artculo original / original article

Investigacin cientfica sobre genotipificacin y distribucin de Giardia intestinalis en humanos y caninos de Amrica Scientific research about genotyping and distribution of Giardia intestinalis in humans and dogs from America
Giovanny Torres Lindarte1, Mario Zapata Tamayo2, Marcos Restrepo Isaza3, Leonardo Ros Osorio4

Resumen Objetivo: Describir la distribucin geogrfica en Amrica de los genotipos A, B, C y D de Giardia intestinalis hallados en humanos y en perros, y los marcadores y tcnicas usadas, de acuerdo con la literatura cientfica. Materiales y mtodos: Revisin sistemtica en la que se seleccionaron 19 artculos, y en todos se caracterizaron aislados de humanos; solo 10 de estos caracterizaron aislados de perros. Resultados: Mxico fue el pas que ms estudios realiz (31,6%). El genotipo A fue reportado en el 89,5% de los trabajos que analizaron aislados de humanos y el genotipo B en el 52,3%. En los que analizaron aislados de perros, el genotipo A se inform en el 60%, el genotipo B en el 20%, el genotipo C en el 30% y el genotipo D en un 20%. La tcnica y el marcador ms usados fueron la PCR-RFLP y el gen de -Giardin. Conclusiones: El genotipo A es el responsable de la mayora de infecciones en humanos como perros de Amrica, aunque los genotipos B, C y D tambin fueron identificados. El hallazgo de perros infectados con genotipos zoonticos sustentan su papel como fuentes potenciales de infeccin de G. intestinalis para humanos. Palabras clave: Giardia lamblia, genotipo, reaccin en cadena de la polimerasa, zoonosis, localizacin geogrfica de riesgo.

Candidato a Maestra en Microbiologa y Bioanlisis. Grupo de Investigacin Instituto Colombiano de Medicina Tropical. Universidad CES. Sabaneta (Antioquia). gtorres@ces.edu.co 2 Magister en Ciencias Bsicas Biomdicas. Especialista en Epidemiologa. Grupo de Investigacin Microbiologa Veterinaria, Escuela de Microbiologa Universidad de Antioquia. Medelln (Antio quia). 3 Especialista en Parasitologa y en Medicina de laboratorio. Grupo de Investigacin Instituto Colombiano de Medicina Tropical. Universidad CES. Sabaneta (Antioquia). 4 Bacterilogo y Lab. Clnico. Especialista en CBB, Parasitologa Humana. Ph.D. en Sostenibilidad. Grupo de Investigacin Microbiologa Veterinaria, Escuela de Microbiologa, Universidad de An tioquia. Medelln (Colombia). Correspondencia: Giovanny Torres Lindarte, Instituto Colombiano de Medicina Tropical Universidad CES, carrera 43 52 sur 99, Sabaneta (Antioquia), telfono +57(4)3053500. gtorres@ces.edu.co
1

Fecha de recepcin: 30 de octubre de 2010 Fecha de aceptacin: 23 de febrero de 2011

Vol. 27, N 1, 2011 ISSN 0120-5552

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

49

Giovanny Torres Lindarte, Mario Zapata Tamayo, Marcos Restrepo Isaza, Leonardo Ros Osorio

Abstract Objetive: To describe America geographical distribution of A, B, C and D Giardia intestinalis genotypes founded in humans and dogs, and molecular markers and techniques used to detect them, accordingly to scientific literature. Materials and methods: Systematic revision was made it and 19 scientific articles were selected in which Giardia intestinales human isolates were characterized; 10 of this articles reported dog isolates. Results: 31,6% of the studies were made in Mexico. A genotype in 89,5% and B genotype in 52,3% were reported in studies that analyzed human isolates, in front of, A genotype in 60%, B genotype in 20%, C genotype in 30% and D genotype in 20% that were reported in analyzed dog studies. PCR-RFLP was the most used molecular technique, and -Giardin gen was the most used molecular marker. Conclusions: A genotype was responsible of both humans and dogs Giardia intestinalis infections in America; and B, C and D genotype were identified in infections, too. Findings of infected dogs with zoonotic genotypes support their role as a potential source for human infection with G. intestinalis. Key words: Giardia lamblia, Genotype, Polymerase Chain Reaction, Zoonoses, Geographical Localization of Risk.

INTRODUCCIN
Giardia intestinalis es un protozoo flagelado que infecta un amplio rango de hospederos vertebrados, entre los que se encuentran los humanos, perros y otros animales, causan do en ellos la enfermedad conocida como giardiasis (1). Esta parasitosis es una de las principales causas de gastroenteritis epid mica a nivel mundial, considerada como una enfermedad infecciosa reemergente y un problema de salud pblica (2,3) En Asia, frica y Latino Amrica cerca de 200 millones de personas presentan snto mas y en los pases desarrollados Giardia intestinalis es el parsito intestinal ms co mn encontrado en humanos (4, 5). La pre valencia en pases industrializados puede ir desde un 2% hasta un 5% y exceder el 30% en pases en va de desarrollo (6). La pre valencia reportada en Colombia esta alre dedor del 12% en poblacin general y del 28% en poblacin de 1 a 4 aos (7). En los

perros es el protozoo ms comn encontra do con prevalencias alrededor del 10% en perros adultos bien cuidados, del 36 al 50% en cachorros y hasta el 100% en animales de criaderos (8). Giardia fue inicialmente descrita por van Leeuwenhoek en 1681 (9), pero fue has ta 1859 cuando Lambl describi con ma yor detalle el microorganismo (10). Desde entonces se describieron ms de 40 especies basndose en el husped donde se encontr el parsito (11). Hacia 1952 Filice propuso tres especies apoyndose en las caracters ticas morfolgicas: G. lamblia (humanos y otros mamferos), G. muris (roedores) y G. agilis (anfibios) (12). Entre las dcadas de los aos ochenta y los noventa se describieron las otras tres especies reportadas basndo se en criterios morfolgicos detectados por microscopa electrnica: G. psittaci (peri cos), G. ardae (garzas) y G. microti (roedo res) (1315).

