Escherichia Coli

Tambin conocida por la abreviacin de su nombre como, E. Coli. Se trata de una enterobacteria que se encuentra generalmente en los intestinos y por lo tanto en las aguas negras, pero se le puede encontrar en todos lados, dado que es un organismo de muchas ubicaciones. Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo, adems de producir las vitaminas B y K.

Es un bacilo que reacciona negativamente a la tincin de Gram (Gram negativo). Es anaerobio facultativo Mvil por flagelos pertricos (que rodean su cuerpo) No forma esporas Capacidad de fermentar la glucosa y lactosa Su prueba de IMVIC es ++--

La Escherichia coli, en su hbitat natural, vive en los intestinos de la mayor parte de los mamferos sanos. Es el principal organismo anaerobio facultativo del sistema digestivo. En individuos sanos, es decir, si la bacteria no adquiere elementos genticos que codifican factores virulentos, esta acta como un comensal formando parte de la flora intestinal y ayudando as a la absorcin de nutrientes. En humanos, la Escherichia coli coloniza el tracto intestinal de una persona adhirindose a las mucosidades del intestino grueso en el plazo de 48 horas despus de la primera comida.

Especies:
Escherichia coli Enteropatognica (ECEP) Esta cepa causa diarrea en humanos, conejos, perros y caballos, al igual que la enterotoxignica, pero la etiologa y los mecanismos moleculares de colonizacin son diferentes. Carece de fimbrias y no produce las toxinas ST y LT, pero utilizan la protena intimina, una adhesina, para adherirse a las clulas intestinales. Este virotipo posee una serie de factores de virulencia que son similares a lo que se encuentra en Shigella, como la toxina shiga. La adherencia a la mucosa intestinal causa una reordenacin de la actina en la clula hospedante, que induce una deformacin significativa. Estas bacterias son moderadamente invasivas: penetran en las clulas hospedadoras provocando una respuesta inflamatoria. La causa principal de diarrea en los afectados por esta cepa son seguramente los cambios provocados en la estructura de las clulas intestinales. Escherichia Coli Enterotoxignica (ECET) Se parece mucho a Vibrio Cholerae, se adhiere a la mucosa del intestino delgado, no la invade y elabora toxinas que producen diarrea. No hay cambios histolgicos en las clulas de la mucosa y muy poca inflamacin. Produce diarrea no sanguinolenta en nios y adultos, sobre todo en pases en vas de desarrollo, aunque los desarrollados tambin se ven afectados. Emplea varias toxinas, incluyendo la enterotoxina resistente al calor y la enterotoxina termolbil. Escherichia Coli Enteroinvasiva (ECEI) Es inmvil, no fermenta la lactosa. Invade el epitelio intestinal causando diarrea sanguinolenta en nios y adultos. Libera el calcio en grandes cantidades impidiendo la solidificacin sea, produciendo artritis y en algunos casos arterioesclerosis. Es una de las E. Coli que causa ms dao debido a la invasin que existe en el epitelio intestinal. Escherichia coli enterohemorrgica o verotoxignica (ECEH) Brotes caracterizados por dolor abdominal, diarrea acuosa con sangre y poco o nada de fiebre, cuadro al que se le llam colitis hemorrgica (CH) y que era debido a la ingestin de carne cruda o mal cocida. Escherichia Coli Enteroagregativa o enteroadherente (ECEA) Slo encontrada en humanos. Son llamadas enteroagregativas porque tienen fimbrias con las que aglutinan clulas en los cultivos de tejidos. Se unen a la mucosa intestinal causando diarrea acuosa sin fiebre. No son invasivas. Producen hemolisina y una enterotoxina ST similar a la de las enterotoxignicas. se le asocian dos toxinas - Toxina termoestable enteroagregante (EAST) - Toxina codificada por plasmidos (PET) Escherichia Coli de adherencia difusa (ECAD) Se adhiere a la totalidad de la superficie de las clulas epiteliales y habitualmente causa enfermedad en nios inmunolgicamente no desarrollados o malnutridos. No se ha demostrado que pueda causar diarrea en nios mayores de un ao de edad, ni en adultos y ancianos.

