Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez REVIEW TERAPIA GNICA DEL VIH Y OTRAS

ENFERMEDADES VIRALES Jacqueline Chvez1, 2, Jennifer Rodrguez1 RESUMEN

En la actualidad la terapia gnica ha abarcado un sin nmero de enfermedades que no tienen una vacuna establecida y que en su mayora de casos presentan un alto ndice de mortalidad mundial, es por esto que la terapia gnica pone en prctica mltiples investigaciones in vitro e in vivo con diferentes modelos de experimentacin para el tratamiento de algunas enfermedades virales entre las que se encuentran el VIH, la hepatitis B y C , el virus de la rabia, el dengue y la fiebre amarilla, gracias a esta nueva propuesta de terapia se ha logrado un alto porcentaje de reduccin en la carga viral aunque no se ha logrado una erradicacin total, esta terapia abre nuevas puertas de investigaciones para que en un futuro no muy lejano se pueda garantizar una mejor calidad de vida. Palabras claves: terapia gnica, genes, virus, enfermedad, inhibicin, reduccin. ABSTRACT Currently, gene therapy has involved a number of diseases that have no established vaccine and in most cases have a high mortality rate worldwide, which is why gene therapy research implements multiple in vitro and in live experimentation with different models for the treatment of viral diseases among which are HIV, hepatitis B and C virus, rabies, dengue and yellow fever, thanks to this new proposal of therapy has been a high percentage of reduction in viral load but has not achieved total eradication this therapy opens new doors for research in the near future can be guaranteed a better quality of life. Keywords: gene therapy, genes, viruses, disease, inhibition, reduction. INTRODUCCIN La terapia gnica es una tctica teraputica que se basa en modificar el patrimonio gentico de determinadas clulas somticas mediante la administracin de secuencias de cidos nucleicos, se han trabajado con dos tipos de tcnicas in vivo o ex vivo en la que se utilizan vectores de transferencia ya sean virales o no los cuales se encargan de portar el gen teraputico a la clula de inters (clulas diana) , cuya finalidad depende de la enfermedad a tratar , puede reemplazar un gen defectuoso, pueden proteger o fortalecer a las clulas ante cierto dao, puede provocar la muerte de clulas dainas etc. todo aquello que induzca la muerte celular programada o apoptosis y as mejorar el tratamiento de enfermedades de origen hereditario o de tipo adquirido, Cmo es el caso del VIH y otras enfermedades virales. (Pierce, 2010)

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez El virus de la inmunodeficiencia humana destruye el sistema inmunitario en forma gradual alterando o anulando su funcin, lo cual hace que para el cuerpo sea ms difcil combatir infecciones. Especficamente este virus destruye una clase de clulas de defensa del cuerpo llamadas linfocitos cooperadores CD4. Estos linfocitos forman parte del sistema inmunolgico del organismo, el sistema de defensa que combate las enfermedades infecciosas (Quinn, 2011). Esta enfermedad es estudiada desde hace mucho tiempo periodo en el cual ha surgido una variedad de vacunas y tratamientos antivirales pero que no han logrado erradicar eficazmente el virus dado a su gran capacidad de mutar y de engaar el sistema inmune, es por esto se quiso implementar una terapia que apoyara los tratamiento convencionales y que a un largo plazo pudiera erradicar este virus que se ha convertido en causa de muerte de grandes poblaciones del mundo. (Chono et al., 2011) Actualmente existen varias investigaciones de terapia gnica en VIH y de otras enfermedades virales como lo son la hepatitis B y C, el dengue, la fiebre amarilla, y el virus de la rabia ; tomando como objeto de estudio animales y seres humanos, as probando diferentes genes teraputicos que permitan disminuir o erradicar a corto y a largo plazo esta carga viral que ataca las defensas del cuerpo posesionndose de un tejido en particular; en esta revisin se darn a conocer algunos de esos estudios que se han venido desarrollando en los ltimos aos y as mismo la importancia que genera cada uno de estos genes teraputicos para suprimir la replicacin del virus.
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TERAPIA GENICA CONTRA EL VIH Un primer estudio muestra la utilizacin del gen MaZF una toxina que juega un papel en la regulacin del crecimiento en condiciones de estrs en E. coli (Uniprot. 2012).Transduccidas con un vector retroviral MT-MFR-LP2 en clulas TCD4 autologas de un primate (cynomolgus macaques) estas clulas desempean un papel muy importante en establecer y maximizar las capacidades de defensa del sistema inmunitario, por lo tanto son el punto blanco del VIH. (12) MazF puede actuar como un endoribonucleasa (RNasa) que corta especficamente secuencias ACA de ARNm viral. (Chono et al., 2011) Cada uno de los primates fue intravenosamente inoculado con las clulas modificadas (MazF-Tmac + TCD4) listo para la activacin de este complejo despus de la infeccin del virus as solo cortara secuencias del virus y no de la clula, teniendo en cuenta que el virus del VIH tiene 240 secuencia de ACA es difcil que este virus tenga posibilidad de sobrevivir. (Chono et al., 2011) Esta investigacin midi la supervivencia de estas clulas durante seis meses despus de la inoculacin observando la desaparicin del gen teraputico al pasar el tiempo sin embargo la accin perdura en un porcentaje elevado inhibiendo as la replicacin del virus, adems se examin la distribucin de estas clulas modificadas en el cuerpo del primate observndose en los tejidos distales linfoides tales como varios ganglios linfticos y el bazo. El Anlisis histopatolgico de los tejidos revel que