50

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

Investigacin cientfica sobre genotipificacin y distribucin de Giardia intestinalis en humanos y caninos de Amrica

Como G. intestinalis (sinnimo: G. lamblia o G. duodenalis) es la nica especie capaz de infectar a los humanos, as como a una variedad de mamferos, es la especie con mayor importancia dentro del gnero, a tal punto que la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) desde los aos veinte le ha reconocido su potencial zoontico (16). A travs de una variedad de herramientas moleculares que incluyen el anlisis de isoenzimas, Reaccin en Cadena de la Po limerasa con anlisis del polimorfismo de longitud de los fragmentos de restriccin (PCRRFLP), tipificacin de cromosomas por electroforesis de campo pulsado y secuen ciacin de genes constitutivos, se ha mos trado que G. intestinalis es un complejo de especies que comprende al menos siete ge notipos (1719). Los principales marcadores que han sido utilizados para la genotipificacin son: la subunidad pequea del RNA ribosomal (SSurRNA), el gen giardin (bg), la glu tamato deshidrogenasa (gdh), la trifosfato isomerasa (tpi) y el factor de elongacin 1alfa (ef1) (20). El anlisis de estos mar cadores les permiti a los investigadores clasificar inicialmente las poblaciones de G. intestinalis de la siguiente manera: en Am rica como grupo 1, 2 y 3 (11,12), en Europa como Polish y Belgian (13,14) y en Australia como genotipos A y B (21). Otros estudios permitieron conocer genotipos adicionales que fueron clasificados como C, D, E, F y G (15, 22); adems se logr identificar dife rencias dentro de los genotipos A y B, que fueron clasificados posteriormente como subgenotipos: AI, AII, BIII y BIV (23). Aunque toda esta clasificacin puede llegar a ser confusa y algunas formas de clasificar pueden resultar limitadas y poco funciona

les cuando son aplicadas en diferentes es tudios, la literatura reciente demuestra que la clasificacin que arroja ms informacin acerca de las poblaciones de G. intestinalis, sobre todo si se quieren realizar estudios de epidemiologa molecular, es: A (AI, AII), B (BIII, BIV), C, D, E, F y G (24). Como son los genotipos A y B los encontrados infectando humanos y un amplio rango de hospederos, entre los que se encuentran los perros, se han considerado como los genotipos poten cialmente zoonticos, en especial el subge notipo AI (1). Los genotipos restantes (CG) se consideran huspedespecficos (25). La transmisin de G. intestinalis siempre se ha asociado a condiciones higinicosa nitarias deficientes en los pases en va de desarrollo (26) y en los pases desarrolla dos, donde las condiciones higinicas son favorables, la transmisin se ha relacionado principalmente con fuentes de agua no tra tadas (27). Sin embargo, los investigadores que respaldan la transmisin zoontica de G. intestinalis argumentan que los animales tambin juegan un papel importante en la propagacin del parsito. De acuerdo con lo anterior, se plantea una posible transmisin cruzada debido al es trecho contacto que puede existir entre ani males y humanos, como las mascotas, espe cialmente los perros (28). Estos animales se han convertido en parte integral de la fami lia y usualmente son mantenidos dentro de la casa, viviendo en contacto frecuente con los humanos, tanto as, que algunos llegan a compartir la cama con sus amos (29). Esta cercana no est libre de riesgos, ya que un perro infectado por el parsito, sin im portar las condiciones higinicosanitarias, puede actuar como fuente de infeccin para

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

51

Giovanny Torres Lindarte, Mario Zapata Tamayo, Marcos Restrepo Isaza, Leonardo Ros Osorio

el humano, contaminando con materia fe cal, que pueda estar en su hocico y pelaje, objetos o superficies con las que estar en contacto el humano (1). Cualquier persona es susceptible de infec tarse, debido a que esta parasitosis es ad quirida por va fecaloral, pero son los ni os, justamente por su naturaleza curiosa, los que estn en mayor riesgo de infectarse (29, 30). Estudios realizados en diferentes partes del mundo han proporcionado evi dencia acerca de la trasmisin zoontica entre perros y humanos; es el caso de dos estudios realizados, uno en India y el otro en Tailandia, donde se encontr el mismo genotipo infectando tanto a perros como a humanos que convivan en una misma casa o rea comn (3133). As mismo, en un estudio reciente realizado en Alemania se encontr que de 60 perros pertenecientes al rea urbana que resultaron positivos, el 60% estaba infectado con el genotipo A, 12% con el genotipo C o D (especficos del perro) y en el 28% restante se present una infec cin mixta (genotipos especficos de perro y zoonticos) (34). Igualmente, en un estudio realizado en perros de ambientes urbanos en Australia se encontr que estaban infec tados principalmente por los genotipos A y D (35). Estudios como los anteriormente menciona dos que aplican la epidemiologa molecular permiten llegar a conocer la heterogeneidad gentica de la G. intestinalis (genotipos), y a partir de esta informacin poder estudiar la dinmica de transmisin de los diferentes genotipos y su asociacin con focos o fuen tes de infeccin, vas de transmisin, sinto matologa y respuesta a tratamientos, au nando evidencias para demostrar el posible carcter zoontico de la giardiasis.

