Imunofenotipagem

HenriSatoJunior FaculdadedeCinciasMdicasdeSantos TurmaXLIX

Divises

Existemduasdivisesbsicasparaasclulas sanguneas: Origem:mieloideoulinfoide Antgenoapresentado:ClusterDesignation

ClusterDesignations
OsClusterDesignationsouCDsomarcadores celularesparamolculasdesuperfcie. OsmaisconhecidossooslinfcitosT,masoutros leuccitoseclulasdeorigemvermelhatambm contemestes.

OstiposdeCDcelulares: CD4:LinfcitosThelper CD8:LinfcitosTcitotxicos CD3:LinfcitosTimaturos CD19e20:LinfcitosB CD45:Linhagemhematopoitica CD56:ClulasNK

Anticorpos

Existem2tiposbsicos: Monoclonais:somentereconhecemumantgeno,o maisespecfico. Policlonal:Reconhecemdiferentestiposde antgenos.

Osantgenospoliclonaistempossibilidadedeseobter umareaocruzadaouseja,podeinterferirem diferentesantgenos. Umexemploclssicodereaocruzadasodos anticorposdavacinadaBCGocasionandoreao cruzadacomaM.Lepraeounarelaodaforma hemorrgicadadenguecomaimunidadede diferentessorotipos. Reaescruzadassofatoresdeterminantespara falsopositivo.

MarcadoresFlorescentes

Omarcadoresfluorescentessousadosparamarcar componentescelularesdesejados. Oselementosusadossoosfluorcromos,os componentesmolecularesquedevidamente preparadosemitemfluorescncia. Sousadosemconjuntocomanticorposmonoclonais paraaagregaodoelementodesejadoe visualizao

Citometriadefluxo

Mtodolaboratorialbaseadonadetecode partculasemmeiofluidosubmetidoafluxoderaios laser(geralmenteargnio). utilizadoemconjuntocommarcadoresflorescentes emolculasativadorasdebiolumenescncia. ummtodoqualitativoequantitativopoispermite classificartiposcelulareseacontagemdesses grupamentos(Sorting)

Qualitativo:,permitequandoseusaummarcadorde membrana. Quantitativo:atravsdaimunofenotipagempara contagemdesubpopulaesdeclulas.

Funcionamento

Consisteem3fases: Fluido:Apassagemdasmolculasnumfunil ptico:AplicaodoLaserparaanalise Eletrnico:computaodedadosobtidos

Esquemadecitogramamostrando as3faseseosistemadeanalise

Fludo

Afasefludaconsistenoafunilamentoporumtubo salinoeasclulasnummeioliquidoisotnicoparaa analisedolaser. Podesedecidiromeiodeafunilamentoregulandoa pressodoar.

ptico

Umsistemadelaserseespelhosdirecionamo espectrodeluzeumsistemadeespelhosnotubo fludodetectamosfatoresqueforamdispostose preparadosadesejo. Adetecoconsisteumsistematridimensional: Frontal(FSC)quemedeotamanhodaclula Lateral(SSC)Informaaestruturainterna

Eletrnico

Consistenacaptaodesinaisdolasere computaodasinformaesobtidas. Osdadossocolocadosemumcitograma

Citogramacomparativo

Osistemadecomputaoseexibeem4quadrantes apartirdoquadrantesuperioresquerdoemum mtodocomparativocomosfluorocromosusados paraacitometriaempauta:

Q1:positivoparaflourcromoA Q2:positivoparafluorcromoAeB Q3:ambosnegativos Q4:PositivoparafluorcromoB

Existemoutrosmtodosdecitogramacomo marcadoresdegenesapoptoticosoudequalificao deleuccitos

Citogramacomparandoqualificaes dosleuccitos

Utilidades

A Citometria de fluxo tem como funo a fenotipagem a partir da imunidade ento um objeto de estudo perfeito para diferentes tipos de doenas.

Como o mtodo relativamente complexo e caro, se reserva geralmente quando no h mtodo mais barato, estudos cientficos onde o PCR no possvel ou que a necessidade na sensibilidadesejagrande.

Exemplificaode analisedelinfcitosT

Suasutilidadesseimplicamemlocalizarmarcadores, classificlosouquantificlosousejatudoquepode sermarcadoanticorpospodeserutilizvel DNAemmarcadorestumorais PopulaodeclulasT Marcadoresdeantgenoparadoenasautoimunes Populaodeclulassanguneasemgeral