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez no haba lesiones relacionadas con las clulas modificadas. (Chono et al., 2011) Este estudio refleja que el trasplante antlogo de clulas TCD4 con genes MazF es una estrategia atractiva para la terapia gnica del VIH. Dado a la utilizacin de anticuerpos neutralizantes en la terapia convencional se ha generado mltiples resistencia debido a la gran capacidad de mutacin del VIH, por la cual no ha generado xito alguno. Estos anticuerpos no son producidos en un nivel adecuado en pacientes infectados por lo tanto el sistema inmunolgico no logra combatir adecuadamente este virus. (Aviva et al., 2010) la terapia gnica constituye una herramienta fundamental para suplementar estas necesidades, previamente se utiliza un tratamiento endgeno en el que se construye un vector lentiviral que secrete un antgeno neutralizante 2G12 , que en estudios anteriores ha demostrado una gran capacidad de eliminar cepas de VIH. se utiliz como modelo experimentacin el ratn ( NOD / SCID), el cual fue inoculado por va intravenosa con clulas madre hematopoyticas humanas (huHSC) junto al lentivirus modificado (anticuerpo neutralizante) ,se repite el procedimiento de la inoculacin del lentivirus modificado pero por va intraperitoneal y utilizando clulas T y as se desarrolla la infeccin in vivo del VIH, procediendo a medir la eficacia de este anticuerpo. (Aviva et al., 2010) Posteriormente se utilizan diferentes lneas celulares (clulas B, clulas T293, clulas NSO) inoculadas in vitro con el
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lentivirus modificado y sin modificar (control) para evaluar la presencia de este anticuerpo en las clulas; los ratones injertados (con hu-HSC + lentivirus modificado) muestran una marcada inhibicin in vivo de la infeccin por VIH que se observa al a ver una reduccin de 70 veces en los niveles de ARN del VIH en plasma y una gran reduccin del nmero de clulas infectadas en el bazo de los ratones frente al control , finalmente las lneas celulares revelaron porcentajes de 3080% en cuanto a la presencia del lentivirus modificados. (Aviva et al., 2010) Estos resultados apoyan la eficacia condicional del enfoque de terapia gnica usando vectores lentivirales que codifican una mezcla de anticuerpos ampliamente neutralizantes contra el VIH, este tratamiento es otra posible fuente de ayuda a la erradicacin total de este virus. Se explora una nueva intervencin teraputica duradera sobre la base de una terapia gnica que induce ARN de interferencia (RNAi) contra el VIH-1, basada en la transduccin de clulas progenitoras hematopoyticas humanas (HPC) con vectores lentivirales (R3) que codifican los ARN de horquilla corto (shRNA) los cuales expresan siRNA funcionales encargados de inhibir la expresin de genes especficos en regiones conservadas del ARNm del virus. A partir de esto se prueba la eficacia y seguridad de shRNA en las clulas CD4 encargadas de la defensa del organismo, se usa como modelo el ratn el cual es inoculado con el vector (lentivirus) y ShRNA. (Knoepfel et al., 2012)

