Imunofluorescncia e Imunocitoqumica: Direta: o anticorpo que se liga ao antgeno possui fluorescncia.

a. Indireta: o anticorpo que se liga ao antgeno no fluorescente, logo voc necessita usar um anticorpo secundrio que seja fluorescente.

Vantagens da imunofluorescncia indireta: Baixo custo (s h a necessidade da compra de um tipo de anticorpo fluorescente) Maior nmero de molculas fluorescentes por antgeno (melhor visualizao devido a amplificao da fluorescncia)

Os anticorpos secundrios de uma reao indireta podem ainda possuir biotina em sua molcula, ao invs de imunofluorescncia. Esses resduos de biotina seriam detectados por avidina modificada para apresentar fluorescncia, amplificando ainda mais a imunofluorescncia. Tambm podemos utilizar anticorpos fluorescentes para detectar anticorpos contra determinados antgenos no soro do paciente (ex: diagnstico para sfilis). A imunofluorescncia tem a desvantagem de o anticorpo perder sua fluorescncia aps a exposio luz UV ou aps certo tempo. A imunocitoqumica, diferente da imunofluorescncia, pois no utiliza a fluorescncia como marcador. Esta tcnica lana mo de outros processos, como: uso de protenas como barreira aos eltrons na microscopia eletrnica, a incorporao da peroxidase ao anticorpo (que ao reagir com seu substrato provoca o aparecimento de um precipitado), etc.

Anticorpos monoclonais: Anticorpos monoclonais so anticorpos produzidos por clulas provenientes de um mesmo clone. Das clulas provenientes desse mesmo clone, uma parte ser efetora e outra estar ligada a memria imunitria. O soro uma fonte de clulas policlonais, pois possui clulas provenientes de diferentes clones, que foram ativados por diferentes antgenos. Anticorpos Policlonais X Anticorpos Monoclonais O indivduo, ao receber um soro de cavalo, por exemplo, ser sensibilizado pelas protenas do cavalo tambm; O anticorpo contra um determinado antgeno fica diludo em soro contendo anticorpos policlonais; O policlonal reage com diferentes eptopos de um mesmo antgeno.

Obteno de anticorpo monoclonal: Em 1975 foi desenvolvida uma tcnica capaz de separar um nico clone de linfcito B, que produz um nico anticorpo. Faz-se uma fuso de clulas do bao de um animal imunizado e clulas de mieloma em PEG (polietilenoglicol), que um agente que promove a fuso de membranas celulares, gerando um hibridoma. Este hibridoma mantido em meio HAT (hipoxantina, aminopterina e timidina) para selecionar os hibridomas (a aminopterina impede a via de novo de sntese de DNA, e a timidina e a hipoxantina so usados na via de salvao para sntese de DNA). Assim, as clulas hbridas sobrevivem, apesar do mieloma no ter as enzimas da via de salvao, porque o linfcito tem tais enzimas.

Aps esta etapa, faz-se uma diluio do hibridoma estabelecida por clculos matemticos para que tenha 99% de probabilidade de que caia apenas uma clula por poo da placa. Em seguida faz-se testes dos sobrenadantes para os anticorpos especficos, pega-se as clulas do poo que PROVAVELMENTE monoclonal e dilui novamente para que cerca de meia clula seja plaqueada novamente por poo. Repetem-se os testes dos sobrenadantes e faz-se a expanso dos clones positivos ou em cultura ou em camundongo (provocando uma ascite neste). O resultado em ambos os casos a obteno de anticorpos monoclonais. Atualmente utiliza-se a engenharia gentica para obtermos anticorpos monoclonais, podendo obter-se: anticorpo monoclonal de camundongo com regies V e C e CDRs do camundongo, anticorpo monoclonal quimrico com regies V e CDRs de camundongo e regio C humana, e anticorpo monoclonal humanizado com CDRs de camundongo e regies V e C humanas.

ELISA (enzyme linked imunosorbent assay): 1) Adere-se o antgeno ao fundo da placa de Petri (SENSIBILIZAO DA PLACA COM O ANTGENO) 2) Lavagem (para retirar o excesso de material) 3) Adiciona-se o anticorpo que se quer testar e incuba-se para que ocorra a liganco antgeno-anticorpo. 4) Lavagem 5) Adiciona-se um ligante (um anticorpo secundrio conjugado a uma enzima, que pode ser uma peroxidase ou fosfatase alcalina. Exemplo: IgG , que quer dizer anti IgG humana) 6) Lavagem 7) Adiciona-se o substrato especfico para a enzima conjugada, de maneira que o produto da reao seja colorido. 8) Revela-se a placa Na placa ns adicionamos o soro do paciente em diferentes diluies. Alm disso, ns temos um controle positivo (onde sabe-se que o anticorpo primrio vai reagir com o antgeno) e um negativo (onde no adiciona-se o anticorpo primrio, para verificar se o anticorpo secundrio no estaria interferindo na reao). As vrias diluies visam eliminar a possibilidade de reao com outro anticorpo que no seja o que voc est procurando. Exemplo: diagnstico de Chagas: testa-se pessoas de regio endmica, pessoas com Leshimania ou com tuberculose (ligao cruzada), etc. Assim, determina-se at que ponto a pessoa no estaria com Chagas e a partir de qual ela estaria (ponto de cut-off). Western Blot: Mtodo usado para detectar protenas virais ou bacterianas, por exemplo, separado-as de acordo com a carga. Utiliza-se o SDS e o mercaptoetanol (que quebra pontes de sulfeto) para desnaturar as protenas sua forma primria e com carga negativa (aquece-se um pouco para favorecer a desnaturao). Assim, coloca-se essas protenas desnaturadas para correr num gel de poliacrilamina ou SDS-page (preparado entre duas superfcies com um pente do lado do catodo para fazer dentes que evitam que os diferentes substratos se misturem) do polo onde se localiza o catodo para outro onde se localiza o anodo, de forma qe as menores protenas vo correr mais que as maiores (as protenas

migram do catodo para o anodo devido a suas cargas negativas e de acordo com seu tamanho molecular). Ento esse gel colocado em contato com uma membrana de nitrocelulose, e as protenas do gel so transferidas para a membrana por capilaridade (blotting) ou por diferena de potencial. Essas protenas so ento identificadas incubando-se a membrana com anticorpos radioativos, conjugados a enzimas, etc, especficos para o antgeno de interesse. Finalmente, expem-se a membrana ao raio X para vermos o resultado. A desvantagem desse mtodo que o anticorpo que reconhece antgeno conformacional no reagir.

ESTUDO DIRIGIDO ELISA Enzyme linked immunosorbent assay Utiliza-se uma enzima para ver se houve reao antgeno-anticorpo. Adere-se o anticorpo (molcula ou clula) ao fundo da placa de 96 pocinhos (etapa de sensibilizao). Em seguida, lava-se para retirar os antgenos no aderidos. Acrescenta-se o soro, para ver se h determinada doena, ou o anticorpo puro. Incuba-se. Lava-se para a retirada do anticorpo que no se ligou. At agora, no d para ver se houve ligao do anticorpo ao antgeno. Utiliza-se ento um anticorpo anti-anticorpo primrio (ex.: antiIgG humano - IgGh) ligado a uma enzima. A vantagem a mesma da tcnica de imunofluorescncia indireta. A enzima geralmente a peroxidase ou a fosfatase alcalina (assim como na imunocitoqumica). Lava-se. Adiciona-se o substrato para a enzima (cromgeno), que quando quebrado passa a ter cor. O resultado obtido por leitura no espectrofotmetro. Na placa h um controle positivo (antgeno; anticorpo para o antgeno; anticorpo secundrio; substrato) e um negativo (antgeno; anticorpo secundrio; substrato) no se coloca o anticorpo primrio para ver se o anticorpo secundrio no est fazendo ligao cruzada com o antgeno. So feitas vrias diluies do soro, sendo que a positividade determinada pela reao em um certo nmero de diluies, especficos para cada doena (cria-se um parmetro testando-se soro de indivduos com a doena, normais, normais em rea endmica, com outras doenas, etc.). WESTERN BLOT Detecta protenas que so separadas de acordo com a carga. Utiliza-se o detergente SDS, que faz com que a protena perca as estruturas quaternria, terciria e secundria, ficando apenas a primria e a carga negativa dada pelo SDS. Mercaptoetanol quebra as pontes dissulfeto. Aquece-se para facilitar a desnaturao. Coloca-se gel de poliacrilamida entre duas placas de vidro. Faz-se com um pente, dentes na parte superior do gel, para se colocar solues de diferentes protenas em cada um. Coloca-se numa placa de eletroforese, onde as protenas migram do catodo para o anodo (pois o SDS negativo) de acordo com o tamanho molecular, de forma que as maiores migram menos, pois tm que passar pelos poros da acrilamida. Essa tcnica chamada SDS-PAGE (eletroforese em gel de poliacrilamida). Coloca-se o gel com as protenas em contato com um papel filtro e aplica-se uma diferena de potencial para

que as protenas migrem para o filtro de nitrocelulose com a mesma disposio do gel. Esse papel pode ser incubado com anticorpos, que reagem com as protenas de uma banda (anticorpos secundrios radioativos, com enzimas, etc.). Os anticorpos que se ligam a eptopos conformacionais no se ligam.
FACS ou citometria de fluxo: H uma fonte de raio laser e um recipiente onde colocada a soluo de clulas, que pinga atravs do raio laser. Esse, ao passar pela clula, sofre um espalhamento (refrao), que serve para determinar o tamanho, granulosidade e fluorescncia (se tiver marcador) da clula. A suspenso deve ser de clulas isoladas, com uma diluio que tenha uma maior probabilidade de que cada gota contenha apenas uma clula. O aparelho faz vibrao e presso para que o lquido passe como gotculas. Pode-se quantificar as clulas e separ-las em sub-populaes, sem precisar fix-las, por meio de placas de diferena de potencial, que desviam as clulas para compartimentos diferentes. A desvantagem principal o pequeno nmero de clulas separado, embora a amostra seja bem purificada. Nem sempre granulosidade e tamanho so suficientes para fazer um diagnstico, sendo necessrio fazer marcaes (ex: de , de , CD19, etc). Os aparelhos de hoje podem detectar at cinco marcadores fluorescentes na mesma clula atravs de um sistema de filtros. Esse mesmo tipo de anlise usado para dosar CD4 e CD8 em pacientes HIV-positivos, embora essa possa ser feita em microscpio tico de fluorescncia, que tem a desvantagem de sofrer influncia da subjetividade do contador e ser um mtodo mais lento. Aplicao: a) Tipagem de leuccitos diagnstico de imunodeficincias congnitas, avaliao e prognstico de HIV-positivos, monitoramento da reconstituio de transplante de medula ssea, monitoramento de imunoterapia ou quimioterapia em imunodeficincias. b) Fenotipagem de tumores diagnstico e classificao de linfomas e leucemias, diferenciao de clulas tumorais hematopoiticas e no hematopoiticas, avaliao de prognstico de cancr, determinao da clonalidade de linfomas e leucemias B. c) Anlise de DNA determinao da fase do ciclo celular.

ED FACS ou Citometria de fluxo

H uma fonte de raio laser e um recipiente em que colocada a soluo de clulas, que pinga atravs do raio laser. Esse, ao passar pela clula, sofre um espalhamento, que serve para determinar o tamanho, granulosidade e fluorescncia (se estiver marcada) da clula. A suspenso deve ser de clulas isoladas; com uma diluio tal que haja uma maior probabilidade de cada gota conter apenas uma clula. O aparelho faz vibrao e presso para que o lquido passe como gotculas. Pode-se quantificar as clulas, separ-las em subpopulaes, sem precisar fix-las, por meio de placas de diferena de potencial, que desviam

as clulas para compartimentos diferentes. A desvantagem principal o pequeno nmero de clulas separado, embora a amostra seja bem purificada. Os aparelhos de hoje podem detectar vrios marcadores fluorescentes na mesma clula, atravs de um sistema de vrios filtros.

Nem sempre granulosidade e tamanho so suficientes para fazer um diagnstico, sendo necessrio fazer marcao (ex.: de kappa, de lambda, CD5, CD19). Esse mesmo tipo de anlise usado para dosar CD4 e CD8 em pacientes HIV-positivos, embora essa possa ser feita em MO de fluorescncia, que tem a desvantagem de sofrer influncia da subjetividade do computador e ser mais lento. Aplicao: I) Tipagem de leuccitos: Diagnstico de imunodeficincias congnitas; avaliao e prognstico de HIV+; monitoramento de reconstituio de transplante de medula ssea; monitoramento de imunoterapia ou quimioterapia em imunodeficientes. Fenotipagem de tumores: Diagnstico e classificao de linfomas e leucemias; diferenciao de clulas tumorais hematopoiticas e no hematopoiticas; avaliao do prognstico do cncer; determinao de clonalidade de linfomas e leucemias B. Anlise de DNA: Determinao do ciclo celular.

II)

III)

Rejeio de Transplantes A rejeio pode ser aguda ou crnica. A rejeio aguda mais intensa e mais violenta, e termina com a rejeio do rgo. J a rejeio crnica dura um perodo de tempomaior.ArejeionoestligadaquantidadedealelosdeHLAdiferentesentre doadorereceptor. Papeldaimunossupresso: Diminuir a resposta imune a uma rejeio crnica. Antigamente a imunossupresso s era conseguida com altas doses de drogas e efeitos colaterais. Atualmente, as doses so bem mais baixas e os efeitos colaterais so menores. Essas drogas (exemplos: ciclosporina A, FK506, e rapamicina) atuam principalmente em linfcitosT.Emprincpio,esteumtratamentocrnicoequedeveserconstantemente acompanhado. TipagemHLA: Antesdotransplante,procurasetiparoHLAdergosdodoadoredoreceptor, paraevitarsearejeioagudaoupelomenosminimizararejeiocrnica.Oobjetivo desta tipagem , portanto, obter a melhor compatibilidade de MHC classe I e classe II entredoadorereceptor. So as clulas do transplante que apresentam MHC classe II na sua superfcie do incio a rejeio. Porm, tanto classe I quanto classe II do contribuies, embora diferentes,arejeio. AtipagemdeHLAfeitaporcentrosespecializados,atravsdeumacombinao detcnicas,taiscomo:sorolgicas,imunoqumicas,edebiologiacelularegentica. Reao leucocitria mista quando o soro de dois indivduos, ao serem colocados juntos, desencadeam uma reao violenta. A ausncia desta reao indica que h compatibilidade de classe II. No transplante de medula ssea, o hospedeiro pode rejeitar a medula ou a medula pode rejeitar o hospedeiro. a chamada reao do enxerto contra o hospedeiro. Reao do enxerto contra o hospedeiro quando clulas contidas no transplante (30% das clulas da medula so clulas T) rejeitam o hospedeiro, pois as molculas de HLA so diferentes. Estas clulas T agridem o hospedeiro, principalmente pele, sistema imune, retina, e cordas vocais. Para evitar a reao do enxerto contra o hospedeiro, se utiliza anticorpos contra protenas de linfcitos T (ex: anti CD4 e CD8), para matar as clulas T do enxerto. O problema que os linfcitos T produzem citocinas que fazem a medula funcionar, e sem eles a medula no funciona. Enxerto contra leucemia o transplante teria um efeito anti-cancr, se as clulas T no fossem completamente eliminadas.

APLICAODECONCEITOSIMUNOLGICOSMEDICINA (GRUPOSSANGUNEOS) GruposSanguneos:

 Sistemasdealoantgenospresentesemhemcias Dinamicamenteimportantes:ABOeRh Aplicarconceitosde: AntgenoEptopoHaptenoCarreadorReaoCruzadaAnticorpo ClasseRespostaprimriaesecundriaTimoindependentemudanadeclasse TolernciaEspecificidadeAglutinaoRelaoentreestruturaefunodasclasses deIgPareamentoentredoadorereceptorRespostatimodependente Transfernciaplacentriadeimunidade(imunizaopassiva)hipersensibilidade ProduodeIgsSecreodeIgAnticorponatural SistemaABOdegruposSanguneos: Aloantgeno:coisapresenteemumindivduoeausenteemoutrodamesma espcieservindoparaestecomoumantgeno.Ex:Agdehistocompatibilidade; substnciaspresentesnasuperfciedashemcias. ChamamosdeAeBacaresdiferentesquefazempartedaglicoproteinasou glicolipdeospresentesnasuperfciedashemcias. DevemosentenderosistemaABOnosentidodeAgseptoposhaptenos: OsgruposAeBsogeradosapartirdasdiferentesenzimasglicosiltransferases quetransferemespecificamenteoacardeumlugarparaooutro. AeBpossuemestruturasbioqumicasdiferentes;soantgenosdiferentese assimsoreconhecidosporAcdiferentes!!!(distintosimunoquimmicamente) AeBsomolculasmuitopequenasesozinhasnosoimunognicasesse tornamimunognicasquandoincorporadasaestruturasmaiores(lipdeosouprotenas nasuperfciecelular). OantgenoAeBsogeradasdentrodashemciasedepoisincorporadas membranaporenzimasglicosiltransferaseespecficasparaAouB.Assim,seum indivduostiverenzimaquetransfereA,sterantgenoAnahemcia,sendotipoA. OpontodeinserodeAouBnamembrananicoeemumamolcula aceptora(umaprotenaouumlipdeo).EstanorecebeAeBaomesmotempo,ouA ouB,masemumaclulaquepossuiasduasenzimasglicosiltransferase,produzindoA eB,essessotransferidosparaasuperfciecelulardeumamesmahemciamasem aceptoresdiferentes,caracterizandootipoAB. Condioparaserhemcia(indivduo)dotipo... A:expressargenequecodificaenzimaglicosiltransferaseparaA possuiraceptoresdeAnamembrana B:expressargenequecodificaenzimaglicosiltransferaseparaB possuiraceptoresdeBnamembrana AB:2enzimastransferases Possuirosdoisaceptores.EmumamesmahemciastemosAgAeBem diferentesstios. AgAeBsohaptenos,poissomolculaspequenasesocolocadasem estruturasmaioresnasuperfcieparasetornaremreativos/imunognicos. Transfuso,TolernciaeRespostaImune:

 Asrespostasatransfusoimediata!Issoocorrepoisnosanguejexistem anticorposantiBemindivduosAeantiAemindivduosBouatambososAcsem indivduosO.Essesanticorposjexistemnosanguedoindivduoantesmesmode qualquertransfusoqueoindivduosofra.EomaiscuriosoqueemumindividuoA nohanticorposantiAenosBnohantiB! Todarespostaimunecriadaapartirdeumasensibilizaoinicialenocasoda existnciadeanticorposantiAeantiBantesmsmdetranfusso.Oqueseexplicaque bactriasdenossafloraintestinalpossuemtantoantgenosAqtoBemsuasuperfcie( nosoAgexclusivosdosangue)esoelasquesensibilizamonossosistemaimuneque entoproduzAcantiAeantiB OqueumindividuoApassaanoapresentarAcantiAofenomenodetolerncia eomsmvalepraindividuosBemrelaoaosAcantiB. ComoprovarqueasbactriasdefloratemAgA? PegasanguedeindividuotipoB(quecontmAcantiA)ejoganeleabacteria.Se eletiverAgAirsegrudaraosAC.DasedpscolocarmossoroAcomhemciasA positivoveremosquenoirmaisaglutinar. OBS:EmindividuoA,asbactriasAdefloranosoconhecidascomoestranhas devidotolerncia.Paraquensnoreconheamosnossascls. AcnaturalAcantiAeantiBsoencontradosnaturalmentenosorosanguneo deindivduosnuncatransfudidos.Asbactriasdefloraintestinalimunizam ATENOessasbactriasdeflorasoportantomuitoteisparaosistemaimune eelecuidacomcarinho.Otratogastrointestinalumcomponentealtamente especializadonosistemaimune,quecapazdedistinguiroqueumestimulo patognicorealmentedonopatognico. Osistemareconheceasbactriasdafloramasnoasataca.Apenasqdoelesvo paraoutrosstiosqueosistemaentraemalertatentandocontlos.OTG1funciona predominantementeparagerartolernciaacomorganismos.Portantoaadministrao deAgsporviaoralacabaaumentandoachancedefazertolernciaediminuindoade respostaimune.Aquebradetolerncianospredispeadoenasgraves. Reaocruzada:AgAeBdehemciassoiguaisaosAgAeBdasbactriasdaflora eporissoqueAcproduzidocontrabactriasagemcontrahemciasdodoadoremuma reaocruzada. AcantiAeantiB:SoAcsnaturaissendotimodependentes.TodososAcstimo independentessodotipoIgMENOPRECISAMDECLStHELPERPARASEREM PRODUZIDOS.Sofabricadoscontraacardesuperfciebacteriana. ShproduodeIgMenodeIgGpqasbactriasestimulamumarespostatimo independentequeentonocontacomlinfcitothelper,nohavendomudanade classe. OshaptenosAeBsopresosacarreadores(glicoptnseglicolipidios)de superfciedashemciasegeramumarespostaimuneemindivduosquepossuemIgM antiAeantiB. PropriedadesdosIgMantiAeantiB: capacidadedeaglutinarhemcias capacidadedeativardestruiodehemciaspelosistcomplemento. ATENO:Amaiorpartedasbactriasgeraumarespostahumoralpoispor meiodeAcsqueosistemaimuneconsegueselivrarmaisfacilmentedasbactrias.A produodeIgMcontraasbactriasdafloraintestinallocalapenasnamucosa intestimalNOSENDOSUFICIENTEPARAATIVARLINFT. Atpqasbactriasnosopatognicas. Voltandospropriedades...

AsIgMsobonsparaaglutinarhemciaspoissoMULTIVALENTESGRANDES tendoportantoumaestruturapropciaparaaglutinarcoisasdistantesdesi.Almdisso, estodistribudosemtodasasdirees. NocasodeaglutinaodehemciasmtimportanteotamanhodeIgMpoisas hemciasnuncaseaproximambemvistoquehrepulsoeletrostticaentreas superfciesdashemcias.Portanto,somenteempatologiaquevemoshemciasunidas empilhademoedasnoverso.Paraaglutinarhemciasento,necessrioum instrumentoaglutinadorgrande. IgMativaosistemacomplementocomaltaeficinciapoisnamolculadeIgM ocorreajustaposioderegioFcvariasvezes. Pareamentodoadorreceptordesangue: Antesdeocorreratransfusodeumindividuoparaooutrodevesetestarse ocorreounoreaoqdouneossangues. Emgeralopareamentofeitopegandosehemciasdeumdeleseunindoemsoro antiAeantiBevendoseaglutinaouno. HemciasB+soroantiBaglutina HemciasA+soroantiAaglutina Poroutrolado,nosorocontendohemciasquesertransfudidonohapenas hemcias.NumatransfusodesanguetotaltbimportantesabersenosorohAcs contaosantgenospresentesnashemciasdoreceptor. Portanto:Noexistedoadoruniversaldesangue.Msmosanguedeindivduostipo O,podemnoconterAgsmaspossuinoplasmavriosAcantiAeB.AiosAcsdodoador podemdestruirashemciasdoreceptor. Provacruzada:TestatantoAgqtoAc. Evitardestruiodashemciasdoadas:verificarseashemciasdodoador tmounoAgsreconhecidosporAcsdoreceptor Evitaradestruiodehemciasdoreceptor:verificarnoplasmaqueser transferidosehAcsquehajamcontraAgsdashemciasdoreceptor Portantoatransfusodesanguedevesersempreentreindivduoscompatvel=do msmgrupoABO. Conseqnciasdatranfusoimcompatvel: Alongoprazoocorreodesenvolvimentodeumarespostatimodependente.Isso ocorreqdoabactriadafloraestlisoladanamucosa,arespostaimediatagerada IgM,masqdoashemciasnosanguesofremhemlisedevidoreaohumoral(mais sistemacomplementomaismacrfagos)issoumaevidenciaparaosistemaimunede quenoesttudobemeailinfcitoThelperpassamainterferirelinfcitoBproduzem IgG.(tpicoderespostaimunesecundria).Apartirdanuncamaisarespostaser PRIMRIAPROVAVELMENTE.(IRREVERSVEL) ATENO:respostaprimriabactriastimoindependentesIgM/R secundriatransfusotimodependenteIgG Arespostasecundriatbpodeserprovocadaemmulheresgrvidasqdoas hemciasdefetoencontramcomsanguematerno,seestascontinuaremAgsparaos quaisosoromaternotemAcs,aipodeocorrerhemliseeprovocarrespostasecundria eproduodeAcsIgG. Qualoperigodisso? IgGssocapazesdepassarpelaplacenta(eIgMno)provocandoimunizao passivaeai? Ex:seofetoforBeameforO,osAcsIgGantiAe/ouantiBpassampelaplacenta paraofetoeantiBprovocahemlisedascls(hemcias)dofetodoenahemoltica dorecmnascido=eritroblastosefetal.

IgGNOAGLUTINAMASOPSONIZA!! AdoenahemolticaderecmnascidoocorreporincompatibilidadedosistemaRh e/oudosistemaABO,mas... IncompatibilidadeABOmaiscomumemenosagressiva IncompatibilidadeRhmenoscomumemaisagressiva Obs.:OPSONIZAO. Facilitaodefagocitosemediadapelainteraoentreopsonina(ex:IgG)e receptordesuperfciedofagcito.NocasodeIgGaporoFcdeIgG. SISTEMARh(Dd) Protenatimodependente IgG transfernciaplacentria Opsonizao Degradaodehemoglobina Bilirrubinanoconjugada AbioqumicaegenticadosistemaRhmuitocomplexa.Costumasedizerqueos humanossedividememRh+eRh. AfitaallicadoRh+D_eadoRhdd.AgrandemaioriadaspessoassoRh+. PoucossoRh. Poralgumarazodesconhecida,sexistepossibilidadedereaoimuneemum sentido(unidirecional):osdd(Rh)quandoentramemcontatocomosangueRh+ reagemfazendoanticorpoantiRh.JosRh+noreconhecemRhcomoestranho,no reagindo. ApsocontatocomRh+aproduodeanticorposantiRhdemoramaisoumenos umasemana. EssesanticorposnosodotipoIgM,poisRhumaprotenaqueprovoca respostatimodependenteemuitointensa:umanicaexposioimunizantesuficiente parafazermuitaIgGqueduramuitotempoeesseIgGpodecausardanoscasoseja transferidopelaplacentaparaofeto.Eleopsonizaashemciasdofetofacilitandoa hemlisedestaporfagocitose.Portantoadestruiodashemciasnofeitapelo complemento,vistoqueesteaindanemamadureceunofeto,massimporclulas fagocticas.Comahemlise,ocorreanemia(menorcapacidadedetransportede oxignio)eodesenvolvimentofetalprejudicadosendoaprincipalcausademorte fetal incompatibilidadedegrupossanguneosumadascausasdeaborto.Ahemlise tambmlevaadegradaodehemoglobinaquecontribuipraanemiaegerabilirrubina noconjugadaquetxica,insolvelenoeliminvelpelaurina.Duranteavidafetal

esseexcessodebilirrubinatransferidoparaosanguematernoeaofgadodame conjugaeosrinseliminam reduzatoxicidadedebilirrubina. Oproblemaquandoocorreonascimentoeofgadodoneonatonoconsegue conjugala.Aabilirrubinaemexcessomuitotxicaegravementeperigosase associandoaoSNC(gngliosdabaseporex.)causandoleses KERNICTERUS Incompatibilidadenadoenahemolticadorecmnato... Adoenahemolticasedeveaofenmenodeimunizaopassivadofetopela transfernciadeIgGspelaplacenta.EssasIgGspodemserantiRhouantiAouantiB. PortantotantoincompatibilidadeABOquantoincompatibilidadeRhlevama eritroblastosefetal. Duranteagestaoosanguefetalpodeentraremcontatocomosanguematerno procurandosensibilizaoegeraodeanticorposantiRh(meefetoRh+)ouantiA e/ouAntiB. Paracausaraeritroblastose,bastaquenosanguematernoexistaIgGantiA/B/Rh eparaumdelesestarpresenteaomenos,bastaqueantgenosdofetotenhamentrado emcontatocomsanguematerno.Naprimeiragestaoissopodeocorrereofetopode receberasIgGsproduzidas,sofrendodeeritroblastosefetal.Pormissopouco provvel.Asensibilizaobemmaiornahoradoparto.Nessemomentohmisturados sanguesmaternoefetal.Assim,oriscodedoenaaumentaacadagestaodefilhoRh+ pormeRh. Asensibilizaodosistemaimuneeentoaimunizaoocorreemvrios contextos,porex: 1Infeces 2gravidez(grvidaimunizadaporantgenosfetais)asrespostasimunesgeradas podemserruinsparaofeto(ex.sistemaABOeRh)masagrandemaioriadasrespostas imunessobenficasprofeto,assegurandocondiesfavorveisaoseu desenvolvimento.Portanto,assimcomonocasodafloraintestinal,umaresposta benfica. Ex:respostadameaocomplexodehistocompatibilidade(HLA)dofeto(funo protetora,preservarocorpoestranhodentrodoorganismomaterno). ATENODIAGNSTICO OquecausaaeritroblastosesoanticorposIgGcontraantgenospresentesno feto.Comoeupossotestarseacrianatemessadoena?Procurandoanticorpos maternosnosanguedofeto.Essesanticorposdevemestarpresosahemciaseisso podeservistoemtcnicasdeimunohistoqumica(usodeanticorpomarcadopra reconheceroanticorpomaternogrudadonahemciafetal).Oanticorpomarcado produzidoporoutrasespciesquenooserhumanojquenopoderamoster anticorpocontranossosprpriosanticorpos.Esseanticorpodevereconheceracadeia pesadagamasenoelereconheceriaoutrosanticorpos.Essemtodoquasenousado. TestedeCoombs omaisusado(mtododeaglutinao) Consisteemtirarproveitodadiferenanacapacidadedeaglutinaodediferentes Igs.IgGnoaglutina!IgMaglutina!DepoisdecolocarumIgantiIgGhumanadevesever seashemciasaglutinaramouno.UtilizasepraissoumanticorpoantiIgGhumana(de outraespcie)quenoprecisaestarmarcado!Quandoahemciafetalestivercobertade IgGmaterno,oAnticorpoantiIgGirseligaraduasIgGsdiferentespoisbivalenteea aglutinahemcias.umtestedeaglutinao. Teste+aglutinadoena Testenegativonoaglutinanotemdoena.

IDIAS:Osanguenoaglutinanormalmente OtestesfuncionaseemmaisdeumahemciaexistiremIgGsmaternos cobrindoasuperfcie. OtestedeCoombspodeserdiretoouindireto: 1Direto(umaetapaapenas):bastacolocaranticorposIgGeantiIgGmaterna 2Indireto:feitoprasaberseametemimunidadecontraantgenosfetaisese pode,portantocausareritroblastosefetal. ProcurarseametemIgGantiA/antiBouantiRh.Como? 1utilizasehemciasRh+ecolocaseosoromaternonelas.Nodpravernadaa princpio. 2lavaseashemciascobertasounodeanticorposecolocaseoutrosanticorpos quereconhecemIgGsmaternos.SeelasestiveremcobertasporIgGsmaternosiro aglutinar(a+meimunizadaprximagestaotemriscoaconselhamento gentico). MAISATENO:senosorodameexistirIgMantiAe/ouantiBoqueacorreria queiriaaglutinarantesda2etapa. IMUNOPROFILAXIA AplicaointravenosadeAcantiA/BouRhnosanguedemeduranteoperodo dagravidez!!!IssoevitaqueeleproduzaseusprpriosAc,evitandoassimacriaode memria!!(dificultaaimunizao!)Sserveseforaprimeiragravideze/ouseamulher aindanotiversidoimunizada. SeutilizadeIgMpoiselenoultrapassaaplacenta!!Mascapazdeeliminaras eventuaishemciasquepassaramp/me! NaprticamdicaessesorocomIgMadministradoapenaslogoantesdoparto poisoeventoc/maiorriscodemisturadesanguematernofetal!!Evitaqueame desenvolvarespostaimuneantihemciasfetais!!Esseeventomostraquepodehaver DESTRUIOsemhaverIMUNIZAO(eventoREGULADORDAIMUNIDADE). Ateno:Novacina!!soro!!(imunizaopassiva) Noomuitoimportante:Darsoroevacinaaomesmotempoburrice!!Osoroir evitaraimunizaojquecontmAcsqueiroreagircomosAgsatenuadosou mortosdavacinaimpedindoaformaodaimunidade!!Imunizaopassivaregulaa imunidade!! ANTICORPOSMONOCLONAISECITOMETRIADEFLUXO OdesenvolvimentodetecnologiadeAcmonoclonaispossibilitouavanosna medicina,ppnosmeiosdiagnsticos!! Acmonoclonais=>derivadosde1clonedeclulasBespecfico. LinfcitosBsoproduzidosnamedulassea,sofremrearranjoesematuramnos linfonodos!!Cada1possui1Igespecifico!!SeessacelBproliferar,todososseusfilhos iroteramesmaespecificidade.MasoslinfcitosBnovivemparasempre!!Enemo Ig!!porissoquenecessriaarevacinao! Hibridoma=>Hbridodeclulatumoral+celBprodutoradeIg Em1975,2pesquisadores(GeorgeKahlereCesarMiltew)produziramum hibridoma!!Aidiadeleserajuntar2caractersticasmuitoboas:acapacidadede

produodeAcdasclulasBeacapacidadedesobreviverparasempredaslinhagens tumorais!!(imortalidade) *Clulatumoral:Linhagemeterna.Algumaslinhagensvivemparasempreinvitro desdequehajaomnimoparasobreviver!! Imortalidadetumoral+ProduodeAcdeclulasB=>TCNICAATHOJE USADAPARAPRODUZIRAC.MONOCLONAIS! *Descriodatcnica:ProduodeAcmonoclonal: 1)InjetanocamundongooAgescolhido!!(ex.Albumina) OAgdevesergrande,estaremsoluoaquosaecomADJUVANTE. OadjuvanteserveparachamaratenodoSistemaImunedequeexistealgo estranhonoorganismo!!Eleprovocaumarespostainflamatria!!(ex.adjuvantede micobactria). 2)RetirarobaodoanimalparaprocurarocloneBespecficoprodutordo IgcontraoAginoculado. 3)Separaseasclulasdebaoemfrascoscontendotambmclulas tumorais.AdicionasePOLIETILENOCLICOLAOSFRANSCOSqueentolevaa desestabilizaodasmembranascelulareslevandoafusoaleatriaentreclulasnos frascos. Mas,ea?Comosabersefusionaclulatumoral+clulaB? Temquesaberque:asclulastumoraiscolocadasnosfrascostmdefeitonavia denovodeproduodeAcdoNuclicoseparaproduzilosusaaviadesalvao,uma alternativa.Porm,omeioexistentenosfrancosummeiodeseleoqueINIBEAVIA DESALVAO(meioHAT:hipoxantina+aminobterina+rimidina). Assim,apsfusovemosque: TUMORAL+TUMORAL=>Morresempoderfazercidonuclico LINFB+LINFB=>Morredesenescncia TUMORAL+LINF=>VIVE 4)Agoraoproblemasaberquallinfcitofusionou!!Atporquenobaotem linfcitoBlinfcitoTequedosvrioslinfcitosBapenas1clonedeinteresse. OslinfcitosBproduzemAcsedadevemosidentificlosparasaberemque frasco(poo)estolinfcitoBdesejado!!AclulaBsproduzAcquandoativada(vira plasmcitoedeixadeterAcnamembrana,secretandoapenas!!). ParabuscaroAcexatofazseumELISA=>emumaplacasegrudaoAgespecfico (ex:albumina)eseadicionaasoluosobrenadantede1dosfrancosdecadavez( nelequetemAc).Setiveroanticorpoespecficoirgrudar!!Aselavaaplacaecoloca seAcsecundrioparaoAcprimrio.EsseAcsecundrioestmarcadoerevelao primrio!!(marcador=enzimafosfatase,porexemplo). 5)ApsoElisadescobrimosentoquepelomenos1dospooscontinhaAcanti albuminanosobrenadante!!Apodemosatingirumidealde+ou1clulaporpoo.E afazElisadenovocomosobrenadantedecadapoo.Dando+sabemosentoque nestepooexisteoclonequeprocuramos!! =>ummtodomuitodemorado,detentativaeerroeprecisademuita capacidadedotcnico!! Problemasnatcnica: *Noocorrerfuso *PurezadoAG *ImunizaoIncorreta *Nodiluirosuficiente Obs:ParaevitarfalsosnegativosnoElisahsemprelavagementreosprocessos!! (evitaqueAcsecundrioseligueaumAcprimrionogrudadoaoAg).