El objetivo de esta revisin fue determinar la distribucin geogrfica en Norte, Centro y Sur Amrica de los genotipos de G. intestinalis, identificando husped, marcador gentico y tcnica molecular utilizados en la caracterizacin genotpica de aislados de humanos y caninos, por medio de una re visin sistemtica de la literatura cientfica disponible de los ltimos 19 aos.

MATERIALES Y MTODOS
Tipo de estudio Se dise una revisin sistemtica de la evidencia cientfica disponible, desde 1990 hasta 2009, relacionada con la distribucin geogrfica en Amrica de los genotipos A, B, C y D de Giardia intestinalis, hallados en humanos y en perros. Bases de datos y bsqueda bibliogrfica Para realizar esta revisin se consult la literatura cientfica disponible en las ba ses de datos PubMed (Medline), Science Direct, SpringerLink y Scielo. Tambin se utilizaron los motores de bsqueda como Scholar Google, con opciones avanzadas; las palabras claves utilizadas en la bsque da fueron: Giardia, Giardia PCR, Giardia ge notypes, Giardia assamblages. Los artculos de inters inicialmente fueron selecciona dos por ttulo y contenido del resumen, te niendo en cuenta los criterios de inclusin establecidos: artculos originales; en idioma espaol, ingls o portugus; realizados en pases de Amrica; investigaciones realiza das con aislamientos de G. intestinalis pro cedentes de humanos y perros publicados entre 1990 y 2009. Posteriormente, cada ar tculo fue revisado completamente y solo se escogieron aquellos que contenan informa cin en la que se describir la presencia de

52

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

Investigacin cientfica sobre genotipificacin y distribucin de Giardia intestinalis en humanos y caninos de Amrica

los genotipos A, B, C y D de Giardia intestinalis en humanos y caninos. Las publicaciones seleccionadas se reco pilaron impresas en carpetas, as como en archivos magnticos formato PDF (Adobe Reader 7.0). Se construy una base de datos (Excel) en la cual se clasificaron los artculos de acuerdo con el ao, pas, autor, genotipo encontrado, tipo de husped, secuencia y tcnica usada para genotipificar.

RESULTADOS
Con la bsqueda bibliogrfica inicial se lo gr obtener un total de 5319 artculos en PubMed, 2001 en ScienceDirect, 1855 en SpringerLink y 2 en Scielo (revista Biom dica). Despus de la primera seleccin (t tulo y resumen) y de eliminar los duplica dos quedaron 30 artculos. Sin embargo, la lectura completa de estos permiti descar tar 11 referencias ms, por no contar con la informacin de inters. Finalmente, solo 19 artculos fueron escogidos para realizar la revisin, ya que cumplieron con todos los criterios de seleccin establecidos. Teniendo en cuenta el objetivo propuesto en esta investigacin, los artculos que lle garon a discriminar subgenotipo (AI, AII, AIII, AIV) en el proceso de clasificacin del aislado fueron clasificados de acuerdo con el genotipo mayor al que pertenecen (geno tipo A) (24,36). Objetivos de los estudios Como resultado de la revisin se encontra ron un total de 19 artculos publicados con la informacin de inters durante la ltima dcada, cuyo producto del trabajo de in vestigacin report la presencia de algn genotipo de Giardia intestinalis en huspe

des humanos o caninos en pases de Norte, Centro y Sur Amrica. En el primer lustro (2000 a 2005) se encontraron siete artculos: el primero fue realizado en 2000 en Canad; en ste++ el objetivo fue la biotipificacin de muestras clnicas recolectadas durante un brote, en humanos, animales y fuentes de agua (37); en 2002 Mxico aporta un estu dio, en el cual el objetivo fue genotipificar algunos aislados del parsito procedentes de humanos, animales y cultivos axnicos del parsito (38); en 2003, fueron publica dos dos trabajos ms: uno hecho en Mxi co, donde describieron el anlisis gentico de un panel de 26 aislados axnicos de G. intestinalis adquiridos independientemen te (39), y otro en Estados Unidos, que tuvo como objetivo el desarrollo de un protocolo de anidada para amplificar el gen triosafos fato isomerasa (tpi) de G. intestinalis y de G. microti, as como la caracterizacin de la se cuencia nucleotidica del fragmento amplifi cado (40). En 2004 se publica un trabajo rea lizado en Canad, que evalu el uso de PCR en tiempo real utilizando sondas dirigidas contra el gen giardin para la deteccin de Giardia en muestras humanas y diferencia cin, en un solo paso, de los genotipos ma yores A y B (41); 2005 se dieron a conocer dos nuevos trabajos, ambos realizados en Mxico: en uno se genotipificaron aislados del parsito obtenidos de nios y de perros y se estudi la relacin con el husped (6); el otro genotipific G. intestinalis de humanos y perros a travs de una PCR anidada que amplifica el gen giardin (42). En el segundo periodo (2006 a 2009) se en contraron doce artculos; en 2007 solo se encontraron estudios hechos con aislados obtenidos de pases suramericanos (Brasil, Per, Argentina y Colombia); cinco en total. Los artculos de Brasil (dos) se realizaron en

