4

Fecundacin in vitro
Hugo Hernndez Fonseca, MV, MSc, PhD Ctedra de Fisiologa Animal, Departamento de Biologa Animal Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad del Zulia. Maracaibo-Venezuela ~ hjhernan@cantv.net

El fenmeno o proceso a travs del cual el espermatozoide o clula masculina es capaz de unirse y penetrar la clula femenina u vulo para formar un nuevo individuo bajo condiciones de laboratorio (fuera del organismo animal) se conoce como fecundacinin vitro (FIV). La habilidad de imitar exitosamente este proceso biolgico en el laboratorio esta basada en aos de estudio y experimentacin. En la actualidad, luego de la produccin de Virgilio (primer becerro in vitro del mundo en EEUU por el equipo de Benjamn Brackett en 1981) y a 4 aos de los primeros becerros in vitro nacidos en Venezuela logrados por el equipo de Hugo Hernndez, podemos afirmar que han existido suficientes experiencias experimentales, a campo y comerciales, que permiten al FIV comenzar a asistir al productor agropecuario en la difcil tarea de incrementar la produccin de protenas de origen animal. La fecundacin in vitro permite que el semen del toro o sementales de casi cualquier especie domstica, pueda penetrar y fecundar el vulo de la vaca u otra hembra. El semen del toro debe ser preparado al igual que el vulo de la vaca para que ocurra la fecundacin dentro de envases plsticos estriles (placas de petri) en el laboratorio. Los embriones resultantes permanecen embebidos en medios de cultivo lquidos enriquecidos con nutrientes que el embrin necesita para desarrollarse y crecer. Debemos entender que el producto de estas fecundaciones en el laboratorio es un conceptus o embrin que permanecer en la placa de petri por 7 a 8 das, antes de ser utilizado (congelado, transferido, desechado o estudiado). En los actuales momentos, no existe la tecnologa suficiente para lograr la capacidad de mantener el embrin en condiciones in vitro ideales como para permitir al embrin que se desarrolle hasta que este se convierta en feto o en un becerro. De manera tal, que esta tecnologa solo nos permite ejercer un control sobre las condiciones de formacin, crecimiento y desarrollo de embriones bovinos durante la primera se-

www.venezuelaganadera.com

616 / Hugo Hernndez Fonseca mana de vida, donde se han comprobado signos de viabilidad de este embrin antes de transferirlo a una vaca. La FIV nos permite adems, masificar el proceso de produccin de embriones (200-400 embriones/semana/tcnico). La FIV fcilmente se acopla a otras tecnologas como la aspiracin de vulos de vacas seleccionadas (OPU), para de esa forma, multiplicar los beneficios en cuanto a la calidad gentica de los embriones obtenidos.

ETAPAS DE LA FIV
La FIV comprende tres etapas: 1. Maduracin del vulo o gameto femenino. 2. Fecundacin propiamente dicha. 3. Cultivo embrionario Maduracin. Consiste en propiciar la progresin en el desarrollo del vulo de la vaca o novilla, una vez obtenido de ovarios de matadero o animales vivos por aspiracin transvaginal. Esto se logra colocando estos vulos en medios enriquecidos y suplementados con hormonas, como la hormona folculo estimulante (FSH), la hormona luteinizante (LH) o los estrgenos (E ) durante un periodo de 24 horas. Fecundacin. Consiste en incubar los vulos madurados (producto de la fase anterior) con espermatozoides vivos y mviles durante un periodo de 6 a 24 horas, luego de un proceso de seleccin y capacitacin espermtica que nos permitir a su vez de deshacernos de componentes del plasma seminal, crioprotectores y espermatozoides muertos o con escasa vitalidad. La capacitacin espermtica generalmente se logra exponiendo los espermatozoides vivos a concentraciones de heparina y cafena, entre otras. Estas sustancias logran estimular el proceso de capacitacin del espermatozoide que lo prepara para interaccionar y fecundar el vulo. Cultivo. Aquellos embriones de 4 o ms clulas resultantes de la FIV son cambiados del medio de fecundacin a un medio de cultivo embrionario donde los embriones continan su divisin celular a 8, 16 y 32 clulas hasta llegar a mrulas y blastocistos. Al llegar a estos estadios, los embriones pueden ser transferidos a vacas receptoras (en fresco) o congelados para su posterior uso. Durante esta etapa destacan la presencia en el medio de cultivo de diversas fuentes de energa como la glucosa y aminocidos esenciales y no esenciales.