 Acpoliclonal=Respostapoliclonal=>vriosAcsdiferentesdevriosclones diferentesespecficosparadiferenteseptoposdeummesmoAg!!Todaresposta fisiolgicapoliclonal! VantagemdoAcmonoclonal: *Saberondeeleseligaexatamenteeterparasempre!! AvanoseusosdosAcmonoclonais Imunohistoqumica: *UsodeAcmonoclonalmarcadoemumtec.reveladoporreaoqumica.Ex: saberseexistelinfcitoThelperemdiferentestecidos(marcaAccontraCD4). *Tec.porFluorescnciaoureaesenzimticas. Formadireta:Acmonoclonalprimriomarcado. Formaindireta:Acmonoclonalprimrionomarcadoeosecundrio marcado.Tcnicamaisbarata! Marcaodeclulasemsuspenso: *Acmonoclonalpararevelarapresenadesubstncianasuperfciecelular. Podeserreveladopor: CITOMETRIADEFLUXO:clulaspermanecemvivas;usodecitmetro. CITOCENTRIFUGAO:centrifugaefazmicroscopia!!Aotcnicoquecontaas clulasmarcadaspeloAc.Asclulassomortas;nomuitosensveledmuito trabalhocontarclulas=>nomuitousado! Vantagensdocitmetro:maisrpido,maiorsensibilidadeenomataclulas. Citometriadefluxo: Laser=>usadoemmicroscpiosdefluorescncia Propriedades:Feixedeftons;monocromtico;coerenteecolimado. AcormaisusadaparaolaseroAZULqueaoatingirmolculasasexcitaequando elasvoltamaonormalliberamluzdediferentescores!! Utilizasefluorocromosqueimitamcorescomespectrosdiferenteseassimem umamesmasuspensodeclulaspodeseverdiferentescoressignificandodiferentes AcsparadiferentesAgs!! Radioistopos: Acconjugadosasubstnciasqueemitemradiao.(ex:CD4). feitop/tratamentodirecionadoporradioterapia. Aaoinvsdeseemitirradiaoporfora(quepodelesarpeleeoutrosrgos sendobemmenosdirecionado)secolocaradionucleotdeosacopladosAcespecfico p/orgoalvo!! 4)Conjugaoc/prdroga: ConjugaAcc/prdrogaquesdeveseativarnorgoalvo(stiodeatuao)que ostioemqueoAcreconheceoeptopo. 5)Acbioespecficos: CadavalnciadoAcseligaaumAgdiferente. Ex.:ligaoemclulatumoraleclulacitotxicaaproximandoasepermitindo maiorinteraoemortedeclulatumoral.

 6)Bloqueiodefatores: Ex.:jogaAcanticitocinaparadiminuirareaoprovocadaporestacitocinano organismo!! CITOMETRIADEFLUXO Obs:clssobrevivemnogarc/meiodeculturaeaindaficamimveis. usoexperimentalbemmaiscomum!! Usodiagnstico Citmetros(aevoluopermitevermaiscoisasemcadacel):EpicsAltra, Facscalibur(maiscomumemlabdiagn),Moflow(altaperformance.1milhode cls/hora.V13coisassimultneas) CD25receptorp/IL2(estimulacrescimentocelular) ClsnaveCD45Ra(clingnuas/noentraramemcontatoc/Ag) ClsdememriaCD45Ro(clsdememriaj!!) PORESDOCITMETRO cmaradefluxo Amostraentraporbaixo.Clsentramumaaumaesoatingidaspelolaser(azul). Algunsfeixes... sodesviados,masseguememfrente,sendodetectadospelodetectorforward sootter(FSC) outrossodesviadosp/olado,sendodetectadospelodetectorsidescatter(SSC) Oquedizcadadetector? FSCcomparaTAMANHOdacls SSCcomparaCOMPLEXIDADEdascls Complexidade=qntsorganelaseoutrascoisastemnacel!!(dependedoquetem nocitoplasmadefineodesviodeluz) Detectorescriamemgrfico(DOTPLOT) Assimidentificaseacelqestpassando!!MaseosAcgrudadosnelas? P/saberseacelpossuiAgnasuperfcieeatemAcsgrudadosdevesepassarp/a anlisedafluorescnciaemitida,dequecorecomqualintensidade!! Obs:FSCeSSCdetectamdesviodaluzazul!! AscoresemitidaspelosAcsexcitadossodetectadasporoutrossensores.Omais curiosoqueossensoresquedetectamasdiferentescoressoiguaisentresi,masoque mudaquenomeiodocaminhodosraioshespelhosdiferentesquerefletemsum tipodecoreaestacaptadapelodetector!!(D) Aessesdetectorestbgeramgrficos.SoosHISTOGRAMAS Tdcltemumafluorescnciaintrnseca,masqdhmarcaodoAceleaumenta essafluorescnciaemclspositivas!!

USODIAGNSTICOOUDECONTROLE:pacienteHIV+precisaseracompanhado parasaberonmerodeclsCD4+circulantes.Seestenmerocairmtdevertrocaro tratamentoantiretroviral!!Paraisso: 1extraiosangue 2fazseimunofluorescnciadiretap/marcarlinf.CD4eCD8 3divideseosangueem4tubos: controle(s/Acs) AcantiCD4FITC(conjc/fluorescncia) AcantiCD8PE AcantiCD8PE+AcantiCD4FITC 4passaosanguenocitmetro 5analisaoDOTPLOTeinformaaoaparelhoquemacldeinteresse(escolhe oGATE).Issonocontrole!! 6ajustaoequipamentop/quemaisnaesquerdadogrficofiquemascls c/menorfluorescnciaemaisp/baixoqdtemtamanhopequeno!! 7avaliarosgrficosgeradosemcadatubo!! Naprtica:examepadroouro utilizamarcao:CD3+CD4+CD8 pq?PqhclsquetemCD4enosolinfcitosequetemCD8etbnoso! LinfThelperCD3+CD4 LinfTcitotxicoCD3+CD8 CD34clstroncohematopoiticas CD39 MaiorexpressodeCD69namembeamaisAcseligaemaiorafluorescncia! Htbtestesfuncionais... neutrfilos Geralmenteproduzemradicaislivresoxidadosqueliberamp/matar microrganismos PodemostestarageraodessesradicaispeloTESTEOXIDATIVO *utilizaseumcomplexo(DHR)queqdoxidadoliberaluz 2)doenasmalignas NoDOTPLOT... Clcinzanormais Clnegrafentipoaberranteeemmaiorquantidade(marcadoresindevidos) SORTING Obs:isolarclsporumacaractersticaespecficaqvcdetermina(tamanho, complexidade,marcadorp/CD10,CD19).DpspodesercomplementadapeloDCRp/ver sehmutaonomarcador! Oequipamentoconstitudoporumcristalbisoeltrico(transformaen.Eletrnica emcargaspositivasounegativas).Acolocacarganasgotculasquecontmemseu interiorclulascomacaractersticadesejada.Depoiscolocaseagotculaentre2placas carregadasparaisolladasoutrasgotculasnomarcadas. COMPLEXOPRINCIPALDEHISTOCOMPATIBILIDADE

 Osanticorposnosooselementosfundamentaisderespostaimune.As molculaspresentesnasuperfciedeclulaschamadasmolculasdeclasseIedeclasse IIquedesempenhamumpapelfundamental,apresentandoantgenosaoslinfcitosT. CPH=ComplexoPrincipaldeHistocompatibilidadeconjuntoespecficode geneslocalizadosemumdadocromossomoecujafunonoeramuitobemesclarecida antigamente.Acreditavasequeafunoeradiferenciarumindivduodeoutro causandorejeiodetecidosergos,masissonoseriaumafunointeligente. Independentedisso,essesgenesrealmentedefinemsehaverounocompatibilidade entreosindivduoseseocorrerrejeioalmderegularoutrasfunesdeimunidade. Compatibilidade=aceitaodetransplantes Incompatibilidade=rejeiodetransplantes HLA: AsdiferentesespciesdeanimaispossuemCPHdiferenteseprprios.OCPHdos sereshumanosrecebeuonomedeHLA,poisinicialmenteacharamqueasmolculasde complexoeramencontradasapenasnasuperfciedeleuccitos,masnaverdadeesto emvriasclulasdiferentesdoorganismo,atclulasquenosodosistemaimune. RejeiodeTransplantes AidiadequeosgenesdeHLAregulamarejeiodetransplantesvemdofato quearejeiorpida,emcurtoperododetempo(aguda),quandoosindivduos possuemHLAdiferentes(incompatibilidade). Massesabeque,mesmoquandoHLAidnticoentreosindivduos,existem antgenosmenoresdehistocompatibilidade(antgenomenor)quenofazempartede HLA,maspodemlevarrejeiomaislentaegradualdetransplantes(crnica).Essa rejeiopodesercontroladaeevitadaporusodeimunossupressores. Concluso: Somosdiferentesumdosoutrosemvriosgenes. AprincipaldiferenaquecausarejeioemHLA(aguda). Mashtambmantgenosmenoresquelevamrejeio(crnica). ReaoLeucocitriaMista Revelamuitosaspectosdosistemaimune. Misturadossorosde2indivduosdiferentes(contmleuccitos):geraumaativao celularmuitofortecomativao,proliferaoesecreodemediadores. Podemosevitarqueumadaspopulaesdeumdossorosrespondapresenade outraevemosapenasarespostadessaoutraouvemosasreaesdeambas,umacotraa outra. ParaevitarconfusesmisturamossoroscomomesmoABOeRh. Essareaoleucocitriamistaumareaoimunolgica,poistemmemria(2 vezmaisintensa)eespecificidadederesposta. Elaumaexcelentemaneiradeverificaracompatibilidadeentredoisindivduos quandohnecessidadedetransplante:quantomaisintensaareao,maiorachance derejeio. Arespostaquevemosnareaoleucocitriamistaumarespostadoslinfcitos T.NenhumaoutracluladoorganismorespondeincompatibilidadeentreHLAs.Nesse casoespecfico,oslinfcitosTsoCD4+(Thelper),poisreagemeseproliferamcontra osleuccitosdooutroindivduo.Portanto,quemrespondesooslinfcitosTCD4+,mas quemprovocaarespostapodemseroutrasclulasdosistemaimune. OutrasManeirasDiferentesdeDiferenciarHLA

DetecodeanticorposantiHLA NosorodeindivduosquerecebemtransfusosangneadeumdoadorcomHLA diferente,vemosmuitosanticorposantiHLA. Obs.:parafazertransfusosefazapenastestedecompatibilidadeentreABOeRh, outrosno. Nosorodemulheresquetiveramgestaesnormaisedesenvolveram anticorposcontraHLAdeorigempaternapresentesnofeto.Nemtodarespostaimune levadestruiodostecidos.Esseeventoprovaisso.AmetemanticorposcontraHLA fetal,masnoodestri. Anticorposmonoclonais: FacilitaadetecodeanticorposantiHLAemaltaquantidade. PermiteatipagemdosantigenosdeHLA,assimcomotambmofazemosorode receptoresedemulheresexgrvidas. MolculasdeClasseI Encontradasinicialmentenasuperfciedeleuccitosenoemhemcias. Estonasuperfciedamaioriadasclulasnucleadasdoorganismo.So antgenosdesuperfcie.ProdutosdeHLA. Soprotenasidnticasemtodasasclulasnucleadasdoorganismo,mas diferentesentreosindivduosmarcadorimunolgicoqueconfereaindividualidade. Somolculaspolimrficas,ouseja,humagrandevariabilidadegenticanos genesquecodificamessasmolculasdiferente,mastodasfuncionais.(outrosgenes polimrficos:cordeolho,cabelo,pele,...) Obs.:hgenescujavariabilidadelevadoenas ex.:genedaglobinaanemiafalciforme EssasmolculasdeclasseIIfuncionamcomoAloantgenos(Agdedoador)parao sorodeindivduosdiferentes(incompatveis)egeramrespostaimunolgica. AsmolculasdeclasseIdeumindivduo: Cadapessoanormaltempelomenostrsgenesdiferentesemummsm cromossomo,quecodificamcadaumdeles,umamolculadeclasseI.Elesesto prximosnoscromossomosecodificam:HLAA,HLABeHLAC.Comorecebemosde nossospaisumcromossomocom3genesedenossameoutrocromossomohomlogo com3genesparaHLA,sendoamaioriadosindivduosheterozigotos,expressamos6 molculasdeclasseIdiferentes!!Padrodecodominncia(todossoexpressos).A,na superfciedeumamsmclulaexistevriasmolculasdeclasseIdiferentescoexistentes. AestruturadoMHCI So3elementosqueaconstituem: Polipeptdeocomtrsporesglobulareseporotransmembranade insero:oprodutodosgenesdeHLA(A,BouC) Ptnglobular:sempreamsmparatodasasmolculasdeclasseIdetodosos indivduos(nopolimrfica). 2microglobulina:seassociaindiferentementeatodososprodutosdeHLAde classeI.Funodeestabilizarocomplexo.NoprodutodeHLA.codificadaporoutro cromossomo.

NaestruturadeMHCIinserido: Peptdeo:fragmentodeptnALTAMENTEVARIVELENTREASMOLCULASDE CLASSEI.SendodiferenteentremolculasdeclasseIdomsmtipo(Ap.ex.)deummsm indivduo. umfragmentodeptnsdoprprioorganismooudemicroorganismosque infectamoorganismo. SempredevehaveradissociaoentreMHCIeessepeptdeoparaqaMHCIfique namembrana. Ouseja:AsmolculasdeclasseIpossuemtodasumasemelhanaestruturalque garanteqsejamexpostasnamemb.Erealizaremfunes.Masapresentamuma diversidadepelagenticatbmtoimportante.(esquemasemelhanteaosanticorpos) Dentrodeumindivduo,cadagenedeHLA(A,BouC)possui2formasallicas(1 dopaioutrodeme)!! AsmolculasCIsoparentesdosAc.Os3domniosglobularesdeMHCIso semelhantesaodomniosdosAC!! AsMHCIsoasmolculasdeHLA+abundantesnoorganismo,mashtboutras molculasdeHLAespecializadas,presentesapenasemclulasdoSI!! MolculasdeClasseII PresentesapenasemalgumasclulasdoSI:macrfagos,cls.Dendrticaselinf.B. Expressasnasup.Celular,seancoramnamembrana. ClsqueexpressamMCIItbexpressamasMCI! Estrutura: 2cadeiaspolipeptdicas(e)cadaumacom2poresglobulares AmbascodificadasporgenesdeHLAdiferentesdosgenesdeHLAparaMCI UmamsmregiodeHLAcodificaacadeiaedeumdadotipodeMCII Sovriasregiesdiferentescodificandoparesdiferentes.Ex.:regiesDR,DQ eDQcodificamHLADR,HLADQeHLADP! Essasregiesestoseparadas,masnomsmcromossomodosgenesqcodificamas MCI!! Oqfazcomqapenasalgumascls.doSIexpressemMCIIqapenaselaspossuem osfatoresdetranscrio!! ExistemdiferentesMCIInasuperfciedummsmmacrfago(codominncia) MCIIsoaltamentepolimrficos(mtosgenesdiferentesegeralmentecada indivduoheterozigoto:alelosdopaiedame). PossuitboPEPTDEOALEATRIOentrecadeiase. Concluso:SesomarmostodaavariabilidadeparaMCI+avariabilidadedeMCII vemosqHUMAGRANDEDIVERSIDADEENTREOSTECIDOSDOSINDIVDUOSA REJEIAAREGRA!ODIFCILACOMPATIBILIDADE!!Estimativadeseacharum doadorcompatvel:1em143000!!! OpolimorfismodeHLAseexpressade2formas: MCI MCII Acapacidadedeseativarumarespostaleucocitriamistadependeinicialmenteda diferenaentremolculasdeclasseII,poisoestmuloparaareaoocorrersoAgCII

presentesnasuperfciedeclulasdoSI(macrfagos,linf.B)reconhecidasporlinfcitos Thelper(CD4+)querespondemcomintensaproliferaoclonaleproduodcitocinas!! Oquecompatibilidade? IndivduospodemsercompatveisparaHLA,ouseja.PossuemHLAiguaisepodem sercompatveisparaasmolculasmenoresdehistocompatibilidade(soiguaisentreos indivduos). Quandohcompatibilidadeparaos2EVITAREJEIOEM100%.Quandoh compatibilidadeapenasparaHLAREJEIOAGUDAEVITADA,maspodeocorrera crnica!!(evitadaporimunossupresso). Ateno!! Entreindivduosdiferenteseentremolculasdehistocompatibilidadedeum msmindivduo,avariabilidadegenticaconcentradanosdomnios+externos(regies variveis)queseassociamaopeptdioaleatrio!!Japoro+internacontmos domniosaltamenteconservados(ctes)!! OslinfcitosTCD4+sreconhecemMCIIeessereconhecimentoqueINICIAO PROCESSODEREJEIO!! Portanto,areaoleucocitriamistapossui2fases: 1fase:linf.TCD4+respondemsMCIIdesup.demacrfagoseentose proliferamesecretammediadores(citocinas)queinfluenciamemoutrascls.doSI!! (p.ex.:linf.TCD8+).Oslinf.TCD8+sooslinf.Tcitotxicosqueqndoativadosso capazesdematarAgestranhosestimuladores,masparamatlosprecisamreconhecer MCI.(faseinicial) 2fase:linf.TCD8+respondemsMCIdesup.Devriascls,comotbos macrfagoseMATAMNOSFaseefetora!Oslinf.Tcitotxicosssoativadosqndolinf. Thelpersinalizam!!Geralmenteelesestoinativos!(incapazesderesp.). Ateno:Oslinf.TCD4+tmpapelcentral,masnoabsolutonarejeiode transplantes. HierarquianaResp.Imune Arejeiodetransplantesdependedeinteraoentrepopulaescelularese cadapopulaotemumafuno!! Linf.TCD4+:reconheceAgemMCIIeativamlinf.CD8+eoutrascls(macrfagos, linf.B). LinfcitoCD8+:mataclulasquereconhececomoestranhasporMCI. Transplantedetireide. Atireide(clulasdoparnquimaeestroma)sobreviveemtemperaturas reduzidas(geladura)porumbomtempoforadocorpo. Constataramqueotransplanteimediatodetireidedeumindivduoparaoutro incompatvellevarejeio,masseatireideformantidaformantidaporum temponageladeiraedepoistransplantadaparaoreceptor,NOOCORRE REJEIO!Porque? Descobriusequeapesardeoep.tireoideanosobreviverabaixastemperaturas, osleuccitos(macrfagos)residentesdetireidemorremeanohrejeio,pois

nohapresentaodeantgenosemMHCIIparaoslinfcitosCD4+eanod iniciorejeio!! Ouseja,apresenademacrfagosresidentesnatireide(clulasdendrticas) que,aoapresentaremMHCIIaoslinfcitosCD4+doreceptor,promovemarejeio. Portanto,osleuccitoscomMHCIIresidentesdosnossostecidosergos quepermitemarejeioTudocomoeporquecomeaarejeio. Respostaimunecelular

Respostaimunecelular:descobertaemanimaisexperimentais. Diferentementedaimunidadehumoral(imunizaopassivaportransfernciade Acs)aimunidadecelularnopodesertransferidaentreindivduos,poisdadapelos linfcitoseestespossuemmolculasdeHLAepromovemrejeio. Aimunidadecelularatuacontrainfecesviraisemicobactria. Setransferssemoslinfcitosdeumindividuoparaoutro,elesseriamrejeitados. Experimento:Anlisedarespostaimunecelular.Especficap/que? 1PegamososlinfcitosTCD8+dosorodeindivduosqueforaminfectadospelo vrusinfluenzaesecuraram. OBS:OslinfcitosTCD8+aparecemnosoroquandoapessoaestemfasede recuperaodeinfecoecomosocitotxicosdestroemasclulasquecontmo vrusdainfluenza. Essasclulasinfectadassoverdadeirasfbricasdevrusproduzindomuitas protenasviraisemseuinterior. 2SemisturarmoslinfcitosTCD8+deind.emrecuperao+cels.infectadas pelovrusinfluenzadomesmoindivduo,oslinfcitosTCD8+destroemascels. Infectadaspelovrusinfluenza. 2*Seascels.doindividuonoestivesseminfectadasouestivesseminfectadas poroutrovrus,NOHVERIADESTRUIO! OBS:2e2*especificidadeparaovrusinfluenza.

