dulzura superior a la simple aditividad de los poderes de ambos edulcorantes por separado (Morita, 1977).
Por lo general, el sabor dulce de un edulcorante nunca es "puro" como en la sacarosa, ya que normalmente viene acompaado de sabores secundarios no deseados. El caso ms comn de sabor secundario es el amargo y/o metlico, debido a que los centros receptores del mismo se hallan localizados en las vecindades de los del sabor dulce. Existen sustancias, que adicionadas en pequeas cantidades, son capaces de suprimir o disminuir algunos sabores indeseables, de los utilizndose alimentos. ampliamente Ejemplo: la en la
formulacin
mezcla
ciclamato-sacarina en la relacin 10:1.
Asimismo, existen otras sustancias que, adicionadas en pequeas cantidades, sabores de aumentan la mezcla, la intensidad ejemplo, de el
determinados
por
cloruro de sodio y los condimentos (Morita, 1977).
1 - Propiedades de un edulcorante ideal:
Un
edulcorante
"ideal"
deber
satisfacer los
siguientes requerimientos: (Ishima y Kakayama, 1976).
- Tener el sabor dulce de la sacarosa, sin componentes secundarios indeseables.

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- Tener bajo contenido calrico, referido a una misma base de poder edulcorante. Esta condicin puede ser satisfecha bien por poseer un alto
poder edulcorante o por no ser metabolizado por organismo.
- Poseer propiedades fsicas similares a la sacarosa: resistencia a las temperaturas elevadas y a los ph comunes en los alimentos, ser soluble en agua, poseer similares caractersticas de textura y viscosidad que la sacarosa en iguales condiciones, no ser higroscpico, etc.
- Ser inerte con respecto a las sustancias presentes en la formulacin de alimentos y no interferir en sus sabores.
- No ser txico por si mismo, ni producir sustancias txicas por descomposicin o reaccin.
- Ser estable y mantener sus caractersticas con el tiempo.

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- No poseer propiedades carcingenicas
En la prctica, no existe ninguna sustancia que satisfaga todas estas condiciones, lo que obliga, en algunos casos para algunas a limitar el uso de un edulcorante dado aplicaciones o recurrir a mezclas de
edulcorantes, uso de aditivos, etc.
2 - Caracterizacin de los edulcorantes de uso extensivo: (Ishima y Kakayama, 1976)
2.1 - Sacarina:
Este compuesto es cido y poco soluble en agua, por lo que normalmente Es un se utiliza de como sal de sodio o
calcio.
producto
sntesis.
Su
poder
edulcorante, referido a la sacarosa, vara de 200 a 700, dependiendo de la concentracin (300 en sus usos ms comunes).
La mayor limitacin para su uso es su sabor amargo y metlico, muy difcil de enmascarar hasta la aparicin del ciclamato. Asimismo, en los ltimos aos, el uso de
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la sacarina se ha cuestionado duramente, por comprobarse que produca tumores malignos, en mezclas con ciclamato, prohibindose su uso en EE.UU. y Canad.
Actualmente,
se
comercializa
en
Argentina,
Australia, Austria, Blgica, Brasil, Francia, Holanda, Italia, Japn, Mxico, Portugal, Sudfrica, Reino Unido, EE.UU., Espaa y Alemania.
2.2 - Ciclamato:
Normalmente se usa como sal sdica o clcica, y es muy soluble en agua. El poder edulcorante referido a la sacarosa es de 30 en las concentraciones ms utilizadas. La calidad del sabor es muy diferente al de la sacarosa, ya que adems de estar acompaado de sabores agrio y amargo, tiene distintas velocidades de percepcin y de duracin de sabor. Es un producto de sntesis.
En
1969, la
se
descubrieron
las
propiedades
carcinognicas de
ciclohexilamina, producto de la
metabolizacin del ciclamato, siendo prohibido su uso en EE.UU., Canad y Reino Unido.
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Actualmente se utiliza en: Argentina, Blgica, Brasil, Francia, Italia, Holanda, Alemania, Mxico,
Portugal, Espaa y Sudfrica.
2.3 - Aspartame:
Presenta una solubilidad del 1% a 20C; se produce industrialmente a partir de aminocidos por diversos
caminos. El poder edulcorante se encuentra entre 100 y 400, aunque a las concentraciones habituales vara entre 150 y 200.
Su sabor es muy parecido al de la sacarosa, hasta el punto que algunas personas prefieren su sabor al de la misma.
Es un edulcorante muy adecuado para una gran variedad de alimentos, debido a la sabor con la sacarosa, aunque similitud de su debe evitarse su
utilizacin en los casos de coccin o calentamientos prolongados.
Actualmente est permitido en Argentina, Francia, Blgica, Luxemburgo, Filipinas, Brasil y EE.UU.
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2.4 - Acesulfame-K:
Es
la
sal
potsica
de
un
derivado
de
la
oxatiazinona. Tiene un poder edulcorante de 170 a 300. Presenta buen sabor y buenas propiedades de mezcla.
3 - Caractersticas edulcorantes del estevisido:
3.1 - La Stevia rebaudiana Bert contiene en sus hojas, principios edulcorantes que han sido reconocidos y
utilizados por siglos por las poblaciones nativas que viven en la zona de origen de esta especie (Paraguay) (Sumida, 1980).
La
designacin
de
estevisido,
principio
edulcorante de la especie, se debe a los investigadores franceses Bridel y Lavielle que en 1931 cristalizaron el principio edulcorante y determinaron que es 300 veces ms dulce que el azcar, y que no posee efectos txicos al realizar pruebas de laboratorio con animales (Bridel y Lavielle, 1931).
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Asimismo, se demostr que el estevisido es el edulcorante encuentra natural en la no nitrogenado y ms dulce que se
naturaleza
que
est
compuesto
solamente de carbono, hidrogeno y oxgeno, siendo su formula C38 H60 O18.
En 1952 un equipo de investigadores americano del National Institute of Arthritis and Metabolic Diseases, dirigidos por el Doctor Hewit y Fletcher jr.,
determinaron la estructura qumica del estevisido; el que result ser un glucsido diterpnico con un aglycon denominado steviol (Mosetting y Nes, 1955).
Durante
la
dcada
de
1970,
investigadores
japoneses de las Universidades de Hiroshima y Hokkaido identificaron otros principios edulcorantes en las hojas de Stevia: Rebaudisidos A, B, C, D y E, Dulcsidos A y B y otros de menor importancia. El rebaudisido A es el que presenta el mayor grado de dulzor (aproximadamente 350-400 veces ms dulce que el azcar) y, es por ello que, se procura seleccionar individuos con altos
contenidos de este componente (Kohda, 1976). 3.2 - Propiedades fsico-qumicas del estevisido de inters en el procesado de alimentos: (Fujita, 1979)
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-Resistencia al calor: presenta estabilidad a las temperaturas habituales en el procesado de alimentos. Se funde a 238 C.
-Alteracin del color: no se observa oscurecimiento, an en las condiciones ms rigurosas de procesado de alimentos.
-Solubilidad: es altamente soluble en agua, alcohol etlico y metlico e insoluble en ter.
-Resistencia al ph: es suficientemente estable entre ph 3 a 9.
-Contenido de caloras: no es metabolizado por el organismo, por lo tanto se convierte en no calrico, y es adecuado para usos dietticos.
-Capacidad osmtica: presenta buenas propiedades osmticas para la preparacin de pikles dulces (Japn).
-Fermentabilidad: no es fermentable, ni atacado por las bacterias orales. No es hidrolizable por Aspergilus nger, ni por el fermento seco de levaduras. Se hidroliza con cido sulfrico
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diluido y por diastazas.
Otras propiedades:
Dentro de la medicina popular paraguaya se utiliza como hipoglicemiante (Miquel, 1977), digestivo,
cardiotnico, diurtico, anticido, etc (Jordn Molero, 1984; Yang et al, 1979).
3.3 -
Propiedades edulcorantes: (Fujita, 1979)
La mayor parte de los autores coinciden en que el estevisido es 300 veces ms dulce que la sacarosa y el rebaudisido A, 400. Pero debido a las extraordinarias
caractersticas de potenciar su dulzura por la accin de diversas sustancias comunes en la formulacin de
alimentos, tales como cloruro de sodio, leche, cidos, etc., se puede fijar como valores razonables de poder edulcorante para la mezcla natural de glucsidos, un rango de 100 a 400, dependiendo de cada alimento. 3.3.1 - Calidad del sabor dulce:
Conjuntamente con el sabor dulce, el estevisido presenta un sabor secundario, persistente, definido como
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sabor
regaliz-mentol,
detectable
altas
concentraciones. Este sabor secundario es evidente en el extracto natural. El rebaudisido A posee un sabor dulce ms puro.
Este sabor no deseado se puede enmascarar con la utilizacin de combinaciones de otras sustancias
edulcorantes. Los
mejores resultados se
obtienen con
sacarosa y glucosa, siguindoles la fructuosa, sorbitol y malitol.
Con respecto a la velocidad de percepcin del sabor del estevisido, se observ que la curva de intensidad percibida en funcin del tiempo, tiene una gran
similitud con la correspondiente a la sacarosa en lo que respecta a la ubicacin del mximo, pero presenta una diferencia en la duracin o persistencia del sabor,
siendo menor, aunque la similitud es superior a la de cualquier otro edulcorante actualmente utilizado.
Con el fin de suavizar la persistencia del sabor dulce, se obtienen buenos resultados con el agregado de fructuosa, glucosa, pptidos, aminocidos, cidos
ctrico, actico, lctico, mlico y tartrico.
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El
estevisido
presenta
sinergismo
con
el
aspartame, sacarina, glucosa, fructuosa y muchas otras sustancias edulcorantes.
4 - Inocuidad del estevisido:
La primera prueba de inocuidad del estevisido es la utilizacin de las hojas de Stevia por los indgenas guaranes durante varios siglos, y por los habitantes de Paraguay, hasta la actualidad, sin observarse efectos colaterales. Ya aislados los principios activos de la Stevia, comenzaron los ensayos de laboratorio con el fin de detectar posibles efectos toxicolgicos. En Poniaret y Lavielle, observaron que tras 1931, la
administracin subcutnea del mismo en cobayos, no se producan afecciones hemolticas ni otros efectos
txicos (Felippe, 1982).
En 1968, Plana y Kuc , informaron que suministrando una solucin de estevisido a ratas, se observaba una reduccin del 20 al 30 y % de la y fertilidad. ms tarde,
Posteriormente,
Persinos
Whistler,
Doffmmann y Nes demostraron que dicho efecto no se deba al estevisido sino al dihidroesteviol, compuesto
inexistente en las hojas de Stevia y producido durante

