El Urocultivo EL urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un mtodo excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos

que infectan el aparato urinario. La combinacin de piuria con bacteriuria considerable sugiere la presencia de una infeccin urinaria. UTILIDAD CLINICA: 1. Cuando los sntomas indican una posible infeccin urinaria como: dolor y sensacin de calor al orinar, as como urgencia frecuente de orinar. 2. Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre sntomas de infeccin. 3. En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que pueda causar algn problema al beb.

Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiolgico, estriles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilucin al 1:100. Se deposita 1 ml. de cada dilucin en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vaca un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45. Mediante rotacin suave, se favorece la distribucin homognea de la siembra. Mtodo de Kass Se incuban todas las siembras a 37 durante 24 a 48 horas. Para calcular el nmero de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contadas stas, basta multiplicar su nmero por la dilucin respectiva para obtener la cuenta total. Mtodo del asa calibrada. Esta estimacin cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de agar-sangre o agar con CLED en una muestra de orina, sin centrifugar, empleando asa de platino calibrada (4 mm. de dimetro). Despus de incubar las siembras a 37 durante 24 a 48 horas, se cuenta el nmero de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que la asada de platino contiene 0.01 ml. de orina. Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera: No hubo desarrollo microbiano. Menos de 10 000 colonias por ml. Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml. Ms de 100 000 colonias por ml. Cuando se obtienen dos recuentos sucesivos con ms de 100 000 colonias por ml., la probabilidad de infeccin es de 80%, cifra que se eleva a 95% si el mismo resultado se logra en tres recuentos sucesivos. Por lo general, las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. Cuando el recuento revela valores intermedios, entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml, el examen debe repetirse. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas, si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml, ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas, diuresis acentuada, obstruccin uretral, infecciones crnicas e infecciones por cocos gram positivos. b. Examen cualitativo

El estudio cualitativo, que conduce a la identificacin del agente, se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar-sangre, agar-CLED, agar de Levine o MacConkey. Es recomendable el medio CLED, porque favorece el desarrollo de bacterias patgenas urinarias y permite la identificacin de los microorganismos contaminados. Su contenido en cistena y lactosa y su deficiencia en electrolitos facilitan, por una parte, el reconocimiento de colonias de bacterias y, por otra, inhiben el carcter invasor de las colonias de Proteus. As se facilita la identificacin de estafilococos, bacilos difteromorfos, lactobacilos y otros agentes que pueden contaminar la orina. La identificacin final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioqumicas y caractersticas serolgicas. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control, y definir el estado de revivida o de reinfeccin. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo, del serotipo (particularmente en E. coli), del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. aeruginosa) y del antibitico. ste ltimo se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia, se concluye que se trata de una misma cepa. * Mtodos rpidos de diagnstico. Existen varios procedimientos prcticos y econmicos para el diagnstico rpido de infecciones urinarias o de bacteriurias significativas. Son tiles para investigar grandes grupos de personas. Estos mtodos pueden ser microscpicos, qumicos o de microcultivo. La coloracin de un frotis de orina no centrifugada mediante el mtodo de Gram constituye un ndice prctico para diferenciar entre infeccin y contaminacin urinarias. En efecto, la observacin de un bacilo gram negativo por campo microscpico puede realizarse cuando la muestra contiene ms de 100 000 bacterias por ml. Sin embargo, la dificultad de encontrar bacterias en frotis de orina por este mtodo, provoca resultados falsos negativos. Menos confiable aun es el hallazgo de 20 o ms bacterias gram negativas por campo microscpico de sedimento urinario, aunque dicho nmero permita sospechar recuentos superiores a 100 000 microorganismos por ml. Los procedimientos qumicos estn basados en propiedades enzimticas de las bacterias, que se pueden poner de manifiesto en la orina. Entre las pruebas se pueden mencionar: catalasa, reduccin de nitratos, reduccin de trifeniltetrazolio e hipoglucosuria. Estos mtodos, aunque rpidos y econmicos, tienen el inconveniente de ser indirectos, basarse en propiedades metablicas de las bacterias y no en su desarrollo y observacin, y producir muchos falsos negativos. Placas de agar McConkey y de agar CLED, donde ha crecido un Escherichia Coli en cultivo puro, con un recuento superior a 100.000 UFC/ml. (cultivo sembrado con asa calibrada de 1/1000). SIGNIFICADO CLINICO: Los siguientes microorganismos en titulacin suficiente se consideran patgenos: Escherichia coli, Enterococcos, Neisseria gonorrhoeae, Klebsiella, Enterobacter, algunas especie de Serratia, Mycobacterium tuberculosis, Especies de Proteus, Pseudomona aeruginosa, Estreptococco hemolitico genralmente del gurpo B, Candida albicans y otras levaduras. INTERFERENCIAS: Pacientes que estn recibiendo lquidos forzados, la orina esta tan diluida que la cuenta de los colonias disminuye por debajo de los 105/mililitro. La contaminacin bacteriana puede provenir de: vello peri anal, bacterias localizadas debajo del prepucio, bacterias de las secreciones vaginales, de la vulva o de la porcion distal de la uretra, bacterias provenbientyes de las manos, pies o ropa. 1- Siembra La siembra debe realizarse de la orina sin centrifugar con un ansa calibrada, lo que permitir obtener una estimacin semicuantitativa del desarrollo microbiano. Existen numerosos medios de cultivo para sembrar una muestra de orina. La

eleccin del medio de cultivo debe contemplar la relacin costo-beneficio, de modo de elegir la opcin que permita la recuperacin de la mayora de los patgenos con el menor costo posible. iv. El medio CLDE permite el desarrollo de bacilos gram-negativos, estafilococos y enterococos. Los medios de Levine, EMB o MacConkey permiten nicamente la recuperacin de bacilos gram-negativos. La mayora de los grmenes (incluyendo estreptococos y corinebacterias) desarrollan en agar sangre, pero este medio no permite la recuperacin de Haemophilus spp., ni neisserias patgenas (gonococos y muchas cepas de meningococos). El agar chocolate posibilita la recuperacin de todos los microorganismos mencionados anteriormente. Teniendo en cuenta estos conceptos, el microbilogo tiene varias opciones para la siembra racional de la orina. Siembra de acuerdo a la observacin previa del sedimento. Este procedimiento ofrece la ventaja de cultivar el microorganismo en el medio ms apropiado, tanto para su desarrollo, como para su caracterizacin macroscpica (aspecto de la colonia, fermentacin de lactosa, tipo de hemlisis, etc), por lo que posibilita orientar con mayor certeza el esquema inicial de identificacin.