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez Este estudio analiza 135 candidatos de shRNA con el fin de buscar la combinacin con mayor potencial para inhibir las diferentes cepas de VIH. A travs de pruebas in vitro e in vivo se evala la actividad antiviral y la citotoxicidad, a partir de esto se descarta la gran mayora de candidatos debido a la resistencia derivada del virus y a la baja actividad antiviral, as quedando solo tres shRNA generando una combinacin con alto grado antiviral siendo fcil el acondicionamiento en el genoma de las clulas sin causar dao alguno. Dado a los resultados de este estudio en un futuro se puede lograr una reconstitucin del sistema inmune al generar clulas T CD4 + que no son susceptibles para a la replicacin del VIH-1. (Knoepfel et al., 2012) Un nuevo enfoque de terapia gnica se ha estudiado con el fin de buscar ms sitios de accin contra el VIH, clulas CD34 autlogas son transducidas con OZ1 un virus de la leucemia murina que contiene un gen que codifica una ribozima que acta como "tijeras moleculares" manipulando el RNA fcilmente, logrando inhibir la sntesis de protenas que da como conclusin la desintegracin del ARNm del VIH, OZ1 es modificado genticamente para obtener resultados favorables en secuencias especficas y as destruir el virus, ensayos in vitro fueron realizados para transducir clulas CD34 autlogas las cuales fueron inyectadas va intravenosa en 74 adultos infectados con VIH-1 , se interrumpen cualquier tratamiento antirretroviral para dejar actuar nicamente a la ribozima. (Mitsuyasu et al., 2009)

No observaron problemas de seguridad asociados con el tratamiento OZ1, la carga viral no disminuye significativamente en 48 semanas sin embargo de 40-100 semanas se dio una inhibicin de virus estadsticamente significativa. (Mitsuyasu et al., 2009) Este estudio apoya que OZ1 transducido en clulas CD34 utilizado como terapia contra el VIH es segura y tiene una eficacia mnima debido que el nivel de las clulas transducidas fue relativamente baja, especialmente por 100 semanas, todo esto conduce a que es posible mejorar la eficacia si se mejora el nmero de clulas marcadas, para as obtener resultados ms amplios que puedan ser utilizados como terapia gnica en pacientes con VIH positivo. (Mitsuyasu et al., 2009) las clulas TCD4 son un subgrupo de linfocitos que cumplen un papel muy importante en establecer y maximizar las capacidades de defensa del sistema inmunitario (Vaque y David, 2012) estas clulas presentan dos tipos de coreceptores (CCR5 y CXCR4) que permiten la entrada del VIH, si estos cofactores se interrumpen o se bloquean el virus que incapacitado para entrar a estas clulas. (Highleyman, 2011) a partir de esto se establece un nuevo enfoque de la terapia gnica en la que se utiliza dedo de zinc nucleasas que cumple la funcin de desactivar el gen responsable de la produccin de estos dos co-receptores en las clulas T , un pequeo estudio fue dado para medir la eficiencia de esta nueva terapia gnica, para CCR5 se utiliz como modelo de estudio seis hombres con VIH positivo

