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TEMA 6.- BIOACTIVACIN Y DETOXICACIN: Biotransformaciones de XBs. Compuestos biodegradables y no biodegradables o persistentes: bioacumulacin y biomagnificacin. Rutas para la biotransformaciones de XBs. Reacciones de fase I y de fase II. Transformaciones de activacin y de detoxicacin.

BIOTRANSFORMACIONES DE LOS COMPUESTOS XENOBIOTICOS

Los organismos estn expuestos a un gran nmero de diferentes sustancias qumicas xenobiticas, que, una vez absorbidas por el organismo, se acumulan en l y pueden amenazar su equilibrio funcional. Si la concentracin de cualquier xenobitico en el organismo es excesiva, inevitablemente comportar un riesgo para las funciones de las biomolculas que acten en su entorno, pudiendo alterar el correcto funcionamiento de un rgano, tejido, sistema, etc, interfiriendo en las reacciones bioqumicas. Al igual que la absorcin y la distribucin, dos procesos de transferencia, la Biotransformacin tambin se lleva a cabo utilizando los mecanismos existentes en los tejidos, para ello se usa la misma maquinaria bioqumica con la que se metabolizan los compuestos endgenos, a veces de estructura qumica similar. Al conjunto de reacciones metablicas por medio de las cuales los organismos modifican la estructura qumica de un XB se le denomina BIOTRANSFORMACIN. Podemos predecir que la biotransformacin de un XB consiste fundamentalmente en incrementar su polaridad para posibilitar su eliminacin, en convertir un compuesto no polar en uno soluble en agua. Este es el mecanismo ms comn que usan los organismos para transformar y eliminar los XBs ambientales. Un XB en el interior del organismo puede seguir muchas opciones, pero simplificando: a) puede ser excretado sin que haya sufrido modificacin alguna, con su estructura original. b) puede sufrir reacciones de transformacin metablica, biotransformaciones. Cuando stas se producen, los compuestos son biodegradables. Existe un conjunto de enzimas en los organismos que es ms responsable de las biotransformaciones de XBs. METABOLISMO Y BIOTRANSFORMACION El metabolismo de un organismo es el conjunto de reacciones enzimticas organizadas en rutas bioqumicas que sirven para mantener la funcionalidad de las clulas con las caractersticas estructurales y funcionales propias. Cuando las reacciones enzimticas operan sobre componentes endgenos nos estamos refiriendo al metabolismo propiamente dicho y cuando las reacciones enzimticas operan sobre los xenobiticos nos referimos a las reacciones de biotransformacin. Ambos trminos metabolismo y biotransformacin se usan a veces como sinnimos, particularmente cuando se refiere al campo de los xenobiticos o de "drugs" . Por ejemplo, las enzimas biotransformadoras de xenobiticos son frecuentemente llamadas enzimas metabolizantes de drogas. Cualquier enzima puede operar sobre su sustrato natural o sobre un compuesto XB, sea frmaco, contaminante, etc.: enzima Sustrato --------------------------- Producto o metabolito Cofactor El trmino enzimas bitransformadoras de xenobiticos sera mas apropiado, aunque el trmino enmascarara el hecho de que varios compuestos endgenos, como los esteroides, puedan ser sustratos de estas mismas enzimas. Aplicar el trmino metabolismo a la biotransformacin de xenobiticos, as como el trmino de metabolito a los derivados metablicos de aquellos no parece muy adecuado, pero suele ser generalizado. Igualmente cuando se habla de individuos metabolizadores pobres, aquellos con alguna deficiencia enzimtica y que tienen menor capacidad de biotransformar los XBs., o el trmino metabolizadores extensivos para aquellos individuos con fenotipo normal. Podra resultar conveniente aplicar el trmino de sistemas biotransformadores, aunque no es usual. Biotransformacin: Cualquier reaccin bioqumica que opere sobre un XB a cargo de los sistemas enzimticos de un organismo. Se entender como BIODEGRADACIN el conjunto de transformaciones metablicas que sufra un XB a lo largo de su paso por un organismo, especialmente cuando el XB se degrade y ha sido el proceso mas estudiado para muchos xenobiticos en muchos tipos diferentes de organismos (fundamentalmente organismos).