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la
extraccin
purificacin
defectuosas
(Felippe,
1982).
En Japn, previo a la utilizacin masiva del estevisido, se realizaron rigurosos ensayos que
probaron su inocuidad. El Ministerio de Salud de Japn, coordin un ampli estudio en el cual nueve grupos
cientficos estudiaron en forma independiente la accin del estevisido. Por unanimidad se concluy que el
estevisido, con un 90 % de pureza, no posea actividad mutagnica o teratognica, coincidiendo, adems, con
otros estudios realizados anteriormente (Fujita, 1979)
Por otra parte, se observaron efectos beneficiosos de esta sustancia en la prevencin de caries dentales, no slo por la disminucin de azcares en la boca, sino que, adems se demostr que el mismo inhibe el
desarrollo de bacterias orales cariognicas (Felippe, 1977; Sakaguchi y Kan, 1982).
5 - Utilizacin actual del estevisido:
La rpida y amplia aceptacin que ha tenido el estevisido en Japn (consumo aproximado de 4000 ton/ao (CEPEX, 1982)), demuestra
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significativamente
sus
potencialidades.
Se
debe
recordar
que
los
productos
edulcorantes que dominan el mercado mundial (sacarina, ciclamato), cuentan con serios cuestionamientos por sus propiedades nocivas para la salud (Felippe, 1977;
Sakaguchi y Kan, 1982; Jordn Molero, 1984), y debe adicionarse el atractivo que, en la actualidad, para la opinin pblica, tiene el origen natural y edulcorante del estevisido.
Adems del Japn otros pases del Lejano Oriente donde se produce el estevisido son Corea del Sur y Taiwan (CEPEX, 1982).
En Latinoamrica su consumo es habitual en dos pases. En Paraguay se utiliza, en hojas, desde siempre, y desde 1988 en Brasil, ya que en Maring (Paran), se comenz la industrializacin del mismo (Marcavillaca y Divo de Sesar, 1993).
Pases
interesados
en
la
produccin
y/o
industrializacin de Stevia rebaudiana Bert., incluyen a Alemania, Canad y EE.UU., lo que implica, que se
necesitarn grandes cantidades de materia prima abastecer la demanda.
para
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Actualmente los usos ms destacados del estevisido son en: bebidas, gomas de mascar, helados y cremas
heladas, alimentos de bajo contenido calrico, pikles, salsas 1985). y otros productos de sabor delicado (CEPEX,
6 - Formas de comercializacin: (CEPEX, 1982)
En
el
mercado
japons
se
encuentran
muchos
productos a base de estevisido o extracto purificado de stevia, comercializados bajo diversas denominaciones o marcas comerciales. En su composicin nicamente
participan compuestos de origen natural, considerndose que puede satisfacer las necesidades de cualquier tipo de producto alimenticio.
7 - Otros campos de aplicacin: (CEPEX, 1982)
En el caso de que la sustitucin del azcar por el estevisido se hiciere con

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vistas
nicamente
una
disminucin
de
costos,
la
proporcin
recomendada
es
sustituir el 30 % de la sacarosa, ya que as se obtiene el mximo de sinergismo, sin que se note el sabor
caracterstico del estevisido.
8 - Mercado mundial de edulcorantes: (CEPEX, 1989)
La situacin presentada por el mercado mundial de edulacorantes de alto poder ha presentado muchos cambios fundamentales cuestionamientos debido a que a las prohibiciones sometidos los o ms
fueron
importantes, y a que los efectos indeseables tuvieron diversa incidencia en los distintos pases.
A continuacin se analizar la situacin aproximada del mercado para fines de la dcada de 1980.
8.1 - Sacarina:
Es el edulcorante ms utilizado. El consumo y la produccin puede ser desglosado de la siguiente manera:

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Consumo(kg/ao)
Produccin(kg/ao)
EE.UU. Europa Japn Otros Total
3.500.000 2.000.000 800.000 2.700.000 9.000.000
2.270.000 2.800.000 3.930.000 9.000.000
El precio actual de la sacarina sdica en EE.UU. es de 8,42 U$S/kg.
8.2 - Ciclamato:
Antes de su prohibicin en EE.UU., se haba constituido en el edulcorante ms utilizado en volumen, ya que solamente en EE.UU. su produccin haba alcanzado los 9.500.000 kg/ao. En la actualidad, se sigue
produciendo en dicho pas, pero en una escala reducida y para exportacin. No se conoce el consumo mundial. El consumo en Europa alcanz los 1.300.000 kg en 1982. Su precio fue de 9,90 U$S/kg.
8.3 - Aspartame:
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Se considera que su produccin aproximada fue de 1.000.000 kg, en 1983. Este volumen es considerable, teniendo en cuenta que la aprobacin de uso era muy reciente, y con muchas limitaciones, en EE.UU., Gran Bretaa, Francia, Blgica y otros pases. Su precio en dicho ao fue de 152 U$S/kg.
8.4 - Estevisido:
En Japn, en 1979, la produccin y consumo fue de 140.000 kg, aunque se consideraba que en dicho ao el mercado japons poda absorber 1.400.000 kg, equivalente al 10 % del consumo de sacarosa en poder edulcorante. En ese mismo ao la produccin kg, mundial era de China
aproximadamente
700.000
incluyendo
Japn,
Popular y Corea. No se cuenta con informacin oficial respecto a precios, pero se estima en alrededor 120 U$S/kg (Marcavillaca, comunicacin personal).
9 - Perspectivas del estevisido:
9.1 - Mercado mundial:
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El mercado total de edulcorantes de alto poder y bajo contenido calrico, es equivalente a entre 12 a 15 millones de kg de estevisido por ao. La conquista de una pequea fraccin de este volumen, por el
estevisido, representara cifras significativas.
Teniendo edulcorantes que
en
cuenta dominan
que el
los
tres
productos mundial,
mercado
especialmente en los pases occidentales, cuentan con serios cuestionamientos por sus propiedades nocivas para la salud, las posibilidades del estevisido como
sustituto de los mismos son buenas, presentndose como su principal limitacin la imposibilidad de provisin de materia entrar prima a en tan gran en pasar escala. el por Adems, mundo todas antes de
competir deber
occidental las pruebas
industrializado,
previas a su aprobacin, especialmente las de la Food and Drug Administration de EE.UU. En este organismo, se encuentra actualmente en los prximos 10 productos en ser aprobados (Marcavillaca, comunicacin personal).
10 - Evolucin histrica:(Marcavillaca y Divo de Sesar, 1993)
1887- Se tuvo la primera referencia de la especie, llegando la noticia al naturalista Dr. Moiss Bertoni, a
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travs de mineros e indios de la regin de Caaguaz y Monday de la Repblica del Paraguay.
1899- El Dr. Bertoni describe a la planta como Eupatorium.
1900- El qumico paraguayo Ovidio Rebaudi, realiza los primeros estudios del componente dulce de la hoja.
1904- Bertoni verifica que la planta pertenece al gnero Stevia.
1905- Se registra como Stevia rebaudiana Bertoni en los libros internacionales.
1908- Juan B. Aranda Jimnez en Puerto Bertoni-Alto Paran, realiza el primer cultivo extensivo, obteniendo 1000 kg/ha de hoja seca. P. Rasennack (Alemania) realiza los primeros anlisis qumicos y cristaliza el
componente dulce de la hoja.
1909- Karl Dietrich (Alemania) asla dos sustancias dulces de la muestra enviada por Aranda Jimenz y las denomina eupatrina y rebaudina.
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1913- Aranda Jimenz enva muestras a Europa a los laboratorios de Amberes, Wiesbadenn y Hamburgo, donde se aslan tambin los mismos compuestos.
1915- Kobert considera a la eupatrina como una saponina y concluye que existen dos tipos: una cida y otra neutra con propiedades hemolticas.
1919- Se envan muestras a la Facultad de Agronoma y Veterinaria de la Repblica Argentina, donde se
realizan anlisis y estudios de las hojas, llegndose a la conclusin que se trata de una especie de alto valor econmico por su poder endulzante.
1921- El Dr. Bertoni pide que el cristal denominado eupatorino sea designado con un nombre que recuerde el gnero de la planta, para lo cual propuso stevina y la Unin Internacional de Qumica lo adopt como
estevisido.
1931-
Bridel
Lavielle,
qumicos
franceses,
cristalizan el estevisido con un 6 % de rendimiento y determinaron que su poder endulzante era 300 veces mayor que el azcar de caa y rectificaron la frmula, Lavielle que el quedando finalmente en refutan el trabajo de C38H60O18. Pomaret y Kobert,
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demostrando
estevisido no tena relacin con la saponina y que la propiedad hemoltica era debido a las impurezas
presentes, adems encontraron que el estevisido no es asimilado por el organismo, siendo eliminado en su forma original.
1942- Es publicado en Inglaterra un artculo que presenta al estevisido como sustituto del azcar.
1945- El Instituto Biolgico Argentino ensaya y obtiene algunos preparados para diabticos.
1946- Una expedicin encabezada por Aranda Jimenz, contratada por el Servicio Tcnico Interamericano de
Cooperacin Agrcola, se dirigi al lugar de origen en la zona de Amanbay y lleg a traer 780 plantitas que plantaron en el Instituto Agronmico de Caacup.
1951- Nuevamente, Aranda Jimenz y Arturo Florentn del Ministerio de Agricultura y Ganadera recolectaron en el mismo lugar, 350 plantas, que plantaron en el Colegio de Agricultura "Mariscal Estigarribia" de San Lorenzo.
1952- The National Institute of Arthritis and Metabolic Diseases en Bethesda,

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Maryland,
EE.UU.,
estudia la estructura qumica y hace investigaciones con el estevisido.
1953- El Dr. Miguel Ovidio de Paraguay, concluye un estudio sobre el estevisido y su efecto sobre la
glucemia.
1954- El qumico ingls F. Bell despus de varios estudios describe al estevisido como el nico
edulcorante, comparado con los dems conocidos.
1959- Se planta en el Jardn Botnico de Ro de Janeiro la especie, y en el mismo ao el botnico Jos Correa Gomez lleva nuevas plantas desde Paraguay al
Instituto de Botnica de San Pablo. Durante la dcada del 50 se realizaron numerosos estudios en los distintos laboratorios del mundo despertando gran inters el
edulcorante presente en Stevia.
1961- Luis Enrique De Gsperi inicia un cultivo extensivo en Horqueta (Concepcin), con plantitas
multiplicadas en la zona de Capitn Bado.
1962- ngel Gonzalz Aranda y Hnos. en la Colonia Ex-Combatientes de Horqueta (Concepcin), instala un
vivero y cultivo extensivo con plantitas tradas de la