 3Sepegarmos,poroutrolado,clulasdeoutroindivduoinfectadopelovrus influenza,olinfcitoTcitotxicopodeounodestrulas,dependendodasdiferenas emHLA. Nessecasoespecfico,vemosquequandooHLA(A)diferente,olinfcito TCD8+nodestriascels.Infectadasdooutroindividuo. 4MasquandoooutroindivduotambmpossuiHLA(A5)eestinf.pelo vrusinfluenza,olinfcitoTcitotxicodestriasclulas. OBS:3e4especificidadeparaamolculadeHLA. Concluso:AespecificidadedolinfcitoTcitotxicopara1molculadeHLAde1 tipoapenaseapenasquandoestaclulaestinfectadaporumtipoespecficodevrus. IssoocorrepoisprovavelmenteestaMCIquemostrouumapartedo vrus!Provavelmentetemavercomopeptdeoaleatrio! ArespostaimunecelulartambmpoliclonalDiferenteslinfcitosT reconhecemamesmaclulainfectadaporumdadovruspormeiodediferenasdeMCI. Muitoimportante:Arespostaimunecelularnodistingueoprprio(self)do noprprio(nonself)esimreconheceainteraoentreos2.Ovrusinfluenzano existeparaolinfcitoTCD8+quandolivrenomeio,apenasquandoestassociadoauma MCIdoorganismo.Afusoentreprprioenoprprioquereconhecidacomo estranhaeatacada. FunorealdasMHC(HLA). Elasnoservempararejeitartransplantesatporqueessaumasituao artificial,queanaturezanoprevia. Servemparaauxiliarnarespostaimunecelularaoexporantgenosno prprios. Osvrus,porexemplo,estoescondidosdentrodasclulaseparaserem destrudos,asclulasinfectadastambmsero.Elastmumpapelfundamentalnissoao exporumpedaodevrusemsuasuperfcieindicandoinfeco. Mecanismosdeexposiodeantgenos: Ovruscomeaasersintetizadonocitosoleentreeleeamembranaexisteo RERqueolocaldesntesedosHLA(protenasdemembranasosintetizadasnoRER). Assim,ovrusprecisachegaratoRERparaseuniraoHLAeserexposto namembranajuntoele.Como? Ubiquitinassoprotenasquemarcamasprotenasquevoparao proteossomaseremdegradados.Assimtantoprotenasdaprpriaclula,quanto protenasviraisubiquitinizadasquandopassamprximoaoproteossomasero degradadosempepitideos.umprocessoaleatrio,independedeaptn.estar defeituosaounormal.(hpormumasinalizaobioqumica). OspepitideosgeradosnoproteossomavoparaoRE. AmembranadoREpossuiumsistemadebombasespecializadasno transportedepeptdeos:TAP1eTAP2(transporteassociadoaotransportede antgenos)quegastamATPparacolocarpeptdeosparadentrodoRE,concentrando osetransferindolhesparaprximosmolculasHLAemformao.Aeles grudamfortementeasmolculasesoexpostosnamembranajuntoaeles.

 Aprincipio,esseprocessodesvantajosoparaaclula,poisamaioriados peptdeosgeradoseapresentadosjuntoMCI(nessecaso)soderivadosdeprotenas daprpriaclula,masemclulasinfectadas,geralmentepredominampeptdeos virais.Masclaroquepeptdeosprpriostambmsoexpostos. Arespostaimunenopodeserexplicadaapenaspeloimensorepertriode peptdeosexpostosemmol.HLAnamembrana!OrepertriodelinfcitosTtemque batercomesserepertriodepeptdeoseparahaverrespostanobastao reconhecimento!Vriosoutrosfatoresestimulatriosdevemestarpresentes! Informaodomomentoatual: . SeopeptdeoviralgrudaremprotenasquenoMCI,olinfcitoTCD8+noo reconhece!Ento,aproduodeMCIconstanteparacoincidircomadegradao deprotenasvirais.Masomaisimportantequeamembranacelularmesmoassim noficarepletadeMCI,poishrenovaodasmolculasatodomomento.Portanto,a presenadeMCIcompeptdeoviralnamembranamomentneaeindicaumperigo atual. Arespostaimunenoumarespostaderesistnciaainfeco,atporque, recebertecidosadionocausainfeco,masprovocarespostaimune.Osantgenosde transplante(molculasdehistocompatibilidade)notmnadaavercomtransplantee simcomnossaresposta! Somosdiferentes,poisasmolculasdeclasseIdeumapessoadiferentede outraeassimovruspodematarumapessoaenofazermaloutra.Issoporquea respostacelulardependedoreconhecimentosimultneoentrevruseHLA(self) pelolinfcitoT!(diferentedolinfcitoBquesreconheceoeptopoestranho). CadalinfcitoTpossuiumaestruturadereconhecimentoespecficapara reconheceroantgenoviralnoHLAprprio(self)dotipoMCI.esse reconhecimentohbridonecessrioquetambmimpedededoarlinfcitosTCD8+ deumindivduoparaoutro,poiselesreconheceantgenounidoMCIprprios. Repertriopersonalizado! OrepertriodoslinfcitosTpossuiessaespecificidadehibridadevidoaotipode seleoqueocorreduranteacriaodediversidadenesterepertrio... OrepertriodoslinfcitosTCD8+selecionadoantesdeserusadoeas clulasquesoclonescapazesdereconheceroHLAdoprprioorganismoso escolhidoseascls.quenoligamparaoHLAprpriosodescartadas.(seleo positiva)

 Entretanto,aocontrriodoqueparece,essenoumprocessoautoimune,pois asclassesselecionadasdevemsercapazesdereconhecerantgenosnosHLA prprios.porissoquelinfcitosTCD8+sreconheceasclulasinfectadasenoasdo seuvizinho.(nodparaimunizarpassivamentenarespostaimunecelular). importanteressaltarqueoprocessodeformaodorepertriodoslinfcitos BdiferentedosdelinfcitoT,porqueenquantohseleopositivadoslinfcitosT quereconhecemoself,hseleonegativadoslinfcitosBquereconhecemoself (sodescartados)! IMUNODIAGNSTICO InteraoentreAceAg(invitro)parafinsdiagnsticos DetecodeAgeAcs Ag+AcAg...Ac SoligaesfracasentreAgeAceportantoreversveis.Oprocessode associaoedissociaodeAgeAcnogovernadosporconstantes(KaeKd respectivamente) Ka=[Ag:Ac]/[Ag][Ac] Kd=[Ag][Ac]/[Ag:Ac] Assim,dependendodaforadeinteraoentreAgeActeremosmaiscomplexos imunes(Ag+Ac). Forasdeinterao: PontesdeH;pontesinicas(interaoentreaminocidos);interaes hidrofbicas(nointerferembemcomaguaeaseagrupam,assumindoumaestrutura tridimensionalglobular,pex,expondoapenasasporeshidrofbicasnasuperfcie). Sotodasinteraesmuitofracas,bemmaisfracasdoqueligaescovalentes. OquefazcomquealigaoAcAgsejaestvelasomadevriasinteraesentre1 mesmoAgeAc.Essasligaessoestveiseespecficas!! LembrardeIg: IgGcadeiaslevesepesadasinteragemporforasfracasepontesde dissulfeto. stiosdeligaodeantgeno:poroNterminaldascadeiaspesadase leves!!NumamesmaIgtodasasvalnciasreconhecemomesmoantgeno! namaioriadassituaes,oantgenoinfinitamentemaiorqueo anticorpo,eesteirseligar,portanto,aumapequenapartedasuperfciedoantgeno (eptopo) Existemantgenosquesoapenasumeptopo(haptenos).Elessoantignicos (reconhecidosporanticorpos)esprecisamdecarreadorparaserimunognico (provocarproduodeanticorpo)!! OAcpodeseligarcomas2valnciasemummesmoantgeno,desdeque existamnessapartculaeptoposiguaismuitoprximos.Masnamaioriadoscasosos anticorposligam2partculasdiferentes(aglutinao).

OstiodeligaodeAgnoActemformacomplementaraoAc!!Narealidade,os stiossoondulaessuavesnaestruturadoAc!!Issogarantequeosdois,ao interagirem,encaixamperfeitamenteenoseaproximamaomximo(modelochave fechadura). OBS:Hemciassoenormesetemcargapositivaemsuasuperfcie.Entose repelementresi.PorissoIgGnocapazdeaglutinarhemciasnormais.Masemalguns casosIgGpodeaglutinarpartculas(ex1:quandoIgGatuasobresalmonellascujos eptoposestonoscliosdebactriasqueseaproximamouex2:hemciassemcargas). EPTOPO Variaentre7e15aminocidosdoAg(bempequeno) PoroqueinteragecomoAceportantonopodeinteragircommuitos aminocidos.Nacadeialeve+cadeiapesadaapenas9aminocidosdoAcnototal interagemcomoeptopo. DETECODEAgEAc IntenodoImunodiagnstico:formarimunocomplexos Seumindivduotemsintomologiaerealmenteestiverinfectado,eledeveter AcantiAgespecficonosoro. VemosimunocomplexosentreAgeAcparacomprovar: EmumaIgG... OsbraosdoAcsomveisequandoaangulaode180o,elesficamdistantes eligamAg.Maisdistantes,maiorcorbeturaderaio. Diferenaentreafinidadeeavidez: Afinidadecapacidadedereconheceroeptopo. Avidezsomadetodasasafinidades Imaginemosumasituaoemqueoseptoposestoemdezenasdemilhares sobreasuperfciedaclula.Comooseptopossoiguais,doiseptoposseligamumem cadastiodoIgG(bivalncia). NocasodeapenasumAgligadoaoAcbemmaisfcilseparardoquequando hdoisAgsligadosaoAc.Issoporque,noltimocaso,aavidezmuitomaior!Amais comumsoltarprimeiroumAgesdepoisooutro.Quandooanticorpodecavalente,a avidezmaiorainda!!! REATIVIDADECRUZADA Ummesmoeptopopodeestaremdiferentesptnsdediferentes microorganismos(LeishmaniaevrusdoHIV).EntoumACparaesseeptopopodeagir contraamboseumapessoaquejteveleishmaniosepodedarpositivoparaHIV(falso positivo). *Definiodecausa: 1)DoisAgsdiferentescompartilhandoumeptopoidntico 2)Acespecficoparaumeptopoligaseaumeptoponorelacionadoque tenhapropriedadesqumicassemelhantes(corpos,estrutura),pormcommenor afinidadedoquecomoeptopooriginal. Ex:1)Asvacinassebaseiamnoprincpiodaimunoreatividade. Vacinacontravarola

M.bovisdaBCGXM.tuberculosis(eptoposiguaisnasduas espciesdemicroorganismos).OM.bovisperdeacapacidadeinfectante,seadaptandoa vidaemcultura.Pormtembaixaeficcia. 2)Grupossangineos antgenosAeBsoacaresencontradostantoemhemcias quantonasuperfciedebactriascomensaisdafloraintestinal.Soidnticosentre bactriasehemcias. FORMAODEIMUNOCOMPLEXOSPARADIAGNSTICO PlacadeElisacontendoAgespecficoexpostaaosorodopaciente.Seimunizado (comAc),osorodevereagircomosantgenosparaformarimunocomplexos. Colocarsoronaplaca. FasesdelavagemparaevitarqueAgsoltosouAcsoltosdemfalsospositivos. Marcaoparaverimunocomplexosformados(sistemarevelador:fluorocromo, radioistopoeenzima). ANTGENONTEGRO PodemosusarAgpormeiodeincubaodeparasitas(Agntegro)naslminas edepoiscolocarsorodeumpacienteinfectadoouno.Sederpositivo,aparecem imunocomplexos,apresentandoIgsnosoro. Osimunocomplexospodemsermarcadosporfluorescncia. aptnAtemaltaafinidadepelaparteconstantedeIgeacoplada fluorescnciaeamarcaosIgs. ATENO1:sficafluorescentesehouveremAcsnosoroeaiaptnAcom fluorescnciasegrudaaoAcequandoolharmosnalaminavemos! ATENO2:nomarcaoAg,marcadepoisoAc. Obs:nocoraAcserradospoiselessolavados. OutrasformasdeAgusadosalmdontegro: Extrato:parasitalisado,usaapenasoextrato.(brutos/semipurificado) Purificado:semmembrana,evitaqueAcsnormalmenteformadosreajam. Recombinante:genedemicobactriascolocadoemE.coliparaproduzirptnsque soosAgs. Peptdeo Obs:asIgshumanassoreconhecidasporoutrosorganismos(animais)como antgenosegeramentoAcsquepodemserusadoscomoantianticorpos.Essesanti anticorpospodemserligadosaumaenzima(exHRP)ouafluorescnciaqueosmarca sendochamadosdeconjugado. *QuandofazemosinteraoentreAgseAcsdevemossaberquantoseptopos existemparaaiexistiremtantosAcs. soropoliclonal:nossosAcsparadiferenteseptoposdeummesmoAgeir formarummacrocomplexo(redetridimensional)eapodeocorrer: Precipitao:AcsolveleAgtambmsolvel. Aglutinao:AcsolvelmasAginsolvel. Quandotemmuitoanticorpooumuitoantgenonoaglutina(noformarede). DevesetrabalharemumafaixadeequivalnciaentreAgeAc. Hemaglutinaoindiretaquantitativa(sorologiadadoenadeChagas):

 1)Placadehemaglutinao:plsticoquerepeleptns,portantonoabsorvemnas, notemafinidade.Ashemciasnoaderemparede.Ospoossoemformadecone. Somaisoumenos96porplaca. Ex:ptnsdeT.cruzi+hemciasdecarneiro:hemciasrecobertasinvitropor reaesqumicascomptns(Ags)deT.cruzi. Pegaseessamisturadehemciasrecobertasecolocaemumdospooseaias hemciasprecipitameficamnofundodpoo(hemossedimentao). QuandojogamosAcdosorodeumpacientechagasiconopoooqueacontece queosAcantiAgpresentesnasuperfciedehemciasseligamaessashemcias formandoumaredeeimpedindoqueashemciassedimentem.Nohpontopretono centrodopoo. Obs:setemmuitoAcaredemuitograndeenohnenhumpontinhonocentro dopocinho.SenohouvermuitoAcaialgumashemciassedimentameformamum pontinhorosaclaronocentro.SenohouverActodasashemciassedimentamefica umpontinhopreto. ELISAEnsaioImunoenzimtico Pocinhosemplacasdiferentes(placadeELISA):fundonocnico,achatadoe tambmaderemptns. PegasoluodeptnsdeT.cruziecolocanumpocinhoporumtempoaias molculasproticasaderemsparedesdopocinho:sensibilizao.Formasevarias camadasdeAgs. LavagemcomtampoTBSquequebraforasfracasentreptnsedeixaapenasuma monocamadadeantgenosdeT.cruzi. 4)AdiodosoroquepodeconterAcespecficosparaptnsdeT.cruzieoutros Acstambm.NocasodeumpacientequenochagsiconohAcantiT.cruzi. Dse1horamaisoumenosqueparaAcligaremAgs. 5)Lavagem:eliminatodososAcsquenoligaramnosAgsdeT.cruzi(ouseja, eliminatodososAcdepacientesnodoentes).Nosorodopacientesadionosobra nadaenododoentesobramimunocomplexosAgAcT.cruzi. 6)Primeirarevelao: Jogaseanticorposmarcadoscomenzimanopoo.Nocasodeumpoopositivo hligaodosAcsligadosAgs(DUPLOCONJUGADO:AntiAcconjugado+AgAc).J nonegativoelesficamsoltos. 7)ltimalavagem 8)Revelao:Aenzimafuncionacomobandeirinhaqueacusaapresenado Ac!Adicionamosumsubstratoincoloresolvelqueirficarcoloridoporaoda enzima=vemosamarelo. AutilizaodeElisamtomaiscomumemaisusadapois: noprecisausarhemlise areaoenzimticaumaetapadeamplificaodesinal(poucasenzimasagem sobrevriossubstratos)quepermiteumaaltasensibilidadedotestedandopositivo mesmoqueapessoatenhapoucosAcs! PortantooElisapodeserquantificado(aintensidadequantificadaporum programa),evitasubjetividadedaobservaodahemossedimentao. Quantomaisproduto=maisintensacolorao.

