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INTRODUCCIN A LAS PRCTICAS DE LABORATORIO N 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8 EXTRACCIN Y CROMATOGRAFA Extraccin y cromatografa son dos formas sencillas y ampliamente utilizadas como mtodos para separar un compuesto deseado de sus impurezas, o para aislar cada componente presente en una mezcla, y estn basadas en el principio de distribucin de las diferentes sustancias entre dos fases inmiscibles. Es importante, para lograr integracin entre el laboratorio y la teora, aplicar las tcnicas separativas mencionadas al aislamiento de algunos productos naturales. De esta forma, tendremos las siguientes asociaciones temticas : Cromatografa de adsorcin de "Pigmentos Vegetales" Cromatografa de particin de "Hidratos de Carbono" y "Pigmentos" Arrastre con vapor y extraccin diferencial de " Alcaloides, terpenos o flavonoides" Extraccin de "Lpidos" El objetivo de prcticas separativas de laboratorio, aplicadas a los Productos Naturales, es ms amplio que el planteado para la primera parte del curso. Las prcticas de laboratorio que se han realizado hasta ahora, se basaban en conceptos tericos rigurosos. El estudio de dichos temas requera memoria y razonamiento como operaciones mentales fundamentales. Las prcticas que se inician a partir de ahora, se fundamentan en principios tericos sencillos, y apuntan bsicamente a presentar herramientas para la resolucin de problemas separativos concretos. La dificultad est entonces, en utilizar correctamente esas herramientas, entendiendo la complejidad de los problemas separativos que se planteen. De aqu que no basta estudiar lgica y memoriosamente para entender el tema. Las prcticas se disearon para preparar integralmente al estudiante, de tal forma que se propicia la experimentacin con distintos materiales (sustratos, adsorbentes, solventes de desarrollo, reveladores, etc.) con el objetivo fundamental de que se planteen problemas experimentales no previstos en la gua. Para un aprovechamiento cabal de las posibilidades que brinda cada prctica, resulta indispensable que cada alumno : a) Comprenda el significado y la tarea que realizar en el laboratorio. b) Tenga los conocimientos tericos sobre el comportamiento de los productos naturales que se utilizarn. c) Utilice el margen de creatividad disponible. d) Rescate la totalidad de la prctica, y no slo la parte que le toc realizar. Referencias bibliogrficas * S. Bawn, W. Bowen: "Laboratory Exercises in Organic and Biological Chemistry" 2 Edicin. Mac Millan Publishers, New York 1981. * G. Walther, S. Morn Palma: "La qumica en experimentos " Guatemala, 1977. * W. Smith, J. Mc Carty: "A Laboratory Manual for a Modern Introduction to Organic Chemistry". 1963. Merril Books, Inc. New York * Journal of Chemical Education: 1982 = "Qumica de los limpiadores" Pg. 305.

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1978= "Qu es un detergente" Pg. 596. 1977= "El pH de los shampoos" Pg. 553. 1972= "El rol de los fosfatos en los detergentes- Determinaciones cuantitativas" Pg. 15. 1971 = "Aislamiento de trimiristina de nuez moscada" Pg. 255. * M. Cava , M. Mitchell "Selected Experiments in Organic Chemistry", 1966. * F. Sixma , H. Wynberg. "A manual of Physical Methods in Organic Chemistry". J. Wiley and Sons, Inc. London, 1964. * R. Robertson T. Jacobs. "Laboratory Practice of Organic Chemistry". Mac Millan Co. London, 1962. * E. Heftmann. "Chromatography". Reinhold Publishing Corporation New York, 1961 * L Savidan. "Cromatografa". EUDEBA, Buenos Aires, 1979. * E. y M. Lederer. "Cromatografa". El Ateneo, Buenos Aires, 1960. * D. Abbot y R. Andrews. "Introduccin a la Cromatografa". 2 ed. Alhambra,Buenos Aires, 1970. * I. Smith y J. Feinberg."Cromatografa sobre papel y capa fina. Electroforesis" Exedra, Buenos Aires,1979. * L.G. Galagovsky "Qumica Orgnica: Fundamentos Teorico-prcticos del Laboratorio." Eudeba, Buenos Aires, 1992. * A. Pomilio, A. Vitale "Mtodos Experimentales de Laboratorio en Qumica Orgnica." O.E.A. 1988.