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Biodegradacin: El resultado de todas las biotransformaciones de un XB en un entorno concreto, a cargo de los diferentes organismos que operen en l. La capacidad biotransformadora de los organismos es muy diferente y est relacionada, adems, con su grado de exposicin a XBs. Por ejemplo, los insectos, que se alimentan de una amplia variedad de plantas, tienen una mayor capacidad para biotransformar XBs que aquellos insectos que se alimentan de un nmero limitado de plantas. Comparados con los mamferos, los peces tienen una ostensible menor capacidad de biotransformar XBs, porque ellos pueden eliminar ms fcilmente los XBs no transformados a travs de las branquias. Por otra parte, las diferencias especficas en la capacidad de biotransformar XBs entre los mamferos no refleja simplemente unas diferencias en su exposicin a contaminantes, sino otros muchos factores. Algunos compuestos estimulan la sntesis de enzimas implicadas en la biotransformacin de XBs. Este proceso conocido como induccin enzimtica es una respuesta reversible y adaptativa a la exposicin a XBs. La induccin enzimtica hace posible que algunos XBs aceleren su propia biotransformacin y la biotransformacin de otros compuestos. Se estudiar este proceso en relacin con las enzimas tipo Cit. P-450 y algunas conjugasas. BIOACUMULACIN: COMPUESTOS BIODEGRADABLES Y NO DEGRADABLES O PERSISTENTES. Los xenobiticos despus de ser absorbidos, dependiendo de sus propiedades fsico-qumicas, se acumulan en los organismos, especialmente los compuestos con caractersticas lipoflicas o que son fuertemente liposolubles. Otros compuestos se acumulan porque emulan comportamientos de anlogos biolgicos o porque interaccionan con algunas biomolculas. Por ejemplo el Pb es transportado en sangre dentro de los eritrocitos, como el Fe2+ y se acumula en los huesos al igual que el Ca2+ .El Cd2+ interacciona con las enzimas que dependen de Zn2+ (carboxipeptidasas). El comportamiento bioacumulador se basa tambin en las funciones de los rganos excretores (rin, pulmn, etc.), que generalmente se deshacen de las sustancias en contacto con lquidos o con gases, donde estn en contacto con los conductos de estos rganos. El rin excreta sustancias (hidrosolubles) a travs del filtrado glomerular de la sangre, envindolas por los tbulos renales a la vejiga. Desde los tbulos renales muchas sustancias son reabsorbidas hasta la circulacin, bien de forma activa (agua, sales, glucosa) o bien de forma pasiva (sustancias lipoflicas). La reabsorcin pasiva de las sustancias lipoflicas se produce porque dichas sustancias tienden a disolverse en los lpidos de las membranas de las clulas epiteliales. Puesto que en ellas pueden unirse despus a protenas o lipoprotenas de la sangre, as se genera un transporte neto desde el filtrado glomerular hacia la sangre. Este fenmeno explica que la concentracin de sustancias lipoflicas en el organismo pueda ir en aumento y se produzca su bioacumulacin, primordialmente en los tejidos con alto contenido lipdico (adiposo, hgado, mamas, etc). Este fenmeno se produce generalmente para los compuestos que en su paso por el organismo no son degradados, sino que son persistentes, porque no son abordados por los sistemas de biotransformacin. En general son muy persistentes los hidrocarburos, mas si son policclicos y si estn halogenados y son menos persistentes los carbamatos y los organofosforados Estos compuestos XBs persistentes en el medio, se van acumulando desde entornos acuosos hasta los tejidos de las diferentes especies, conduciendo a un fenmeno de bioconcentracin de los XBs. La acumulacin de un compuesto en los tejidos de cualquier organismo para conseguir un nivel mayor que el que tiene el medio ambiente del entorno. BCF: factor de bioconcentracin = razn entre las [ ] y BAF: factor de bioacumulacin = razn entre las concentraciones del organismo/agua o medio, cuando hay un eslabn alimenticio intermediario. Las especies correspondientes a los eslabones superiores de las cadenas trficas suelen soportar los niveles ms altos de los XBs acumulados. Se denomina biomagnificacin a los procesos de bioconcentracin y bioacumulacin que se producen en los organismos de una secuencia trfica a travs de la cadena alimentaria. Ver pirmides invertidas de biomasa y de contenido en XBs o el Proceso de bioacumulacin para TCDDs. Ejemplo de Biomagnificacin de TCDDs (persistentes)
Suelo superficial Hierba Hierba (Seveso) Hgado Granja Seveso 150 pg/g 270 pg/g 100 pg/mg = ng/g 433-633 ng/g 35-24 ng/g