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez que mantenan una carga viral indetectable pero sus clulas CD4 estaban gravemente afectadas las cuales fueron extradas por un procedimiento de afresis y se inocularon con un vector de adenovirus que portaba el dedo de zinc nucleasa, provocando una ruptura de ADN en el gen CCR5 , el 25% de clulas fueron transducidas con xito, no se observaron efectos colaterales graves al realizar este procedimiento , en todos los pacientes las clulas CD4 proliferaron de una manera normal solo el 7% de estas clulas mostraron supresin de CCR5, aunque es un porcentaje bajo es un buen resultado debido a que los individuos experimentales fue mnimo. (Highleyman, 2011) Para al co-receptor CXCR4 se utiliza un procedimiento similar al anterior, pero se escoge como modelo a los ratones los cuales fueron inoculados con estas clulas CD4 modificadas, en la que se presenta un efecto protector pero que con el tiempo empieza a disminuir. Diferentes estudios han mostrado que se puede alterar estos dos receptores en una misma clula lo que promete un resultado exitoso a largo plazo; aunque estos procedimientos en la actualidad son de elevado costo se podran convertir rentables si solo una modificacin celular basta para eliminar el VIH en comparacin de los tratamientos antirretrovirales que tienen que ser suministrados durante toda la vida. (Highleyman, 2011) Dado todos los estudios anteriormente nombrados sobre modelos de terapia gnica para erradicar del VIH, se plantea una combinacin de terapias gnicas
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para asegurar la inhibicin de este virus en un mayor porcentaje aumentado la resistencia en las clulas madres hematopoyticas. Este estudio se realiz en cuatro pacientes con VIH y compone la utilizacin de una enzima de ARN que no permite la codificacin de la protena CCR5 quien es una de las encargada de posibilitar la entrada del VIH a las clulas husped, aunque esta protena no es garanta de la entrada del virus debido a que el VIH engaa a la clula utilizando mltiples formas de penetrarla. (Katsnelson, 2010) Se disea otro mtodo de ataque que aumente las posibilidades de supervivencia de las clulas, se incluye un seuelo ARN que interfiere con la protena tat que juega un papel importante en la replicacin del virus, y se utiliza el ARN de interferencia que permite degradar el mensaje que codifica para la protena viral tat evitando con variados mecanismos la resistencia. En la mayora de Pacientes las clulas madres hematopoyticas continuaron por varios aos produciendo estos RNAs asegurando la proteccin celular en un porcentaje significativo. (Katsnelson, 2010) Este triple punch contra el VIH es una estrategia que se est extendiendo en un mayor nmero de pacientes con VIH positivo, disminuyendo la carga viral en su organismo y as asegurando una mayor calidad de vida. TERAPIA GNICA HEPATITIS B CONTRA LA

La hepatitis B es una infeccin heptica potencialmente mortal causada por el virus de la hepatitis B (VHB) que produce

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez irritacin e inflamacin del hgado hasta llegar a la necrosis celular especficamente de los hepatocitos (OMS, 2012). La envoltura de este virus posee un antgeno viral de superficie el HBsAg que contiene protenas que permiten la entrada a la clula, como preS2 que se une a pHSA (albumina polimerizado de suero humano) presente en los hepatocitos invadiendo estas clulas y posteriormente causando la muerte celular. (Zhang et al., 2012) Se ha trabajado con preS2Ab un anticuerpo que puede ayudar a eliminar el VHB , para esto se utiliza un adenovirus como vector que porta los genes preS2Ab; se escoge los ratones ICR como modelo experimental en los cuales fueron inoculados clulas hepticas L02 que estaban modificadas con el vector y posteriormente fueron infectadas con sangre de pacientes con VHB. El anticuerpo preS2Ab se expresa con xito en las clulas dando como resultado la reduccin del nivel de HBsAg indicando la inhibicin del VHB. (Zhang et al., 2012) Todos los ratones ICR fueron inducidos con cirrosis heptica y ndulos cancerosos que tratados con preS2Ab mostraron un alivio y disminucin significativa del tamao de los ndulos, lo que muestra que preS2Ab tiene un efecto inhibidor contra la carcinognesis hepatocelular y adems puede proteger la funcin heptica; estos resultados son un buen indicio para eliminar el virus de la hepatitis B. (Zhang et al., 2012) Un modelo de terapia gnica que ha sido muy utilizado en enfermedades como el sida es el uso de RNA de interferencia en