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

53

Giovanny Torres Lindarte, Mario Zapata Tamayo, Marcos Restrepo Isaza, Leonardo Ros Osorio

el estado de Sao Paulo y en Ro de Janeiro; en el de Sao Paulo se estudi aislados de G. intestinalis obtenidos de humanos, perros, gatos y ganado vacuno que habitaban ciu dades del estado, por medio de una PCR (43), mientras que el estudio realizado en Ro de Janeiro caracteriz genticamente (locus giardin) aislados del parsito ad quiridos de humanos y animales doms ticos (mascotas) con el fin de investigar la prevalencia, datos de ocurrencia, epidemio loga y potencial de trasmisin zoontica de los genotipos (44). El objetivo del traba jo argentino fue adaptar un protocolo de PCR para la amplificacin del gen tpi de Giardia lamblia en materia fecal formolada (45); en el artculo de Colombia el objetivo fue determinar el nivel de polimorfismo y la complejidad de las cepas circulantes en reas especficas del pas (46). La investiga cin hecha en Estados Unidos con aislados de G. intestinalis procedentes de humanos peruanos busc demostrar la recombina cin gentica del parsito por medio de la evidencia proveniente de poblaciones (47). El ao 2008 es en el que se encuentra el ma yor nmero de publicaciones con los resul tados de inters (Cuba, Mxico, Nicaragua,

Per, Argentina y Brasil); siete en total. En Cuba se estudi la infeccin por Giardia en nios del pas, incluidos los resultados de epidemiologa molecular utilizando PCR y secuenciacin de dos marcadores molecula res (48); uno de los dos estudios mexicanos analiz muestras de Giardia de humanos y perros con el fin de comparar los respectivos genotipos por restriccin del gen giardin (49), y el otro estudio us una PCR mltiple para clasificar aislados de G. intestinalis ob tenidos de cultivos axnicos y materia fecal de humanos y perros (50); en Nicaragua se realiz una PCRRFLP y secuenciacin de aislados de Giardia recuperados de huma nos y perros que vivan en una misma rea de Len (51); el estudio realizado en Per buscaba hallar la prevalencia de parsitos intestinales en nios desnutridos de tres distritos de Trujillo, utilizando PCRRFLP de G intestinalis (52); el estudio argentino busc determinar los genotipos del parsito aislados de heces humanas y de perros que habitaban La Plata y General Mansilla, uti lizando la tcnica molecular PCRRFLP (53); y el de Brasil, relacionar el genotipo detec tado por PCR mltiple en nios del noroes te del pas, con la presentacin clnica, as como con la inflamacin intestinal (54).

Fuente: Propia de los autores.

Figura 1. Muestras genotipificadas en estudios humanos

54

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

Investigacin cientfica sobre genotipificacin y distribucin de Giardia intestinalis en humanos y caninos de Amrica

Estudios en Aislados de Humanos Los pases donde ms se ha publicado so bre genotipificacin de Giardia intestinalis provenientes de aislados de seres huma nos es Mxico, donde se realizaron el 31,5% (6/19) de los estudios (6,38,39,42,49,50); se guido de Brasil, que aport el 15,8% (3/19) (43,44,54). El nmero de muestras genotipi ficadas en todos los estudios vari con un rango de 117, una media muestral de 28 ais lados, una mediana de 20 y una desviacin estndar de 27 (Figura 1). Los marcadores ms utilizados para la ge notipificacin de los aislados de Giardia intestinalis fueron: el gen de giardin y el gen de triosafosfato isomerasa. Cada uno de estos se us en el 26,3% (5/19) de los tra bajos (37,4042,44,45,47,49,51,53); con me nor frecuencia se han utilizado el gen de la glutamato deshidrogenasa, la subunidad pequea del RNA ribosomal, el gen que co difica para la protena de superficie varian teespecfica (6,38,39,43,47,54). Las tcnicas de biologa molecular utili zadas con ms frecuencia para genotipifi car Giardia intestinalis en aislados de seres humanos fueron la PCRRFLP, utilizada en el 47,4% (9/19), y la PCR y secuenciacin en el 21% (4/19) de los estudios evaluados (6,3740,4244,4749,51,53); tambin fue ron utilizadas para la genotipificacion de Giardia intestinalis: PCR en tiempo real, PCR mltiple y Amplificacin al Azar del DNA Polimrfico (RAPD) (41,46,47,50,54). El an lisis del marcador giardin por medio de PCRRFLP fue utilizado en el 21% (4/19) de los estudios (42,44,49,51); sin embargo, esta tcnica tambin se utiliz para analizar el gen de triosafosfato isomerasa, el gen de glutamato deshidrogenasa y el gen de la protena de superficie varianteespecfica (3739,52,53).

La frecuencia de los genotipos de Giardia intestinalis evidenci que el genotipo A fue hallado en el 47,4% (9/19) de las investiga ciones (6,38,39,42,49,50); en cambio, el ge notipo B solo se encontr en el 10.5% (2/19) (37,45). La distribucin geogrfica por pases mues tra que Mxico y Colombia fueron los nicos pases donde no se encontr el ge notipo B infectando humanos, todos los aislados correspondieron al genotipo A (6,38,39,42,46,49,50), mientras que en Es tados Unidos solo se detect el genotipo B (40). En pases como Canad, Nicaragua, Cuba, Per, Argentina y Brasil se encontra ron ambos genotipos (A o B) entre los ais lados analizados (41,44,48,5153) (Figura 2) (Tabla 1).

Fuente: Propia de los autores.

