PROJECTO D3B DRUG DISCOVERY & DEVELOPMENT @ BIOALVO

QREN SI I&DT PROJECTOS INDIVDUAIS N 1413 LISBOA-01-0202-FEDER-00113 Descrio do Projecto As doenas neurodegenerativas e de sistema nervoso central (SNC) sero o grande desafio em termos de sade humana para as prximas dcadas. O termo doena neurodegenerativa inclui um conjunto de patologias com diferentes causas e sintomas, que tm em comum o facto de apresentarem um compromisso da funo cerebral normal. A doena neurodegenerativa mais comum a Doena de Alzheimer, estimando-se que 50-75% dos casos de demncia no mundo inteiro se associem a esta patologia. O aumento da esperana de vida da populao mundial conduzir a um envelhecimento da populao que far crescer substancialmente a incidncia de casos de doenas neurodegenerativas. A Organizao Mundial de Sade estima que esta categoria de doenas seja a segunda maior causa de morte no ano 2040, superando assim a morte por cancro. Acresce que no existe actualmente uma soluo teraputica eficaz para as doenas neurodegenerativas, o que torna premente o investimento imediato no desenvolvimento de novas abordagens aplicadas descoberta de terapias para este conjunto de doenas de impacto social to dramtico. A BIOALVO uma empresa que desenha e estabelece programas de descoberta e desenvolvimento de drogas com aplicao teraputica em doenas neurodegenerativas e de SNC. A rea teraputica de eleio da BIOALVO representa j o segundo maior segmento do mercado farmacutico mundial, precedido apenas pelo sector oncolgico. O Projecto D3B tem como objectivos globais a criao de ferramentas de excelncia para aplicao em programas de descoberta de drogas e a utilizao dessas ferramentas na identificao e desenvolvimento de novos frmacos para tratamento de doenas neurodegenerativas e de SNC. A descoberta e desenvolvimento de uma molcula com aco teraputica (doravante designada por droga) um processo complexo cujo objectivo a introduo de uma nova molcula no mercado farmacutico (Figura 1).

Figura 1: Processo de descoberta e desenvolvimento de drogas O primeiro passo deste processo a identificao de um alvo teraputico, seguido do desenvolvimento de uma plataforma de teste e respectivo ensaio experimental que permitam identificar molculas com aco no alvo escolhido. O ensaio experimental consiste na avaliao do efeito de milhares de molculas sobre a plataforma teraputica, utilizando para o efeito sistemas robticos que permitem um alto dbito de screening (High Troughput Screening HTS). As molculas seleccionadas no screening (denominadas de hits) so posteriormente analisadas de forma a identificar famlias com caractersticas qumicas comuns. Cada famlia analisada relativamente potncia, propriedades fsicas e qumicas, facilidade de sntese prevista, custo dos reagentes, capacidade de scale-up da sntese, selectividade biolgica e espao qumico livre de propriedade intelectual em redor da estrutura inicial. Neste passo, atravs de uma de anlise de qumica mdica, os vrios hits so agrupados em funo da sua relao estrutura-funo com o objectivo de identificar as caractersticas qumicas responsveis pela actividade biolgica especfica e pelas qualidades essenciais a uma droga que se pretende que seja administrada preferencialmente por via oral. A anlise de qumica mdica inclui a sntese de anlogos com caractersticas qumicas melhoradas, que devem ser re-testados na plataforma de screening inicialmente utilizada, de forma a validar a sua maior potncia. Simultaneamente, os hits e novos anlogos so avaliados em termos de citotoxicidade e genotoxicidade em culturas celulares. A informao daqui resultante ser integrada na anlise de qumica mdica e permitir, juntamente com os resultados da potncia no screening, identificar um conjunto mais restrito de molculas que renam as melhores condies de potncia/toxicidade molculas lead. Ainda nesta fase do processo, designada por hit-to-lead, as molculas so avaliadas em ensaios preliminares de ADME (absortion, distribution, metabolism and excretion) com o objectivo de aferir