APLICABILIDAD DE LA FECUNDACIN IN VITRO EN LA GANADERA

El establecimiento y la adopcin de una nueva tecnologa en nuestros sistemas de produccin bovina de leche y carne estarn probablemente determinados por la existencia de condiciones y prerrequisitos, entre los cuales se contaran los siguientes: Tecnologa Eficiente. La FIV ha venido superando obstculos desde los aos 70. Hoy da por cada 100 vulos colocados a madurar se puede esperar que ms del 90% alcance el estadio de Metafase II o estadio en el que puede ser fecundado por el espermatozoide. De esos maduran ms de 90 vulos para luego de la fecundacin inicia-

www.venezuelaganadera.com

Manual de Ganadera Doble Propsito. 2005 Fecundacin in vitro

/ 617

rn su divisin celular aproximadamente de 50 a 70 vulos. De estos vulos fecundados, 20 a 40 llegan a ser embriones (blastocistos) transferibles. Costos por debajo de ingresos. La FIV garantizara bajos costos en la medida que el nmero de vulos sea alto, constante y de apropiado valor gentico, de manera de masificar la produccin de embriones por semana (400 embriones/tcnico). La combinacin de FIV con otras tecnologas como el sexaje de embriones, semen sexado, ICSI (inyeccin intracitoplasmtica de espermatozoides) o la aspiracin transvaginal de vulos aunque aumentan los costos, en general, incrementar mucho ms el valor del embrin producido. Tcnica probada bajo condiciones comerciales. Aun cuando la FIV no se aplica ampliamente a nivel mundial (slo el 7% de los embriones transferidos son producidos in vitro), ha demostrado ser comercialmente aplicable en pases como Canad y Brasil. Simplicidad en su aplicacin. La aplicacin de la FIV no impone exigencias adicionales sobre el sistema de produccin diferente a las exigidas por otras tecnologas como la inseminacin artificial y la transferencia embrionaria. Flexibilidad para insertarse en el sistema. La produccin in vitro de embriones se podra llevar a cabo usando vulos provenientes de ovarios de matadero, de vulos aspirados de animales lite sin necesidad de sacrificarlos o con vulos adquiridos a empresas especializadas a nivel mundial. Los espermatozoides pueden provenir de semen fresco o congelado. La FIV puede producir embriones con gametos de cualquier raza y suele obedecer la seleccin del productor. Accesibilidad de equipos, asesoramiento tcnico y repuestos. Todos los equipos y reactivos utilizados en FIV son normalmente utilizados en laboratorios clnicos y de investigacin, y aunque no son normalmente producidos en el pas, si pueden ser adquiridos a travs de representaciones locales. Publicidad y Educacin. Es vital que el potencial usuario y la comunidad donde ha de insertarse conozcan las expectativas reales de su aplicacin.

BENEFICIOS DE LA APLICACIN DE FIV Los beneficios de alguna tecnologa siempre deben cuantificarse econmicamente cuando se aspira que la misma tenga impacto en la ganadera nacional, aspecto este que en ocasiones los investigadores olvidan y que termina perjudicndolos con las dificultades para la consecucin de fondos para la investigacin cientfica. Sin embargo, cuando se habla del aspecto econmico no necesariamente hay que referirse a la inversin inicial, sino a los flujos de caja a ser generados en los aos subsiguientes.

La FIV posee nichos de aplicacin donde su xito ser ms probable. Por supuesto, que las empresas agropecuarias o fincas donde ya se aplique alguna otra tecnologa como la inseminacin artificial o se lleve un control reproductivo confiable, y exista a la vez una gerencia entusiasta y comprometida con el proceso productivo, probablemente constituyan lugares apropiados para la aplicacin de esta tecnologa.

www.venezuelaganadera.com

618 / Hugo Hernndez Fonseca

La FIV realmente no tiene exigencias adicionales a las establecidas por la IA o la

Transferencia Embrionaria (TE), dado que el embrin in vitro se realiza en un laboratorio de FIV y slo se lleva el embrin a la finca dentro de una pajuela idntica a las usadas para semen. Este embrin ser almacenado en tanques de nitrgeno lquido igual que el semen. En conclusin, podemos sealar que la fecundacin in vitro (FIV):

Constituye una tecnologa que abre las puertas a la produccin masiva de embriones bovinos doble propsito, sin mayores exigencias sobre el sistema productivo mejorado, actualmente en funcionamiento.