Essaplacasubmetidaaumespectrofotmetroeaoprodutocoloridoemite umaluzquantificvel. Obs!Oprodutonoinsolvel!solveleainoprecipita,oqmtoimportante paradeixarpassaraluz! Ateno:Senofizermosa1lavagempodedarfalsonegativo!(Acgrudaem camadasuperiorelavadonaslavagensseguintes). UsarmisturadeAgsnumaplacadeElisanodprasaberparaqualdosAgsa pessoatemAc!Portantodevemosterumtesteconfirmatrioqueconfirmaesse diagnsticoimunolgico!oWesternBlot. WesternBlot Separaptnsportamanhoemumgeldeeletroforese(migraodemolculasem conseqnciaaumcampoeltrico). DesnaturamosptnscomSDSqueconfereatodasasptnscarganegativademodo quetodosmigremparaoplopositivo,molculaspequenaspassammaisrpidopelo geleasgrdsdemoram. Assim,seseparaAgsportamanho. AtransfernciadessasptnsparaumamembranadenitrocelulosechamadaBlot WesternBlotevemosnofimbandosdemarcaodotamanhodasptnsnam.de nitrocelulose.Cortamosentoastirinhasecolocamosnascanaletas(finasmembranas denitrocelulosecombandasdemarcaodasptns). Nascaneletascomtirinhas,colocamososorodopacientecontendoAcantiAgs presentesnatirinha.Masa,comosabemosqualfaixahorizontalcadaAg,sabemosque seaparecerumabandaemtalfaixa,porquehaviaAcscontraoAgnosorodopaciente. OsAcsdosorogrudam,ento,noAgespecfico.Depois,jogamosAcconjugados marcadoseasejogaumprodutoinsolvel(substrato)quesetransformanumproduto coloridodevidoaaodaenzima. A,osubstratoseadere.Casosejapositivo,serovisualizadastodasasbandas ouapenasasbandasasquaistemAc.Jnonegativo,noserovisualizadasbandasas quaisdeveramosver.HIV:GP120positivoemaisoutrasprotenaspositivas!!!!!!!!!!!! FazemostantoElisaquantooWesternBlot,poisoElisamuitobaratoepor issousadoparatriagem.JoWesternBlotusadoparaconfirmar!!!!!!!!!!!.Ex.:No Elisa,otestedeHIVpodeserpositivoenoWBnegativoquandoapessoastem Leishmaniose.

AUTOIMUNIDADEEREGULAO FazemosAceclulasTcapazesdereconhecernossosAg,inclusiveAgqueno estonotimo. PoliendocrinopatiaassociadaaoX: autoimune.Apartirdela,clonouseogeneAutoImmuneRegulatoryElement (AIRE),presentenasclulasepiteliaismedularestmicas.Transcreveumfatorde transcrioqueregulaaexpressodeAgectpicosnotimo,emclulasepiteliais medulares.importanteparadesinibirospromotoresdegenesquecodificamprotenas detecidosperifricos,expressasporclulasepiteliaismedularestmicas,levando

seleonegativadosclonesautoreativos.Assim,provocaaexpressodeAg(protenas dotecidoperifrico)quenoestonotimo(ectpicos):insulina,tireoglobulina. Naausnciadessegene,hessadoenaautoimune,caracterizadaporcandidase, diarria,displasiaectodrmica(lesesnasunhasdopeboca)ealopecia:APECED (baixaincidncia) Addisonsdisease Hipoparatireoidismo Hepatiteautoimune Candidasemucocutneacrnica displasiaEctodrmicacomvitiligoealopcia Diabetestipo1,atrofiagonadal,anemiaperniciosa,hipotireoidismo Amedulatmicaolocalondeadeleomaisfavorvel,poishmaior quantidadedeTCReporquetemmaisAgexpresso.Adoenaaaconteceporquetem muitosclonesquereconhecemautoAg,eessesclonesatacamonossocorpo,por exemplo,osqueratincitos.Semessegene,noexpressaasprotenasdaperiferia,eos clonesautoreativosnosomortos.Napessoanormal,tambmno100%dosauto reativosquemorrem,masficaumnbembaixo.Nessecaso,nohseleonegativa desseslinfcitos,eelesaindasoativados. Existeumaregulaodarespostaimune,sejaaquerespondeaAgextrnsecoou no.SeaAPCproduzTGFEIL10,inibeaexpansoearespostadosclones.Masa prpriaclulaTpodeproduziressesdoismediadores. AsclulasprodutorasdeIL10soclulasCD4,chamadasTr1,esoinduzidas durantearespostaimune,tendoafunoereprimila. ClulasprodutorasdeTGFinibemarespostaimune:proliferao,produode muitascitocinas:soinduzidasatravsdainoculaodoAgporviaoral.assimqueno temosreaoimuneatudoquecomemos.NadeficinciadeTGF,oindivduotem inflamaessucessivasaocomerqualquercoisa. ExisteumtipodeclularegulatriaCD4+quepodeproduzirTGFouexercersua funonadependnciadecontatofsico,independentedeTGF.Essaclulageradano timoedenominadaTreg.regulatriaepodeproduzirTGF,IL10ounoproduzir nada,ssuprimirporcontato,principalmenteasCD.Tambmsoteisparaa eliminaodetumores. Elastmimportantepapelnamanutenodocontroledarespostaimunolgica. ElassoCD4/CD25+eparecemclulasanrgicas:tmfentipodeclulasativadas,tm osmarcadoresdesuperfcie,masnoproduzemIL2enoproliferamquandore estimuladas.Eaindasocapazesdeinibirocrescimentodeclulasqueestiverem ativadas.Suafunoefetorainespecfica:inibemtodaequalquerclulaativadaque entreemcontatocomela. QuandohapenasosinaldadopeloAg,masnohcoestimuladores,oslinfcitos TexpressamreceptoresdeIL2,masnoproduzemIL2.Ouseja,ficacongelada,no responde,noproliferamquandoreestimuladas,mastemfentipodecel.ativada Asclulasregulatrias,aoseremestimuladas,ficamcomseureceptorde superfciedaclulaativado,masnoproliferanemproduzAce,seentraremcontato comumaclulaativa,vaiinibila. Seforemeliminadas,umadultomorreem15diasdereaoinflamatria generalizada.Serqueforamfeitasparanosprotegerdedoenasautoimunes? OquefazdaclulaTregdiferentequeelatemumgenequefazofatorde transcrioFoxP3,quesuprimeaativaodaproduodecitocinas.Todasasclulas regulatriastmFoxP3.AsTregtmessefatoretmfentipodeclulaativada.Esse fatordetranscrioindispensvelparaosurgimentoedesenvolvimentodasTreg. ExistemasclulasTregnaturais,produzidasnotimo,quereconhecemAgcomalta afinidade,masnosoeliminadas:passamaatuarcomoTreg,aexpressarFoxP3.

Existemtambmasinduzidas,geradasnaperiferia,nosesabebemporqual mecanismo,masinvitro,aincubaocomIL6eTGFfazcomqueelaspassemaser Treg.AscelsTreginicialmentesrecebem1estmulo,odoAgespecficoaoqual respondem.A,quandovdoisestmulos(Ag+coestmulos),ativadaemsuafunode supressoraepassaaagirinespecificamente.MinhasclulasTregpodeminibirasclulas ativasdeoutrapessoa. AexpressodeFoxP3fortenobao,timo,emCD4+eCD8(ausentenaCD8+e emclulasB).Umadeficincianaturaldessamolculalevaaumarespostaproliferativa muitomaior.Ascelsdeumanimalnormal,aoentrarememcontatocomciclosporinaA, porexemplo,tmsuaproliferaomuitodiminuda.Umanimalcomdeficinciade FoxP3,acurvadeproliferaodemoramuitoparabaixar:10mgdadrogadiminuia proliferaodonormalem70%,maspraticamentenoafetaadodeficienteemFoxP3. Ouseja,soclulasresistentesimunossupresso,opacientetratadocomaltasdoses decorticides. CausaadoenaIPEX:a)Imuodeficincia b)Poliendocrinopatia c)Enteropatia d)Xlinkedheritance(heranaligadaaoX) Foidescritaem1982comsndromedediarria(ataquesclulasintestinais, muitasvezesprovocadisenteria),poliendocrinopatiaeinfecofatalnainfncia, desenvolvimentodediabetesmuitoprecoce,dermatite,eczema,glomerulopatia, deficincianocrescimentoedesenvolvimentoenodesenvolvimentoneurolgico.H respostasmuitograndesaAg,poissoclulasmuitosensveis. Jforamencontradasmutaesnessegeneemtodasaspartesdamolcula. Geralmente,asmutaesnopromotordogenelevamaumfentipomenossevero.O repertriodaperiferiapodenoconterosclonesdeclulasTquereconhecemcomo sendoosmaisperigosos. Lembrar:100%dosnossosclonesT,normalmente,soumpouco autorreativos!!!!! Nessecaso,orepertrioperifriconocontmosclonesautorreativos, provavelmenteosmaisperigosos,mascontmclonesquereconhecemAgteciduaisque noestavampresentesnotimoenquantosedesenvolviam. Diabetesmellitus,tireoidite,oorofite,gastritesautoimunes:todasrelacionadas autoimunidade.HassociaoentrealgunsMHCeodesenvolvimentodedoenas. Poucospeptdeosinduzemdoenasautoimunes.Ex.:jsesabeque,nocasodadiabetes, opeptdeopredominantenarespostaautoimunenovariamuitodeumpacienteparao outro.HumarelaoentreoaleloMHCdodoenteeadoenaautoimunequeele desenvolve.OgentipoDR3deMHCIIaumentaem2,5%achancedeumapessoade desenvolvermiasteniagravis.Mas,dequalquerforma,a%depessoascommiastenia gravismaiorqueisso:noonicofatorqueinfluencia. SeosTsoautoreativossempre,porquenotemostantasdoenasautoimunes? Encefalomielitealrgicaexperimental(modelodeesclerosemltipla):mostraque noterosclonesautoreativosnosuficiente!SevcimunizarumanimalAcontraumB edepoisinjetarnoAasclulasdoB,oAficaparaltico,poisfazumarespostaimune contraaprotenabsicademielina.Mas,sevcpegaascelsTdoanimalB,separaoTCR paramielina,clonaejocolocarearranjadonoblastocistodoC,todasasclulasTdoC seroiguaisemseuTCRereconheceromielina,maselenoficariaparalticose recebesseasclulasdoB. Ento,oquenecessrioparaquehajadoena?UmacoisaativaraclulaT.Para tal,temqueterasmolculascoestimulatrias,osPAMPs,paraoTollreconhecelase ligalas.Logo,temqueterumagenteinfecciosooualgoendgenoanormal,quesirvade alerta,comoumanecrose.Preparadodamedulaespinhalnoodeixariadoente,masse eleformisturadocomPAMPs,eledeixa.

Logo,pelapresenadePAMPs,humaassociaoentreinfecoedoena autoimune.Ex.:NadoenadeChagas,humacarditeautoimune.Nafebrereumtica,h umareaocruzadaentreAgpresentesnasvalvascardacaseemStreptococcus.Nesses casos,soduassituaes:a)clulasinfectadasdonossocorpopassamaseratacadas pelonossosistemaimunedeformaincontrolada;b)clulasdonossocorpoquetmAg semelhantesaosAgdosinvasoressoatacadas. Emtodainflamao,realizamosdoenaautoimune,maselatransitriae limitada.Narespostaautoimune,esseequilbriopassaanoexistir.Podesera eficincianaapresentaodeAg(defeitorelacionadoaoHLA,ainfeces)ouapresena declonesdealtssimaafinidade,geradospelapessoa. Vimosdoisexemplosdedoenasautoimunesemquehalteraesgenticasem genesdetolerncia:AIRE(APECED)eFoxp3(IPEX).Tambmpodehaverdoenaauto imunepordeficincianogenedaapoptose.Mas,senohouvermutao,tambmpode haverdoenaautoimune,comoasdoenasAgespecficas:nasoutras,nohaviaAg especfico,adoenaerasistmica,nessecaso,sumrgoacometido. SteroclonedaclulaTnosuficienteparageraradoena,poisadoenaauto imunetemdoislados:umdaimunidadeadaptativa,deativaraclulaT,eoutrodoAg; podehaveralteraodosistemaimuneemsi,gentica,easoutrasparecemestarligadas aclulasqueapresentamAgaclonescomaltaafinidade.Nesseltimocaso,queodas doenasAgespecficas,olinfcitoTnormal,ouseja,reconheceumAgeseativapara destrulo,oproblemaestnosPAMPs,naapresentaodeAg. Oscorposapoptticosexpressameatmesignals,sendoentocomidospelos macrfagos.Paraseremdigeridos,omacrfagoprecisaterDNAse.Seumaououtraou todasnofuncionam,haveracmulodeDNAnodigerido,eDNAestmulo inflamatrio.Seforregurgitado,haverDNAlivre,paraoqualnotemostolerncia, levandoaumarespostaimune. Lpuseritematososistmico:complexosAgAcsedepositamprincipalmentenos rinsepulmes,almdeacometerpeleearticulaes.Pacientestmdeficinciade DNAsetipoI,amaisabundantenosrinsepulmes,tambmpresentenosmacrfagos dasarticulaespele,masaelatemmenosimportncia. OutradoenadedepsitoAgAcaartritereumatide,quenotemtanta letalidadequantoolpus,masmaisfreqente(maiormorbidade),almdeserum processocrnicodegenerativo.Nessecaso,hdeficinciadeDNAseII,maisimportante nacartilagem,levandoalesesa,microcalcificaes,devidoaoacmulodeAg. So,ento,doenasquederivamdoacmulodecomplexosAgAc.Nosesabe porquevariatantootempodeaparecimentoentreospacientes,derepentedependeda gravidadedamutaoedapenetrnciadogenemutado. ESTADOSDEDEFICINCIADOSISTEMAIMUNE APECEDeIPEXsotantodeficinciasdeimunidadequantodoenasautoimunes: noraro,essesdoisquadrosestoassociados.Quandovocnoconseguecriarum sistemaimuneadequado,elefalhacomoumtodo.Masessasduasdoenassomuito rarasemrelaoaoutras. Deficinciaimunolgicaximunossupressoximunodepressoxagentes imunossupressoresxagentesantiinflamatrios Muitasvezes,sefalaempacientecomprometidoimunologicamente,porexemplo, osgrandesqueimados:umcomprometimentodaimunidadequenoresultantede defeitodosistemaimune,masdeumasituaoespecfica.

Comprometimentoimunolgico=imunodepresso,queumtermovago. Imunologicamentecomprometidoumjargomdicoparaimunodeficincias secundrias,ouseja,quenoafetamprimariamenteosistemaimune. Imunossupressoseriaumacondioinduzidapelomdico,comopartede umtratamento. Issodiferentedaimunodepresso,emquealocalizaoprimriadadoena noosistemaimune,umacondiopatolgicaqueatacaoutrorgoousistema,mas acabarefletindonaimunidade.Arespostaimuneestcomprometida,masosistemaest completo.Ex.:queimaduras,diabetes(provocadistrbiosnofuncionamentodos neutrfilos,comoquimiotaxia,fagocitose.Odiabticoestcheiodeneutrfilos,masa funodelesestdeprimida),uremia,cncer(podemestarcomprometidospor desnutrio,caquexia,eocncerpodeinvadiramedulasseaeosrgoslinfidese,no leitoondeocorreocrescimentodotumor,himunossupresso,asdefesasinatasno centrodotumorestoprejudicadas).Ainteraoentrecnceresistemaimunemuito complexa:amaiorpartedostumorescausadaporprotenasmutantes,queno existemnormalmentenaclula.Namaiorpartedostumoresmalignos,huminfiltrado declulasinflamatrias,masquedentrodomesmo,estoimunossuprimidas,nosendo capazesdecombaterocncer. HIVumexemplodedoenaconsideradacomoprimriadosistemaimune, ouseja,congnitacomoAIRE. Entretanto,linfomas,leucemia,timomas,oprofessornoconsideracomodoenas primriasdosistemaimune,logo,tambmlevariamadeficinciasimunolgicas,enoa deficinciasprimrias.A,asclulasprimariamenteatingidassooslinfcitos:mieloma mltiplocncerdelinfcitoB,masnocausaimunossupresso,porques1dosclones Bfoiafetado.Mas,comaexpansodesenfreadadesseclone,asoutrasclulasvo perdendooespaoparaproliferar,eavmaimunossupresso. ClulasTregulatrias:soelasqueocorremnagestao.Nessecaso,muitos clonessoativados,citocinassoliberadas,masregulamainteraoentremulhere feto,deformaqueelanoatacaele.ummecanismoregulatriodosistemaimune. Adeficinciaimunolgica,comcertezaestassociadoummaiorriscodeinfeces ededesenvolvimentodedoenasautoimunes.Algumasimunodeficinciaslevamaum riscoaumentadodedesenvolvimentodealergiasoudecertostiposdecncer. Vimosqueaimunodeficinciapodeserprimria(HIVoumutaescongnitas, quelevamaproblemasintrnsecosdosistemaimune)oucausadaporoutrosagentes, quenotmoobjetivodeatingirosistemaimune,masacabamlesandoo:irradiao extensaealtasdosesdeagentescitotxicostmoobjetivodeeliminarasclulasque proliferamcomaltavelocidade,logo,podeterimpactograndesobreaimunidade. UmapessoairradiadadiferentedapessoaHIV+:oHIVsafetaasclulasTCD4,a irradiaoafetartodasasclulascomaltataxadereplicao.OslinfcitosT,namaior partedotempo,noestosedividindo,masquiescentes.AmeiavidadoBmaisou menoscurta,masmaiorqueadoT.Quemproliferamesmosoosprecursoresdessas clulas,namedulassea:osprecursoresdeneutrfilos(1/2vidamuitocurta,so produzidosmuito,soosprincipaisafetadospelairradiao)edoslinfcitos. Osextensamenteirradiadosmorremdeneutropeniaprofunda,deinfeco generalizada,antesquehajadiminuiodequaisqueroutrasclulasdosangue,ele morredeinfecopelafaltadoneutrfilo,mesmoantesqueasclulasTeBsedem conta. Osneutrfiloseplaquetassoosquetmavidamaiscurta,oneutrfilomais queaplaqueta,eafetandoseusprecursores,namedulassea,diminuilogosua concentraonaperiferia.

Ateno:dependendodaidadedopaciente,possvelsobreviversemotimo.Uma criananoconseguiria,masumadultoviveriatranqilamente,poiselejformousua memriaimunolgicanainfnciae,apartirda,oslinfcitossemantmnaperiferia. Almdessasimunodeficincias,hdficitsdefinidoscomoexclusivamenteTouB, defagcitosoudosistemacomplemento.Asmaisgravesatingemmaisdeumtipode clula,comonaimunodeficinciacombinadagrave(SCID),morbidadedomeninoda bolha. Hmuitostiposdiferentesdessesdficits,porquehcausasdiferentes. NaDoenadeDiGeorge,umamorbidadeembrionria,soslinfcitosTso afetados.Decorredeumamformaodosarcosfarngeos,levandoaproblemasno desenvolvimentodotimoedasclulasT. AagamaglobulinemialigadaaocromossomoXafetasomenteasclulasB, tambmconhecidacomoDoenadeBruton.Decorredefalhaemumaenzimaenvolvida nodesenvolvimentodasclulasB.Logo,oindivduonoproduzAc. Comosopopulaesdiferentes,especializadas,levamadiferentestiposde doenas. SeoindivduonoproduzAc,estardesprotegidoprincipalmentecontra bactrias,poisnoopsonizabem,noativatobemocomplemento,logo,sfazfrente sbactriasatcertoponto.Oindivduotemmltiplasinfecesbacterianasgraves, mastambmteminfecesporvrus,fungos,vermes.Masasbactriasso predominantes,soosmicroorganismosqueprovocaminfecescommaisfreqncia, depoissoosvrus.Umarazodelesestaremmaisoumenosprotegidoscontraosvrus teroslinfcitosTCD8normais. Seoindivduotemumdefeitonotimo,eleterinfecesviraiscomalta freqncia,massedefendercontrabactriasmaisoumenosbem. NasSCID,faltamtodasessasdefesas:umHIV+menosimunodeficientequeuma crianacomSCID. Htambmdeficinciasdefagcitos,vrias.Nadoenagranulomatosacrnica, porexemplo,hdeficinciadeinmerosmicrobicidasdemacrfagos,necessriospara exterminarbactrias(complexoNADPHoxidase).A,oorganismotemquelanarmo deoutrosmecanismosparanosdefender.Costumasergrave.
TODASESSASDOENASSOMUITODIFERENTES,MASTODASCURSAMCOMALTA FREQNCIADEINFECES.