Figura 2. Mapa de distribucin de los estudios sobre los cuatro genotipos de G. intestialis en humanos y caninos

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

55

Giovanny Torres Lindarte, Mario Zapata Tamayo, Marcos Restrepo Isaza, Leonardo Ros Osorio

Tabla 1 Estudios de genotipificacin de Giardia intestinalis recuperada de humanos Pas Argentina Argentina Brasil Brasil Brasil Canad Canad Colombia Cuba EE.UU. Mxico Mxico Mxico Mxico Mxico Mxico Nicaragua Per Per tpi tpi gdh - giardin ssu-rRNA tpi - giardin rapd - giardin - gdh tpi gdh gdh - giardin ssu-rRNA - giardin gdh - giardin tpi gdh Marcador PCR PCR RFLP (RsaI) PCR Secuenciacin Real Time PCR PCR-RFLP (HindIII or XhoI) Real Time PCR RAPD PCR secuenciacin PCR anidada - secuenciacin PCR-RFLP (Pst I) PCR-RFLP (BspHI) PCR anidada - RFLP(HaeIII) Secuenciacin PCR RFLP (HhaI) PCR mltiple PCR RFLP (HhaI) Real Time PCR PCR RFLP (NlaIV and RsaI) Tcnica Genotipo B A;B A;B A;B;A-B B A;B;A-B A A;B A;B A A A A A A A;B A A;B Muestras genotipificadas 28 43 37 62 58 4 15 22 20 2 19 26 9 20 18 14 119 5 17 Referencia Molina, 2007 (45) Minvielle, 2008 (53) Souza, 2007 (43) Voloto, 2007 (44) Kohli, 2008 (54) McIntyre, 2000 (37) Guy, 2004 (41) Ravid, 2007 (46) Pelayo, 2008 (48) Sulaiman, 2003 (40) Ponce, 2002 (38) Cedillo, 2003 (39) Lalle, 2005 (42) Eligio, 2005 (6) Eligio, 2008 (49) Eligio, 2008 (50) Lebbad, 2008 (51) Cooper, 2007 (47) Prez, 2008 (52)

PCR semianidada - RFLP (HhaI) A

Fuente: Datos tabulados por los autores.

Estudios en Aislados de Caninos Los pases donde ms estudios de genopi ficacin de Giardia intestinalis en aislados de caninos se han reportado son Mxico, 50% (5/10) (6,38,42,49,50), seguido de Bra sil con un 20% (2/10) (43,44). El nmero de muestras genotipificadas en todos los estu dios vari desde una muestra hasta 27, pre sentan una media muestral de 10 aislados, una mediana de 8 y una desviacin estn dar de 8 (Figura 3). Los marcadores ms utilizados para geno tipificar fueron giardin, utilizado en el 40% (4/10) de los estudios (42,44,49,51), seguido de los genes que codifican para

triosafosfato isomerasa, y glutamato des hidrogenasa, cada uno con un 20% (2/10) (40,43,50,53). Las tcnicas de biologa molecular reporta das con mayor frecuencia en los estudios fueron PCRRFLP, con un 60% (6/10), y PCR secuenciacin, con un 30% (3/10) (6,38,40,42 44,49,51,53) El marcador giardin se utiliz en el 40% (4/10) de las publicaciones para genotipificar los aislados, y en todos los casos su anlisis se hizo por medio de la tcnica PCRRFLP (42,44,49,51). El genotipo A fue el ms encontrado en los aislados de caninos, con un 60% (6/10) (6,38,42,44,49,50); solo en un 10% (1/10) de los estudios se ob serv perros infectados solamente con el

56

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

Investigacin cientfica sobre genotipificacin y distribucin de Giardia intestinalis en humanos y caninos de Amrica

genotipo B (53), mientras que en un 30% (3/10) se reportaron la presencia en aisla dos de los genotipos huspedespecficos (C o D) (40,43,51). El genotipo A en cani nos fue reportado en Mxico y en Brasil (6,38,42,44,49,50), el genotipo B en caninos

de Argentina, as como de Mxico (42,53), y los genotipos huspedespecficos (C o D) se encontraron en perros de Estados Uni dos, Nicaragua y Brasil (40,43,51) (Grfica 2) (Tabla 2).

Fuente: Propia de los autores.

Figura 3. Muestras genotipificadas en estudios caninos

Tabla 2 Estudios de genotipificacin aislados recuperados de caninos

Pas Argentina Brasil Brasil EE.UU. Mxico Mxico Mxico Mxico Mxico Nicaragua

Marcador tpi gdh - giardin tpi - giardin ssu-rRNA - giardin gdh gdh - giardin

Tcnica PCR RFLP (RsaI) PCR Secuenciacin

Genotipo B D;C

Muestras genotipificadas 1 27 7 15 5 11 19 8 3 8

Referencia Minvielle, 2008 (53) Souza, 2007 (43) Voloto, 2007 (44) Sulaiman, 2003 (40) Lalle, 2005 (42) Eligio, 2005 (6) Eligio, 2008 (49) Eligio, 2008 (50) Ponce, 2002 (38) Lebbad, 2008 (51)

PCR semianidada - RFLP (HhaI) A PCR anidada - secuenciacin PCR anidada - RFLP (HaeIII) Secuenciacin PCR RFLP (HhaI) PCR mltiple PCR-RFLP (Pst I) PCR RFLP (HhaI) C A;B A A A A D;C

Fuente: Datos tabulados por los autores.

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

57

Giovanny Torres Lindarte, Mario Zapata Tamayo, Marcos Restrepo Isaza, Leonardo Ros Osorio

De los 19 artculos seleccionados, solo el 52,6% (10/19) genotipific G. intestinalis re cuperada tanto de humanos como de pe rros en el mismo estudio (6,38,40,4244, 4951,53). Las frecuencias encontradas con respecto a pases donde se realizaron los trabajos, marcadores usados y tcnicas empleadas son iguales a las informadas anteriormente en el anlisis que se hizo a los estudios que involucraron aislados de caninos. Sin embargo, la proporcin de los genotipos fue diferente, dado que el 50% (5/10) de las investigaciones demostr la presencia solo del genotipo A entre los hu manos y perros muestreados (6,38,44,49,50), en un 20% (2/10) se hallaron los genotipos A y B infectando ambos huspedes (42,53) (Tabla 3).

