Un estudio de la conformacin estructural de los cidos hmicos Acutico

En el presente trabajo, sustancias hmicas acuticas (HS) se extrajeron mediante el uso de adsorbente XAD 8 y la fraccin de cido hmico (AH) se separ a travs de acidificacin. despus de estar purific por Hyphan resina y dializar, el AH acutico se ha caracterizado mediante transformacin de Fourier espectroscopia de infrarrojo y anlisis elemental. La influencia de la HA acutico y electrolito concentraciones, pH y acuticos AH-metal tiempo complejacin en la conformacin era investigado utilizando estudios espectroscpicos de UV / Vis, empleando la ecuacin propuesta por Doty y Steiner. Los resultados indicaron que el cido hmico macromolcula flexibles asume una forma condensada a pH cido y alcalino. Otros factores que favorecen conformaciones son condensados ya la formacin de complejos metlicos tiempo ("envejecimiento") y superior AH acutico y las concentraciones de electrolitos. As, teniendo en cuenta la fuerte influencia de los parmetros investigados en el estructural conformacin de la macromolcula hmico, llegamos a la conclusin de que los estudios que utilizan UV / Vis espectroscopia para estimar la concentracin, aromaticidad, grado de humificacin de la AH acutica y as sucesivamente, requieren riguroso control sobre las condiciones experimentales empleadas para proporcionar una correcta interpretacin de los resultados analticos. INTRODUCCION Las sustancias hmicas (SH) son producto de la transformacin de la materia orgnica por la accin de mycrobes y las enzimas presenta tanto en el suelo y el agua. Pueden se define como una mezcla de alto peso molecular macromolculas (0.500-100 kDalton) de origen natural origin.1 La definicin de los recursos acuticos SA se basa en la cromatografa mtodos de extraccin. Thurman y Malcolm, 2 dio la nombre acutico HS a la parte amorfa no especfica de SA, que consiste en carbono orgnico disuelto (COD), a Ph 2,0, que se adsorbe a XAD-8 columnas con un alto coeficiente de distribucin. Debido a la variabilidad de la material original orgnico y el gran nmero de diferentes reacciones que pueden ocurrir durante su degradacin, no es fcil sugerir frmulas precisas estructural para el SA. Sin embargo, se piensa que la mayora HS consisten cidos hidrfobos con muy funcional oxigenado grupos capaces de interactuar con iones de metales pesados en acutico systems.3 La fraccin de los recursos acuticos insoluble a pH HS <2 es define como acuticos cidos hmicos (AH), cuya molecular los pesos estn en el rango de 0,003 a 0,100 kDalton. La composicin elemental de los recursos acuticos HA en este rango es de 54-59% de C, H 3-6%, 33-38% O, 0.8-4% N y% .1-1 S.3, 4 La conformacin estructural de las macromolculas depende de la extendedness de esta "cinta", el pH, la carga densidad, el grado de ionizacin de los grupos cidos, inica la fuerza y la concentracin de las sustancias hmicas, as como en la formacin del enlace de hidrgeno intramolecular y rearrangements.5-7 La dispersin de la luz monocromtica en una solucin diluida solucin de macromolculas o partculas coloidales es estrechamente relacionada con su peso, el tamao y las interacciones de las partculas en solucin. Sin embargo, de acuerdo con Doty y Steiner, 8 informacin similar se pueden derivar de diferencia espectroscopia (comparacin de las absorbancias a distinta longitudes de onda), utilizando su frmula:

donde A es la absorbancia de la solucin, la longitud de onda de la luz transmitida, es directamente proporcional a b/0, b se la mayor dimensin de la partcula y 0, la longitud de onda de la luz incidente. Chen et al., 9 utilizando la absorbancia de una solucin de cido flvico con diferentes pesos moleculares promedio en 465 y 665 nm muestra que la Doty y Steiner, 8 teora puede ser demandante a sustancias hmicas en solucin diluida. por lo tanto la cantidad puede estar directamente relacionado con el nivel de agregacin macromolecular, con valores ms altos lo que indica una macromolcula hmico ms agregado. Las investigaciones de las sustancias hmicas estructurales agregacin son importantes debido a su estructura influye en las propiedades del material hmico. Por ejemplo, en su capacidad para reaccionar con los metales y la estabilidad de la acuticos HS-iones metlicos especies formed.10 El objetivo de este trabajo es investigar la influencia de la el pH, acutico HA y concentraciones de electrolitos, y acutico HAmetal complejacin tiempo en la conformacin del cido hmico usando acutico UV / Vis espectroscopia estudios, basados en el Doty y Steiner theory.8 Experimental Reactivos y materiales (Todos los productos qumicos utilizados fueron de alta pureza). soluciones de cido clorhdrico (30% v / v), cido ntrico (65% v / v) y hidrxido de sodio se prepararon con agua de gran pureza (Millipore Milli-Q). La resina XAD 8 p.a. (Serva Feinbiochimica), necesario para el aislamiento de acutico hmico sustancias, fue previamente purificada por inmersin sucesiva con 0,5 mol L-1 HCl, 0,5 mol de NaOH L-1 y p.a. metanol (24 h cada una) .11 Celulosa Hyphan utilizado para la eliminacin de metales pesados de HS acutico concentrado se aplic de acuerdo con las recomendaciones dadas en Danielsson.12 La celulosa fosfato de celulosa absorbente (CellPhos) utilizado en este estudio para la separacin de fracciones de metal lbil en la acutico HA fue funcionalizado segn Ford y Hall.13 Este colector tiene una superficie de 1,94 m2 0,06 g-1 y 1,3 0,09 moles g-1 de los grupos fosfato inmovilizados. Aquatic aislamiento HA, separacin y purificacin El HS acutico en estudio se aisl de una humicrich muestra de agua recogida del ro Itapanha, que fluye a travs de la Reserva Ecolgica del Parque " Estadual da Serra do Mar ", ubicado en So Paulo, Brasil. Para este propsito, 20 litros de agua de superficie (aproximadamente 25 cm por debajo de la superficie del agua) estaban en el lugar filtrada a travs de 0,45 micras a base de celulosa y membranas acidificados con HCl concentrado a pH 2,0 con 10 mol L-1 HCl (Suprapur, Merck). Posteriormente, el HS acutico fueron convencionalmente aislada en el siguiente colector XAD 8las recomendaciones de Malcolm12. Despus de la elucin con 0,1 mol L-1 NaOH (100 ml), el concentrado obtenido se neutraliz a pH 7,0 con 2,0 mol L-1 solucin de HCl. Con el fin de eliminar los metales presentes de forma natural en la acutico HS, 50 ml de este concentrado era mecnicamente se agit durante 24 h con 1 g de celulosa Hyphan a pH 8.0.14 A continuacin, la fraccin acutico HA fue la precipitacin a pH 1,5,

con 6 mol L-1 una solucin de HCl, y se separaron por centrifugacin (4000 rpm) despus de 24 horas, se purific por dilisis, 15 y se liofiliza. Caracterizaciones La determinacin del DOC contenida en el medio ambiente acutico sustancia hmica se llev a cabo por combustin cataltica en una corriente de oxgeno en un TOC Schimadzu 2000 Analyser.16 La composicin elemental (CHN) de la acutico HA se determin usando un PerkinElmer 240-C analizador elemental. La transformacin de Fourier de infrarrojos espectro de los ecosistemas acuticos HA fue grabado usando un Nicolet 730 SX-FT espectrmetro. Los pellets se prepar con 8 mg acutico de HA por 100 mg de KBr.17 Estudio agregacin estructural UV / Vis espectroscopia. La influencia del pH (3-11), acutico HA (0.04-1.02 mg L-1) y electrolitos (0-0,32 mg 1 L-), y las concentraciones de complejacin acutico HA-metal tiempo (0.25 a 130 horas) en la conformacin de la acutico cido hmico macromolcula se obtuvieron por UV / Vis espectrometra a 465 y 665 nm, utilizando un doble haz Hitachi UV-2000 espectrmetro. La complejacin tiempo. La muestra de HA acutico utilizado en la investigacin del tiempo de complejacin se aadieron cobre de la siguiente manera: 5,0 mu g de Cu (II) iones se aadieron a 20 ml de 0,5 mg L-1 en solucin de HA acutico 0,01 mg L-1 NaCl (tamponada a pH 5,0), y, despus de ajustar el volumen a 25 