Se apoya sobre tecnologas ya utilizadas en nuestro entorno (como por ejemplo: la transferencia embrionaria, y el procesamiento y congelacin de semen), lo cual resulta ventajoso porque se aprovecha la infraestructura ya existente, as como el personal especializado y la familiaridad del productor con la tecnologa. Igualmente, la FIV puede perfectamente apoyarse en nuevas tecnologas que sern aplicadas en el futuro, como el sexaje de semen y de embriones, para imprimir un mayor valor comercial a los embriones producidos.

GLOSARIO Gameto: Clula sexual femenina (vulo) o masculina (espermatozoide) que

unidas forman un nuevo individuo de la especie (zigoto o embrin).

vulo: Gameto o clula sexual femenina encontrada en pequeas vesculas o folculos a nivel de la corteza de los ovarios de las vacas y dems especies.

Espermatozoide: Gameto o clula sexual masculina producida a nivel de los

testculos del macho y que junto con el plasma seminal forman parte del eyaculado.

Capacitacin Espermtica: Proceso de alteracin de las membranas del espermatozoide que lo preparan para fertilizar un vulo.

Heparina: Glicosaminoglicano utilizado para inducir la capacitacin del espermatozoide.

Fecundacin: Unin y penetracin del vulo por parte del espermatozoide

para dar origen a un nuevo ser.

Embrin: Ser vivo en las primeras etapas del desarrollo desde la fecundacin
hasta que adquiere las caractersticas morfolgicas de la especie.

Blastocisto: Embrin que ha formado una cavidad llena de lquido conocida

como el blastocele, la cual constituye una etapa crucial del normal desarrollo. Esta etapa es corta y transitoria que generalmente ocurre entre el da 6 y 9 en caso de las vacas.

Aspiracin transvaginal de vulos: Aspiracin del contenido de folculos ovricos a travs de la pared de la vagina con el fin de recoger vulos de animales vivos.

www.venezuelaganadera.com

Manual de Ganadera Doble Propsito. 2005 Fecundacin in vitro

/ 619

OPU. Abreviatura utilizada para denominar el procedimiento anterior de aspiracin transvaginal de vulos (Ovum Pick Up). Estos vulos pueden ser fecundados mediante FIV.

ICSI: Colocacin mecnica de un espermatozoide dentro del citoplasma de un

vulo (Inyeccin Intracitoplasmatica de espermatozoides, del ingls: IntraCytoplasmic Sperm Injection).

Medio de Cultivo: En el caso de FIV, el medio es generalmente lquido y contiene todos aquellos nutrientes (aminocidos, protenas, cidos grasos, carbohidratos, vitaminas, buffer, y sales) que el embrin requiere para su normal desarrollo.

LECTURAS RECOMENDADAS
Hernndez H. Fertilizacin in vitro. En: Reproduccin Bovina. C. Gonzlez-Stagnaro (ed). Fundacin GIRARZ, Maracaibo-Venezuela. Cap. XXVI: 411-426. 2001. Tanaka H, Ballarales P, Masaka J, Kanaga H. Teora y practica de la fecundacin in vitro. Agencia de Cooperacin Internacional de Japon Chile, 190 pp. 1997. Palma G. Produccin in vitro de embriones bovinos. En: Biotecnologa de la Reproduccin. G. Palma (Ed), p 225-289. 2001.

PRODUCCION Da 1
Donantes de Ovocitos

IN VITRO DE EMBRIONES BOVINOS

Aspiracin intravaginal de Ovocitos

Seleccin de ovocitos (citoplasma homogneo, 2-3 capas de clulas)

Maduracin de ovocitos

Lavado de los Seleccin de cigotos cigotos (eliminacin fertilizados y de clulas del colocacin en cultivo cumulus y espermatozoides)

Da 3

Da 2
Fecundacin de los ovocitos maduros Capacitacin de espermatozoides

Da 4-5

Da 6
Cultivo de los cigotos y cambio cada 48 horas de los medios de cultivo Seleccin de las receptoras Seleccin de los blastocitos

Da 7
A. Hernndez, 2004 Transferencias de los embriones cultivados

www.venezuelaganadera.com