CONCLUSIONES
La literatura cientfica reporta que los hu manos slo pueden ser infectados por los genotipos A o B (24,36), tal como se eviden ci en esta revisin, pues todos los aislados recuperados de las personas correspon dieron a estos genotipos, aunque el geno tipo A fue el ms frecuentemente detecta do, lo cual contrasta con lo informado por Caccio et al. (2008), quienes proponen que el genotipo B es el mayor responsable de la infecciones en humanos (36). En el 60% de los trabajos que genotipifi caron aislados recuperados de ambos hus pedes se encontr que los caninos estaban infectados con los mismos genotipos de

Tabla 3 Estudios de genotipificacin de Giardia intestinalis recuperada de humanos y caninos Pas Argentina Husped Humanos perros Humanos Brasil perros Brasil EE.UU. Mxico Mxico Mxico Mxico humanos Perros humanos perros humanos perros humanos Perros humanos Perros humanos Perros humanos Nicaragua Perros perros
Fuente: Datos tabulados por los autores.

Tcnica PCR RFLP (RsaI)

Marcador tpi

PCR Secuenciacin

gdh - giardin tpi - giardin ssu-rRNA - giardin gdh

PCR semianidada - RFLP (HhaI) Secuenciacin PCR anidada - RFLP (HaeIII) Secuenciacin PCR RFLP (HhaI) PCR mltiple

PCR RFLP (HhaI)

- giardin

Genotipo A B B A B C D A A B C A A;B A A A A A A A B C D A

Referencias Minvielle, 2008 (53)

Souza, 2007 (43)

Voloto, 2007 (44) Sulaiman, 2003 (40) Lalle, 2005 (42) Eligio, 2005 (6) Eligio, 2008 (49) Eligio, 2008 (50)

Lebbad, 2008 (51)

58

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

Investigacin cientfica sobre genotipificacin y distribucin de Giardia intestinalis en humanos y caninos de Amrica

tectados en los humanos (AB); el hallazgo de estos genotipos, considerados zoonticos en caninos y humanos, sugiere una posible transmisin zoontica. Datos similares a los descritos en estos estudios han sido obteni dos en trabajos realizados en India (2004), Alemania (2007) y Tailandia (2009) (3234); en estos casos, los caninos se podran estar comportando como fuentes potenciales de infeccin para las personas, debido, hipot ticamente, a un proceso de desplazamien to de los genotipos especficos de especie, generado por los genotipos zoonticos. En ese mismo sentido, se plantea la hiptesis segn la cual en lugares geogrficos donde se presente un fenmeno de alta transmisi bilidad de genotipos especficos del parsi to en seres humanos y baja transmisibilidad de genotipos especficos entre los caninos. En comparacin con los estudios realiza dos con otros microorganismos, las tcnicas de genotipificacin de G. intestinalis no son particularmente avanzadas, y gran parte de estas tcnicas se han basado en el anlisis de una variedad importante de marcadores. Quizs esta es una de las razones por las que todava la transmisin zoontica del parsi to contina siendo tema de controversia, pues no todos los resultados obtenidos con estas tcnicas son comparables. Este trabajo evidencia cmo, a travs de los tiempos, se han venido empleado una cantidad de tc nicas y marcadores para poder caracteri zar aislados procedentes de humanos y de perros. Un total de cinco marcadores y de seis tcnicas moleculares fueron utilizadas en los 19 estudios revisados; incluso, en al guno se utiliz ms de un marcador (39,48). Finalmente, se pudo observar que los geno tipos A y B estn ampliamente distribuidos entre personas de pases de Norte, Centro

y Sur Amrica. El genotipo A en los perros, al igual que en los humanos, fue el ms en contrado, lo que indica que estos animales pueden estar desempeando un papel im portante en la transmisin zoontica directa y posiblemente endmica de G. intestinalis. Sin embargo, es necesario proponer inves tigaciones que permitan conocer la comple ja dinmica de transmisin del parsito en tre ambos huspedes.
Financiacin: Los recursos para la realizacin del proyecto fueron aportados por el Grupo de Investigacin del Instituto Colombiano de Me dicina Tropical, Universidad CES y el Grupo de Investigacin en Microbiologa Veterinaria de la Universidad de Antioquia. Conflicto de intereses: Los autores manifiestan que no se presentaron conflictos de intereses para la realizacin de este estudio en ninguna de sus fases.

REFERENCIAS
(1) Thompson R. The zoonotic significance and molecular epidemiology of Giardia and giardiasis. Vet Parasitol 2004; 126 (12): 1535. (2) Lane S, Lloyd D. Current trends in research into the waterborne parasite Giardia. Crit Rev Microbiol 2002; 28 (2): 12347. (3) Rivera M, La parte M, Hurtado P, Magaldi L, Collazo M. Giardiasis intestinal. Mini revision. Invest Cln 2002; 43: 11928. (4) Thompson R. Giardiasis as a reemerging infectious disease and its zoonotic poten tial. Int J Parasitol 2000; 30 (1213): 125967. (5) WHO. Fighting Disease Fostering Development. Geneva: World Health Organizations; 1996. (6) EligioGarca L, CortsCampos A, Jim nezCardoso E. Genotype of Giardia e in testinalis isolates from children and dogs and its relationship to host origin. Parasitol Res 2005 Aug; 97 (1): 16.