HIV Comoseprovaqueumadoenainfecciosaprovocadaporcertoagente?Isso bemdifcil.OKochficoufamosoporqueprovouqueobacilodeKochoagente etiolgicodatuberculose,comumasriedeexperimentosquenodeixammargempara advida.E,apartirda,todomundopassouacomprovarosagentesetiolgicos utilizandoosmesmosexperimentosqueoKochidealizou.Squenodparafazerisso comaAIDS,porquenosepodefazerexperimentoscomhumanos,eovrusHIVno infectaanimais. OHIVumagenteinfecciosomuitosofisticado,quetemtropismoporTCD4,mas tambminfectamacrfagos.Quandoestativado,elemataosCD4demuitasformas diferentes,nemtodasforamdescobertasainda.Maspodetambmficarlatenteno organismo. SabesequeaclulaT,quandoativada,ficamaissuscetvelsinfeces,ea clulasinfectadastendemasefundircomoutras,formandomassasquenoso fagocitadas.A,clulasCD4quenoestoinfectadastambmsomortas. PessoasquetrabalhamemumlaboratriodeAIDStmumriscoinfectivoalto,por isso,vriasprecauessotomadas,inclusivearealizaodeexamesdesangue peridicos,ostestesdeAIDS,emqueseprocuraoAcnosoro.Todososcuidadososso soronegativo.Mas,sevcpegaressasmesmasamostrasdesangue,purificarascels

mononuclearesecolocalasparareagircomoHIVeanalisaraproliferaodelinfcitos TouageraodelinfcitosTcitotxicos,verquetodos,mesmooscuidadosos(soro) tmtestepositivo.Ouseja,ovruscontaminouoambientesemningumperceber,e imunizouospesquisadores.Possoafirmarissoporque,comohlinfcitoTcitotxico replicando,jhouvecontatodesseslinfcitoscomoAgantes.Ouseja,olinfcito produziuesseAgdentrodele,jqueoseuMHCdotipoI,odaviaendgena.Logo, existeumamaneiradeentraremcontatocomoHIVenodesenvolverAIDS,eainda ficarresistenteaovrus.OTCD8proliferou,eelesproliferasejtivertidocontato prviocomMHCI,eMHCIviaendgena,logo,elestmqueterproduzidoessevruse apresentadoseusAgnoMHCI. HIPERSENSIBILIDADETARDIADOTIPOI Todareaodehipersensibilidadeumareaoimunolgica(dedefesa)que reconhecidapelodanoquecausa(patolgica).Tambmchamadadereaoalrgica, ummecanismofeitoporAceclulasimunes. AhipersensibilidadedotipoIaformamaiscomum,tambmchamadade reaoanafilticaouimediata.Existemvriostiposdeapresentaodessareao (rinite,otite,asma,oftalmite,conjuntivitealrgica,urticria)etodaselastmomesmo mecanismo.comumexistiremindivduoscommltiplasformasdiferentesdereao anafiltica,podendoinclusiveacometerdiferentesrgos,sendoumaforma disseminadademanifestao,semumlugarpreciso.Essesindivduossoatpicose podemapresentarasdiferentesmanifestaesemdiferentesestgiosdavida.Areao anafilticatemumcomponentegentico/hereditrioe,portanto,vriosindivduosda mesmafamliaapresentamalergia. ATOPIA: Tendnciahereditriaqueoindivduopossuidemanifestaralergiasoureaes anafilticasemdiferenteslocais,dediferentesformaseemdiferentesestgiosdavida. Diferentesgenesinfluenciamnessatendncia.Podeserdefinidacomouma predisposiogenticadaspessoasemfazerreaotipoI. REAESANAFILTICAS: SomediadasporAcdotipoIgE,conhecidoscomoAccitotrpicospois apresentamumtropismo(atrao)porcertasclulasdosnossostecidos (principalmentemastcitosebasfilos),ligandoseaelasdeumaformaespecial. Sepegarmososorodeumapessoaalrgicaeinjetarmosemumanoalrgica, essasegundapessoaficaalrgicatemporariamente,masoquemaisimpressionaque nolocaldeinjeodosoroocorreumareaoalrgicamuitomaisintensadoqueno restodocorpo.IssoexplicadoporqueosIgEficamretidosnostecidosdapeledevido altaquantidadedemastcitosetambmbasfilos(circulamnosanguemasvoparaos tecidos). AIgEnodestrudaeneminteriorizadaporessasclulas.Elasficamretidasna membranaexternadomastcitoporqueessepossuireceptoresdemembranaque reconhecemaregioFcdaIgE.EssereceptordotipoIetambmestpresenteem basfilos.chamadoFcR1enodistingueseaIgEestsozinhaoupresaaAg,ligando semuitasvezesaIgEsemAg(comaltaafinidade)quepassaafuncionarcomoreceptor paraAgnamembranadosmastcitos.

OBS:OFcR2estpresenteemeosinfilos,macrfagoselinfcitosBesseassociaa IgEligadaaAg. Todasaspessoas,alrgicasouno,produzempoucaquantidadedeIgEeo mastcitoosretmcomaltaafinidade.Odiferentequeaspessoasalrgicas: produzemumpouquinhoamaisdeIgE produzemIgEcontraAgquenosoaprincpioinfecciososenem perigosos,comoospresentesnapoeira,caros. ClulasTH2: SooslinfcitosTqueinteragemcomoslinfcitosBprodutoresdeIgE.Eles liberamIL4eIL13promovendoamudanadeclassedeIgMparaIgE. OsmastcitospossuemvidalongaeoIgEqueretidoemsuasuperfciefical pormuitotempo,esperandopeloeptopoquereconheceespecificamente.QuandooAg chega,elereconhecidoporessasclulas,quelogosoativadasesofrem DEGRANULAO. AspessoasalrgicasproduzemumaquantidademaiordeIgEcontraos diferenteseptoposdeummesmoAg(porexcontraalgonapoeira).Assim,huma grandeconcentraodeIgEquereconhecemummesmoAg(eptoposdiferentes)na superfciedosmastcitosebasfilos.Issomuitoimportantepoisaumentaa probabilidadedeocorreradegranulao:asmolculasdeIgEnasuperfcie,quandose ligamaoeptopo,seaproximamumasdasoutras(fenmenodeAgregao),assimos FcR1prximospodeminteragireissoquepermiteaativaoedegranulaodos mastcitos.Portanto,essainteraocolateralentreosreceptores,formandoumarede quepermitearesposta.umarespostapoliclonal,dependendodediferentesIgEpara ummesmoantgenopresentesnasuperfciedeummesmomastcito. PessoaspoliparasitadasproduzemmuitoIgEmascontradiferenteAg!Assim, noprovvelqueocorraumareaodehipersensibilidade,poisnohuma concentraograndedeIgEcontraummesmoAgnasuperfciedosmastcitoseao fenmenodeagregaomenosprovvel!(pex.:Crianaspoliparasitadasnafricatem muitostiposdeIgEdiferentes,paradiferentesAgdediferentesparasitasNOSO ALRGICAS!) OBS:IgEproduzidoporlinfBquejtiveramumaresp.primriacomproduode IgM. Ativaocelularedegranulao: EmummastcitoexistemIgEparadiferenteseptoposdeummesmoAgetb contradiferentesAg,masoquenaprticaprovocaaativaodomastcitoo reconhecimentodediferenteseptoposdeummesmoAgqueentraemcontatocomele, permitindoaagregaodereceptoresligadosaoscomplexosAgIgE. Noindivduonormal,nosesabeafunodeIgEmassabesequenofazmal. Emalrgicos,elafazmal,poisasuaproduoexacerbadaeconcentradaemIgEcontra osvrioseptoposdeummesmoAg,aumentandoaprobabilidadededegranulaodos mastcitosaoentrarememcontatocomesseAg. OBS:Noseesquea!Acbivalente!Liga2eptoposparaserativado! Choqueanafiltico: arespostadehipersensibilidadequeocorrenotecidosangneo,sendo sistmica.mediadaporbasfilos.Umadasformasmaissriasdechoqueanafiltico causadaquandoseinjetapenicilinanosangue.Apenicilinanoumaprotena,um hapteno(comoodinitrofenol).Aapenicilinadeveseassociarasprotenasdoplasma (conjugaohaptenocarreador)paraqueessaprotena,contendomuitasvezes

penicilina,levedegranulaodobasfilo(muitoseptoposjuntos,reconhecidospor vriosIgE). PorquedosarIgEnaalergia? PorqueapesardeIgEseligareficientementeaosmastcitosebasfilos,nos indivduosalrgicosaproduoaumentadetalformaquesobraIgElivrenoplasmaa maisqueonormal. ATPICOS:TendnciaintrnsecadeproduzirrespostaTH2,comproduode linfcitosTH2ativadoscontravriosAgambientais,comosquaisencontra.Essa respostaocorresemternadaavercominfeco.Issobemdiferentedoqueocorrena crianapoliparasitadaque,porestarinfectada,produzmuitoseosinfilos,emuitoIgE. Mastcitos: Possuempotencialfisiolgicoextraordinrio,mascujafunoaindaincerta. Nasinfecesrespondemrapidamenteesecretamsubstanciasquimiotticaspara outrasclulasdosangue,aumentamfluxosangneoepermeabilidadevascular,almde ativaremoendotlio. Fasesdareaodehipersensibilidade: Inicialmente,osmastcitosativados(apsoprocessodeAGRAGAOnoqual hinteraoentrereceptorescolateraisligadosacomplexosAgIgE)degranulame liberammediadoresinflamatriosqueestavamemgrandesgrnuloscitoplasmticos (metacromticos).Essesmediadorespromovemfenmenosvascularesque caracterizamaprimeirafasedareao,comovasodilataoeaumentoda permeabilidade.Oprincipalahistamina(mastambmhaliberaodeserotoninae heparina).Ahistaminatambmpromoveirritaodasterminaesnervosas, causandoacoceira. Portanto: FASEIMEDIATA(liberaodemediadoresinflamatrios) FenmenosVasculares: Congesto(vasodilatao)ouhipereremia; Edema(aumentodapermeabilidade,levandosadadeplasmaparatecidos); Coceira(irritaodeterminaisnervosos). Ex:Alergiacutnea(pex.:urticria)placasvermelhas,edemaciadasequecoam. Essareaoditaimediataporquepercebidalogoqueoindivduoentraem contatocomoAg.Issopossvel,pois,comojpossuemIgEnamembrana,a degranulaodosmastcitosmuitorpidaeporqueelesjtemgrnulosprontospara seremliberadosassimqueforemativados. OBS:ChoqueAnafilticoumareaosistmica,comliberaodehistamina eserotoninaemtodoocorpo,levandoaoextravasamentodeplasmaparaostecidose causandoedema.Mashalgumasestruturasquenosuportamedema!Umexemploa gloteEdemadeglotepodematarporasfixia!Nochoqueanafilticoobservaseaindade formaimediata:hipotenso,hipersecreo(podecausarobstruodotratorespiratrio ouaindacausardiarria),brnquioconstrio,almdoedemadeglotequejfoicitado anteriormente. Ateno:Pessoasatpicastmmaiorchancededesenvolverchoqueanafiltico! Mashviasalternativasquelevamaochoque,comoocasodealgunsSOROSque

possuemagregadosemsuacomposio,provocamaativaodoS.Complemento, ativandoasanafilatoxinasqueativamosmastcitosmesmoseminteraoAgAc! PessoasmuitoalrgicastomamANTIHISTAMNICOSparainibirafase imediata! SEGUNDAFASE: maistardiapoisdependedesubstncias(mediadoressecundrios)quesso produzidasquandoosmastcitossoativadosouseja,depoisquecomeama degranular: peptdeosquimiotticosparaeosinfilos; lipdeosderivadosdamembranacelular(AcidoAracdnico)queservemde substratoparaageraodeProstaglandinas(COX),tromboxanos(TX)eLeucotrienos (LT).Estessoimportantesmediadoresdareaoanafiltica,principalmenteos leucotrienosLTC4,LTD4eLTE4quesooscistenilleucotrienos.Esteslevam broncoconstrioeaumentodasecreodemucoprovocandoascrisesasmticas. OBS:Tratamentodeasmticos:MedicamentosantiinflamatriosINIBIDORES DECISTEINILLEUCOTRIENOS.Oproblemadosasmticosnoahistaminavistoque elaumfracobroncoconstritoremhumanos! AspessoasemchoqueanafilticodevemreceberBRONCODILATADORES,como aadrenalina.Noantiinflamatrio,temaosobremsculolisosendoidealnessa situaodeemergnciapoisbroncodilataemantmaPAelevada. FASETARDIA: Jdesapareceramasreaesmaisprecocespoisahistaminassecretadaat certomomentoetambmdegradada.Oantihistamniconofuncionamaisnessafase, apenascompapelpreventivoparaprximasreaes. Notecidoapareceinfiltradoporeosinfilosqueforamatradospelosfatores quimiotticos(secretadosprincipalmentepelosmastcitos).Nosesabeoseupapel, massabesequeelescausamdanotecidualemortecelulardevidoliberaode substnciastxicascomo:protenabsicaprincipal,peroxidase,protena catinica.Assimoquadrotendeasecronificaratporqueoseosinfilospermanecem porbastantetemponotecido,etmcomoconseqncias: Fibrosetecidual Remodelamento Essafasetpicanopulmodoasmticoquetodofibrosadoeremodelado, permanecendoassimmesmoquandoapessoanoestemcrise. OasmticotendeareagirdeformabemmaisviolentaqueonormalavriosAg (acetilcolina,metacolina)etambmaestmulosnoantignicosquecausamirritaoa arvorebr6onquica,como:exercciosfsicos,frio,umidade.E,poressesestmulos, entramemcrise:broncoconstrio.ahiperreatividadeasmtica. OBS:Algumaspessoaspossuemmastcitosdefeituososquerespondem pressoativandoseedegranulando.(estmulofsicoqueprovavelmenteoqueocorre nahiperreatividadeasmticatambm)Essaspessoastmdermografismo. Comosetornaratpico?

Hereditariedade(genesdemuitostiposparaIL4,IL13,paraosreceptores, paraIFNgama,paraLTC4sintase,...)Nosesabeosmecanismosdetodos,massesabe, porexemplo,quealtoIL4induzaproduomaiordeIgE. Ento,comoexplicaroaumentodonmerodepessoasalrgicasnomundosea atopiafossedeterminadasgeneticamente? Hinflunciasdomeioambiente,comoporexemplo,oaumentodaofertade alrgenos. Pessoasafastadasdosalrgenostendemamelhorardaalergiaeasexpostasa muitosalergenosficamalrgicas! HiptesedaHigiene: Epidemiologistaspostularamqueoaumentoemescalamundialdepessoas alrgicasproporcionalaoaumentodahigienedospases!! Qualeraafundamentao? Paraeles,empasesindustrializados,ahigieneseriamaioreonmerode infecesseriamenor.Assim,reduziriaosestmulosaoslinfcitosTH1(principais defensoresquesecretamIFNgamaeestimulamproduodeIgGporlinfB),eesses diminuiriam,deixandooslinfcitosTH2dominar,jquenormalmenteTH1eTH2so antagnicospoisTH1produzIFNgamaqueinibeTH2eTH2produzIL4queinibe TH1.Esseantagonismorealepartedeumaregulaofinadarespostaimune, permitindoocrescimentodapopulaoadequadaemcadaresposta. Resumindo:DesusodeTH1,ficandofraco,nofreiaTH2Hiptese epidemiolgicacomemprstimodeimunologia.Associaoestatsticaentre industrializaoealergia. Essahiptesepodeserrefutadaporvriosargumentos: Industrializaononecessariamentesignificalimpeza; Asincidnciasdealergiasosubnotificadasemvriospases; CidadedoMxicoeSoCristovopossuemmuitosalrgicosenoso industrializados; Nohcomprovaocientficadofato; Hsuperficialidadedoraciocnioepidemiolgico.Nosepodedescreveruma naototalmentedesigualcomosmesmoscoeficientes,jquenosoiguais.uma hipteseimatura!Nofoidevidamentepostaprova. SoaumentodelinfcitosTH2noexplicaoaumentodealrgicospoistem tambmqueaumentaronmerodealergenos.Equantomaissujo,maisalergenos.(ex: baratasecamundongossofontesdealrgenosesocomunsnaausnciadehigiene). Temosqueteremmentequeahigiene,avacinaoealimpezasoconquistase mesmoqueseprovequesoruins,nodevemoscomearaviversujos.Asoluosoos remdiosmoduladoresdoSistemaImune,aumentandoTH1. IMUNOSSUPRESSORES (continuaodaauladeImunodeficinciaseImunodepresso) Ousodeimunossupressorescomumnaprticamdicaemdiferentessituaes: transplantes,cnceredoenasautoimunes(doenadeKhroninflamaocrnicado intestino;lupuseritematoso;artritereumatide) HcasosemqueomdicodeveimunossuprimirnodevidodoenasdoSIesim paraevitarrespostasimunesindesejveis,comorejeionocasodetransplantes.A rejeiopodeser:

Aguda:DevidodiferenadeHLA(classeIeII) Crnica:Lenta,podeserevitadaporimunossupressores,devidoadiferenas entremolculasmenores. fciltercompatibilidadedeHLAentreindivduosdeumamesmafamlia.Seno houveraindatemchancenosbancosdedoao.AntigamenteopareamentodeHLAera decisivoparaostransplantes.Hoje,vriosimunossupressorespodematuarcontraa rejeio,masaindasimprefervelqueodoadorsejacompatvel.Nocasodarejeio crnicacomumseevitarpelousocrnicodeimunossupressoresapsotransplante! Certostransplantestendemadeteriorarcomotempo:doenametablicadorim. AgentesImunossupressores: Radiaoionizante: Utilizadainicialmente.Deveserfeitaemaltasdoses.Podetambmserusada paramatarclulascancerosaseeliminarclulashematopoiticasdamedulasseapara fazertransplante.(ex:leucemia)localizada! Agentesantiproliferativos(antimitticos): Tambmatuamatandoclulasemproliferao(=radiao)masnolocal,em todocorpo! Ex:quimioterapiadocncerafetacabelo,TGI,Medulassea.Devemserdadas dosesmuitoaltasparaatingiromesmoefeitoquearadiaoletal. Amaioriadostransplantadosnousaessesagentestoagressivos,usando: ImunossupressoresSeletivos: InterferncianoprocessodeativaodoslinfcitosTeproduodeIL2.Ao atuarnessafase,prejudicaaativaoinicialdasclulasT.benficoparaevitar rejeies.seletivoparaasrespostasnovas,porminefetivoparaasantigas.Portantoa memriamantidaeelessevitamarespostaprimria. Glucocorticides: Substnciasesteridesusadascomoimunossupressorasquandoemdoses elevadas.Existemnormalmenteemnossoorganismoeaumentadapeloestresse, podendotambmestarpresentesemmedicamentos. Emdosesbaixasnocausamimunossupresso,apenassoantiinflamatrios. Porexemplo,nousoparatratarasma! TransplantedeMedulassea: bemdiferentedosoutrostransplantes.AntesdevesedestruiraMOdo receptoredepoisdotransplante,aMOtransplantadadeveterplenascondiesde proliferar,oquesignificaquenocomumdarimunossupressoresnessecaso! DOENADOENXERTOCONTRAOHOSPEDEIRO:clulaslinfidesdamedulassea doadapassamaseproliferarereagircontraostecidosdoreceptor,comosefossem estranhos.ocontrriodarejeio,mastambmmerecetratamentocom imunossupresso!