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zona de Capitn Bado, lugar denominado Cerro Cuata, sobre el arroyo Tarac
1963- Ruddat, Lang y Mosetting, encontraron que el steviol ejerce la misma funcin que la Giberelina A3.
1966- Se inicia en Paraguay la venta de ka-he en forma natural bajo la denominacin de "Dulce t del Paraguay" del seor De Gasperi. Se registra la Patente de Invencin al seor De Gsperi sobre "Utilizacin de Ramas y Tallos de Stevia" y otra sobre "Extracto de la hoja".
1967- Se inicia la investigacin de la stevia en Kosakoka, Japn, con muestras llevadas desde Paraguay. Von Schmelling estudi el mtodo de aislamiento del
estevisido y su uso como edulcorante no calrico.
1969- Sumida lleva la especie al Japn y Tayomenka Kaisha Ltda. empez a investigar sobre muestras enviadas del Paraguay por Akira Suggi donde identificaron otra sustancia, el rebaudisido. El prof. Derek Bonton
(Premio Nobel de Qumica) en el Colegio Imperial de Ciencia y Tecnologa de Londres expone un trabajo sobre stevia.
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1970- Los japoneses llevan nuevas plantas al Japn y la industrial Qumica Shuda comienza el cultivo y la investigacin. La Compaa Tamasei inicia el cultivo
experimental en chacras del Ministerio de Salud. Carlos Oviedo, paraguayo, concluye un hipoglicemiante investigaciones institutos. de con la stevia estudio sobre "Accin Se en inician distintos
Stevia". en Brasil,
1971- El Ministerio de Agricultura y Produccin Acutica del Japn inicia el cultivo experimental de stevia. Haku Miura de la Universidad de Hokaido comienza la investigacin y el anlisis de la planta. La firma Qumica Industrial del Shuda producto realiza con el la primera de
comercializacin
nombre
"Steviarol". En la colonia japonesa Yguaz se realizan trabajos de investigacin de Stevia rebaudiana Bertoni.
1972- La Compaa Qumica Tamasei obtiene el primer xito en el Japn en la comercializacin del
estevisido.
1973- Se inicia el cultivo experimental de la stevia en las 50 dependencias del Ministerio de
Agricultura del Japn en las distintas zonas del pas.
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1974Paraguay,
Isao
Ohira, un
en
Pedro e
Juan
Caballero, un cultivo
instala
vivero
inicia
extensivo de stevia. La Ca. Qumica Tamasei registra como marcas comerciales "Stevicus y Steviosin".
1975- En Japn se organiza una organizacin de la stevia, Qumica formada Nikkon, por las compaas Yamasaki Shuda, Kokokiku, Tamasei, Qumica
Celulosa
Ikeda, Kosho Kagaku y otras para realizar todos los estudios sobre el cultivo, la industrializacin y
comercializacin del estevisido.
1976- En Paraguay, aparece la marca "Pirung" del seor ngel Gonzlez para la venta de la yerba dulce en todas Salud. sus En formas, el autorizados 6 Congreso por el Ministerio de de
Latinoamericano
Farmacologa, realizado en Buenos Aires, se presentan los siguientes trabajos preparados por el Centro de
Investigacin de la Stevia en San Pablo: "El efecto inductor de la prdida de peso corporal y la obesidad" y "Los efectos antiarrtmicos reguladores del corazn". La Dra. Gila Anmaral de Von Schmellings en la 28. Reunin Anual para el progreso de la Ciencia, y presenta sus el
trabajo
"Stevia
rebaudiana
Bertoni
efectos
hipoglicemiantes en conejos alexamizados", corroborando el efecto antidiabtico de

31
la
planta.
Se
inicia
la
primera reunin general de la Sociedad de la Stevia en el Japn. Ishima y Katayama, experimentan mezclas con diversos azcares y estevisido, obteniendo buenas
respuestas y/o resultados en sabor en relacin con la fructuosa. Se crea en San Pablo, Brasil, el Centro de Investigaciones de la Stevia. Se incrementa la
produccin en otros pases del Sudoeste Asitico (Corea, Taiwan, Filipinas, Indonesia y Malasia).
1977registro del
La
Compaa
Qumica
Shuda, Se
obtiene inicia
el la
producto de
rebaudisido. hoja seca de
exportacin
masiva
Kaa-hee
desde
Paraguay a Japn.
1978- Se incorpora a la Sociedad Qumica Maruzen, Qumica Vegetal Zyomu. En un estudio realizado por la Sociedad de la Stevia del Japn, se demostr que no es txica, que no afecta al embarazo y el efecto negativo anticoncepcional. Maruzen Kasei S.A. revela que los
cidos tartrico, lctico, ctrico, actico y disminuyen el efecto residual del estevisido.
mlico
1979- Se inicia la provisin masiva de hoja al Japn proveniente de Taiwan, Corea, Filipinas y otros pases. Farmacia El y Dr. Mauro Alvarez de la
32
del
Departamento de
de
Bioqumica
Universidad
Maring-
Brasil, obtiene una metodologa para la extraccin y cristalizacin del estevisido. Se crea la Cooperativa de Productores de Ka-He Ltda., para el fomento,
produccin y comercializacin de la especie en Paraguay. En la Universidad de California, en Davis, Clinton C. Shock realiza investigaciones con semilla llevada de
Paraguay.
1980- Una misin oficial de la Cooperativa de Productores de Ka-He de Paraguay, con el apoyo del Ministerio de Agricultura y Ganadera viajan al Japn, a fin de investigar el cultivo y su industrializacin. Se incorporan Qumica la Compaa Gran Farmacutica Japn INKI Oriental a la y la
Industrial
Sociedad
Japonesa de Stevia. La produccin de Japn llega a 60 toneladas de hoja. Por decreto N 15.595 del 5 de mayo de 1980, la Cooperativa de Productores de Ka-He del Paraguay obtiene la personera jurdica y es inscripta bajo el N 163 de Cooperativismo del M.A.G. que est regulada por la Ley 349/72 y por el Decreto N 27.348 que lo reglamenta.
1981- Se incorporan las Compaa Fuji Furu, Qumica Industrial Kyosui y Kokubum a la Sociedad. Se inicia el estudio sobre aspectos crnicos a largo plazo del
estevisido. Se realiza el Primer Seminario Brasilero

33
sobre Stevia, organizado por el Instituto de Tecnologa de Alimentos (ITAL). Se instala un vivero en la Colonia Pte. Stroessner-Alto Paran, Ruta internacional N 7 km 28.
1982- Se instala el Vivero La Fortuna en el km 296 de la Ruta Internacional N 7 (Colonia Pte. StroessnerAlto Paran), del con variedades en mejoradas zona. y Se se inicia el
promocin
cultivo
dicha
inicia
Segundo Seminario Brasilero de la Stevia organizado por ITAL. El Ministerio de Agricultura declara de y Ganadera para por el
resolucin
23/05-02-82,
inters
desarrollo agrcola al kaa-hee y el fomento de su cultivo. Se instala una planta piloto de extraccin del estevisido Brasil. en la universidad Estadual de Maring, que los
Shoch,
Clinton
(EE.UU.),
expresa
compuestos qumicos de la especie de mayor inters son el estevisido y el rebaudisido A, aunque existan otros seis componentes dulces.
1983- Se realiza el Primer Simposio Nacional de la Stevia en Productores Asuncin-Paraguay, organizado por de la especie. Inicia su la Coop. la
produccin
planta piloto instalada en la Universidad de Maring con 10 kg/da de estevisido. Francisco Jordn Molero,
introduce en el Instituto Agronmico Nacional de Caacup