ml con 0,01 mg L-1 de NaCl, mecnicamente se agit durante 130 h. Despus del tiempo de complejacin preestablecido (2-120 h), 80 mg de CellPhos se aadi en 10,0 ml de acutico AH solucin sostienen de metal de adicin y se agit durante 24 h. El intercambio inico se filtr a travs de papel de filtro (2 cm dimetro), limpiada previamente con 1 mol L-1 HCl. Papel y la resina se transfirieron a frascos pequeos y se extrajo durante 1 h con 3,0 ml de 2,0 mol L-1 HCl suprapur.18 Despus centrifugacin (4000 rpm) del eluato, el metal contenida se determin por ICP-AES, usando un Thermo Jarrel Ash-CID-DUO espectrmetro, de acuerdo con la condicin experimental dan en la Tabla 1. Resultados y Discusin Aquatic HA caracterizacin La Tabla 2 muestra la informacin complementaria sobre la sustancia estudiada hmico acutico. El HA acutico en la muestra se encontr que contena promedio de 51,76% C, 4,32% H y% 2,13 N, de acuerdo con data.19 previamente publicado en la absorcin infrarroja espectro del cido hmico, una banda ancha se observ en la regin de 3430 cm-1, que se atribuye a una extensin de alcohol, fenlica y / o carboxlicos enlaces OH, mientras que la absorcin debido Estudio Agregacin estructural En la literatura encontramos tres puntos de vista diferentes acerca de tamaos y formas de las sustancias hmicas en solucin. Una sugieren que hmico macromolcula asumir azar conformacin helicoidal, una segunda propuesta que HS son asociacin molecular de molculas relativamente pequeas en manos junto a la fuerza de interaccin dbil, un tercero consider que HS aparece en solucin como micelas o "pseudomicellar" structures.23-25 La relacin de las densidades pticas de una solucin diluida solucin menos dos diferentes longitudes de onda, 465 y 665 nm (E4/E6) se utiliza para caracterizar los cidos hmicos. La relacin E4/E6 indica el nivel

medio de condensacin estructural de las molculas en solution.13 Aplicando la relacin E4/E6 en Doty y Steiner frmula, 8 tenemos: La cantidad puede estar directamente relacionado con el nivel de condensacin de la estructura macromolecular, mayor valores que indican una conformacin ms condensada de la hmico macromolcula. En la Figura 1, es la ms alta, a pH cido que indica macromolculas ms condensada. Un segundo mximo es observado a pH alcalino. A pH bajo, las interacciones debido a enlaces de hidrgeno, fuerzas de van der Waals y orbitales en anillos aromticos conjugados dentro de la macromolcula hmico, 7 favorecer una conformacin ms agregado de la acuticos HA macromolculas y intermoleculares asociacin. Adems, las interacciones intermoleculares pueden inducir la formacin de dipolos a travs de la deslocalizacin de anillos aromticos -electrones, lo que favorece la agregacin de la macromolcula humic.24 A pH alto, la carga densidad sobre el aumento de la macromolcula, debido al aumento ionizacin de los grupos cidos. Sin embargo, los iones de contra- en solucin (Na +) reducir al mnimo el potencial de carga en la polielectrolito hmico, causando na expansin de la eletric duble capa, dando como resultado la repulsin y la dispersin de la partcula. En esta condicin la molcula macro hmico supone una "micelas como" la estructura. La sustancia hmica tienen propiedades anfiflicas en la que las molculas tienen hidrfobas (no polares) y hidrfilo (polar), las piezas lo que puede inducir a la "micela-como" la formacin de estructuras en solution.25 La Figura 1 muestra el valor de la variacin de las 1,9 unidades en la regin cida (pH 3-7), mientras que en la regin alcalina (pH 7-11) esta variacin es slo el 0,8 une. Esto indica la fuerte influencia de la regin alcalina en la repulsin de cargas, favoreciendo la conformacin extendida. Los valores ms bajos de se encuentran a pH neutro, lo que lleva a la conclusin de que, en este caso, la hmico flexibles macromolcula aparentemente adopta una forma extendida, porque de repulsiones carga intramoleculares asociados con mayor densidad de carga en la