TRANSPLANTEDECLULASTRONCOHEMATOPOITICASEM IMUNODEFICINCIASPRIMRIAS Imunodeficincia=DefeitonafunodoSistemaImune(Quantitativoou Qualitativo). Primrias:Doenasgenticas,mutaoemgenesquecodificamcomponentesdo SI,podemserhereditrias. Secundria:Outrosagentescausadores.Ex:HIV. Ospacientessofremde: infecesrecorrentesavidatoda infecesgraves:podehaverinternaohospitalar;terapiaintensiva;seqelas persistentesouatobito. infecespersistentes:mesmocomtratamentoopacientenoficabom! Exemplos: 1)AgamaglobulinemialigadaaoX:nopossuifraogamaglobulinanoplasma. PodemnoternenhumaIg,sofrendovriasinfeces.Tratacomreposiodegama globulina. 2)AtaxiaTelangectasia 3)SndromedeWiskottAldrich Plaquetopenia,Eczema,DefeitonoSI Algumasimunodeficinciassomuitofreqentes! OsdezsinaisdeAlerta: 2oumaispneumoniasnoultimoanoex:Agamaglobulinemia 4oumaisnovasotitesnoultimoanoex:baixadeIgA Estomatiesderepetiooumonilasepormaisde2mesesex:neutropenia eSCID(imunodeficinciacombinadagrave) Abscessosderepetioouectimaex:SndromeHiperIgE;Deficinciade adesoleucocitria(LAD)eDoenaGranulomatosaCrnica. 1episdiodeinfecosistmicagrave(meningite,osteoartrite,septicemia) Infecesintestinaisderepetio/diarriacrnicaex: Hipogamaglobulinemia Asmagrave,doenadocolgenoouDoenaAutoimune EfeitosadversosaoBCGe/ouinfecoporMicobactriaex:Defeitono receptordeIFNgama;HiperIgM FentipoclnicosugestivodesndromeassociadaImunodeficinciaex: AtaxiaTelangectasia Histriafamiliardeimunodeficinciaex:DeficincianoSComplemento OpesTeraputicasparaIDP: ReposiodeIg:Permiteaospacientesvidanormalmasnocura! TransplantedeMedulassea TerapiaGnica ClulasTronco: Vriostipos.AshematopoiticasgeramclsdoSI. Autlogo: bemtolerado.Maspodehavercontaminaoporclstumorais.

Alogeneico: PodeocorreraReaoenxertocontrahospedeiro,principalmentenapele,TGIe fgado.Podepredisporainfeces(Fungos,vrus;CMV;bactrias).Podehaverrejeio doenxerto Deondetirarosprecursores? Medulassea;Sanguedocordoumbilicaleplacentrio;Sangueperifrico. Doador AparentadoXNoaparentado Compatibilidade Totalmentecompatvel(6genesHLA=em6nocordo,10em10naMO) Parcialmentecompatvel Haploidentico:paioumedoador(50%HLAigual) Comofeito? Quimioterapiadealtadosenopacienteedainfundeosprecursores. Quando? ImunodeficinciasPrimrias(IPEX,Agamaglobulinemia,SCID) SCID:vriossinaisdealertadiferentesacometem: InicioPrecoce;infecograve;pneumonia;diarria Reconstituioimunolgica: ApstransplantedeMOvemosqueasclulasvosurgindoaospoucos. EfeitosAdversosdotransplante: DoenaEnxerto...(DECH) Pensarsempreem:sobrevidaeQualidadedevida(DECHcrnicapodelevarao vitiligo,esclerodermia,verrugasdisseminadas,alteraescognitivas,perdaauditiva.....)

Imunodeficincias Primrias X Secundrias Primrias Defeito primrio no sistema imune. Secundrias Problemas em outros sistemas ou outras condies causam problemas no sistema imune: desnutrio; neoplasias; citostticos; radiao; parasitoses (Leishmania). Congnitas X Adquiridas Congnitas Desde o nascimento. Muitas vezes levam ao bito no perodo perinatal, ou mais tardiamente. Adquiridas Ex.: HIV. Existem imunodeficincias primrias adquiridas. Diagnstico: Sinal mais evidente: Infeces repetidas e / ou graves; neoplasias.

1) 8 ou mais infeces de ouvido em 1 ano. 2) 2 ou mais infeces nos seios da face (sinusite) em 1 ano. 3) 2 ou mais meses de antibitico com pouco efeito (a maioria bacteriosttico, sendo que o sistema imune debela a infeco). 4) 2 ou mais pneumonias em 1 ano. 5) Falta de crescimento. 6) Abscessos orgnicos (ou na pele) recorrentes. 7) Candidase oral persistente. 8) Necessidade de antibiticos por via parenteral. 9) 2 ou mais casos de infeces graves como meningite, osteomielite, celulite ou sepse. 10) Histria familiar de imunodeficincia ou morte precoce (no primeiro ano de vida). Infeco em pacientes imunodeficientes: Microorganismos mais frequentes. Deficincias celulares: Infeco por vrus e fungos. Herpes simplex; Herpes zoster; citomegalovrus; micobactrias; Candida sp.; fungos em geral; P. carini; Criptosporidum sp.; L. monocytogenes; ... Deficincias humorais: Infeco por cocos patognicos. Estreptococos; pneumococos; estafilococos; H. influenzae; N. meningitidis; enterobactrias; enterovrus; P. carinii; G. lamblia. Deficincias de fagcitos: S. aureus; S. epidermitis; enterobactrias; Aspergillus. Deficincias do complemento: Bactrias encapuladas; Neisseria meningitidis. Dados mundiais: 50% - Deficincia de anticorpos 20% - Deficincia combinada celular e de anticorpo 18% - Deficincia de fagcitos 10% - Deficincia celular 2% - Deficincia de complemento Dados do instituto da criana (SP): 64% - Deficincia humoral 19% - Deficincia de fagcitos 12% - Deficincia celular

5% - Deficincia de complemento As primeiras so na maioria congnitas, com seus genes mapeados, sendo que vrios so ligados ao X, o que aumenta a incidncia em meninos. A idia de mapear genes a terapia gnica para fazer transplante autlogo de medula ssea. Grupos sanguneos Sistema AB0 Grupos sanguneos so conjuntos de alo-antgenos expressos nas hemcias, que esto em algumas pessoas e no em outras. As hemcias so vestigiais, no se reproduzem, tm uma vida limitada, assim, uma reao contra as hemcias uma reao contra a principal clula do sangue e que no pode se recuperar. Existem inmeros antgenos de grupo sanguneo, que a maioria dos mdicos nem ouve falar a respeito, sendo de interesse somente do hemoterapeuta. Os mais importantes so o AB0 e o Rh. AB0 Esses antgenos so glicdios na superfcie de hemcias. Os antgenos A e B so acares colocados durante a biossntese, sobre o antgeno H. O H um aceptor de A ou B, que igual em todas as pessoas. A colocao de A ou B depende da glicosil-transferase da clula. H s pode ligar A ou B de uma vez (s tem 1 stio). Quem AB possui as duas glicosiltransferases na mesma clula, tendo H ligado a A e H ligado a B na mesma hemcia. A glicosil-transferase inativa a zero (0), de forma que a pessoa 0 tem que ser homozigota, pois se tiver um alelo 0 e outro A, esse ser ativo e glicosilar as hemcias. Quem A0 possui apenas um gene para A, mas esse d conta de produzir enzimas para glicosilar todas as hemcias. AB possui antgenos A e B em quantidades iguais, pois as enzimas competem pelo H. Esses antgenos so importantes, na prtica, porque no produzimos anticorpos contra eles, naturalmente, contra outros antgenos, sem precisar de imunizao. Na verdade, existe a hipotese de imunizao ambiental, de que seramos imunizados por antgenos semelhantes de microorganismos, progressivamente, ao longo da vida. Anticorpos naturais so os encontrados em uma pessoa que no entrou em contato com o antgeno. Os anticorpos encontrados so invariavelmente IgM, de baixa intensidade, indicando uma resposta inicial. Apesar disso, essas IgM so capazes de gerar uma resposta eficiente (aglutinao). IgG no produzido pela imunizao ambiental.

IgM um aglutinador por natureza, alm de causar ativao do complemento (muitas Fc), causando a lise da clula. A hemoglobina ento liberada no plasma, sendo intil para o transporte de O2 e tendo efeitos txicos, principalmente para o rim (necrose de tbulos). Tambm causa problemas em msculos e crebro. s vezes, a leso pela hemoglobina se confunde com efeitos da aglutinao, como entupimento dos vasos. A resposta a uma reao de transfuso aguda, atuando em poucas horas, causando dor muscular, proteinria, etc. Por isso, importante que ao se fazer uma transfuso, faa-se tambm a tipagem AB0 no doador e receptor. Essa feita utilizando-se a aglutinao por IgM, usando-se anticorpos anti-A e anti-B. Para verificar se a tipagem foi correta, pode-se fazer prova cruzada do sangue do doador com o do receptor, testando-se a presena de anticorpos no soro do receptor contra o do doador, colocando-se o soro do receptor para reagir com o sangue do doador. A reao ocorre pela reao dos anticorpos do receptor contra o sangue do doador, ou porque o doador tem anticorpos contra o sangue do receptor. Assim, no existe a idia de doador (0) e receptor (AB) universal. Ex.: AB receptor, recebe sangue A, que possui anticorpos anti-B, que reagem com o antgeno B do receptor (em grandes quantidades). Por isso, as transfuses atualmente utilizam preferencialmente concentrado de hemcias, eliminando as reaes dos anticorpos dos doadores. Os antgenos A e B no so expressos somente nas hemcias. Clulas do endotlio renal possuem esses antgenos, o que importante nos transplantes renais, de forma que se doador e receptor no forem compatveis, os anticorpos do doador reagem com os antgenos da vasculatura renal, causando destruio desse endotlio por ativao de complemento, causando uma reao durante a prpria cirurgia, chamada reao hiperaguda, que nada tem a ver com MHC. Rh So antgenos proteicos, constitudos por vrias protenas diferentes, codificadas por genes diferentes, que causam uma resposta. Rh + : Presena de pelo menos um desses genes (qualquer um). Um mesmo anticorpo reage com todos antgenos Rh. Rh - : Ausncia de genes Rh. A maioria das pessoas Rh +. No existem anticorpos naturais antiRh, sendo que a pessoa precisa ser imunizada para reagir. Como so antgenos proteicos, h o switch para IgG rapidamente. Nas transfuses, fazse a tipagem Rh no para evitar uma reao rpida, mas sim para evitar a sensibilizao da pessoa e problemas futuros. IgG tem resposta predominante por fagocitose, tendo uma resposta txica da hemoglobina menor. Doena hemoltica do recm-nascido ou Eritroblastose fetal

Anticorpos da me reagem e destroem as hemcias do feto, sendo, portanto, IgG (passa pela placenta), podendo causar aborto e, no caso de sobrevivncia, kernicterus, que leso dos gnglios da base por bilirrubina, que passa pela barreira hemato-enceflica do feto, que mais permevel. Alm disso, a bilirrubina indireta (no conjugada) lipossolvel e o feto produz mais dessa, j que o seu fgado imaturo. No caso de me A e filho B, no h reao, pois os anticorpos so IgM. Entretanto, se a me tiver recebido transfuso errada, produz IgG, que passa para o feto. Alm disso, a me pode ser sensibilizada durante a gravidez, se houver passagem de hemcias da circulao fetal para a materna, atravs da placenta, se houver ruptura de vasos. A DHRN a que ocorre toda vez que h passagem de IgG da me contra o sangue fetal, sendo que ocorre mais frequentemente os casos de incompatibilidade AB0, mas os casos mais graves so os de incompatibilidade RH. Isso compreensvel, pois h uma gama maior de antgenos AB0 que podem causar sensibilizao da me e, alm disso, a frequncia de Rh na populao menor e, apenas metade so mulheres. OBS: A destruio de hemcias fetais na circulao materna parece evitar a sensibilizao dessa, fazendo-se a administrao de anticorpos no final da gravidez. Isso comprovado estatisticamente, mas no h garantia de que ajudar num caso isolado. No vacinao!!! transferncia de imunidade humoral (IgM, pois do contrrio passaria pela placenta). Teste de Coombs Permite verificar se o feto tinha suas hemcias destrudas por anticorpos maternos. Deve-se detectar a presena de IgG, mas essa no aglutina hemcia, devido repulso pela carga dessas. IgM aglutina pois seu dimetro supera a distncia de repulso. O teste de Coombs provoca a aglutinao de hemcias com IgG na superfcie, atravs da utilizao de anticorpos anti-IgG. utilizado toda vez que h suspeita da presena de IgG na superfcie de hemcias. O teste de Coombs direto possui apenas uma etapa e utilizado para detectar DHRN; revela apenas a presena de IgG recobrindo hemcias do recm-nascido. J o teste de Coombs indireto detecta IgG no sangue da me. Reveste-se de plasma da me, hemcias do tipo que se espera que haja IgG contra; e depois adiciona-se anti-IgG.

1a. etapa: Hemcias reagem com o plasma da me. 2a. etapa: Aglutinao por anti-IgG. Hipersensibilidade Imediata

Tambm chamada de hipersensibilidade anafiltica ou de tipo I. A reao ocorre muito rapidamente, em minutos, no mximo em meia a uma hora. A classificao de tipo I de acordo com o critrio de Gell-Coombs. Alergia qualquer resposta imune que provoca mais dano que o antgeno, causa uma patologia. Alergia = Hipersensibilidade. A descoberta da hipersensibilidade foi feita por Richet, que pesquisava uma neurotoxina de algas que matava ces, quando inoculada. Richet tentou imunizar os animais com doses sub-letais da toxina. Quando a dose letal era dada, entretanto, os animais imunizados morriam mais rapidamente que os outros, no sendo uma profilaxia e sim, uma anafilaxia. Os animais imunizados morriam de forma diferente, tendo acentuada hipotenso, problemas respiratrios (obstruo das vias areas), ao invs do efeito neurotxico. Alm disso, mesmo com doses baixas, no suficientes para causar o efeito neurotxico, causavam anafilaxia do mesmo jeito. Richet descobriu o choque anafiltico, que a forma mais grave de hipersensibilidade, agindo de forma rpida e sistmica. Ocorre quando o antgeno inoculado por via venosa. A hipotenso ocorre por causa de vasodilatao e pelo aumento da permeabilidade vascular. A dificuldade respiratria ocorre por causa de broncoconstrico, secreo intensa de muco, alm disso, algumas pessoas tm ainda edema de glote. Esses problemas respiratrios podem ocorrer tambm fora do choque, numa crise de asma. O choque anafiltico no ocorre apenas com toxinas, mas com qualquer antgeno para o qual a pessoa seja sensibilizada. Esse choque pode matar. A maior parte das alergias so localizadas e menos graves. Ex.: Urticria Reao alrgica na pele; rinite alrgica; conjuntivite alrgica; asma. Quem tem tendncia a fazer um tipo de anafilaxia, tem propenso a fazer todas as outras formas, assim como o choque anafiltico. Isso chamado atopia, que a tendncia a fazer anafilaxia. Acredita-se que a atopia seja herdada geneticamente. OBS: Existe asma alrgica e no-alrgica. As manifestaes atpicas podem mudar ao longo das diversas idades (numa idade pode-se ter asma, em outra rinite...) Atopia (do grego; fora de lugar) uma doena com vrias manifestaes. A manifestao alrgica pode ser transmitida de um indivduo para o outro, atravs do plasma por via venosa (ex.: Urticria por todo o corpo); por ser imunidade humoral. Quando os anticorpos so injetados na pele, entretanto, a urticria fica localizada nessa regio, mostrando que os anticorpos no se difundem pelo corpo. Esses anticorpos da alergia foram