34
una
coleccin
de
plantas
procedentes
de
distintos
lugares del Paraguay y del Brasil.
1984- Finaliza los estudios la Sociedad de Stevia del Japn, concluyendo que el edulcorante es apto para el consumo humano sin efectos colaterales. La Dra. Laura Fracchia del I.N.T.N. de Paraguay, obtiene un mtodo de cristalizacin del estevisido en el laboratorio de la Institucin.
1985- En el Instituto de Fisiologa de I.N.T.A.Castelar, el Ing. Agr. Manuel C. Marcavillaca inicia sus estudios sobre la accin giberlica de stevia y realiza ensayos sobre propagacin vegetativa de la especie.
1986- INGA Stevia Industrial S.A. (Brasil) empresa formada comercial para de la la explotacin stevia, agrcola, firma industrial con y la
contrato
Universidad Estadual de Maring y el Banco Do Brasil, para la explotacin de la licencia y patente del
estevisido a nivel industrial. El Ministerio de Salud del Brasil, autoriza el uso del estevisido como
edulcorante natural en alimentos y bebidas dietticas. Se realiza el Tercer Seminario Brasilero, organizado por ITAL. La empresa Phoenix Agrcola S.A. del Paraguay en su planta piloto llega a
35
la
cristalizacin
del
estevisido,
rebaudisido
separa,
con
tecnologa
nacional la clorofila.
1987- Se constituye la Sociedad Fortuna Stevia del Paraguay S.R.L., empresa dedicada a la promocin,
cultivo, acopio, industrializacin y comercializacin de Ka-He que, con tecnologa propia elabora el extracto acuoso de la hoja. El Ing. Agr. Marcavillaca (Argentina) logra las primeras plantas de stevia micropropagadas e integra ensayos en laboratorio y a campo con el objetivo de establecer las condiciones ptimas de manejo del
cultivo.
1988- INGA Stevia Industrial S.A. inaugura la primera industria en Occidente el 8 de agosto de 1988 en Maring-Brasil, con una capacidad instalada de 9
toneladas por da de procesamiento de hoja, y que en la primera fase solamente utilizar 3.000 kg/da, por falta de materia prima, obteniendo un rendimiento del 10 % en estevisido.
1993-
Se
incorpora
el
estevisido
al
Cdigo
Alimentario Nacional (Resolucin 101 del 22 de febrero de 1993).
36
11 - Caracterizacin de la
Stevia rebaudiana Bert.:
11.1 - Origen y distribucin:
La mayora de los estudiosos admiten que el ka-he es una planta autnticamente paraguaya, originaria de la Regin Oriental del pas, donde era utilizada por los indios como edulcorante y para fines medicinales (Shock, 1982).
Segn distintas fuentes se encuentra desde las sierras del Mbaracay, Campos Altos del Amambay hasta el Monday, zonas de San Pedro, Capitn Bado, Yh, Bella Vista, San Salvador, Vac Ret, entre el ro Ypan e Ybyrar, prximo al Cerro Cuarepot, en Itacu y en Campos de Cerro entre de Cuata 22-26 (Shock, sur y 1982). 54-57 La regin oeste. San se Los
encuentra
Departamentos
Amambay,
Concepcin,
Pedro,
Canendiy, Alto Paran y Caaguaz estaran representados en la zona mencionada. Otros autores indican que la planta es autctona de las fronteras del Paraguay con Brasil (Pagliosa, 1982) encontrndose en el suroeste del Brasil en la regin de Amambay, divisin del Paraguay con Matto Grosso do Sul. ha sido colectada en Ponta Por (Felippe, 1982). Monteiro (1982) menciona estudios de
37
especies brasileas de Stevia y su interrelacin con el ka-he y de revisin taxonmica - morfolgica de la serie Multiaristatae de Stevia en Brasil. Sumida (1980) observa que Stevia crece naturalmente o es cultivada en los distritos de Amambay e Iguaz, frontera de Brasil, Paraguay y Argentina (latitud 25S). Se ha naturalizado en todo el Noreste Argentino. Se cultiva en Brasil en Santa Catarina, Paran, Sao Paulo, Matto Grosso do Sul y Goias; en Paraguay en el Alto Paran, Horquetas, Pedro Juan Caballero, Capitn Bado, Quiindy, Coronel Oviedo y la regin del Chaco.
Actualmente Japn, China, Brasil y Paraguay parecen ser los principales productores. Del Japn se ha
extendido a todo el sudeste asitico (Jordn Molero, 1984).
11.2 - Descripcin botnica:
Stevia rebaudiana Bert. (yerba dulce), es una planta arbustiva originaria del noreste de Paraguay,
perteneciente a la familia de las compuestas, que crece en estado silvestre en forma de planta aislada. Fue descripta botnicamente en 1905, por el naturalista
38
Moiss Santiago Bertoni, como una planta herbcea de 40 a 80 cm de altura.
La raz es fibrosa, filiforme y perenne, formando abundante cepa que apenas de ramifica y no profundiza, es el nico
distribuyndose
cerca
la
superficie;
rgano de la planta que no contiene el estevisido (De Vargas, 1980). En plantas que se propagan asexualmente por pedazos de tallos en arena gruesa, se ha observado abundante (1980) ramificacin que del sistema radicular. abundan Sumida en la
observ
las
races
finas
superficie y las gruesas en las zonas ms profundas del suelo.
El
tallo
es
anual,
subleoso,
ms
menos
pubescente, con tendencia a inclinarse, es ms o menos ramificado. Durante su desarrollo inicial no posee
ramificaciones, tornndose multicaule despus del primer ciclo vegetativo llegando a producir hasta 20 tallos en 3 a 4 aos. En condiciones ptimas, el tallo puede llegar hasta un metro y medio de altura (Sagakuchi, 1982).
Las
hojas
son
elpticas
oval
lanceoladas,
pequeas, simples; borde o margen dentado; a veces en
39
verticilos; algo velludas. La hoja es el rgano con mayor contenido del edulcorante (C.C.N., 1980).
Una planta tarda ms de un mes en producir todas sus flores. En Paraguay florece en octubre, diciembre y marzo pero se clasifica como una planta de da corto, situando el fotoperodo crtico en 12 - 13 horas segn el ecotipo. La en flor es hermafrodita pequeos pequea y o
blanquecina, axilares, 1982).
captulos en
terminales
agrupados
panculas
corimbosas
(Shock,
La polinizacin es entomfila; se dice que la planta es autoincompatible (protandria) de tipo
esporoftico y clasificada como apomctica obligatoria (Monteiro, 1982).
El fruto es un aquenio que es diseminado por el viento. Se clasifica en: claro estril, oscuro frtil y oscuro estril (Gattoni, 1945).
El gnero Stevia tiene ms de 100 especies en el continente Stevia americano, de donde es la es originaria, especie pero con
rebaudiana
Bert.
nica
principios edulcorantes en las hojas (Grashoff, 1972).
40
En el Paraguay es conocida con su denominacin: Ka'He', que significa yerba dulce en espaol.
11.3 - Ecotipos:
Esta
especie
presenta
numerosos
ecotipos.
Mitsuhashi (1975), seleccion 28 ecotipos diferentes. Para diferenciarlos se bas principalmente en sus
caractersticas morfolgicas. Al determinar el contenido de estevisidos estos variaron entre 2,07 y 18,34 %. Sumida (1980) describe una serie de experimentos donde 22 variedades de Stevia rebaudiana Bert. fueron
estudiadas para correlacionar, varias caractersticas de la planta con la heredabilidad. y 6 Se observ 11 de
caractersticas
morfolgicas
caractersticas
contenido. De estas 17
caractersticas, solamente el
peso seco de hojas mostr una baja correlacin con la heredabilidad. morfolgicas principios evidente. Sumida, y de concluy, contenido, tienen que caractersticas de
principalmente
activos,
efecto
seleccionador
11.4 - Citologa:
41
Observaciones de Brucher (1974), revelan que la planta es diploide, conteniendo 22 cromosomas.
Estudios de poliplodia fueron realizados por Brucher (1974), por Utsunomiya (1977) y Sato y Kawakami (1975). variedades resultar un Estos de ltimos alta investigadores La obtuvieron puede de
calidad. para
poliplodia
buen
mtodo
obtener
aumentos
productividad en trminos de masa foliar y contenido de principio activo, reduciendo el rea plantada y por ello los costos (Handro, 1984).
11.5 - Clima:
La regin donde crece el kaa-hee es subtropical, semihmeda, con 1.400 a 1.800 mm. de lluvia, que se distribuyen regularmente durante todo el ao y
temperaturas extremas de -6 a 43C, con promedio de 24C. Segn Sakaguchi (1982) la temperatura ms
apropiada para Stevia es de 15 a 30C con un lmite inferior de -3C. Soporta medias mnimas de 5C.
42
La habilidad para resistir inviernos, aparentemente es determinada por la temperatura del suelo. La amplitud crtica est entre 0 a 2C. Mudas de 5 cms. con 10 hojas soportaron (Sagacuchi, potenciales extenderse a temperaturas 1982), de lo de que -5C implica de la En por que 70 las minutos reas podra facultad
produccin
especie nuestra
latitudes
mayores.
existe una pequea parcela, con 50 plantas desde hace aproximadamente 2 aos. Durante el invierno su parte area se seca, rebrotando desde la base en primavera.
La planta resiste la humedad pero no la sequa, y esto puede explicarse por la morfologa de su sistema radicular.
Desarrolla mejor donde la estacin de crecimiento es larga, donde la intensidad de luz es alta, con
temperaturas tibias, riesgos mnimos de heladas luego de la brotacin y sin perodos aumentan peso de la larga sequa. de Los los la
fotoperodos entrenudos,
largos rea
longitud y
foliar,
seco
aceleran
aparicin de hojas. La materia seca se reduce a la mitad con fotoperodos, de das cortos. Azcares, protenas y estevisidos aumentan tanto en valores absolutos como relativos en das largos (Sagacuchi, 1982).
43
Para la produccin de mudas (propagacin) es necesario temperaturas por sobre los 15C.
11.6 - Suelos:
Se la puede cultivar en suelos muy variados. En su estado natural, la planta crece en suelos tanto de baja fertilidad, cidos, de tipo arenoso como hasta orgnicos y con alta humedad (Shock, 1982). Algunos autores
recomiendan tierras areno-arcillo-humfera-ferruginosa o simplemente arena humfera. Se desarrolla bien en suelos colorados del Alto Paran. La tierra ideal es la arenoarcillosa con regular proporcin de humus. Se adapta bien a suelos arcillosos con buen drenaje, no as a lugares con exceso de humedad. Prospera bien en suelos de desmonte, no as en tierras recin desmontadas, con mucha materia orgnica, por problemas de enfermedades (C.C.N., 1980). La planta crece naturalmente en suelos de ph 4-5, pero crece bien entre 6.5-7.5 siempre que no sean salinos (Shock, 1982).
12 - Caractersticas agronmicas:
44
Stevia rebaudiana Bert. es una especie semiperenne que en cultivo puede durar entre 5 y 6 aos, con 2 o 3 cortes anuales; el rendimiento anual de hoja seca en Paraguay oscila entre 1500 y 2500 kg/ha, en condiciones de secano y alrededor de 4300 kg/ha con riego (Jordn Molero, 1984).
En Japn, en 1 o 2 cosechas por ao, el rendimiento de hoja seca vara entre 3000 y 3500 kg/ha en el primer ao, 4000 a 4500 kg/ha en el segundo, 4000 a 6000 kg/ha en el tercero, disminuyendo a 4000 kg/ha en el cuarto (Sumida, 1980).
Segn distintos autores la densidad de plantacin puede variar entre 20.000 a 400.000 pl/ha, en hileras sencillas, dobles o triples. Altas densidades, reducen el desarrollo de ramas laterales y el rendimiento en peso seco por planta, aumentando el nmero de plantas muertas luego de la cosecha y las dificultades en la misma (Sakaguchi, 1982).
Se estima que la densidad optima de 88000 pl/ha, se da a distancias de 75 cm entre hileras y 15 cm dentro de la misma (Jordn Molero, 1984).
45
12.1 - Propagacin sexual de Stevia rebaudiana (Bert):
Se reproduce sexualmente por aquenios, observndose alta heterogeneidad en las poblaciones resultantes. La planta es de polinizacin cruzada y gran parte de sus aquenios son estriles; son livianos y de fcil
dispersin por el viento. La floracin no es uniforme, lo mismo que la maduracin de la semilla, siendo la recoleccin lenta y difcil. Para mejorar la calidad de las semillas se recomienda incorporar apiarios en la plantacin. El porcentaje de germinacin varia entre 10 y 38 %. La longevidad de los aquenios es corta y ya a los 4 meses el potencial de germinacin se reduce un 4070 %, despus de 8 meses es casi nulo. Las semillas deben guardarse en condiciones de baja humedad, baja temperatura, preferentemente en la oscuridad y en
envases hermticos (Felippe et al., 1971; De Vargas, 1980; Sagakuchi et al., 1982; Jordn Molero, 1984).
12.2 - Propagacin vegetativa de Stevia rebaudiana (Bert):
Esta especie puede propagarse vegetativamente por separacin de hijuelos. Este mtodo slo puede
46
utilizarse para pequeas plantaciones, ya que el nmero de mudas producidas es reducido.
En la base del tallo, o bajo tierra, en la primavera temprana aparecen pequeos vstagos, muchos con sus respectivas races que pueden separarse y
plantarse en el lugar definitivo (Jordn Molero, 1984).
Otra forma de propagacin vegetativa es a travs de estacas; mtodo que convenientemente ajustado podra ser usado a escala comercial.
Diferentes autores obtuvieron respuestas variables al utilizar estacas apicales o subapicales, con diversos sustratos, en distintas pocas del ao y al incluir tratamiento rizognico (Felippe, 1977; De Vargas, 1980; Sumida, 1980; Shock, 1982; Jordn Molero, !983 y 1984).
El cultivo de tejidos es otro mtodo de propagacin vegetativa que permite obtener plantaciones ms
uniformes, adems de
la rpida multiplicacin clonal
(Yang, 1979 y 1981; Marcavillaca, 1985).
Marcavillaca et al (1993) proponen la combinacin de macro y micropropagacin; las plantas micropropagadas se utilizan como banco de plantas madres y en slo 3
47
ciclos
de
multiplicacin se
(1 a
de
micro de
y una
de sola
macropropagacin),
lograra
partir
planta, material para cultivar 3 ha (225.000 plantas).
13 - Propagacin vegetativa:
La
historia por
de
la
produccin de
vegetal
se
ha de
caracterizado avanzada que
el
desarrollo y
tecnologas la
facilitan
optimizan
propagacin
vegetativa. La posibilidad de controlar el ambiente (uso de nieblas, calefactores, termostatos, serenos, etc), amplia el espectro de especies que pueden seleccionarse y multiplicarse de esta forma (Marsden, 1955).
La propagacin vegetativa o asexual se utiliza para producir una planta que posea el mismo genotipo que la planta madre (planta donadora) y esto es posible porque todas las clulas de una planta poseen la informacin necesaria y/o suficiente para reproducir la planta
entera (Hartmann et al., 1992).
En la multiplicacin por estacas solo es necesario que un nuevo sistema de races adventicias se
desarrolle, ya que la estaca posee yemas con aptitud
48
potencial para desarrollar nuevos vstagos (Hartmann et al., 1992).
Las races adventicias son de dos tipos: races preformadas y races de herida (inducidas). Las races preformadas se forman naturalmente durante los primeros periodos de desarrollo del vstago, pudiendo emerger
antes de la realizacin de estacas o permaneciendo en dormicin colocadas hasta en que se realicen las mismas y sean Las
condiciones
ambientales
favorables.
races de herida desarrollan slo despus que la estaca es cortada, por efecto de la herida producida en la preparacin de la misma. como formadas de novo Estas races, son consideradas (nueva formacin)(Davies y
Hartmann, 1988).
Cuando se prepara una estaca, las clulas ms cercanas a la superficie son lesionadas y expuestas, comenzando la respuesta de cicatrizacin de la herida (Cline y Neely, 1983). En el proceso de regeneracin de races, ocurren los siguientes tres pasos:
- A medida que las clulas externas, lesionadas, se mueren, se forma una lmina necrtica que sella la herida con un material suberoso y se
49
tapona el xilema con gomas. Esta lmina ayuda a proteger la superficie del corte de desecamientos y patgenos.
- Por detrs de la lmina, clulas vivas comienzan a dividirse despus de algunos das y una capa de clulas parenquimatosas (callo), forma una peridermis.
- Ciertas clulas, en la vecindad del cambium vascular y floema, comienzan a dividirse e inician la formacin de races adventicias.
13.1 - Bases fisiolgicas de la iniciacin de races adventicias:
Varias clases de reguladores de crecimiento, tales como auxinas, cytokininas, como el giberelinas abscsico y y etileno e
inhibidores,
cido
fenlico,
influyen sobre la iniciacin de races. De ellas, la auxina es la que tiene el mayor efecto sobre la
formacin de races en estacas (Hartmann et al., 1992).
50
13.1.1 - Efecto de las hojas sobre el enraizamiento: (Hartmann et al., 1992)
Es ampliamente conocido que la presencia de las hojas en la estaca, ejerce una fuerte influencia,
estimulando la iniciacin de races.
La traslocacin de carbohidratos desde las hojas sin duda contribuye, a la formacin de races, sin
embargo, la mayor promocin del enraizamiento por efecto de las hojas y yemas, es posiblemente resultado de otros factores ms directos (Breen, 1974). Hojas y yemas, son conocidas como poderosos centros productores de auxinas, y los efectos son observados directamente por debajo de ellos, demostrando el transporte polar, desde el pice a la base. Estacas de ciertas especies son fcilmente
enraizadas, mientras que estacas de otras enrazan con mayor dificultad.
13.1.2 - Fotosntesis de las estacas:
La
fotosntesis
de
las
estacas
no
es
un
requerimiento absoluto para la formacin de races. Esto puede ser observado en estacas con muchas hojas, que se llevan a un sitio oscuro
51
con
estacas
deshojadas
(nofotosntetizantes),
que
enrazan
(Davis
Potter,
1981). Pero puede generalizarse que, la fotosntesis en estacas, es probablemente ms importante despus de la iniciacin de races y ayudara en el desarrollo y
crecimiento ms rpido de las races (Davis, 1989).
13.2 - Factores que afectan la multiplicacin por estacas:
13.2.1 - Diferencias entre plantas individuales procedentes de semilla:
Al enraizar estacas tomadas de plantas individuales de una especie, la que de ordinario ha se propaga que por
semillas,
experiencia
demostrado
pueden
existir amplias diferencias entre estacas tomadas de ellas (efectos y/o variabilidad del genotipo )(Hartmann et al., 1992).
13.2.2 - Diferencias entre las zonas apicales y bsales de la rama: (Hartmann et al., 1992)
52
En la composicin qumica de las ramas hay marcadas diferencias de la base a la punta. En las estacas
tomadas de distintas partes de las ramas en ocasiones se observa variabilidad en la produccin de races y en muchos casos el mayor porcentaje de enrace se obtiene en estacas procedentes de la porcin basal de la rama.
Puede ocurrir que en tallos de un ao o ms de edad, los carbohidratos se hayan acumulado en la base de las ramas y tal vez se han formado algunas iniciales de raz, posiblemente bajo la influencia de sustancias
promotoras de races procedentes de yemas y de hojas, y por lo tanto el mejor material para estacas puede
provenir de la porcin basal de esas ramas.
Pero,
el
mejor
enraizamiento
de
las
estacas
apicales podra explicarse por la posibilidad de que en el pice se encuentre una mayor concentracin de
sustancias endgenas promotoras del enraizamiento ya que las mismas se originan en las secciones apicales (yemas apicales). Tambin, las estacas apicales son ms jvenes y en consecuencia, hay ms clulas capaces de volverse meristemticas. En las especies que enrazan fcilmente, este factor es de poca importancia, cualquiera sea la posicin de la estaca en la rama.
53
13.2.3 - Estado reproductivo o vegetativo:
En la mayora de las plantas se pueden hacer estacas de ramas en condicin vegetativa o en condicin reproductiva. fcilmente no Nuevamente, existen en especies que enrazan entre
grandes
diferencias
distintos estados fenolgicos en que se encuentre la planta, pero en especies que enrazan con dificultad, ste puede ser un factor de importancia. Por ejemplo, en dalia, mayor las estacas que portan enraizar yemas que florales las tienen que
dificultad
para
estacas
tienen solamente yemas foliares (Biran y Halevy, 1973).
13.3 - Sustratos para el enraizamiento:
Hay diversos medios y mezclas de stos que se usan con el fin de hacer enraizar se estacas. las Para obtener
buenos
resultados
requieren
siguientes
caractersticas (Richards; Warneke y Aljibury, 1964):
- El medio debe ser lo suficientemente firme y denso para mantener las estacas en su sitio
54
durante el enrace; su volumen no debe variar mucho, ya sea seco o mojado; resulta perjudicial que tenga un encogimiento excesivo al secarse.
- Debe retener la suficiente humedad para que no sea necesario regarlo con mucha frecuencia.
- Debe ser lo suficientemente poroso, de modo que se escurra el exceso de agua y permita una aireacin adecuada.
- Debe estar libre de malezas, nemtodos y otros patgenos.
- No debe tener un nivel excesivo de salinidad.
- Debe poderse esterilizar con vapor o qumicos sin que sufra efectos nocivos.
- Debe existir una adecuadada provisin de nutrientes para todo el perodo, aunque suplementaciones con fertilizantes de lenta liberacin son frecuentemente recomendados.
55
Un medio ideal de propagacin, debe estar provisto de suficiente porosidad para permitir una buena
aireacin y una alta capacidad de retencin de agua, debe tener un buen drenaje y estar libre de patgenos (Hartmann et al., 1992).
13.3.1 - Arena:
La arena est formada por pequeos granos de piedra, de alrededor de 0.05 a 2 mm de dimetro,
dependiendo su composicin mineral de la que tenga la roca madre. En propagacin, generalmente, se emplea
arena de cuarzo. De preferencia se debe fumigar o tratar con calor antes de usarla para esterilizarla.
Virtualmente no contiene nutrientes minerales y no tiene capacidad intercambio amotiguadora cationico. (Buffer) Casi o capacidad se usa de en
siempre
combinacin con al., 1992).
algn material orgnico (Hartmann et
13.3.2 - Turba:
56
La
turba
se
forma
con
restos
de
vegetacin
acutica, de marismas, cinagas o pantanos, que se ha preservado bajo el agua en un estado de descomposicin parcial.
La turba de pantanos esta formada por restos de pastos, juncos y otras plantas de pantanos. Este tipo de turba es variable en su composicin y color. Su pH vara alrededor de 4 a 7.5 y su capacidad de retencin de humedad es de 10 veces su peso seco (Hartmann et al., 1992).
13.3.3 - Humus de lombriz:
El humus de lombriz con forma de restos vegetales, restos animales (no deben utilizarse crudos) y restos domiciliarios orgnicos, que acumulados, forman un
compost, y con el agregado de lombrices que digieren la materia orgnica, resulta en un producto final, llamado vermicompuesto, semejante al humus, atxico para los
vegetales y excelente mejorador de suelos.
Algunas modifican las
caractersticas del propiedades del suelo:

57
humus -
de
lombriz y
fsico a)le
qumicas al
microbiologicas
comunica
suelo
mayor
porosidad
aireacin,
mejorando
tambin
la
infiltracin y favoreciendo el desarrollo radical; b)se liberan gradualmente los nutrientes que las plantas necesitan, pues al mantener el pH dentro de un rango cercano a la neutralidad (6-7)( con gran poder buffer) , les permite una Cu, mayor Mn, solubilidad. Mo y Zn, es El tenor de c)-
microelementos:
elevado;
contiene los mismos microorganismos benficos que tiene el suelo, pero en mayor cantidad, destacndose los que transforman la celulosa y los que intervienen en la asimilacin de nitrgeno y fsforo; d)- aumento de la velocidad de emergencia de las plntulas; e)- permite una larga permanencia de ciertos hongos benficos del suelo. Estos microorganismos que suelen ser efectivos para controlar hongos dainos del suelo, suelen tener en l poca durabilidad. El humus de lombriz les permite un buen desarrollo trnadolo efectivo en la lucha, por
ejemplo contra dampig off ( Mirabelli, 1995).
13.4 - Mezclas de suelo para cultivo en maceta: (Hartmann et al., 1992)
En
los
sistemas
de
propagacin,
las
estacas
enraizadas algunas veces se plantan directamente en el campo, pero por lo general, esto no es satisfactorio
58
para
la
sobrevivencia
de
las
mismas,
por
ello
con
frecuencia se les inicia en una mezcla de suelo en diversos recipientes.
Para lograr mezclas de suelo ms uniformes y de mejor textura para macetas, a veces se aade arena a la tierra y algo de materia orgnica, en forma de turba, viruta de madera o corteza desmenuzada. Tambin se usan otras mezclas, sin el agregado de tierra, para la
propagacin y cultivo de plantas. Pueden citarse mezclas de turba y perlita o turba y arena, pero al ser pobres en nutrientes, necesitan el agregado de fertilizantes. El humus de lombriz puede utilizarse satisfactoriamente por todas las buenas caractersticas que presenta.
59
JUSTIFICACION OBJETIVO HIPOTESIS
60
JUSTIFICACIN:
La
inclusin
del
estevisido
en
el
Cdigo
Alimentario Nacional (Resolucin 101 del 22-2-93) y la posibilidad de exportacin ha incrementado el inters en esta especie por parte de productores.
El bajo valor cultural de las semillas (10 al 15 %) (Felippe et al, 1971) y la heterogeneidad 1982), ajustar de las la
poblaciones necesidad
resultantes de
(Pagliosa, y/o
indican
desarrollar
tcnicas
alternativas, sencillas y econmicas, que permitan la propagacin masiva de genotipos selectos (Marcavillaca et al, 1993).
OBJETIVO:
El objetivo del presente trabajo de intensificacin es estudiar, como el origen de la estaca, la poca del ao y/o estado fenolgico, el sustrato de enraizamiento y la presencia de sustancias rizognicas, afectan la propagacin vegetativa de Stevia rebaudiana Bert.
HIPTESIS:
61
- Las respuestas en el enraizamiento de Stevia rebaudiana Bert. estn condicionada por la posicin de la estaca en la planta (estaca apical vs estaca subapical).
- El tipo de sustrato afecta la longitud y peso de las races formadas.
- Durante el perodo de crecimiento anual (desde primavera a fines de otoo), pueden realizarse varios ciclos de multiplicacin (cortes de estacas), con el mismo stand de plantas madres con porcentajes de enraizamiento razonables.
62
MATERIALES Y METODOS
63
MATERIALES Y MTODOS:
Estas experiencias se realizaron con material extrado de plantas de Stevia rebaudiana Bert. (tres
clones: A-B-C), de origen japons, que se mantienen en el campo experimental de la Facultad de Agronoma (UBA) (fotografa), peridicamente; las los que se se riegan y fertilizan luego del
ensayos
iniciaron
rebrote primaveral cuando el crecimiento en la mayora de los vstagos fue tal que permiti extraer estacas apicales (Ap) y subapicales (Sap) de aproximadamente 1012 cm (2 o 3 nudos).
Las bases de las estacas (2 cm), apicales (Ap) y subapicales (Sap) se trataron durante 24 hs, en una solucin de cido indolbutrico (IBA)(25 mg/l, en
solucin alcohlica al 10 %) (Marcavillaca et al, 1993). Previamente, a las mismas, se les disminuy el nmero de hojas presentes en los nudos inferiores, para disminuir la superficie de transpiracin (Hartmann et al, 1992).
Posteriormente se plantaron en bandejas de plstico (32 por 32 por 18 cm), sobre un sustrato de turba y arena (Ta)(1:1) turba y humus de lombriz (Tl)(1:1), y colocando 36 estacas por bandeja (12 estacas de cada clon), realizndose tres
64
repeticiones
de
cada
tratamiento. Sobre las bandejas se construy un armazn de alambre, abovedado y se cubri con una lmina de polietileno, para crear una cmara hmeda, mantenindose las mismas a la sombra. Al comienzo del ensayo y a las dos semanas se pulveriz con Captan (1,5 gr/l de
solucin), para disminuir la posibilidad de enfermedades fngicas. A las cuatro semanas se contabiliz el nmero de estacas muertas y enraizadas, determinndose, races
porcentaje de enraizamiento (%E), longitud de
(LgR) por el mtodo de Tennant (1975)(ver anexo) y peso seco de races (PSR) y parte area (PSA).
Este primer ensayo se inici el 29 de noviembre de 1994 (F1) y se repiti durante todo el perodo anual de crecimiento, cada vez que los vstagos de las plantas madres alcanzaron una longitud tal que permiti el corte de estacas apicales y subapicales; el segundo se realiz el 12 de enero de 1995 (F2); el tercero el 2 de marzo de 1995 (F3) y el cuarto el 6 de abril de 1995 (F4) y las evaluaciones se iniciaron el 29 de diciembre de 1994, el 15 de febrero de 1995, el 4 de abril de 1995 y 9 de mayo 1995, respectivamente. En el ensayo iniciado el 12 de enero de 1995 (F 2), a las estacas correspondientes al clon A se les incluy otro factor: con y sin tratamiento
65
hormonal
(IBA
noIBA), factor que tambin fue estudiado en las fechas restantes (F3 y F4) para los tres clones (A, B, C), tipos de estaca (Ap y Sap) y sustratos (Ta y Tl) (Tabla 1).
En cada una de las fechas de los ensayos se tomaron muestras de estacas (n=10) apicales (Ap) y subapicales (Sap) y se estim peso seco de las mismas.
Para evaluar peso seco se separaban las races de la parte area. En por lo menos cinco estacas de cada tratamiento, se determin la longitud de las races y luego se sec todo el material enraizado en estufa a 50C, durante 72 hs, pesndose posteriormente en balanza analtica (precisin: 10-4 gr). El peso de la parte area se ajust segn:
Crecimiento de la parte area (CpA)= Peso seco areo total - media del peso seco inicial de cada fecha y tipo de estaca.
Se
realiz
un
ensayo
factorial,
con
medidas
repetidas en el tiempo, con un diseo de bloques al azar y los resultados se evaluaron a travs de un anlisis de varianza, para el mismo se utiliz el programa
estadstico Number Cruncher Statistical System (NCSS)