Patogenia:
La Escherichia coli puede causar infecciones intestinales y extra intestinales generalmente graves, tales como infecciones del aparato excretor, cistitis, meningitis, peritonitis, mastitis, septicemia y neumona Gram-negativa.

Muestras biolgicas de donde se aslan:

Para el aislamiento, la identificacin y la caracterizacin de cepas de E. coli se aplican mtodos tradicionales, mtodos in vivo e in vitro y de biologa molecular; a continuacin se mencionarn los mtodos tradicionales y los de biologa molecular. El mtodo tradicional es el aislamiento de la bacteria: - Tomada directamente de materia fecal o con hisopo rectal. - Despus se siembra con la punta del hisopo en la parte superior de una placa de agar MacConkey u otro medio selectivo. - Y con un asa redonda de nicromel, se contina el aislamiento, sembrando por estra cruzada. - Despus se incuba a 37 C durante 18-24 h. - Posteriormente se seleccionan de 5 a 10 colonias tpicas de E. coli lactosa positivas. - En muestras provenientes de casos de diarrea con sangre se deben seleccionar tambin cepas lactosa negativa que pudieran ser EIEC.

Identificacin:
La identificacin se hace mediante pruebas bioqumicas en tubo como TSI, LIA, MIO, citrato, sorbitol, mucato, urea, rojo de metilo, Voges Proskauer, malonato y caldo manitolrojo de fenol. Simultneamente se siembra la cepa en tubos de agar base sangre (BAB), sin sangre para posteriormente hacer la serologa.

Pruebas Bioqumicas:
Prueba TSI (Triple Sugar Iron o Triple Azcar Hierro) El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de produccin de cido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un nico medio. Tambin permite la identificacin de la produccin de SH2. Esta es una prueba especfica para la identificacin a nivel de gnero en la familia Enterobacteriaceae, con objetivo de diferenciar entre: Bacterias fermentadoras de la glucosa Bacterias fermentadoras de la lactosa Bacterias fermentadoras de la sacarosa Bacterias aerognicas Bacterias productoras de SH2 a partir de sustancias orgnicas que contengan azufre.

Procedimiento: Inocular los tubos de TSI con punta (alambre recto). Para eso introducir la punta hasta 3 a 5 mm. Del fondo del tubo. Tras retirar el alambre del fondo, estriar el pico con un movimiento hacia uno y otro lado. Incubar a 35 durante 24 horas. Posteriormente se debe medir el pH de los cultivos. Resultados: - Pico alcalino/fondo alcalino: No hay fermentacin de azcares. Caracterstica de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas sp. - Pico alcalino/fondo cido: Glucosa fermentada, lactosa ni sacarosa fermentadas. Shigella spp. - Pico alcalino/fondo negro: Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosas fermentadas, produccin de cido sulfhdrico. Salmonela spp. - Pico cido/fondo cido: Glucosa y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse SH2 o no. Escherichia coli. A estos resultados se les agrega el resultado de la produccin de gas.

Pruebas Bioqumicas IMVIC:

Agar Citrato
La utilizacin de citrato como nica fuente de carbono es una prueba til en la identificacin de enterobacterias. La utilizacin de citrato como nica fuente de carbono se detecta en un medio de cultivo con citrato como nica fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinizacin del medio. Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7,6. Procedimiento: Se inocula el agar inclinado en una sola estra en el pico. Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio slido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden producir falsos positivos por crecimiento a partir del medio de cultivo del inculo. Incubar a 35C durante 4 das. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estra, acompaado o no de un viraje del indicador al azul. Resultados: (+) Klebsiella spp. ( - ) Escherichia Coli