ento chamados de anticorpos citotrpicos, pois se fixavam no tecido e demoravam muito tempo para sair. No tecido onde h anafilaxia no aparecem mastcitos, que so identificados por seus grnulos. Na verdade, os mastcitos esto l, mas como desgranulam, no so visveis. Os grnulos so ricos em substncias inflamatrias, principalmente a histamina. Ishisaka descobriu que os anticorpos citotrpicos se ligavam aos mastcitos nos tecidos, e basfilos no sangue, provocando a degranulao. Na verdade, esses anticorpos so IgE, que podem se ligar clulas. Mastcitos e basfilos podem ligar IgE no ligada antgeno. Se no houver antgeno, a IgE permanece ligada s clulas, disparando a degranulao somente quando o antgeno se liga. A alergia imediata pois as substncias inflamatrias nos grnulos j esto prontas, bastando apenas a liberao; alm de bastar apenas a IgE dar o sinal para a liberao. Essa resposta rpida como uma resposta endcrina. Os anti-histamnicos atuam nos receptores de histamina. Ainda no se sabe o que faz com que uma pessoa desenvolva uma determinada manifestao de atopia, pois os mastcitos so iguais. Pessoas atpicas geralmente tm IgE um pouco mais alta no sangue; entretanto IgE srica comea a aumentar quando os tecidos j esto saturados para a sua ligao. Pessoas que no so atpicas tambm podem produzir IgE, quando infectadas por certos antgenos, como helmintos. Quando a infeco debelada, cai IgE. Durante a infeco, a pessoa pode desenvolver atopias, que somem depois. As reaes anafilticas, atravs da degranulao de mastcitos, podem causar vrios efeitos, como aumento da produo de eosinfilos (ocorre tambm na parasitose por helmintos). O choque anafiltico depende dos basfilos, pois so esses que esto na circulao, liberando nesta os seus grnulos. A histamina vasodilatadora e aumenta a permeabilidade vascular, gerando hipotenso e edema. Algumas das manifestaes respiratrias so devidas histamina em animais, mas no ser humano no, sendo causadas por outros mediadores. Nos tecidos h uma fase imediata, predominantemente vascular (vasodilatao; edema e coceira, por estimulao de nervos perifricos). gerada pela histamina, serotonina... Se fosse s isso, estaria bom, pois essas substncias so logo destrudas. Fase tardia: Ocorre aps de 6 a 8 horas, sendo uma reao inflamatria mediada por eosinfilos. Esses produzem determinadas protenas no citoplasma que, quando liberadas, causam danos ao tecido. Se o estmulo for contnuo, h uma inflamao crnica por eosinfilos, lesando os tecidos (comum no nariz do paciente com rinite alrgica, ou no pulmo do asmtico). No pulmo do portador de asma alrgica, a cronificao pode alterar a estrutura do rgo, causando um remodelamento. Essa cronificao

tambm causa alteraes funcionais, como um aumento da sensibilidade a estmulos inofensivos (ex.: hiperreatividade metacolina), no alrgenos, que causem um pouco de broncoconstrico. Essa chamada hiperreatividade broncopulmonar. Assim, o pulmo do asmtico anormal mesmo na ausncia de alrgenos. Os mediadores (produzidos pelos mastcitos) so divididos em prformados e formados de novo. Pr-formados: Histamina; serotonina; heparina; enzimas. A histamina tambm estimula o sistema nervoso, causando prurido, ou dor. A serotonina atua de forma semelhante histamina, potencializando a sua ao. A heparina anticoagulante, mas deve ter outra ao nesse caso. As enzimas provavelmente atuam lesando o tecido. Os anti-histamnicos tm efeito muito grande na fase imediata, pois a histamina o principal mediador dessa fase. So drogas teis principalmente na urticria, em que os efeitos so causados basicamente pela histamina (rinite tambm...); no adiantam muito na asma. Cromoglicatos tm a propriedade de impedir a degranulao dos mastcitos, tendo efeito preventivo (no adiantam depois de iniciado o processo). Formados de novo: Leucotrienos, PAF, prostaglandinas, tromboxanos e citocinas.

Os leucotrienos so os responsveis pela broncoconstrico, aumento de secreo e ativao de eosinfilos. O uso de uma droga que bloqueie a COX (ex.: Aspirina), pode causar uma asma medicamentosa, se a fosfolipase A2 estiver agindo liberando cido araquidnico, que segue obrigatoriamente pela via da lipoxigenase, j que a outra est inibida. A PLA2 normalmente no est ativada. O PAF um fosfolipdio produzido tambm pela ao da PLA2, que tem como funo recrutar clulas inflamatrias, alm de causar broncoconstrico e outros efeitos. O PAF um mediador verstil e potente. Assim, a fase tardia causada por mediadores lipdicos, principalmente os leucotrienos. Por isso esto surgindo novos remdios , na classe dos anti-leucotrienos (pranlukast). Os corticoesterides tambm so eficazes, pois cortam a reao alrgica em vrios pontos, pois possuem vrias aes, como inibio da

PLA2; inibio da inflamao (afeta a diapedese e a infiltrao das clulas); mata as clulas inflamatrias, como os eosinfilos. Entre as citocinas produzidas esto a IL-4 (estimula produo de IgE) e a IL-5 (induz a produo de eosinfilos), que preparam a anafilaxia do futuro. Os corticoesterides tambm impedem a produo dessas citocinas, impedindo esse efeito de cronificao. Certas drogas tambm so utilizadas para controlar reao anafiltica por reaes que nada tem a ver com a imunologia. No caso da asma, por exemplo, usa-se adrenalina, aminofilina, salbutamol. Esses causam broncodilatao (no caso da asma). A adrenalina importante no choque, pois aumenta a PA (atua nos sintomas). Os efeitos benficos da adrenalina so dados por receptores que causam aumento de cAMP. A aminofilina e o salbutamol causam efeitos semelhantes a adrenalina. Aminofilina inibe a degradao de cAMP. Salbutamol estimula receptores -adrenrgicos. Reaes do tipo III Tambm chamadas de reao por imunocomplexos circulantes ou solveis. Doena do soro Causada por tratamento com soro. Causa manifestaes que incluem febre, dor, leses de pele (eritema rash), podendo haver eritema nodular, leses nas articulaes (simtricas em ambos os lados do corpo); leso renal (ex.: Proteinria, hematria). Essa doena tende a desaparecer com o tempo. A probabilidade de desenvolver a doena do soro grande se a inoculao ocorrer muito tempo aps uma primeira vez. Pode ocorrer tambm algum tempo aps a primeira exposio. Na histologia, v-se que as leses so inflamatrias: Infiltrao neutroflica (leso tecidual) em locais contendo grandes quantidades de antgeno, anticorpo e complemento (C3). Na verdade, h deposio nos tecidos do complexo antgeno-anticorpo, seguido de ativao do complemento, o que acaba por atrair neutrfilos. Pode ocorrer quando antgeno e anticorpo esto na circulao (doena do soro), ou quando antgeno ou anticorpo esto na parede do vaso, e o outro migra at ele, causando a reao de Arthus, rica em neutrfilos, na parede de um vaso (ou prximo a ele). A maior parte das reaes por imunocomplexos so vasculites. Nenhum dano ocorre enquanto no houver infiltrao neutroflica. Na verdade, complexos antgeno-anticorpo formados em condies ideais (quando h muito antgeno e anticorpo) no causam reao. Os que causam so os que possuem muito antgeno e pouco anticorpo. H precipitao de complexos antgeno-anticorpo na zona de equivalncia (1 anticorpo : 1 antgeno). Os que no precipitam (mais antgeno ou anticorpo) so chamados solveis. In vivo, os complexos precipitados so facilmente eliminados, por fagocitose, por exemplo: Quando possuem muito anticorpo,

tambm so rapidamente eliminados, pois h muitas pores Fc expostas (como se fosse uma opsonizao). Entretanto, os que tm mais antgeno tm uma meia-vida muito maior, pois possuem menos oferta de Fc, ficando na circulao por muito mais tempo. Esses complexos s causam doenas quando se depositam nos tecidos. Isso ocorre principalmente nos seguintes tecidos: Rim; articulaes; pele; plexo coride; endocrdio. O fato desses tecidos prenderem esses complexos pode ser explicado pela filtrao (rim; articulaes), por serem muito vascularizados (plexo coride; endocrdio). No caso da pele, no se sabe a razo. Normalmente esses imunocomplexos no causam doena, pois esto em pequena quantidade. Ex.: Glomerulonefrite ps-estreptoccica; Febre reumtica (atinge principalmente o endocrdio, atinge plexo coride). OBS: No caso da doena do soro, os antgenos em excesso so as protenas do soro de cavalo, e os anticorpos so os do receptor. Por isso, quando recebe soro muito depois, o nmero de anticorpos j caiu bastante. Normalmente, quem j teve doena do soro, no tem de novo, pois ter uma resposta secundria, com muitos anticorpos produzidos rapidamente (doena do soro limita a eficincia desse). Doenas virais (pois h viremia Muitos vrus na circulao antes de muita produo de anticorpos), que geram respostas inespecficas causadas por complexos imunes.

Esquistossomose A esquistossomose aguda causada por uma doena do soro, causada por antgenos do schistosoma que formam imunocomplexos, assim como no caso da malria (que afeta 1 bilho de pessoas no mundo). Esses processos so normalmente autolimitados, porque a tendncia que esses complexos sejam eliminados, ou por aumento de anticorpos, e assim alterar a conformao do complexo, ou por fagocitose mesmo na forma original, por neutrfilos (esses vo para o local tentar fagocitar os complexos). Essa fagocitose tambm pode ser frustrada, quando o neutrfilo no consegue englobar o complexo e elimina o contedo granular no tecido, causando leso. Eritema nodoso leproso Ocorre tambm na sfilis. Ocorrem na fase tardia da doena (aps vrios anos), gerando reaes sistmicas graves. So parasitas intracelulares, que ficam escondidos dos anticorpos, no entrando em contato com eles. A reao ocorre no momento do tratamento, em que muitos antgenos so liberados. No caso da lepra (tuberculide), a pessoa pode reagir bem, causando inflamao, o que causa as leses visveis. Outras pessoas no reagem, e h maior quantidade de bacilos por todo o corpo, dentro das clulas, no sendo identificadas como leprosas, porque no tm leses, sendo chamadas lepromatosas. So essas pessoas que desenvolvem reao durante o tratamento; ou em caso de reao do sistema imunolgico.

Doenas auto imunes Artrite reumatide, lupus eritematoso sistmico, esclerose sistmica. Tambm so formados imunocomplexos. So produzidos auto-antgenos, para os quais so formados auto-anticorpos. Como os antgenos esto em todo o corpo, h mais antgeno que anticorpo. Na artrite reumatide, o autoantgeno IgG, para a qual formado um auto-anticorpo, que geralmente IgM (fator reumatide anticorpo que reconhece IgG). No lupus e na esclerose sistmica, h vrios auto-antgenos, inclusive DNA e RNA. Por isso, podem aparecer clulas fagocitrias (neutrfilos) que fagocitaram o ncleo de uma outra clula, coberto por anticorpos, formando uma clula LE (Lupus eritematoso), que mostra 2 ncleos, e serve para diagnstico dessa doena. 18/10/2000 Hipersensibilidade Tipo I: Mediada por IgE Tipo II: Mediada por anticorpos Tipo III: Mediada por imunocomplexos em geral no sistmicas Tipo IV: Mediada por linfcitos T Tipo II: Fenmenos mais localizados, pois os anticorpos se ligam a antgenos fixos ou a clulas (ex.: Na matriz extracelular). Relacionado a ativao do complemento e recrutamento e ativao (mediados por Fc) de clulas inflamatrias. A ativao do complemento leva lise celular, fagocitose e atrao de clulas inflamatrias. So muito importantes os receptores de Fc e de C5a. Os anticorpos podem se ligar a receptores (como o de acetil colina, na placa neuromuscular), impedindo a ligao do ligante (ach Causa miastenia gravis). Em outra situao, o anticorpo pode se ligar e estimular o receptor, estimulando-o, como no caso da doena de Graves, em que o anticorpo se liga ao receptor de TSH, causando um hipertireoidismo. Na hipersensibilidade, esses mecanismos perdem o controle, tornando-se patolgicos. Podem causar anemia hemoltica; prpura trombocitopnica (antgenos nas plaquetas), anemia perniciosa, etc. Tipo IV: Mediada por linfcitos T. Forma lepromatosa: Produz pouco interferon- e muita IL-4, que desativa M (interferon- ativa). A forma mais importante de tipo IV causada por CD-4, que produz muito interferon-, ativando M excessivamente.

PPD baseado num fenmeno chamado hipersensibilidade (tardia) retardada. O Mycobacterium tuberculosis no normalmente totalmente debelado do organismo, havendo continuamente clulas T CD4 efetoras circulantes (monitoram o organismo). No PPD, inoculada uma certa quantidade de componentes do antgeno que so reconhecidos por esses CD4, que geram respostacom atrao de M e CD4, edema e eritema. O reconhecimento do antgeno na reao depende de CD4 especficos para esse, assim, ocorre quando a pessoa j foi previamente infectada, ou j foi imunizada, ou, quando recebe experimentalmente clulas CD4 ativadas de algum imunizado ou infectado. Isso ocorre pois no se consegue destruir os bacilos completamente, havendo a contnua ativao de TH1, com formao de granulomas (clulas epiteliides, clulas gigantes e linfcitos), que isolam as clulas infectadas. O PPD no causa doena; a hipersensibilidade tardia normal quando j se entrou em contato com o antgeno. Resposta Integrada Agresso Febre: uma reao de defesa conservada na evoluo. No existe somente nas infeces; pode ocorrer tambm quando h queimadura extensa, leso tecidual extensa. defesa contra agresso e no contra infeco especificamente. Tenta-se controlar a febre pois, em crianas e indivduos mais vulnerveis, febre alta por longos perodos, pode causar leso do SNC (convulso febril). A febre em geral benfica e informativa, podendo auxiliar no diagnstico e evoluo da doena. Pirognios: Qualquer substncia ou agente capaz de causar febre. Esses contm alguma molcula que causa febre. Bactrias mortas causam febre, pois contm substncias pirognicas. Pirognios endgenos: Substncias que causam febre produzidas por clulas endgenas, quando h presena de pirognios externos (exgenos). Foram as primeiras citocinas descobertas (so as citocinas inflamatrias: IL1, TNF, IL-6, IL-8). O principal pirognio exgeno o LPS (Gram -), que extremamente potente. Os pirognios exgenos s causam febre indiretamente, atravs dos endgenos. muito ativo, mesmo em baixas concentraes, por isso devese evitar a contaminao de soros equipos. Vrus tambm podem causar febre (no todos). Supe-se que essa seja causada pelos interferons, e , no caso da infeco viral inicial, que so patgenos endgenos. A febre uma elevao da temperatura corporal controlada, de forma que a temperatura mais elevada estvel. Aumenta a gerao de calor e diminui a perda de calor. A perda ocorre principalmente atravs da pele;

evita-se desviando o fluxo sanguneo da pele (vasoconstrico). A gerao de calor ocorre por contrao muscular, atravs de calafrios e aumento do tnus muscular. O SNC determina a estabilizao da temperatura. A funo da febre o controle da multiplicao microbiana. No s bactrias, mas fungos e vrus tm sua reproduo diminuda. A reproduo desses (bactrias) depende de ferro, que entra por transporte. O calor inibe esse transporte. De alguma forma, inibe o crescimento viral tambm. possvel que a febre prejudique a captura de outros nutrientes, alm de aumentar o metabolismo de linfcitos B. Antipirticos so substncias que diminuem a febre. Ex.: cido acetil saliclico. Existem formas de febre sensveis aspirina (mais comuns) e outras resistentes. AAS diminui a febre pois inibe a produo de prostaglandinas no SNC (no so as prostaglandinas no local de inflamao que causam a febre, pois no chegam at l). O fato de aspirina no diminuir a febre em alguns casos significa que essa no gerada somente por prostaglandinas: IL-1, IL-6 e TNF Causam febre atravs de prostaglandinas. IL-8 causa febre sem prostaglandinas (deve-se dar banho frio). Reao de fase aguda: Muito relacionada febre. So protenas de fase aguda. A primeira foi a protena C reativa (CRP), presente em qualquer pessoa que tem uma doena grave. Protena C reage com polissacardeos de pneumococos. O plasma se modifica (fica com essas protenas). Toda vez que o organismo sofre uma agresso (infeco, trauma fsico, psicolgico), a protena C reativa interage com o sistema complemento, aumentando a sua atividade microbicida. Os reagentes de fase aguda podem aumentar com a agresso (maioria), sendo chamados positivos, ou diminuir (negativos), como a albumina. Positivos: Podem ser elementos da coagulao (fibrinognio); componentes do sistema complemento (C3); protenas microbicidas (transportadoras de ons + neutrfilos Ligam os ons, entram nos neutrfilos e ainda os ativam mais), - Sequestro de ons (ferro; cobre); antiproteases (diminuem a destruio tecidual, 2 macroglobulina; funo desconhecida (SAA) Usado como indicador de doena. As protenas de fase aguda so induzidas pelas mesmas citocinas da febre, principalmente a IL-6. So todas produzidas no hepatcito, que pra de fazer albumina e passa a produzir essas protenas. Fibrinognio produzido pois o agredido pode estar sangrando. Produz C3 porque esse gasto numa infeco bacteriana. Essas protenas ajudam a monitorar a existncia de agresso, doena; acompanham melhoria, recada. O aumento dessas protenas causa aumento da viscosidade do sangue, o que uma das razes do aumento de VHS (velocidade de hemosedimentao).

O LPS tambm conhecido como endotoxina, pois no secretado; s sai quando a bactria lisada. Por isso, a bactria Gram morta capaz de causar febre e at matar, se injetada em grandes quantidades (endotoxinemia). Isso semelhante ao que ocorre no caso de uma infeco sistmica Septicemia, hoje chamada sepse (nem sempre h bacteremia). O quadro da sepse semelhante ao da sepse (disfuno generalizada). Na sepse h problemas da nutrio tecidual. Toda pessoa que tem sepse apresenta problemas metablicos: Dificuldade de pegar CO2 dos tecidos; de liberar O2 ; acidose metablica. Essa deficincia do metabolismo nutricional pode causar at morte de rgo, causando o choque sptico. A sepse uma resposta patolgica do sistema imune presena de infeco. Mesmo se o agente infeccioso for retirado (debelado), a sepse pode continuar. Assim, toda infeco potencialmente perigosa e deve ser tratada! 80% dos pacientes com sepse morrem. Infeco local pode causar sepse. TNF parece estar envolvido na sepse. TNF em excesso mata! Sepse Quadro de disfuno generalizada sistmica, com deficincia da nutrio dos tecidos. Presente em casos de infeco dos mais variados tipos, mesmo sem o achado de bactrias na circulao. Influncia do SNC sobre a imunidade A vontade de se curar influencia no processo de cura. Pessoas que entram em depresso tendem a desenvolver cncer. Esse processo envolve a produo de citocinas!

A diminuio da produo de TH1 desvia a via para a produo de TH2, atravs do aumento de IL-4. O aumento de TH2 causa aumento de alergia. Os glicocorticides causam alergia nessas pequenas concentraes. Em doses farmacolgicas, melhora.

Pessoa fica estressada Alergia Toma glicocorticides Melhora da alergia Pra de tomar glicocorticides Continua estressada Volta aos nveis baixos de glicocorticides Volta a alergia...