Introduo A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao.

. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria. A grande variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao. O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilizao atribuda a um botnico russo ao descrever suas experincias na separao dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de ter de petrleo (fase mvel) atravs de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de clcio (fase estacionria), qual se adicionou o extrato, levou separao dos componentes em faixas coloridas. Este provavelmenteo motivo pelo qual a tcnica conhecida como cromatografia (chrom= cor e graphie = escrita), podendo levar errnea idia de que o processo seja dependente da cor. A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura. As diferentes formas de cromatografia podem ser classificadas considerando-se diversos critrios, sendo alguns deles listados abaixo: 1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico Em relao forma fsica do sistema, a cromatografia pode ser subdividida em cromatografia em coluna e cromatografia planar. 2. Classificao pela fase mvel empregada Em se tratando da fase mvel, so trs os tipos de cromatografia: a cromatografia gasosa, a cromatografia lquida e a cromatografia supercrtica (CSC), usando-se na ltima um vapor pressurizado, acima de sua temperatura crtica. A cromatografia lquida apresenta uma importante subdiviso: a cromatografia lquida clssica (CLC) e a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR). A diferena entre os dois tipos est na coluna. Enquanto na CGAR so utilizadas colunas capilares, nas quais a fase estacionria um filme depositado na mesma, a CG utiliza colunas de maior dimetro empacotadas com a fase estacionria. 3. Classificao pela fase estacionria utilizada Quanto fase estacionria, distingue-se entre fases estacionrias slidas, lquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionria ser constituda por um lquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte slido ou imobilizado sobre ele. Suportes modificados so considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separao.

4. Classificao pelo modo de separao Por este critrio, separaes cromatogrficas se devem adsoro, partio, troca inica, excluso ou misturas desses mecanismos. Para se ter uma viso mais ampla dos diferentes tipos de cromatografia, os mesmos esto dispostos no diagrama da Figura 1.

Dentre os vrios tipos de cromatografia, especial nfase ser dada cromatografia em camada delgada (CCD). Cromatografia planar A cromatografia em camada delgada (CCD) uma tcnica de adsoro lquidoslido. Nesse caso, a separao se d pela diferena de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionria. A Fig. 2 mostra um cromatograma obtido por CCD no qual se pode observar a diferena de afinidade das substncias 1 e 2 pela fase estacionria, sendo a substncia 1 mais retida que a 2.

Por ser um mtodo simples, rpido, visual e econmico, a CCD a tcnica predominantemente escolhida para o acompanhamento de reaes orgnicas, sendo tambm muito utilizada para a purificao de substncias e para a identificao de fraes coletadas em cromatografia lquida clssica. O

parmetro mais importante a ser considerado em CCD o fator de reteno (Rf), o qual a razo entre a distncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase mvel. Os valores ideais para Rf esto entre 0,4 e 0,6. A slica gel a fase estacionria mais utilizada, sendo seguida pela alumina, pela terra diatomcea e pela celulose. As amostras a serem analisadas por CCD devem ser aplicadas a aproximadamente 1 cm da base inferior da placa, com a ajuda de um capilar. Aps a aplicao da(s) amostra(s) sobre a placa, a mesma deve ser introduzida numa cuba contendo a fase mvel adequada. Cubas cromatograficas geralmente so de vidro, com fundo chato, e devem ter suas paredes laterais internas recobertas com papel de filtro, para facilitar sua saturao com os vapores do solvente. A escolha da fase mvel, que geralmente constituda por um ou mais solventes, no tarefa simples. No entanto, uma vez que as fases estacionrias mais usadas so extremamente polares, no devem ser utilizados solventes pouco polares, que no removeriam os compostos do ponto de aplicao, nem solventes muito polares, capazes de arrastar os componentes da amostra at o topo da placa. A placa deixada na cuba, onde o solvente ir subir por capilaridade, at que ele esteja a aproximadamente 2 cm da extremidade superior. Ao ascender, o solvente ir arrastar mais os compostos menos adsorvidos na fase estacionria, separando-os dos mais adsorvidos. A linha de chegada da fase mvel deve ser marcada e a placa deve estar seca. Como a maioria dos compostos orgnicos incolor, faz-se necessria a utilizao de um processo de revelao para que se possa analisar o resultado. Para a revelao de placas de CCD, existem processos destrutivos e no destrutivos. Os mtodos no destrutivos mais utilizados so a utilizao de 1) placas onde a fase estacionria fluorescente ou 2) iodo. O primeiro baseiase na utilizao de substncias fluorescentes misturadas slica quando da preparao das placas, possibilitando a revelao dos compostos em cmaras de luz ultravioleta. O segundo vale-se do fato de que o iodo complexa-se com compostos insaturados, de modo que placas que os contenham, ao serem colocadas em uma cmara contendo cristais de iodo, apresentaro pontos amarronzados. Os processos destrutivos consistem na oxidao dos compostos sobre a placa, pulverizando-os com soluo aquosa de um oxidante orgnico e/ou um cido mineral, submetendo-se a placa a altas temperaturas (~110 C) por alguns minutos. Os compostos orgnicos oxidados sero revelados na forma de pontos escuro.