UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

Bioqumica celular y de los tejidos II

Bilirrubinas.

Grupo: 1551

Objetivos. -Analizar el metabolismo de la bilirrubina -Determinar la importancia de la determinacin de bilirrubina como prueba de laboratorio para determinar el funcionamiento heptico. -Emplear la tcnica de rutina de laboratorio para cuantificar bilirrubina directa y bilirrubina indirecta. Introduccin. La bilirrubina, pigmento amarillo muy soluble en disolventes orgnicos y muy poco soluble en soluciones acuosas a pH fisiolgico, es un catabolito, formado de la degradacin de la hemoglobina cuando los eritrocitos son remplazados por su extrema fragilidad en el torrente sanguneo gracias a las clulas del sistema de fagocitos mononucleares, los del bazo principalmente, aunque tambin participan hgado y la medula sea. Un 80% proviene de este proceso mientras que el 20 % proviene de otras sustancias que contienen el grupo hemo, como la mioglobina, los citocromos, las catalasas y peroxidasas. Una vez liberada la hemoglobina es desintegrada en las fracciones, globina y grupo hemo. Este ltimo es degradado, mediante la ruptura del anillo de porfirina, por la accin de la enzima oxigenasa del hemo, originando el compuesto coleglobina. La coleglobina se divide en dos componentes, la globina, la cual al separarse pasa a la reserva orgnica de aminocidos para ser aprovechados y la biliverdina o sal de hierro de biliverdina, se reduce mediante la enzima biliverdina reductasa, originando la bilirrubina indirecta (BI) o no conjugada (BNC). Debido a sus propiedades y solubilidad en lpidos, puede difundir libremente a travs de las membranas celulares de varios tejidos, como es el caso de la BI libre al lquido cefalorraqudeo y la fijacin en los ncleos basales, donde llega a producir necrosis neuronal. Metodologa. -Obtener una muestra de sangre en un tubo Vacutainer de tapn rojo. -Centrifugar a 3000 rxm durante 5 minutos. -En tres tubos de fotocolormetro, marcados B (blanco), D (directa) y T (total) colocar: Blanco 0.2 mL 2.5 mL -----0.2 mL ----Bilirrubina directa 0.2 mL 2.5 mL --------0.2 mL Bilirrubina total 0.2 mL ----2.5 mL 0.2 mL

Muestra (Suero) Agua destilada Desarrollador Reactivo sulfanlico Diazorreactivo

-Se lee a 530nm, estas lecturas son a los 5 y 14 minutos, la BI es a los 5 minutos.

Resultados. TUBO Blanco Directa Total ABSORBANCIA 0.001 0.008 0.021

Bilirrubina Directa (BD)= (Absorbancia del tubo D - Absorbancia del tubo B) x 9.09 = mg/dL Bilirrubina Directa = (0.008 - 0.001) x 9.09 = 0.06363 mg/dL Bilirrubina Total (BT) = (Absorbancia del tubo T - Absorbancia del tubo B) x 9.09 = mg/dL Bilirrubina Total = (0.021 -0.001) x 9.09 = 0.1818 mg/dL Bilirrubina Indirecta (BI) = Bilirrubina total Bilirrubina directa Bilirrubina Indirecta = 0.1818 - 0.06363 =0.11817 mg/dL Anlisis de resultados. Valores de Referencia 0.1 1.00 mg/dL 0.0 0.3 mg/dL 0.1 0.7 mg/dL Valores obtenidos 0.1818 mg/dL 0.06363 mg/dL 0.11817 mg/dL

Bilirrubina Total Bilirrubina Directa Bilirrubina Indirecta

Los resultados obtenidos caen dentro de los parmetros normales de bilirrubinas en sangre, lo que nos dice que hay problemas de ningn tipo de hictericia en el individuo cuya sangre se analiz. Conclusiones. En conclusin, se descarta ictericia de cualquier tipo en el paciente y un buen funcionamiento de rganos como el bazo e hgado al igual que una normalidad en el ciclo vital de glbulos rojos en el organismo. Cabe resaltar que para un diagnstico ms general del funcionamiento del hgado y bazo, se recomienda realizarse pruebas de funcin heptica y una prueba fsica de bazo respectivamente, capaces de detectar anomalas, deficiencias y patologas en estos rganos. Referencias. ngel M. G., Interpretacin clnica del laboratorio. 7 Ed., Mxico D.F., Editorial Mdica Panamericana ARGELLES G., Fundamentos de Hematologa, 3 edicin. Mxico D.F; Editorial medica panamericana, 2004 Manual de laboratorio de Hematologa Clnica