conejos pollos

BA-6;2010/11-3 BIOTRANSFORMACIONES Y ACCIN TXICA: Desactivacin o detoxicacin y bioactivacin o activacin.

Los organismos contienen un nmero de sistemas enzimticos capaces de biotransformar compuestos XBs, al igual que metabolizan los compuestos endgenos para convertirlos en desechables, para transformarlos en otros ms hidrosolubles, que sean mas fcilmente excretables. Las biotransformaciones pueden inducir considerables cambios en la actividad biolgica de los XBs. Si esta actividad decrece, el proceso se denomina de bioinactivacin (detoxicacin) y si aumenta se denomina bioactivacin (activacin). As pues, los efectos txicos de los compuestos exgenos, frecuentemente no provienen de los compuestos patrn sino de los metabolitos reactivos formados a partir de ellos dentro de las clulas. Estas biotransformaciones de compuestos relativamente inertes a metabolitos muy reactivos con una toxicidad intrnseca mayor que la de los compuestos originales se denomina activacion metabolica , bioactivacion o toxificacin
Esquema de biotransformaciones: activacines y desactivaciones XENOBITICOS ABSORCIN
Efectos farmacolgicos XBs en TORRENTE CIRCULATORIO y TEJIDOS

Reacciones metablicas

Efectos patolgicos
Reparacin celular: DNA y protenas

BIOTRANSFORMACIONES
EXCRECCIN Daos en el DNA
Replic acin
DETO XIFICA CIN TOXI FICACI N

Se unen a componentes celulares: Enzimas, Receptores, Membranas, DNA,

DNA alterado
METABOLITOS NO TXICOS

ACTIVACIN DESACTVACIN

METABOLITOS TXICOS o REACTIVOS

Ejemplos de biotransformaciones:

La hidroxilacin en el anillo de aminas aromticas 1s conduce a su destoxicacin, mientras que la hidroxilacin en el N de la aminas primarias conlleva activacin. Los estudios pioneros de James y Miller (aos 40-50) con el colorante N-(CH3)2-4-amino-azobenceno (DAB), un hepatocarcingeno en ratas, demostraron la conversin in vivo del compuesto qumico a productos derivados que eran los que se unan a Ac. nucleicos y protenas, los carcingenos. El -naftil-amino tiende primero a ser metabolizado antes que a causar cncer de vejiga y el 2-Acetilaminofluoreno (2AAF) slo es carcingeno despus de su biotransformacin a N-OH-AAF. Estos hechos establecen la importancia de la activacin metablica en la carcinognesis inducida qumicamente.

DETOXICACIN: La actividad biolgica (incluida la txica) de las sustancias frecuentemente desciende con las biotransformaciones, pero no siempre La biotransformacin suele producir un aumento de hidrosolubilidad de una molcula y as mejora su excreccin. Habr menos acumulacin de la sustancia en el organismo, su nivel descender y puesto que hay una relacin general (dosis-respuesta) entre la concentracin de sustancia y la intensidad de su efecto txico, este tipo de biotransformaciones significan un descenso de la intensidad de la accin biolgica original y se puede definir como bioinactivacin o detoxicacin.
La Detoxicacin, sigue diversos caminos en dependencia de la naturaleza qumica del XB. - Detoxicacin con grupos no funcionales - Detoxicacin de nuclefilos - Detoxicacin de electrfilos - Detoxicacin de radicales libres benceno, tolueno requiere 2 fases -OH, -SH, -NH2 conjugacin: S, Glu, Ac. iones -GSH, epoxi hidrolasa, H-quinona y DT-diaforasa HO. Glutation (-GSH)