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TRABAJO PRCTICO N2 EXTRACCIN Y CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA 1.- Objetivos: 2.- Introduccin: El proceso de extraccin con solventes es empleado generalmente en el aislamiento de productos naturales y purificacin de mezclas. En algunos casos se la utiliza para remover impurezas solubles en mezclas de compuestos de inters, denominndosela en este ltimo caso, lavado. La cromatografa es una tcnica separativa basada en la distribucin diferencial de los componentes de una mezcla entre una fase estacionaria y una fase mvil. En la cromatografa en capa delgada (c.c.d. o t.l.c., Rin ayer chromatography), se usa una placa de vidrio, aluminio o plstico como soporte de la fase estacionaria. 3.- Parte experimental 3.1.-Separacin de mezclas insolubles en agua. Para llevar a cabo la separacin sistemtica de una mezcla insoluble en agua, se trabaja con 1-2 g de mezcla slida, que se trata con 50 ml de CH 2Cl2 (1) y se procede segn el esquema 1. La solucin orgnica (1) se extrae con NaHCO3 (s.s.), agregndolo lentamente, con cuidado y agitacin (por qu?) (2 20 ml), queda una solucin alcalina de pH cercano a 8 (2) y una solucin en cloruro de metileno (2). A continuacin se procede a acidificar la solucin alcalina (2) con HCl diludo hasta pH = 2, luego de lo cual se agrega CH 2Cl2 (2 20 ml). El extracto orgnico obtenido (3) se lava con agua (2 20 ml), se seca con MgSO4 (anh), se filtra a un baln con boca esmerilada y se evapora el solvente a presin reducida en un evaporador rotatorio, obtenindose el residuo B (cidos) . La solucin orgnica (2) que fue extrada anteriormente, se extrae ahora con NaOH 10 %. La solucin bsica resultante (4) se lleva hasta pH cido con HCl 10 % y se extrae con CH2Cl2 (2 20 ml), se obtiene as la solucin orgnica (5). Dicha solucin (5) se lava con agua, se seca con MgSO4 (anh), que se elimina por filtracin y se evapora el solvente en rotavapor. Se obtienen de esta forma los fenoles (residuo C). Tenga en cuenta que la fraccin obtenida anteriormente es soluble en NaOH 5% e insoluble en NaHCO3. La solucin orgnica (4), de la cual se han extrado ya todos los componentes cidos, se extrae con HCl 5% (2 15 ml); queda una fase acuosa cida (6) y una fase orgnica (6). La fase acuosa cida (6) se alcaliniza con NaOH 10% y se extrae con CH2Cl2 (2 15 ml), obtenindose la fase orgnica (7). sta se lava con agua, se seca con MgSO4 (anh), se elimina el desecante por filtracin y luego el solvente a presin reducida, obtenindose el residuo D (aminas insolubles en agua). La fase orgnica (6) se lava con agua (2 15 ml), se seca y se filtra. Se elimina el solvente y se obtiene el extracto E (componentes neutros). Introducir la tcnica de extraccin y su manipulacin experimental. Introducir la tcnica de cromatografa en capa delgada.