el cual se han obtenido muy buenos resultados al causar el silenciamiento de genes en el ARNm del virus; este tipo de terapia se ha implementado contra el virus de la hepatitis B. (Hean et al., 2010) En este tratamiento los siRNAS se han modificado qumicamente con altritol (ANA) suministrado por lipoplex para obtener una mayor eficacia y precisin al destruir el Virus de la hepatitis B (VHB) (Hean et al., 2010) Se evalu la efectividad y la hepatoxicidad de cuatro siRNAS in vitro en clulas derivadas del hgado (hih7) frente al mayor porcentaje de inhibicin del VHB y posteriormente es inoculado por va intravenosa en ratones para examinar su eficacia in vivo, Basado en la observacin el siRNA 3 fue el ms eficaz en un 80 % por lo tanto se seleccion para su posterior anlisis. (Hean et al., 2010) A partir de todos los ensayos realizados anteriormente se obtiene como resultado que en diferentes porcentajes de efectividad los siRNAs ANA son capaces de silenciar la replicacin del VHB in vitro y se muestra una marcada disminucin viral en el plasma de los ratones sin presentar grados de hepatoxicidad. (Hean et al., 2010) A partir de este estudio se da la posibilidad de trabajar con una nueva clase de silenciamiento de secuencias siendo potencialmente ms eficaz y ms estable, que permitan obtener mejores resultados para el tratamiento contra el VHB. TERAPIA GNICA HEPATITIS C CONTRA LA

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez La hepatitis C Es una enfermedad que produce inflamacin en el hgado debido a que el virus de la hepatitis C (VHC) induce directamente el estrs oxidativo en los hepatocitos causando muerte celular (OMS, 2012). este virus expresa una protena BACH1 quien controla de manera conveniente a la enzima HMOX1 encargada de actuar como citoprotector, catalizador de la degradacin del hemo, generadora de hierro ferroso, monxido de carbono y biliverdina ; generando as un efecto antioxidante y anti inflamatorio en las clulas del hgado. (Hou et al., 2010) A partir del efecto negativo que produce la protena BACH 1 se propone el uso de micro ARN (miARN-196) quienes son una clase de RNA no codificantes que tienen la capacidad de regular la expresin de otros genes, en este caso se prob el efecto in vitro de este miARN-196 en dos lneas celulares (hih7, con1) evaluando su potencial de regulacin de protenas y la inhibicin del VHC. los resultados muestran que miARN-196 cumple un papel muy importante en la regulacin de BACH1 pues suprime la expresin de este dejando que HMOX1 pueda ejercer sus funciones de proteccin en las clulas evitando algn dao en los hepatocitos; cuando la expresin gnica de esta protena fue silenciada se redujo los niveles de replicacin del VHC en un 40 %, esto puede ser debido a que los miRNA cuando muestran una complementariedad imperfecta en alguna regin del ARNm generalmente se presenta una inhibicin en la traduccin. (Hou et al., 2010)

Los miRNA-196 abren la puerta a una nueva promesa de estrategia teraputica para combatir el virus de la hepatitis C, dando como beneficio la mejora y la proteccin de las lesiones hepticas. La gran habilidad de replicacin del virus de la hepatitis C en las clulas diana del hgado ha dejado un sin nmero de personas infectadas crnicamente se ha demostrado la presencia elevada de pequeas molculas de RNA (miR-122) en el hgado necesarias para la replicacin del virus , a partir de esto se estn estableciendo terapias gnicas para reducir la carga viral y posteriormente llegar a la erradicacin de este virus.se pone en prctica la utilizacin de un medicamento SPC3649 basado en el ADN desarrollado a partir de LNA (cido nucleico cerrado), pues este se ha demostrado que tiene gran efecto inhibidor en una molcula de ARN microRNA122.(Lanford et al ,2010) Para esta nueva terapia antiviral Se ha utilizado un modelo de cuatro chimpanc los cuales son infectado por VHC , seguidamente Se evala el potencial antiviral de SPC3649 suministrado en una dosis baja y una dosis alta a partir de biopsias hepticas, analizando la toxicidad que se podra generar en el tratamiento. Los resultados muestran una marcada supresin del VHC a mayores concentraciones de SPC3649, el estudio histolgico revelo una marcada inhibicin del RNAm del virus observando una mejora de la patologa inducida por el virus de la hepatitis C. en diferentes ensayos clnicos no se evidencian efectos secundarios generados por el uso de este medicamento. (Lanford et al ,2010)

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez Esta nueva terapia antiviral presenta muy buenos resultados debido al alto porcentaje de inhibicin del virus y al no presentar efectos secundarios muestra una amplia utilizacin no solo en el primates si no en pacientes humanos con VHC. TERAPIA GENICA FIEBRE AMARILLA CONTRA LA