66
(Hintze,
1991).
Las
variables
estudiadas
fueron: races
porcentaje de enraizamiento (%E), longitud de
(LgR), peso seco de races (PSR) y peso seco de la parte area (PSA) y relacin peso de las races/peso total (rPSR/PT) con:
Peso total= Crecimiento de la parte area (CpA) + peso de las races (PSR).
Cuando las variables analizadas son porcentaje de enraizamiento previamente (arcoseno). o se relacin realiz peso de races/peso de total, datos
transformacin
67
RESULTADOS Y DISCUSION
68
RESULTADOS Y DISCUSIN:
Durante
las
realizaciones
del
ensayo
al
contabilizar el nmero de individuos muertos, a los 15 y 28 das se observ que el nmero de los mismos era mayor en los tratamientos de turba y arena. Sobre un total de 432, 462 y 576 estacas para cada una de las fechas, las prdidas fueron en la primer fecha 61 y 70, segunda fecha 46 y 53 y en la tercer fecha 40 y 75, para turba y humus de lombriz y turba y arena respectivamente;
valores que implican 22% de perdida total para las tres fechas juntas. La cuarta fecha (F4), se excluy del anlisis de los datos ya que slo espordicamente algunas estacas subapicales enraizaron. A comienzos del mes de marzo, con fotoperidos de 13 1/2 hs comienza la floracin en los tres clones. Se ha postulado la hiptesis de la existencia de un complejo hormonal complementario de la floracin, y las giberelinas, que se sintetizan en esta etapa, seran las responsables esenciales de la
formacin y crecimiento de los tallos florales (Barcel Coll et al, 1983).
Se
ha
observado
que
las
giberelinas, de
en
concentraciones
relativamente
69
elevadas,
manera
consistente
han
inhibido
la
formacin
de
races
adventicias (Sircar, 1974). Esta
inhibicin sera un
efecto local directo que impedira la divisin temprana de las clulas que intervienen en la transformacin de tejido maduro a una condicin meristemtica (Brian et al, 1960). En estacas de hoja de Begonia se observ que el cido giberlico inhiba la formacin, tanto de yemas como de races adventicias, probablemente, bloqueando las divisiones celulares organizadas, que inician la
formacin de los primordios de yemas y de races (Heide, 1969).
En la mayora de las plantas se pueden hacer estacas de ramas en condicin vegetativa o en condicin reproductiva. En especies que enrazan fcilmente no
existen grandes diferencias entre los distintos estados fenolgicos en que se encuentre la planta, pero en
especies que enrazan con dificultad, ste puede ser un factor de importancia. Por ejemplo, en el arndano azul (Vaccinium atrococcum), las estacas de madera dura
conteniendo yemas florales no enrazan tan bien como las que slo tienen yemas foliares. Cuando se us madera vegetativa, enraiz un 39% de las estacas, pero cuando las estacas contenan una o ms yemas florales, ninguna enraiz (Hartmann et al., 1992). En dalia, las estacas que portan yemas florales tienen mayor dificultad para
70
enraizar
que
las
estacas
que
tienen
solamente
yemas
foliares (Biran y Halevy, 1973). En los rododendros, la remocin temprana de las yemas florales potenciales
aument el enraizamiento, presumiblemente debido a la eliminacin de un estmulo promotor de la floracin
antagonista del enraizamiento. La remocin posterior de las yemas florales todava aument el enrace, tal vez eliminando la competencia por los materiales necesarios para la formacin de races (Hartmann et al., 1992). La floracin es un fenmeno complejo la competencia entre destinos que puede disminuir en perjuicio del
enraizamiento. En nuestro caso en F4 solo enraizaron algunas estacas subapicales las cuales poseen muy pocas yemas florales. Manchado de Carvalho y Zaidan (1995) tambin observaron en esta especie bajos a nulos
porcentajes de enraizamiento cuando las plantas madres se encuentran en estado reproductivo. Ligustrum, Con muchas etc)
especies
ornamentales
(Abelia,
Ilex,
cuando se trabaja en escala comercial, se remueven yemas florales en las estacas para un desarrollo de races ms rpido, un crecimiento vegetativo temprano y una mayor eficiencia en la produccin de la cicatrizacin
(Hartmann et al., 1992).
71
Porcentaje de enraizamiento:
Los resultados obtenidos se observaron en las figuras 1, 2, y 3 y las tablas 2, 3 y 4. Se encontraron diferencias altamente significativas entre clones (F** 14,47) y entre sustratos (F** 66,68) y no significativas (ns) entre tipo de estaca y entre fechas de corte
(figura 1 y tabla 2). Los porcentajes de enraizamiento fueron siempre altos, variando entre 55 y 75% (tabla 2). Al estudiar la tercer fecha, con inclusin de
tratamiento rizognico (figura 2 y tabla 3), se hallaron diferencias significativas (F* 5,62) entre estacas y
altamente significativas entre sustratos (F** 47,75) y entre tratamientos hormonales (F** 12,83). Los
porcentajes de enraizamiento variaron entre 35 y 74% (tabla 3). Al estudiar el clon A (figura 3 y tabla 4) incluyendo tratamiento con y sin hormona (IBA-noIBA), se encontraron diferencias altamente significativas entre
sustratos (F** 47,75) y entre tratamientos rizognicos (F** 12,83) y significativas al 8% entre estacas (F* 3,07). Los porcentajes de enraizamiento variaron entre 41 y 90% (tabla 4).
72
Longitud de races:
Los resultados obtenidos se observan en las figuras 4, 5, y 6 y las tablas 5, 6 y 7. Se encontraron
diferencias altamente significativas entre fechas (F** 7,08), entre clones (F** 10,09), entre estacas
(F**27,13) y entre sustratos (F** 294,29) (figura 4 y tabla 5) y entre las interacciones Fecha x Estaca (F** 8,39) (tabla 5.1), Clon x Estaca (F** 8,45) (tabla 5.2) y significativas entre Fecha x Clon (F* 4,09) (tabla 5.3), las longitudes variaron entre 75 y 225 cm (tabla 5). Al analizar la tercer fecha, 5 con y inclusin tabla 6) de se
tratamiento
rizognico
(figura
encontraron diferencias altamente significativas entre sustratos (F** 75,25) y entre hormonas (F** 14,04) y significativas entre estacas (F* 3,33) y entre clones (F* 3,4). Las medias variaron entre 66 y 189 cm (tabla 6). Al estudiar el clon A durante dos fechas (F2 y F3), se encontraron sustratos diferencias (F** altamente entre significativas tratamientos
entre
58,74),
hormonales (F** 8,85) y las longitudes extremas fueron 51 y 222 cm (figura 6 y tabla 7).
73
Peso de races:
Los resultados obtenidos se observan en las figuras 7, 8 y 9 y las tablas 8, 9 y 10. Se encontraron
diferencias altamente significativas entre clones (F** 5,7) y entre sustratos (F** 165,8) y significativas
entre fechas (F* 2.90), con medias que variaron entre 7 y 31 mg (figura 7 y tabla 8). Al analizar la tercer fecha con inclusin de tratamiento rizognico (figura 8 y tabla 9), se encontraron sustrato diferencias (F** 31,86) altamente y entre
significativas
entre
tratamientos rizognicos (IBA-noIBA) (F** 6,33) y los pesos variaron entre 8 y 23 mg (tabla 9). Estudiando el clon A durante dos fechas (F2 y F3) se observaron sustratos
diferencias
altamente
significativas
entre
(F** 31,31) y significativas entre hormonas (F* 4,23) y los pesos de todos los tratamientos variaron entre 5 y 19 mg (tabla 10).
Peso de parte area:
En esta parte del ensayo se analiza el crecimiento verificado inicial de de la las parte area, por encima del peso el
estacas
iniciales,
durante
enraizamiento. Los datos observados se muestran en las