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Esquema 1 Mezcla + CH2Cl2 (1)

NaHCO3 (s.s.)

fase acuosa (2)

1) HCl 10 % (pH = 2) 2) CH2Cl2

fase orgnica (2')

NaOH 10% (pH = 12)

fase acuosa (4) fase orgnica (3') fase acuosa (3)

1) Lavar con agua 2) MgSO4 (anh.) 3) Evaporar svte 1) HCl 10 % (pH = 5) 2) CH2Cl2

fase orgnica (4')

contina abajo

Residuos B (cidos)

fase orgnica (5') fase acuosa (5)

1) Lavar con agua 2) MgSO4 (anh.) 3) Evaporar svte

Residuos C (fenoles) fase orgnica (4')

HCl 10%

fase acuosa (6)

1) NaOH 10 % (pH = 12) 2) CH2Cl2

fase orgnica (6')

NaOH 10% (pH = 12)

fase acuosa (8) fase orgnica (7') fase acuosa (7)

1) Lavar con agua 2) MgSO4 (anh.) 3) Evaporar svte

fase orgnica (8')

1) Lavar con agua 2) MgSO4 (anh.) 3) Evaporar svte

Residuo E (neutros) Residuo D (Bsicos) 3.2.- Separacin de los componentes de la mezcla por cromatografa en capa delgada Una vez aisladas y purificadas las sustancias que componen la mezcla, se sembrarn las mismas en microplacas de slica gel. En cada placa se sembrarn separadamente las dos sustancias a los costados y la mezcla original en el centro. Las manchas deben ser de 3 mm de dimetro cada uno y deben estar a 0,5 cm del borde inferior de la placa y del borde lateral de la placa. Para desarrollar las placas, se colocarn stas en microcubas, que contengan 1 o 2 mm de solvente. en el fondo, de manera tal que al colocar la placa, el solvente no cubra la zona sembrada de la placa.

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En primer lugar, se desarrollarn o (corrern) las placas en cubas con solventes y mezclas de ellos de polaridad creciente (como mnimo utilizar 4 solventes). Se debe dejar la microplaca en la cuba hasta que el solvente suba, por capilaridad, hasta 0,5 cm del borde superior de la placa, marcando este lmite superior. Luego del desarrollo cromatogrfico, se deja evaporar el solvente de cada placa al aire y se revela sucesivamente con luz visible, UV (254 y 366 nm) y en cmara de I 2. Se dibujarn las microplacas obtenidas en el cuaderno, se calcularn los valores de Rf de cada uno de las sustancias y se relacionar con la polaridad del solvente. Se deber encontrar un solvente o sistema de solventes en el cual los valores de Rf de las dos sustancias que componen la mezcla oscilen entre 0,3 y 0,7 y adems las manchas de cada uno de los componentes aislados tengan un Rf > 0,2. A continuacin se proceder a identificar cada unos de los componentes aislados por comparacin con patrones disponibles. Si surgen dudas en la identificacin debe variarse la composicin del solvente de manera tal de poder asegurar ,sin lugar a dudas, la identidad de los compuestos por c.c.d. Cuestionario Extraccin 1) Una mezcla constituda por los siguientes productos se someti a los tratamientos que se indican a continuacin :
CO2 H CO2 CH3 NH2 OH

CH3

N O

Cl

a) Cul de los cuatro compuestos es A y en qu se basa su separacin de los otros compuestos. b) Indique un esquema de separacin que permita aislar los compuestos B, C y D. c) Una vez separadas las sustancias, indique para cada una de ellas una reaccin que confirme la presencia del grupo funcional respectivo. mezcla 1) ter 2) Solucin de NaHCO 3 fase acuosa 1 1)HCl 5% fro 2)ter fase etrea 2 fase acuosa 2 - ter compuesto A fase etrea 1 -ter

compuestos B, C, D.

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2) Utilizando mtodos extractivos, proponga un esquema de separacin de los componentes de la siguiente mezcla (debe llegar a obtenerlos puros):
A HO2 C O O B O C H3 CO OCH3 OCH3

NH2 D E HO O OH

CO2 H CHNH2 CH3

OCH3

3) Separe por mtodos convenientes la siguiente mezcla de compuestos, de forma tal que obtenga cada uno por separado.
NHCH3 1 O CH3 2 3 O NHCH3 4 O O CO2 H 5 HO2 C 6 N(CH3 )2 CH3 O 7 Cl OH CH3

O H3 C

4) Usando mtodos extractivos separe, aisle y obtenga puros cada uno de los siguientes compuestos; considere que tiene una mezcla de 3 g de c/u.
O N CO2 H N