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BIOACTIVACIONES: Producen un aumento de la reactividad del XB; generalmente conllevan la FORMACIN DE: Formacin de electrfilos, de radicales libres, de nuclefilos o de reactivos red-ox Estas reacciones aumentan la polaridad de los XBs y la introduccin de grupos polares en una molcula no solo aumenta su reactividad para someterse a posteriores reacciones de destoxicacin y aumenta su reactividad hacia otras muchas molculas, incluidas las biolgicas. Si un XB puede reaccionar con un componente de un sistema biolgico (proteina, DNA, etc, o cualquier metabolito del metabolismo celular) hay una posibilidad razonable de que la clula se vea afectada por l. Si esta influencia es adversa, significa que el XB mostrar un efecto txico. REACCIONES DE BIOACTIVACIN ms frecuentes
Oxidacin Des-conjugacin Microflora intestinal

Enzimas

Cit P450, FMO, Alcohol y aldehido deshidrogenasa, PGSintasa B-liasa de XB- conjugados Hidrolasas y reductasas.

Ejemplos de reaciones: AMINAS PRIMARIAS N-hidroxilacin HIDROCARBUROS POLICCLICOS Derivados epoxi DERIVADOS AZO-BENCENO Radicales PCDD Y PCBs COPLANAR Todos forman metabolitos reactivos carcingenos, sustancias electrfilas que se unen al DNA. Otras biotransformaciones que son reacciones de bioactivacin, son las de oxidacin de los organofosforados, i.e., la oxidacin del insecticida parathion en paraoxon (cambia un >P=S por un >P=O). El parathion es un organotiofosfato, cuya neurotoxicidad

radica en la inhibicin de la aceilcolinesterasa (AChE). La afinidad de la enzima por el paraoxon (metabolito) es muy superior que la que mantiene por el precursor. La reaccin de oxidacin que transforma al txico en un compuesto mas hidrosoluble y mas excretable, le convierte tambin en un compuesto ms txico. El paraoxon, no obstante, puede ser hidrolizado y como consecuencia pierde su efecto txico sobre la AChE. Los nitritos y las aminas forman fcilmente carcingenos en el organismo. Conversin de nitrato, va nitrito en nitrosamina cancergena. La formacin de nitrosamina puede tener lugar en el estmago (pH) despus del consumo de alimentos ricos en nitratos (espinacas), junto con un componente de la dieta que contenga aminas, que pueden nitrosilarse. Las nitrosaminas son carcinognicas porque sus metabolitos son muy reactivos, por ejemplo la hidroxilacin de las Nnitrosaminas procura procesos de metilacin sobre las bases nitrogenadas en el DNA.

PRINCIPALES RUTAS PARA LA BIOTRANSFORMACIN DE XENOBITICOS Las reacciones de biotransformacion son conversiones enzimticas de sustancias xenobiticas lipoflicas hacia productos hidroflicos, generalmente, mas eliminables o excretables. Las reacciones son a veces son coincidentes con las que sufren los

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productos metablicos endgenos (Vit. D, prostaglandinas, ). El conjunto de reacciones de biotransformacin de XB suele agruparse en dos fases: I y II.
XENOBITICOS altamente lipoflicos
metablicamente estables

lipoflicos

polares

hidroflicos

BIOACUMULACIN acumulacin de XBs en lpidos del cuerpo FASE I: + polares bioinactivacin o activacin OXIDACIN, REDUCCIN HIDRLISIS polares FASE II + hidroflicos (bioanactivacin) MOVILIZACIN EXTRACELULAR circulacin plasmtica Excreccin biliar excreccin renal