74
figuras 10, 11 y 12 y las tablas 11, 12 y 13. Se encontraron diferencias significativas entre fechas (F** 122,72), entre clones (F** 5,37), entre estacas (F** 13,29) y entre sustratos (F** 9,71) y significativas en la interacciones Fecha x Clon (F* 3,85) (figura 10 y
tablas 11 y 11.1) y los pesos variaron entre 31 y 64 mg. Al analizar la tercer fecha se encontraron diferencias altamente significativas entre sustratos y hormonas (F** 7.29 y 5,63 respectivamente) y significativas entre
clones (F* 3,76) y estacas (F* 4,08), con pesos que variaron entre 14 y 26 mg (tabla 12). Cuando se estudi el clon A durante dos fechas (F2 y F3) con respecto a estas variables se encontraron diferencias (F** altamente 6,22) y
significativas
entre
sustratos
significativas entre estacas (F** 4,75) (figura 12), con pesos que variaron entre 15 y 26 mg (tabla 13).
Relacin peso de races parte area:
Los datos observados se muestran en las figuras 13, 14 y 15 y las tablas 14, 15 y 16. Se encontraron, diferencias altamente significativas entre fechas (F** 26,73), entre estacas (F** 12,10) y entre sustratos (F** 36,32) y las mismas variaron entre 0,04 y 0,15 (tabla 14). Al analizar la tercer
75
fecha
con
tratamiento
rizognico, significativas
se
observaron sustratos
diferencias (F** 10,1)
altamente y entre
entre
estacas (F** 6,08) y significativas entre clones (F* 2.64) (figura 14) y las estacas variaron entre 0,12 y 0,21 (tabla 16). Al analizar al clon A durante dos fechas (F2 y F3), se encontraron diferencias altamente significativas entre fechas (F** 7,27) y significativas entre sustratos (F* 4,23), entre estacas (F* 3,78) y entre hormonas (F* 4,25) (figura 15), mientras que las medias variaron entre 0,1 y 0,18 (tabla 16).
Al analizar en conjunto las distintas variables (porcentaje de enraizamiento, longitud de races, peso de races, peso de la parte area y relacin peso de races/peso total), surge de inmediato la superiodidad del sustrato humus de lombriz y turba, sobre turba y arena, ya que en todos los ensayos se observaron mayores valores que sobre cualquier tratamiento (tablas 2 a 16), incluso al estudiar el largo de races y/o peso
correspondientes a los tratamientos sin hormona, eran mayores que los de turba y arena con hormona (tablas 6.1 y 9.1). Es del evidente mismo que lo las caractersticas en un fsicosustrato a escala por su
qumicas altamente comercial
convierten, para la
recomendable de
propagacin ya que
distintas
especies,
76
consistencia y tamao de partculas, permite un anclaje adecuado tenores aireacin liberando de de las estacas, sin el mantenimiento la de altos y
humedad, que
disminuir el
porosidad
facilitan
intercambio nutrientes
gaseoso,
gradualmente
los
necesarios.
Asimismo, podra postularse que los menores porcentajes de prdidas con este sustrato seran consecuencia de la presencia en el mismo de poblaciones de microorganismos benficos.
En la mayora de los ensayos se encontraron diferencias significativas entre clones, lo que da idea de la variabilidad existente entre los mismos. Se
esperaba encontrar menor heterogeneidad entre ellos, ya que a pesar de ser clones, de una las semillas que los La la
originaron
provenan de las
misma
planta. de
heterogeneidad
poblaciones
resultantes
multiplicacin sexual, sealan la necesidad de trabajar con material seleccionado y propagado vegetativamente (Marcavillaca y Divo de Sesar, 1993). Al evaluar
porcentajes de enraizamiento en la tercer fecha no hubo diferencias entre clones (figura 2 y tabla 3), pero si en la calidad de las races formadas (longitud y peso, figuras 5 y 8 y tablas 6 y 9). La aptitud para
diferenciar races de especies herbceas suele ser alta y es por ello que las diferencias genotpicas suelen ser
77
menos
evidentes.
En
los
clones
siempre
se
encontraron mejores respuestas que en el B. Entre A y C las diferencias son menos notorias e incluso, al
analizar una
misma variable, se observan diferencias
particulares estacionales (interaccin Clon x Fecha). Cuando se estudian las tres fechas siempre es superior el clon A (peso de races y parte area, figuras 7 y 10 y tablas 8 y 11), pero en la tercer fecha, C supera a A (longitud y peso de races, figuras 5 y 8 y tablas 6 y 9), lo que indicara una mejor aptitud de este clon para climas ms frescos. Las temperaturas medias de cada una de las fechas de corte fueron 25, 24 y 21 1/2C.
Al analizar el factor fecha, se observan que aunque no se encontraron diferencias significativas en todas las variables, la tendencia indicara que la mejor fecha fue la segunda, luego la tercera y por ltimo la
primera. Durante la primer fecha (29 de noviembre al 29 de diciembre de 1994), las temperaturas estuvieron muy por encima de las habituales (mnima media 20C y mxima media 30,2C), lo que implica que las estacas, a pesar de estar en la sombra, debieron registrar algn tipo de stres. Las nicas variables que fueron superiores en esta fecha fueron peso de la parte area y de races. Altas temperaturas tienden a promover el desarrollo y/o crecimiento de las yemas, en detrimento del desarrollo
78
radicular (Hartmann et al, 1992)(figuras 7 y 10 y tablas 8 y 11). Tambin hubo crecimiento importante de las races pero el de la parte area fue mucho mayor. En la relacin peso de races/peso total (figura 13 y tabla 14), las diferencias son altamente significativas y en
la primer fecha la particin hacia races fue mucho menor. Las temperaturas de las fechas restantes fueron mnima media 19.3 y 16,9C y mxima media 29,2 y 27,2C respectivamente. Temperaturas diurnas del aire entre 21 y 27C, con temperaturas nocturnas cercanas a 15C son satisfactorias para la mayora de las especies de clima templado clido (Marcavillaca y Divo de Sesar, 1993). La iniciacin de races en estacas est regulada por la temperatura, fuertemente disponibles. pero el crecimiento de de los de las mismas es
dependiente Las estacas
carbohidratos la segunda y
iniciales
tercer fecha fueron ms livianas que las de la primera, pero la relacin peso de races/peso total fue mucho mayor en estas dos fechas (figura 13 y tabla 14). La respiracin se redujo probablemente como consecuencia de las menores de temperaturas, los fotosintatos permitiendo hacia las una mayor Los
particin
races.
resultados estacionales obtenidos en estos ensayos son vlidos para latitudes similares a las nuestras; en
Campinas, Estado de San Pablo, Brasil, los mejores meses para el enraizamiento de
79
estacas
van
de
Mayo
Septiembre,
poca
en
que
nuestras
latitudes
la
especie entra en reposo vegetativo (Machado de Carvalho y Zaidan, 1995). Asimismo, los resultados obtenidos por los autores son mucho menores a los nuestros (65% vs 31%).
En
las
estacas
apicales
se
observan
mejores
respuestas en las variables, longitud de races, peso de las mismas y relacin peso de races/peso total (figuras 4, 5, 6, 7, 8, 13, 14 y 15 y tablas 5, 6, 7, 8, 9, 14, 15 y 16). La mejor aptitud para el enraizamiento de las estacas apicales, podra explicarse por la probabilidad de mayores concentraciones de sustancias endgenas
promotoras del enraizamiento sintetizadas en las yemas apicales. Asimismo las estacas apicales son ms jvenes y por consiguiente existe mayor cantidad de clulas
meristemticas (Hartmann et al, 1992). Sin embargo en el porcentaje de enraizamiento se observ mejores
resultados con las estacas subapicales (figuras 1, 2 y 3 y tablas 2, 3 y 4), en este caso al ser ms pesadas podra haberse favorecido la acumulacin de
carbohidratos, promoviendo el enraizamiento. Machado de Carvalho y Zaidan (1995), rechazan el enraizamineto de estacas adecuadas. subapicales, pues no logran respuestas
80
Todas las variables relativas al enraizamiento se ven favorecidas con la inclusin de tratamiento
rizognico (figuras 2, 3, 5, 6, 8, 9, 14 y 15 y tablas 3, 4, 6, 7, 9, 10, 15 y 16), por lo que podramos afirmar que los mismos, no solo favorecen el porcentaje de enraizamiento (induccin de races), sino la calidad de las mismas, longitud (en nmero y tamao), ya que el mismo, era mayor en los tratamientos con IBA (datos no presentados); desarrollo de adems las estos races tratamientos formadas, estimulan el la
favoreciendo
particin de carbohidratos hacia las mismas (relacin peso de races/peso total, figuras 14 y 15 y tablas 15 y 16)
81
CONCLUSIONES Y CONSIDERACIONES FINALES
82
CONCLUSIONES
- Los mejores resultados cuantitativos de las distintas variables (longitud de races, pesos de races y parte area y relacin peso de races/peso total) en el enraizamiento de estacas se observan con estacas apicales, pero asimismo se logran respuestas adecuadas con estacas subapicales.
- Los tratamientos rizognicos afectan los porcentajes de enraizamiento, mejorando la calidad de las races formadas (nmero, largo y peso).
El enraizamiento es posible durante todo el ciclo vegetativo.
- El humus de lombriz y turba es un sustrato altamente conveniente para ser utilizado en la propagacin.
- Las diferencias encontradas en los clones utilizados sugiere que la heterogeneidad de una poblacin de Stevia rebaudiana Bert. permite la seleccin de distintos genotipos
83
para caracteres determinados.
CONSIDERACIONES FINALES
Stevia mundial, como
rebaudiana muy
Bert.
se
presenta la
nivel de
promisoria,
para
produccin
edulcorantes naturales de bajo contenido calrico. Si un pequeo porcentaje del mercado de edulcorantes, pudiera ser ocupado por el estevisido, seran necesarias
grandes cantidades de materia prima.
Debido a la heterogeneidad de las poblaciones en cuanto al contenido de estevisido, es imprescindible partir de material seleccionado el cual debera ser
forzosamente propagado vegetativamente. Por lo tanto, es indispensable contar con mtodos de enraizamiento que empleando tcnicas sencillas y utilizado a escala industrial. econmicas puedan ser
Los resultados observados en esta experiencia contribuirn al mejoramiento de los ya existentes.
Podra sugerirse que la continuidad de estos ensayos, incluyan otros que estudien la posibilidad de prolongar
el perodo de propagacin inhibiendo de algn modo la
84
floracin.
Asimismo,
sera
interesante
establecer
el
tiempo mnimo necesario para la formacin de races.
Hemos observado, que utilizando humus de lombriz y turba, no solo se mejoran las variables concernientes a la calidad de las races, sino que adems tambin se afecta la velocidad en que las mismas se forman. La etapa de enraizamiento se fij en cuatro semanas porque las estacas de turba y arena solo comienzan a enraizar a partir de los 21 das. Mientras que las de turba y humus de lombriz, ya haban comenzado la formacin de races a los 15 das. Acortamientos de esta etapa permitiran una mayor rotacin y eficiencia en el uso de los recursos (ciclos, instalaciones, etc), factores que deben ser tenidos en cuenta al disear un sistema de propagacin a escala industrial.
85
FIGURAS Y TABLAS
86
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
FOTOGRAFIA
112
FOTOGRAFIA: Planta de Stevia rebaudiana Bert. del Banco de Plantas Madres de la Facultad de Agronoma (UBA).
113
ANEXO
114
ANEXO
Medicin de races. Mtodo de Tennant:
En las fechas de evaluacin correspondientes se cortaron las races a ras del tallo, se lavaron y se midieron siguiendo el siguiente mtodo:
Se construy una grilla cuadriculada (0,5 cm), plastificndose posteriormente. Las races de cada una de las plantas muestreadas se distribuy sobre la grilla al azar y con ayuda de una lupa de mano (2,5 veces de aumento), se contabiliz horizontales el y nmero verticales total que de cada
intersecciones
porcin de raz cruzaba.
El largo total de las races de cada una de las plantas se obtuvo utilizando la siguiente frmula de transformacin:
Largo de raz= 11/14 * nmero de intersecciones * unidad de grilla (cm.).
Unidad de grilla correspondiente= 0,5 cm.
115
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125
NDICE Pg. - Resumen ...........................................1 - Introduccin ......................................4 1 - Propiedades de un edulcorante ideal ...........7 2 - Caractersticas de los edulcorantes de uso extensivo .....................................9 2.1 - Sacarina ...................................9 2.2 - Ciclamato .................................10 2.3 - Aspartame .................................11 2.4 - Acesulfame-K ..............................12 3 - Caractersticas edulcorantes del estevisido .12 3.1 - Introduccin ..............................12 3.2 - Propiedades fsico-qumicas de inters en el procesado de alimentos ..............14 3.3 - Propiedades edulcorantes ..................15 3.3.1 - Calidad del sabor dulce ................16 4 - Inocuidad del estevisido ....................17 5 - Utilizacin actual del estevisido ...........19 6 - Formas de comercializacin ...................20 7 - Otros campos de aplicacin ...................21 8 - Mercado mundial de edulcorantes ..............21 8.1 - Sacarina ..................................22 8.2 - Ciclamato .................................22 8.2 - Aspartame .................................23 8.4 - Estevisido ...............................23
126
Pg. 9 - Perspectivas del estevisido .................24 9.1 - Mercado mundial ...........................24 10 - Evolucin histrica ..........................25 11 - Caracterizacin de la Stevia rebaudiana Bert..37 11.1 - Origen y distribucin .....................37 11.2 - Descripcin botnica ......................39 11.3 - Ecotipos ..................................41 11.4 - Citologa .................................42 11.5 - Clima .....................................43 11.6 - Suelos ....................................44 12 - Caractersticas agronmicas ..................45 12.1 - Propagacin sexual de Stevia rebaudiana
Bert. .....................................46 12.2 - Propagacin vegetativa de Stevia rebaudiana Bert. .....................................47 13 - Propagacin vegetativa .......................48 13.1 - Bases fisiolgicas de la iniciacin de races adventicia..........................51 13.1.1 - Efecto de las hojas sobre el enraizamiento ..........................51 13.1.2 - Fotosntesis de las estacas ............52 13.2 - Factores que afectan la multiplicacin por estacas ...................................53 13.2.1 - Diferencias entre plantas individuales procedentes de semilla .................53
127
Pg. 13.2.2 - Diferencias entre las zonas apicales y basales de la rama .....................53 13.2.3 - Estado reproductivo o vegetativo .......54 13.3 - Sustratos para el enraizamineto ...........55 13.3.1 - Arena ..................................57 13.3.2 - Turba ..................................57 13.3.3 - Humus de lombriz .......................58 13.4 - Mezclas de suelo para cultivo en maceta ...59 - Justificacin, Objetivo e Hiptesis ..............61 - Materiales y mtodos .............................64 - Resultados y discusin ...........................69 - Figuras y tablas .................................87 - Fotografa ......................................113 - Anexo. Mtodo de Tennant ........................115 - Bibliografa ....................................117
128
NDICE DE FIGURAS Y TABLAS Figura 1- Porcentaje de enraizamiento, de 3 fechas (F1F2-F3),para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) .......................88 2- Porcentaje de enraizamiento, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) .............89 3- Porcentaje de enraizamiento, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ............90 4- Longitud de races, de 3 fechas(F1-F2-F3),para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) ......................................91 5- Longitud de races, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) ............................92 6- Longitud de races, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca,sustrato y hormona) .....................93 7- Peso de races, de 3 fechas (F1-F2-F3), para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) ......................................94 8- Peso de races, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) .....................................95
129
Pg.
Pg. 9- Peso de races, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) .....................96 10- Peso de la parte area, de 3 fechas (F1-F2-F3), para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) ..............................97 11- Peso de la parte area, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) ...................98 12- Peso de la parte area, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ............99 13- Relacin Peso de races/Peso total, de 3 fechas (F1-F2-F3), para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) .....100 14- Relacin Peso de races/Peso total, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) ............101 15- Relacin Peso de races/Peso total, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ..102
130
Tabla 2- Porcentaje de enraizamiento, de 3 fechas (F1F2-F3),para los distintos factores (fecha,
Pg.
1- Resumen de los factores ensayados .............103
clon, estaca y sustrato) ......................104 3- Porcentaje de enraizamiento, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) ............104 4- Porcentaje de enraizamiento, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ...........104 5- Longitud de races, de 3 fechas(F1-F2-F3),para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) .....................................105 5.1- Longitud de races, de 3 fechas(F1-F2-F3), interacin Fecha x Estaca (F1-F2-F3 x Ap-Sap) ......................................106 5.2- Longitud de races, de 3 fechas(F1-F2-F3), interacin Clon x Estaca (A-B-C x Ap-Sap) ....106 5.3- Longitud de races, de 3 fechas(F1-F2-F3), interacin Fecha x Clon (F1-F2-F3 x A-B-C) ...106 6- Longitud de races, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) ...........................105
131
Pg. 6.1- Longitud de races, de la tercer fecha (F3), interacin Sustrato x Hormona (Tl-Ta x IBA-noIBA) ...................................107 7- Longitud de races, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ...................105 8- Peso de races, de 3 fechas (F1-F2-F3), para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) .....................................108 9- Peso de races, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) ....................................108 9.1- Peso de races, de la tercer fecha (F3), interacin Sustrato x Hormona (Tl-Ta x IBA-noIBA) ...................................109 10- Peso de races, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ...................108 11- Peso de la parte area, de 3 fechas (F1-F2-F3), para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) ............................110 11.1- Peso de la parte area, de 3 fechas (F1-F2-F3), interacin Fecha x Clon (F1-F2-F3 x A-B-C) ..111
132
Pg. 12- Peso de la parte area, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) ...........................110 13- Peso de la parte area, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ...........110 14- Relacin Peso de races/Peso total, de 3 fechas (F1-F2-F3), para los distintos factores (fecha, clon, estaca y sustrato) ......................112 15- Relacin Peso de races/Peso total, de la tercer fecha (F3), para los distintos factores (clon, estaca, sustrato y hormona) ...................112 16- Relacin Peso de races/Peso total, del clon A, para 2 fechas (F2-F3), de los distintos factores (fecha, estaca, sustrato y hormona) ..112
133
AGRADECIMIENTOS
- Al Ing. Agr. Manuel C. Marcavillaca, que cedi el material inicial de de propagacin, trabajo de que posibilit y la me
realizacin
este
intensificacin
permiti el acceso a su bibliografa personal.
- A la Ing. Agr. Marta Divo de Sesar, por dedicarme su tiempo y conocimientos, por inculcarme orden y
prolijidad, tanto en el trabajo como en la escritura y presentacin de este trabajo de intensificacin.
- A los Ing. Agr. Fernando Vilella, Pablo Pristupa y al Tcnico Agrcola Emilio Mirabelli, por los consejos y aportes brindados durante este trabajo.
- A los responsables del Laboratorio de Semillas, por brindarme las instalaciones y equipos del mismo.
134
A mis padres
135
PROPAGACION VEGETATIVA DE STEVIA REBAUDIANA BERTONI