La fiebre amarilla es una enfermedad vrica aguda que en la mayora de casos produce hemorragias, es caracterizada por presentar falla heptica, renal y miocardio en etapas avanzadas, conduciendo a un alto ndice de letalidad. (OMS, 2012) Buscado optimizar los tratamientos para esta enfermedad se propone el uso de un interfern (IFN) una protena encargada de dar una respuesta antiviral a una infeccin dada, siendo el virus de la fiebre amarilla (VFA) Sensible al tratamiento con interfern exgeno; a partir de esto se construye un adenovirus denominado DEF201 que entra a las clulas epiteliales nasales dirigiendo la expresin de un transgen que se traduce para producir IFN que viaja por la sangre para cumplir con su efecto antiviral. (Julander et al .,2010) En un modelo de hmster se suministra diversas concentraciones de IFN para medir la dosis adecuada de inhibicin antes y despus de la infeccin con el virus; se extrae sangre y se procede al sacrificio extrayendo el hgado que permite evaluar la accin antiviral y posteriormente se estima la toxicidad producida por el tratamiento.se analiza que la administracin de DEF201 disminuye significativamente los niveles
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de virus presente en el plasma y en el hgado aunque se presenta mayor efecto antiviral a mayores concentraciones por ende mayor tasa de supervivencia, cada animal en diferentes proporciones aumenta de peso lo que muestra una marcada mejora , la eficacia de tratamiento se debe al inicio del mismo antes que comience los sntomas alcanzando as una tasa de supervivencia del 90% .(Julander et al.,2010) Dado estos resultados se podra evaluar el uso de la produccin in situ y la secrecin de IFN por un vector de adenovirus en humanos puesto que parece ser una manera eficaz de tratar una amplia gama de infecciones virales. TERAPIA DENGUE GENICA CONTRA EL

El dengue es una enfermedad viral con un amplio rango de distribucin que afecta gravemente a los nios, jvenes y adultos, se caracteriza por la aparicin de fiebre constante, dolor de cabeza, dolor en los msculos y cuando pasa a una fase crnica hemorrgica puede llevar a la muerte.(OMS,2012) Generalmente el virus del dengue (DENV) tiene como objetivo principal los monocitos y los macrfagos pero a partir de estudios se ha demostrado que el hgado tambin se constituye como un objetivo principal dado la presencia de antgenos virales en este rgano y la gran mortalidad de la infeccin del dengue se relaciona con la anormalidad heptica. (Alhoot et al., 2012) A partir de esto se evala la capacidad antioxidante de RNAi en clulas del

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez hgado HePG2, con el objetivo de silenciar la expresin del receptor GRP78 de las clulas y de clatrina una protena de endocitosis que permiten el paso del virus al interior de la misma y as bloquear la infeccin del DENV, una combinacin de tres RNAi cada uno con un destino diferente de tres genes especficos GRP78,CLTC y DNM2 en el que se mostr un porcentaje alto de silenciamiento de 87-90 %, posteriormente se cuantifico la carga viral intracelular y extracelular despus de la transduccin y se evidencia una reduccin viral del 92.4 y 71,4% mostrando una supervivencia elevada de las clulas hepticas. (Alhoot et al., 2012) Este enfoque con ARNi muestra resultados alentadores para erradicar cargas virales y prevenir el desarrollo del dengue en una etapa mortal dando como conclusin la disminucin de la viremia en los seres humanos. Cada da se implementan nuevas formas de mejorar las terapias antiretroviral y as asegurar una mejor calidad de vida para aquellas personas que son propensas a adquirir enfermedades virales dado su ubicacin en zonas endmicas. En el caso del dengue que se ha convertido en una enfermedad viral con mayor distribucin en el mundo gracias a vectores como Aedes aegypti y Aedes albopictus quienes se pueden diseminar fcilmente por doquier. (Wu et al., 2010) Una nueva propuesta de terapia gnica es puesta en marcha utilizando RNA de interferencia (siRNA) exgeno que es probado en la lnea celular C6/36