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

59

Giovanny Torres Lindarte, Mario Zapata Tamayo, Marcos Restrepo Isaza, Leonardo Ros Osorio

(7) Corredor A AE, Hernndez CA. Parasitismo intestinal. Bogot, D.C.: Instituto Nacional de Salud; 2000. (8) Traub R, Robertson I, Irwin P, Mencke N, Thompson R. Canine gastrointestinal para sitic zoonoses in India. Trends in parasitology 2005; 21 (1): 428. (9) Dobell C. The discovery of the intestinal protozoa of man. Proc R Soc Med (Sect Hist Med) 1920; 13: 115. (10) Lambl W. Mikroskopische untersuchungen der Darmexcrete. Vierteljahrsschr Prakst Heikunde 1859; 61: 158. (11) Nash T, McCutchan T, Keister D, Dame J, Conrad J, Gillin F. Restrictionendonuclea se analysis of DNA from 15 Giardia isolates obtained from humans and animals. J Infect Dis 1985: 6473. (12) Nash T, Mowatt M. Identification and cha racterization of a Giardia lamblia group specific gene. Exp Parasitol 1992; 75 (4): 369 72. (13) Keulen H, Homan WL, Erlandsend SL, Ja rroll EL. A three nucleotide signature se quence in small subunit rRNA divides hu man Giardia in two different genotypes. J Eukaryot Microbiol 1995; 42 (4): 3924. (14) Homan W, Enckevort F, Limper L, Eys G, Schoone G, Kasprzak W et al. Comparison of Giardia isolates from different labora tories by isoenzyme analysis and recom binant DNA probes. Parasitol Res 1992; 78 (4): 31623. (15) Ey PL, Mansouri M, Kulda J, Nohynkova E, Monis PT, Andrews RH et al. Genetic ana lysis of Giardia from hoofed farm animals reveals artiodactylspecific and potentially zoonotic genotypes. J Eukaryot Microbiol 1997; 44 (6): 62635. (16) WHO. Parasitic zoonoses. Geneva: World Health Organisation;1979. Contract n 637. (17) Meloni B, Thompson R, Strandn A, Khler P, Eckert J. Critical comparison of Giardia duodenalis from Australia and Switzerland using isoenzyme electrophoresis. Acta Trop 1991 Dec; 50 (2): 11524. (18) Lu S, Li J, Zhang Y, Wen J, Wang F. The intraspecific difference of the triose phos

(19)

(20)

(21)

(22)

(23)

(24) (25)

(26)

(27) (28)

(29)

phate isomerase (tim) gene from Giardia lamblia. Chin Med J (Engl) 2002 May; 115 (5): 7636. Sarafis K, IsaacRenton J. Pulsedfield gel electrophoresis as a method of biotyping of Giardia duodenalis. Am J Trop Med Hyg 1993 Jan; 48 (1): 13444. Wielinga C, Thompson R. Comparative evaluation of Giardia duodenalis sequence data. Parasitology 2007 Nov; 134 (Pt 12): 1795821. G, Andrews R, Ey P, Chilton N. Division of Giardia isolates from humans into two genetically distinct assemblages by electro phoretic analysis of enzymes encoded at 27 loci and comparison with Giardia muris. Parasitology 1995; 111 (1): 117. Hopkins R, Meloni B, Groth D, Wetherall J, Reynoldson J, Thompson R. Ribosomal RNA sequencing reveals differences be tween the genotypes of Giardia isolates recovered from humans and dogs living in the same locality. J Parasitol 1997: 4451. Andrews RH, Adams M, Boreham PF, Myrhofer G, Meloni BP. Giardia intesti nalis: electrophoretic evidence for species complex. Int J Parasitol 1989;19:18391. Adam R. Biology of Giardia lamblia. Clin Microbiol Rev 2001; 14 (3): 44775. Monis P, Andrews R, Mayrhofer G, Ey P. Genetic diversity within the morphological species Giardia intestinalis and its relation ship to host origin. Infect Genet Evol 2003; 3 (1): 2938. Read C, Walters J, Robertson I, Thompson R. Correlation between genotype of Giar dia duodenalis and diarrhoea. Int J Parasitol 2002; 32 (2): 22931. Slifko T, Smith H, Rose J. Emerging parasite zoonoses associated with water and food. Int J Parasitol 2000; 30 (1213): 137993. PonceMacotela M, PeraltaAbarca G, Mar tnezGordillo M. Giardia intestinalis and other zoonotic parasites: prevalence in adult dogs from the southern part of Mexi co City. Vet Parasitol 2005; 131 (12): 14. Pacheco R. Mascotas en los hogares: enfer medades de los nios adquiridas por con

60

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

Investigacin cientfica sobre genotipificacin y distribucin de Giardia intestinalis en humanos y caninos de Amrica

(30)

(31)

(32)

(33)

(34)

(35)

(36)

(37)

(38)