Trabajo de Intensificacin para optar al ttulo de Ingeniero Agrnomo.
Alumno: DARO R. TAIARIOL Tutor: Ing. Agr. FERNANDO VILELLA
Facultad de Agronoma. Universidad de Buenos Aires.
1995
136

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RESUMEN

natural, sin efectos colaterales.

Su inclusin en el cdigo alimentario nacional (Resolucin 101 del 22-2-1993) y la posibilidad de

exportacin ha incrementado el inters en esta especie por parte de los productores.

alternativas, sencillas y econmicas, que permitan la propagacin masiva de genotipos selectos.

muchas personas (ejemplo: diabetes, obesidad), y

(Cardozo y Rodrguez, 1986).

ciclamato-sacarina en la relacin 10:1.

cloruro de sodio y los condimentos (Morita, 1977).

1 - Propiedades de un edulcorante ideal:

siguientes requerimientos: (Ishima y Kakayama, 1976).

- Tener el sabor dulce de la sacarosa, sin componentes secundarios indeseables.

poder edulcorante o por no ser metabolizado por organismo.

- Ser estable y mantener sus caractersticas con el tiempo.

- No poseer propiedades carcingenicas

edulcorantes, uso de aditivos, etc.

2 - Caracterizacin de los edulcorantes de uso extensivo: (Ishima y Kakayama, 1976)

Portugal, Espaa y Sudfrica.

utilizacin en los casos de coccin o calentamientos prolongados.

3 - Caractersticas edulcorantes del estevisido:

solamente de carbono, hidrogeno y oxgeno, siendo su formula C38 H60 O18.

-Solubilidad: es altamente soluble en agua, alcohol etlico y metlico e insoluble en ter.

-Resistencia al ph: es suficientemente estable entre ph 3 a 9.

diluido y por diastazas.

Propiedades edulcorantes: (Fujita, 1979)

caractersticas de potenciar su dulzura por la accin de diversas sustancias comunes en la formulacin de

sacarosa y glucosa, siguindoles la fructuosa, sorbitol y malitol.

ctrico, actico, lctico, mlico y tartrico.

aspartame, sacarina, glucosa, fructuosa y muchas otras sustancias edulcorantes.

4 - Inocuidad del estevisido:

txicos (Felippe, 1982).

inexistente en las hojas de Stevia y producido durante

otros estudios realizados anteriormente (Fujita, 1979)

desarrollo de bacterias orales cariognicas (Felippe, 1977; Sakaguchi y Kan, 1982).

5 - Utilizacin actual del estevisido:

necesitarn grandes cantidades de materia prima abastecer la demanda.

6 - Formas de comercializacin: (CEPEX, 1982)

7 - Otros campos de aplicacin: (CEPEX, 1982)

En el caso de que la sustitucin del azcar por el estevisido se hiciere con

caracterstico del estevisido.

8 - Mercado mundial de edulcorantes: (CEPEX, 1989)

Es el edulcorante ms utilizado. El consumo y la produccin puede ser desglosado de la siguiente manera:

EE.UU. Europa Japn Otros Total

3.500.000 2.000.000 800.000 2.700.000 9.000.000

2.270.000 2.800.000 3.930.000 9.000.000

El precio actual de la sacarina sdica en EE.UU. es de 8,42 U$S/kg.

9 - Perspectivas del estevisido:

9.1 - Mercado mundial:

estevisido, representara cifras significativas.

Teniendo edulcorantes que

occidental las pruebas

10 - Evolucin histrica:(Marcavillaca y Divo de Sesar, 1993)

travs de mineros e indios de la regin de Caaguaz y Monday de la Repblica del Paraguay.

1899- El Dr. Bertoni describe a la planta como Eupatorium.

1904- Bertoni verifica que la planta pertenece al gnero Stevia.

1905- Se registra como Stevia rebaudiana Bertoni en los libros internacionales.

componente dulce de la hoja.

1919- Se envan muestras a la Facultad de Agronoma y Veterinaria de la Repblica Argentina, donde se

1952- The National Institute of Arthritis and Metabolic Diseases en Bethesda,

estudia la estructura qumica y hace investigaciones con el estevisido.

edulcorante, comparado con los dems conocidos.

edulcorante presente en Stevia.

multiplicadas en la zona de Capitn Bado.

vivero y cultivo extensivo con plantitas tradas de la