Prueba de la Oxidasa
El objetivo de la prueba Oxidasa es buscar la presencia de la enzima Citocromo C oxidasa. Se trata de un enzima que oxida el citocromo C de la cadena transportadora de e-. Este se detecta utilizando el tetra para fenilendiamina: el reactivo de oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo C oxidasa. En estado reducido es incolora, pero cuando se oxida vira a prpura. Procedimiento: Con un pequeo papel de filtro aadimos reactivo de Kovacs, lo impregnamos y a partir del tubo con la bacteria problema tomamos un poco con el asa de platino y ponemos en el papel. Tras unos 30 segundos, observamos si ha ocurrido algn cambio. - Las bacterias que dan positivo a esta prueba tienen generalmente un ciclo respiratorio oxidativo. - Se considera positiva esta prueba cuando toma un color prpura la muestra. Resultados: (+) Pseudomonas aeruginosa (-) Escherichia coli

 Indol
El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptofano con produccin de indol, cido pirvico y amonaco. La produccin de indol es una caracterstica importante para la identificacin de muchas especies de microorganismos. La prueba de indol est basada en la formacin de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo del p-dimetilaminobenzaldehdo. Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano. Procedimiento: Inocular el caldo triptofano con el organismo en estudio e incubar a 35C durante 18 a 24 horas. Al finalizar este perodo, aadir 5 gotas de reactivo de Kovacs por la pared interior del tubo. El desarrollo de un vivo color rojo fucsia en la interfase del reactivo y el caldo, segundos despus de aadir el reactivo indica la presencia de indol y una prueba positiva. Resultados: (+) Escherichia coli ( - ) Klebsiella pneumoniae

Rojo Metilo
Una de las caractersticas taxonmicas que se utilizan para identificar los diferentes gneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporcin de productos de fermentacin que se originan por la fermentacin de la glucosa. Se conocen 2 tipos generales: La fermentacin cido-mixta y la fermentacin del 2,3 butanodiol. En la fermentacin cido mixta se forman fundamentalmente lctico, actico y succnico, adems de etanol, H2 y CO2. En la va del butanodiol se forman cantidades menores de cido (acetato y succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2. El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la produccin de cidos por la va de fermentacin cido mixta. Procedimiento: Inocular el caldo Rojo Metilo con un cultivo puro de no ms de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubacin agregar unas gotas del reactivo de rojo de metilo. La prueba es positiva si se desarrolla de un color rojo estable. Esto indica que la produccin de cido es suficiente para producir el viraje del indicador y el microorganismo ferment la glucosa por la va de cido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo.

Resultados: (+) Escherichia coli ( - ) Enterobacter aerogenes

Vogues Proskauer
En la prueba de Voges-Proskauer se determina la va de fermentacin del butanodiol descripta en la prueba de rojo de metilo. El acetil-metil-carbinol (o acetona) es un producto intermediario en la produccin de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia. Procedimiento: Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de no ms de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35C durante 24 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubacin transferir 1 ml del caldo RM/VP a un tubo limpio y agregar 0,6 ml de alfa-naftol al 5% y 0,2 ml de KOH al 40%. Agitar el tubo cuidadosamente para exponer el medio al oxgeno atmosfrico y dejarlo reposar durante 10 a 15 minutos. El desarrollo de un color rojofucsia luego de 15 minutos indica la presencia de diacetilo, producto de oxidacin de la acetona y por lo tanto una prueba VP positiva. Resultados: (+) Enterobacter aerogenes (-)Escherichia coli

Bibliografa
Informacin resumida: http://www.slideshare.net/wao2008/escherichia-coli-presentation Definicin: http://es.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli#Funci.C3.B3n_normal Especies, Identificacin y Aislamiento: http://www.scielosp.org/pdf/spm/v44n5/14036.pdf Pruebas Bioqumicas: http://html.rincondelvago.com/pruebas-bioquimicas.html