vivencia con animales. Enferm Infecc Microbiol Clin 2003; 23 (4): 13748. Botero D. Parasitosis humanas. Medelln: Corporacin para Investigaciones Biolgi cas; 2006. Traub R, Robertson I, Irwin P, Mencke N, Thompson R. The role of dogs in transmi ssion of gastrointestinal parasites in a re mote teagrowing community in northeast ern India. Am J Trop Med Hyg 2002; 67 (5): 53945. Traub R, Monis P, Robertson I, Irwin P, Mencke N, Thompson R. Epidemiologi cal and molecular evidence supports the zoonotic transmission of Giardia among humans and dogs living in the same com munity. Parasitology 2004 Mar; 128 (Pt 3): 25362. Traub R, Inpankaew T, Reid S, Sutthikorn chai C, Sukthana Y, Robertson I et al. Trans mission cycles of Giardia duodenalis in dogs and humans in Temple communi ties in Bangkok a critical evaluation of its prevalence using three diagnostic tests in the field in the absence of a gold standard. Acta Trop 2009 Aug; 111 (2): 12532. Leonhard S, Pfister K, Beelitz P, Wielinga C, Thompson R. The molecular characterisa tion of Giardia from dogs in southern Ger many. Vet Parasitol 2007 Nov; 150 (12): 338. Thompson RCA, Morgan UM, Mellor KJ, Hopkins RM. Genotyping Giardia and Cryptosporidium. Today`s Life Sci 1999; 11: 805. Cacci S, Ryan U. Molecular epidemiology of giardiasis. Mol Biochem Parasitol 2008; 160 (2): 7580. McIntyre L, Hoang L, Ong C, Lee P, Isaac Renton J. Evaluation of molecular tech niques to biotype Giardia duodenalis co llected during an outbreak. J Parasitol 2000 Feb; 86 (1): 1727. PonceMacotela M, MartnezGordillo M, BermdezCruz R, SalazarSchettino P, Or tegaPierres G, Ey P. Unusual prevalence of the Giardia intestinalis AII subtype amongst isolates from humans and domes

(39)

(40)

(41)

(42)

(43)

(44)

(45)

(46)

tic animals in Mexico. Int J Parasitol 2002 Aug; 32 (9): 12012. CedilloRivera R, Darby J, EncisoMoreno J, OrtegaPierres G, Ey P. Genetic homoge neity of axenic isolates of Giardia intestina lis derived from acute and chronically in fected individuals in Mexico. Parasitol Res 2003 Jun; 90 (2): 11923. Sulaiman I, Fayer R, Bern C, Gilman R, Trout J, Schantz P et al. Triosephosphate isomerase gene characterization and poten tial zoonotic transmission of Giardia duo denalis. Emerg Infect Dis 2003 Nov; 9 (11): 144452. Guy R, Xiao C, Horgen P. Realtime PCR as say for detection and genotype differentia tion of Giardia lamblia in stool specimens. J Clin Microbiol 2004 Jul; 42 (7): 331720. Lalle M, JimenezCardosa E, Cacci S, Pozio E. Genotyping of Giardia duodenalis from humans and dogs from Mexico us ing a betagiardin nested polymerase chain reaction assay. J Parasitol 2005 Feb; 91 (1): 2035. Souza S, Gennari S, Richtzenhain L, Pena H, Funada M, Cortez A et al. Molecular identi fication of Giardia duodenalis isolates from humans, dogs, cats and cattle from the state of So Paulo, Brazil, by sequence analysis of fragments of glutamate dehydrogenase (gdh) coding gene. Vet Parasitol 2007 Nov; 149 (34): 25864. Voloto A, CostaMacedo L, Haddad F, Brando A, Peralta J, Fernandes O. Geno typing of Giardia duodenalis from human and animal samples from Brazil using beta giardin gene: a phylogenetic analysis. Acta Trop 2007 Apr; 102 (1): 109. Molina N, Polverino D, Minvielle M, Ba sualdo J. PCR amplification of triosephos phate isomerase gene of Giardia lamblia in formalinfixed feces. Rev Latinoam Microbiol 2007; 49 (12): 611. Ravid Z, Duque S, Arvalo A, Nicholls R, Wasserman M. Genetic diversity of Giardia intestinalis populations in Colombia. Biomdica 2007;27(1):3441.

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62

61

Giovanny Torres Lindarte, Mario Zapata Tamayo, Marcos Restrepo Isaza, Leonardo Ros Osorio

(47) Cooper M, Adam R, Worobey M, Sterling C. Population genetics provides evidence for recombination in Giardia. Curr Biol 2007 Nov; 17 (22): 19848. (48) Pelayo L, Nez F, Rojas L, Furuseth Han sen E, Gjerde B, Wilke H et al. Giardia in fections in Cuban children: the genotypes circulating in a rural population. Ann Trop Med Parasitol 2008 Oct; 102 (7): 58595. (49) EligioGarca L, CortesCampos A, Cota Guajardo S, Gaxiola S, JimnezCardoso E. Frequency of Giardia intestinalis assem blages isolated from dogs and humans in a community from Culiacan, Sinaloa, Mex ico using betagiardin restriction gene. Vet Parasitol 2008 Oct; 156 (34): 2059. (50) EligioGarca L, CortsCampos A, Jim nezCardoso E. Classification of Giardia intestinalis isolates by multiple polymerase chain reaction (multiplex). Parasitol Res 2008 Sep; 103 (4): 797800.

(51) Lebbad M, Ankarklev J, Tellez A, Leiva B, Andersson J, Svrd S. Dominance of Giar dia assemblage B in Leon, Nicaragua. Acta Trop 2008; 106 (1): 4453. (52) Perz Cordn G, Cordova Paz Soldan O, Vargas Vsquez F, Velasco Soto J, Sempere Bordes L, Snchez Moreno M et al. Preva lence of enteroparasites and genotyping of Giardia lamblia in Peruvian children. Parasitol Res 2008 Jul; 103 (2): 45965. (53) Minvielle M, Molina N, Polverino D, Basu aldo J. First genotyping of Giardia lamblia from human and animal feces in Argenti na, South America. Mem Inst Oswaldo Cruz 2008 Feb; 103 (1): 98103. (54) Kohli A, Bushen O, Pinkerton R, Houpt E, Newman R, Sears C et al. Giardia duode nalis assemblage, clinical presentation and markers of intestinal inflammation in Bra zilian children. Trans R Soc Trop Med Hyg 2008 Jul; 102 (7): 71825.

62

Salud Uninorte. Barranquilla (Col.) 2011; 27 (1): 49-62