propriedades tais como a estabilidade metablica, a ligao a protenas do plasma, a permeabilidade intestinal e a solubilidade. Finalmente, as estruturas qumicas mais promissoras entram numa fase de optimizao de leads, em que se procura atingir a prova de princpio num modelo animal da doena que seja globalmente reconhecido. Em simultneo, ensaios de ADME rigorosos atestam as propriedades de droga de cada molcula em estudo. Novamente, todos os resultados obtidos so integrados de ponto de vista de qumica mdica, com o objectivo de gerar novas molculas com propriedades qumicas de potncia e ADME/toxicidade optimizadas. No final desta etapa de optimizao, um nmero muito restrito de molculas candidatas segue para a fase de ensaios prclnicos. A entrada em ensaios pr-clnicos marca o incio da fase de desenvolvimento de uma droga. Nesta altura, as molculas candidatas a droga j demonstraram ter uma actividade promissora contra um determinado alvo teraputico. Contudo, muito pouco se pode concluir relativamente segurana, toxicidade, farmacocintica e metabolismo de cada molcula em humanos. O objectivo dos ensaios pr-clnicos o de avaliar todos estes parmetros previamente s experincias em seres humanos. Mais ainda, nesta fase do desenvolvimento da droga necessrio aferir uma dose inicial segura a ser usada nos ensaios clnicos. Para este efeito, as molculas lead que so seleccionadas para ensaios pr-clnicos so testadas tanto in vitro como in vivo (duas espcies) em termos de toxicologia, genotoxicologia e segurana farmacolgica. A ltima etapa antes do registo de uma nova droga consiste na realizao de ensaios clnicos, divididos em trs fases sucessivas: Fase I, Fase II e Fase III. Resumidamente, nos ensaios clnicos de Fase I esto envolvidos 20-100 voluntrios saudveis e so testadas a segurana e a dosagem da molcula candidata. A Fase II consiste na administrao da molcula candidata a um grupo de 100-500 doentes e tem como objectivo avaliar a eficcia e os efeitos secundrios do tratamento. Por fim, a Fase III implica o tratamento de um vasto nmero de doentes, 1000-5000, com vista a analisar os efeitos da utilizao a longo prazo (1-4 anos) e a comprovar a eficcia anteriormente verificada. A concluso com sucesso dos ensaios clnicos de Fase III possibilita que a molcula em causa seja submetida como candidata a nova droga a uma agncia reguladora credenciada e posteriormente registada e comercializada no mercado farmacutico. Actualmente, so ainda realizados ensaios clnicos de Fase 4, em que se acompanha a utilizao de uma droga depois de comercializada, com o objectivo de aferir a sua eficcia e segurana a longo prazo.

Hoje em dia, procuram conciliar-se dois parmetros essenciais na rea de descoberta de drogas: especificidade do ensaio e capacidade de alto dbito. O alto dbito geralmente assegurado pela utilizao de testes in vitro (ou seja, num tubo de ensaio), em que a simplificao do processo fisiolgico que envolve o alvo teraputico confere vantagem em termos de rapidez do ensaio. No entanto, screenings celulares secundrios ao ensaio in vitro revelam frequentemente que as molculas identificadas in vitro no possuem as mesmas caractersticas de actividade quando analisadas num contexto de complexidade celular. Por outro lado, a utilizao de ensaios in vitro no permite aferir caractersticas de citotoxicidade inerentes s molculas testadas. Por estas razes, o vantajoso alto dbito associado aos ensaios in vitro muitas vezes no compensado, j que uma parte significativa das molculas identificadas se revela ineficaz ou txica num ensaio celular. As plataformas de descoberta de drogas desenvolvidas pela BIOALVO tm por base ensaios in vivo, realizados em leveduras humanizadas, ou seja, leveduras modificadas de forma a expressar o alvo teraputico humano. A levedura constitui um modelo celular simples e representativo das condies fisiolgicas do alvo teraputico. Mais ainda, encontra-se j cientificamente demonstrado que a levedura recapitula aspectos celulares fundamentais de grande relevncia para as doenas neurodegenerativas. Por outro lado, as leveduras so clulas com caractersticas de crescimento muito simples, rpidas e econmicas. Assim, atravs das nossas aos plataformas ensaios in de vitro, levedura, enquanto contornamos garantimos a as inespecificidade associada

necessidades de alto dbito e baixo custo dos programas de descoberta de drogas. Por outro lado, garantimos a deteco precoce de citotoxicidade associada s molculas em estudo, possibilitando uma resposta estratgica adequada. A esta tecnologia desenvolvida in-house, a BIOALVO deu o nome de GPS D2 (GPS, de Global Platform Screening). Actualmente, esta tecnologia encontra-se diversificada em vrias aplicaes para segmentos teraputicos do mercado farmacutico com extrema necessidade mdica. Nomeadamente, a BIOALVO construiu e detentora da plataforma BLOCKADE para identificao de inibidores da enzima indolamina2,3-dioxigenase (IDO), da plataforma DISAGGREGATOR I Tau para pesquisa de drogas com aco teraputica em Tauopatias, e da plataforma DISAGGREGATOR II Tau com o mesmo alvo teraputico da anterior mas direccionada para a identificao de molculas anti-amiloidognicas, especificamente. No mbito do projecto D3B a BIOALVO pretende dar continuidade a dois processos de descoberta de droga actualmente em curso na empresa: a identificao de inibidores de IDO e a identificao de molculas modeladoras de

Tauopatias. Em concreto, pretendemos levar as molculas candidatas at s fases pr-clnicas de cada um dos processos. Adicionalmente, propomo-nos construir duas novas plataformas para screening de novas drogas para a Doena de Alzheimer e para a Doena dos Pezinhos. Finalmente, dado o carcter inovador das nossas plataformas e as contnuas solicitaes do seu uso por parte de terceiros, nosso objectivo desenvolver de um kit comercializvel e inovador para HTS de compostos com potencial teraputico, tendo por base a tecnologia GPS Drug Discovery desenvolvida pela BIOALVO.