macromolcula. En la figura 2 los valores de b se representa como una funcin de acutico concentracin de HA, y este ltimo se ve que ejercen una fuerte influencia en la solucin diluida. Este efecto puede ser debido a una reduccin, en solucin diluida, de la intramolecular repulsin entre las cargas negativas derivadas de ionizacin de los grupos de cido, dando lugar a una estructura ms condensada. Sin embargo, el efecto sobre la causado por la concentracin de acutico AH se eleva desde 0,2 hasta 1,02 mg L-1 es aproximadamente 9 veces menor que la observada en el aumento de la concentracin de 0,08 a 0,2 mol L-1. Este hecho se debe probablemente a la micela formacin. Estos resultados evidencian que la agregacin de la codicia de macromolcula hmico est ms fuertemente influenciada por interaccin intra/intermolecular que por la formacin de micelas, de acuerdo con los datos observados a partir de estos estudios pH. En el ambiente, el HA-acuticos metales interacciones ocurrir durante un tiempo relativamente largo (proceso de envejecimiento) que afectan la labilidad de fracciones de metal complejado por AH acuticos. La figura 3 muestra que despus de un tiempo de complejacin de 48 h la Cu (II) de recuperacin de iones se reduce de 73% a 54%. En general, los metales complejados con los grupos ms externos de la macromolcula hmico reaccionan preferentemente con el los grupos funcionales de la resina. Por consiguiente, el metal complejado permanece durante mucho tiempo, probablemente debido a proceso de transformacin y reordenacin interna. como el tiempo aumentar, sitios de unin menos accesibles de las sustancias hmicas pueden estar ocupadas, y un cambio de iones metlicos del ms dbil a los

sitios de unin ms fuertes pueden tener place.10, 14 El inValue aumento de con el tiempo de complejacin, visto en la Figura 3, indica que la agregacin de codicia macromolcula est influenciada por reordenamientos del metal en la macromolcula hmica durante el "envejecimiento". Es razonable suponer que estos reordenamientos disminuir intramoleculares fuerzas de repulsin, favoreciendo el condensado conformacin al permitir que ms intramolecular interacciones. Como esto se realiza, los sitios de complejacin se hacen menos accesibles a los procesos de intercambio inico. Esta puede explicar el efecto de gran tamao que tiene tiempo de complejacin en la disminucin relativa de la labilidad de metal ions.26 Variacin de la concentracin de cloruro de sodio tiene un efecto exponencial en el valor de b, como se muestra en la Figura 4. En solucin diluida a pH apropiado, cidos hmicos y flvicos y sus sales de metales alcalinos son considerados para ser real coloidal soluciones, que muestra las propiedades tanto de polielectrolito y tensioactivo solucin. Tombcz y Regdon, 25 empleando cido hmico extrado de lignito inform que Na-humatos soluciones tuvo un efecto muy dbil emulsionante. Por lo tanto, es razonable a suponer que el aumento de la formacin de micelas con sodio cloruro de concentracin. Este efecto es similar a la observado en la regin alcalina en la figura 1. Conclusiones La macromolcula acutico cido hmico puede ser clasificado como un polielectrolito flexible cuya estructural conformacin depende de las condiciones en el medio, tales como el pH, la concentracin de AHA y concentracin de electrolito. Por lo tanto, los estudios que utilizan la absorcin de luz visible a estimar la concentracin, aromaticidad, medida de humificacin de la AHA, etc, requieren riguroso control de las condiciones experimentales empleadas, a permitir una correcta interpretacin de los resultados analticos. Adems, se ha demostrado que la formacin de complejos ya veces "envejecimiento" favorecer la conformacin condensada de la macromolcula, reduciendo posiblemente la labilidad relativa de los los iones de metal complejado por el cido hmico acutico. Agradecimientos El apoyo financiero para este trabajo por la CAPES, CNPq FAPESP y se agradece.