Cuestionario. 1.- Cundo se recomienda realizar las determinaciones de bilirrubina en sangre? Cuando existe la probabilidad de deficiencia heptica o sntomas de ictericia. La ictericia es la coloracin amarillenta de la piel y mucosas debida a un aumento de la bilirrubina (valores normales de 0,3 a 1 mg/dl) que se acumula en los tejidos, sobre todo aquellos con mayor nmero de fibras elsticas (paladar, conjuntiva). Se hace clnicamente evidente cuando la bilirrubina es mayor de 2 mg/dl. 2.- Mencione las caractersticas que diferencian a la bilirrubina directa de la indirecta La bilirrubina no conjugada (BNC), es llamada as porque no reacciona directamente con el diazorreactivo de Van Der Bergh en solucin acuosa, sino que nicamente cuando se ha disuelto en metanol o etanol. Se encuentran unidas en su totalidad dos molculas de BNC a una de albumina, esto impide su que pueda difundir a travs de las membranas celulares y por lo tanto tiende a retenerse dentro del compartimiento plasmtico, bajando as el peligro de la bilirrubina en los tejidos. La concentracin normal de BNC depende de tres factores fundamentales: 1.- la magnitud de la entrada y salida del compartimiento plasmtico, 2.- La concentracin plasmtica de la albumina y 3.- disponibilidad de los sitios de unin con la albumina. Sustancias como sulfamidas, aspirinas, tiroxina y cidos grasos, compiten por los sitios de unin con la albumina y la bilirrubina, de manera que si la BNC queda libre en el plasma puede difundir inmediatamente hacia los tejidos. Se cree que la transferencia de la BNC al hepatocito contiene mecanismos de transporte especfico que facilitan el flujo de la bilirrubina. La mayor parte de BNC que penetra al hepatocito se une a receptores especficos, dos de los cuales se han designado como Z y Y. La bilirrubina conjugada (BC), la conjugacin de la bilirrubina se lleva a cabo mediante una unin tipo ester con los dos residuos de cido propinico del pigmento, formndose diglucurnido de bilirrubina, una menor porcin de la bilirrubina excretada en la bilis se encuentra como monoglucornido de bilirrubina. La BC, es mucho mas soluble en agua que la BNC, por lo tanto puede ser excretada en la orina y en la bilis. La excrecin de la bilirrubina una vez conjugada en el hgado es excretada en forma rpida, presumiblemente en contra de un gradiente de concentracin, a travs de las microvellosidades de la pared canicular hacia la bilis. Cuando la BC pasa a la sangre, se une menos firmemente a la albumina que la BNC, por lo cual puede difundirse a la orina. La BC es insoluble en lpidos, esto le impide pasar fcilmente a travs de la pared de los vasos sanguneos hacia el cerebro. Gracias a la bilis la BC llega al intestino y la flora bacteriana del tracto intestinal inferior reduce a la BC a cromgenos que en conjunto reciben el nombre de urobilingeno. La mayor parte de del urobilingeno formado en el colon es excretado en las heces mientras que una pequea fraccin en forma de urobilina

es reabsorbida y luego excretada en la orina. El urobilingeno puede sufrir posteriores oxidaciones por las bacterias del intestino y eliminarse como estercobilingeno en las heces, lo cual le brinda su color caracterstico. 3.- Qu factores causan la hiperbilirrubinemia? Edad gestacional baja, exposicin baja a la nutricin parenteral (aportacin al paciente por va endovenosa los nutrientes bsicos que necesita), la ausencia de alimentacin enteral y la sepsis (Es una enfermedad grave en la cual el torrente sanguneo se encuentra inundado de bacterias. es causada por una infeccin bacteriana que puede originarse en cualquier parte del cuerpo como puede ser hgado o vescula biliar) son las principales causas de hiperbilirrubinemia.