Aunque la degradacin completa de un XB requiere de muchas reacciones, el ataque incial suele ser mediante las reacciones de fase I. Un primer conjunto de reacciones, en las que la biotransformacin es la conversin de compuestos lipoflicos (no polares) en compuestos mas polares y por lo tanto algo ms solubles en agua, mediante las reacciones llamadas de FASE I, (oxidaciones, reducciones e hidrlisis). Muchas de estas reacciones tienen lugar bajo la catlisis de enzimas componentes de los sistemas llamados oxidasas de funcin mixta (OFM), distribuidas principalmente en hepatocitos. Estas reacciones producen compuestos que pueden ser ms, igual o menos txicos que sus predecesores, aunque si es frecuente que sean ms reactivos, lo que suele conllevar una mayor capacidad txica. Las oxidaciones incluyen todas las monooxigenasas dependientes del Cit P-450, las monooxigenasas que contienen nucletidos de flavina y otras (ver tabla adjunta). Son muchas las reacciones de oxidacin que conllevan la bioactivacin de sus sustratos por la formacin de puentes epoxi. Este es el caso de los XBs con anillos aromticos, cuya oxidacin a derivados hidroxi pasa por la formacin de intermediarios muy reactivos, epoxis. Estos epoxi no son estables y la mayor parte derivan hacia fenoles. A causa de su carcter electrfilo, los epoxi pueden tambin reaccionar con grupos nucleoflicos en biomolculas como las protenas o el DNA, que pueden inducir dao en dichas molculas. Algunas de estas reacciones en el DNA pueden producir alteraciones que eventualmente deriven en cncer. Muchas de las conocidas bioactivaciones carcinogenticas pasan por la produccin de un intermediario reactivo electroflico.

Las reacciones de FASE II son reacciones de conjugacin (glucuronidacin, sulfonacin y conjugacin con GSH con formacin de Ac. Mercaptrico-), donde los XBs polares, son conjugados con sustancias endgenas hidroflicas (ac. glucurnico, sulfato, glutation). Estas reacciones enzimticas estn encaminadas a aumentar an ms la hidrosolubilidad de sus sustratos y por lo tanto hacerlos ms fcilmente excretables por el organismo. Adems la mayor parte de los derivados conjugados tienen muy baja actividad biolgica, por lo tanto muchas reacciones de la fase II son reacciones de bioinactivacin en procesos de detoxicacin, aunque no siempre. Fase III.- despus de las modificaciones Despus de las reacciones de fase II, los conjugados de xenobiticos pueden sufrir an ms modificaciones. Un ejemplo muy comn es el procesado de los conjugados de glutation hasta acetil5

BA-6;2010/11-6 cisteinil-derivados (cidos mercaptricos). En estos casos, los residuos de -glutamato y glicina en la molcula de glutation son hidrolizados por la Gamma-glutamil transpeptidasa y las dipeptidasas. En el paso ltimo, la cisterna es acetilada en el conjugado. Los conjugados y sus metabolitos pueden ser excretados desde las clulas en la fase III de su metabolismo, con los grupos aninicos actuando como marcadores de afinidad para una serie de transportadores de membrana de la familia proteina resistente a multi-XBs (MRP). Estas protenas son miembros de la familia de transportadores transmembrana que unen ATP y pueden catalizar el transporte dependiente de ATP de una estrecha variedad de aniones hidrofbicos, y as actuar para extraer productos de la fase II hacia el medio extracelular, donde pueden ser posteriormente metabolizados o excretados. MRP: P-glicoprotena: es una protena humana transportadora de la subfamilia MDT/TAP. Est muy distribuida y se expresa en clulas normales tales como intestino, hgado, clulas proximales de rin, endoteliales capilares y clulas de la barrera hemato-enceflica. Tambin se expresa en clulas de la lnea P-gp, denominadas cmo ABCB1, miembro 1 de la sub-familia B de las transportadoras dependientes de ATP, MDR1, y PGY1. la glicoproteina P tambin se la designa cmo CD243 (grupo de diferenciacin 243). ATP-binding cassette transporters (ABC-transportadores) son miembros de una superfamilia, una de las ms abundantes, y ms antiguas (ancestrales) familias con representacin en todos los organismos, desde procariotas a humanos. Estas son unas protenas transmembrana que funcionan en el transporte de de una amplia variedad de sustratos a travs de las membrana extra e intracelulares, incluyendo productos metablicos, lpidos y esteroles, y drogas. Las protenas son clasificadas cmo ABC transportadores basado en la secuencia y organizacin de su dominio de unin al ATP(s), tambin conocido como plieges de unin a nucleotidos (NBFs). ABC transportadores estn implicados en resistencia de tumores, fibrosis cstica, resistencia multi-drogas bacteriana y un rango de otras enfermedades humanas heredables.