perteneciente a clulas de mosquito en este caso de Aedes albopictus ,se evala el efecto inhibitorio de la replicacin del virus (Den-1) especficamente en la glicoprotena presente en la envoltura del virus, se prob el efecto antiviral con cuatro siRNA dirigidos a diferentes partes del genoma viral, las clulas C6/36 mostraron un xito de tranfeccion con siRNA del 66 % posteriormente hubo una reduccin del efecto citopatico mostrando una alta sobrevivencia celular. (Wu et al., 2010) Cabe destacar que el efecto antiretroviral iba disminuyendo con el pasar del tiempo lo que muestra la necesidad de ms estudios debido a la gran inestabilidad del siRNA. (Wu et al., 2010) Este estudio muestra una nueva alternativa de prevenir esta enfermedad viral aumentando las posibilidades de resistencia de las clulas del mosquito y as disminuyendo los vectores causantes de transmitir el virus del dengue. El virus del dengue puede agruparse en cuatro serotipos antignicamente diferentes, estos serotipos pueden causar una enfermedad grave convirtindose en una amenaza la salud pblica de todo el mundo. Hasta el momento no hay disponibilidad de terapias antivirales para tratar esas infecciones del DENV, por lo que se presenta la necesidad del desarrollo de nuevos productos teraputicos.(Stein et al. ,2011) A partir de esta necesidad se desarrolla una terapia utilizando ARN de interferencia (siRNA - DC-3) que apuntaba a regiones conservadas del genoma viral, utilizando un modelo

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Terapia gnica del VIH y otras enfermedades virales Chvez y rodrguez murino GA129 y diferentes cultivos celulares. Una cepa del virus del dengue (DENV-2) fue probada in vivo en el modelo murino evaluando as la capacidad de inhibicin del siRNA; aquellos ratones que recibieron el ARNsi DC-3 presentaban una reduccin viral significativa aumentando el tiempo de supervivencia con poca prdida de peso durante varios das. (Stein et al. ,2011) Estos resultados sugieren que el siRNA exgena introducida, se combina con la maquinaria de procesamiento de ARN endgeno de interferencia que tiene la capacidad de prevenir la enfermedad del dengue grave. En general, los datos indican que las DC-3 siRNA representa un reactivo til para la investigacin y tiene potencial como un nuevo enfoque para la intervencin teraputica contra los virus del dengue genticamente diversos. (Stein et al. ,2011) TERAPIA GENICA CONTRA EL VIRUS DE LA RABIA La rabia es una enfermedad viral aguda y letal del sistema nervioso central que afecta principalmente mamferos, es producida por la mordedura de un animal infectado causando la neurodegeneracion (OMS, 2012). No existe algn tratamiento para esta enfermedad sin embargo se est implementando el uso de RNA de interferencia (siRNA) encargados de silenciar la expresin de genes presentes en las protenas del RABV que desempean un papel primordial en la replicacin del ARNm. (Yang et al., 2012) A partir de diferentes ensayos in vitro se evaluaron la capacidad de inhibicin de seis RNA de interferencia dirigidos
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especficamente a las regiones conservadas de la nucleoprotena del virus, utilizando clulas (BHK-21) las cuales eran infectadas por una cepa del RABV ; su posterior anlisis indico una marcada inhibicin de la replicacin viral a partir de tres siRNA los cuales fueron posteriormente utilizados con un vector de liposoma para el examen in vivo en ratones que fueron inoculados por va intracerebral , arrojando como resultado una inhibicin parcial del virus asegurando una marcada supervivencia de estos roedores. (Yang et al., 2012) Esta primicia de terapia gnica obtiene buenos resultados aunque no se evidencia una inhibicin total puede ser utilizada como ayudante en etapas tempranas de la enfermedad y as darle el tiempo suficiente para que se puedan generar anticuerpos, acabando de una manera efectiva con el virus de la rabia.

Conclusin
A partir de estas investigaciones la terapia gnica ofrece una posible solucin a largo plazo de muchas enfermedades virales y un mejoramiento en los estudios previos puede generar a gran escala resultados eficaces hacia la culminacin exitosa del tratamiento antirretroviral del VIH, de la hepatitis b y c, la rabia, el dengue, y la fiebre amarilla, disminuyendo as las grandes cifras de mortalidad mundial y as ofreciendo una mejora en la calidad de vida de muchos seres humanos.

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