A
CO2 H

B
OH HO O

HO

H3 CO

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5) Defina constante de particin. de qu factores depende? Por qu es conveniente hacer n extracciones de volumen V y no una sola extraccin de volumen n.V? 6) En qu se basa la extraccin con Soxhlet? 7) Qu precauciones debe tener cuando trabaja con ter? 8) Proponga un mtodo de separacin para las siguientes mezclas a.- m-propiltolueno (p.eb 182C) y anilina (p.eb. 183C) b.- cido actico (p.eb 118C) y butanol (p.eb.116C) c.- fenol, o-nitrofenol y p-nitrofenol. Cromatografa en capa delgada 9) Qu mtodos de separacin de mezclas conoce? 10) Qu se entiende por cromatografa? Cuntos tipos de tcnicas cromatogrficas se pueden distinguir en base a la naturaleza de la fase mvil y de la fase estacionaria? 11) Cules son las principales aplicaciones de la c.c.d? 12) En que se basa la cromatografa de adsorcin? Nombre los adsorbentes ms comunes y ordnelos segn su poder de adsorcin creciente. 13) Nombre los solventes ms comunes y ordnelos de acuerdo con su polaridad creciente (serie elutrpica). 14) Ordene los siguientes solventes de acuerdo con su poder de elucin creciente en slica : a) Cloruro de metileno, cloroformo, tetracloruro de carbono. b) Metanol, 1-butanol, etanol, 1-propanol. c) Agua, acetona, ciclohexano, cido actico, acetato de etilo, benceno, metanol. 15) Ordene los siguientes grupos funcionales segn su orden de elucin, en una columna cromatogrfica de adsorcin: cidos carboxlicos, cetonas y aldehdos, alcoholes, amidas y steres, alcanos y alquenos. Fundamente su respuesta. 16) Cmo influyen la polaridad de los compuestos a separar y la naturaleza del adsorbente y del disolvente en la retencin? 17) Conteste las siguientes preguntas, justificando detalladamente : a) Qu diferencias hay entre cromatografa analtica y preparativa? b) Si las sustancias que va a analizar son incoloras, cmo las visualiza sobre la placa? c) Qu es un revelador? Indique por lo menos cuatro. d) Qu es un revelador universal? y uno especfico? D ejemplos.

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18) Sobre una placa de slica se sembraron siguientes:

COOH

solo cinco de los compuestos

O

n-pentano

A
OH

C
COOH

NH2

E
OH

Ca3(PO4)2

O O

La c.c.d se desarroll en cloroformo y se revel por carbonizacin, dando el resultado que se detalla ms abajo. Considerando estos datos indique qu se sembr en cada punto I...V. Cules sustancias no se sembraron.? Justifique todas sus respuestas.

II

III

IV

19) Discuta cual podra ser el orden de Rf creciente sobre slica de los siguientes compuestos ( justifique ):
A B HO2C O OH HO CO2H C D OH

20) Dadas las siguientes afirmaciones, conteste a c/u si es Verdadera o Falsa y justifique : a) Por cromatografa en capa delgada se pueden obtener puros los componentes de una mezcla de colesterol, cido benzoico y cloruro de metileno. b) Una sustancia A, que en c.c.d. sobre slica con benceno da Rf = 0,7, al usar benceno-metanol 1 : 1 dio Rf = 1,2.

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21) Los compuestos A, B, C, D y E se sometieron a una cromatografa de adsorcin en capa delgada de slica gel :
A OH B CHO OH HO OH OH C CO2H D CHO E

OH

Utilizando tolueno:etanol (3:1) como solvente de desarrollo se obtuvo el cromatograma que se indica a continuacin :

. 1

. 2

. 3

. 4

. 5

Conteste cul Rf corresponde a cada sustancia. Justifique brevemente. 22) Como prctica de espectroscopa se incluyen a continuacin se presentan espectros de sustancias slidas y lquidas. Indique a qu sustancia corresponde cada juego de espectros.